UNIVERSIDAD DE CARABOBO

FACULTAD DE INGENIERA
ESCUELA DE INGENIRA QUMICA

DESARROLLO DE UN REPELENTE NATURAL DE INSECTOS BASADO EN EL

ACEITE ESENCIAL DEL LIMN

Dra. Germania Marquina.

Tutor Acadmico

Barbula Agosto del 2003

Chvez, Silvia Y.
Rivas, Mara F.

INTRODUCCIN
La investigacin que se presenta a continuacin est enfocada a desarrollar un repelente
natural de mosquitos e insectos, empleando el aceite esencial de limn, el cual puede
representar una alternativa frente a los repelentes sintticos existentes en el mercado, que
no dae al medio ambiente ni cause problemas de salud.
Para alcanzar los objetivos planteados se establecieron tres fases metodolgicas que son:
Evaluacin de la extraccin del aceite esencial, formulacin del repelente y estudio de
mercado de los repelentes en Venezuela.
La

evaluacin de la extraccin del aceite esencial de limn con CO2 supercrtico, se

realiza a travs de la aplicacin de un diseo experimental factorial. El cual es comparado

con el de arrastre con vapor de agua seleccionando el mtodo de mayor rendimiento,
tambin son identificados los principales componentes del aceite.
El repelente se formul para dos concentraciones de aceite esencial de limn siendo
elaborado en la Facultad de Farmacia de la Universidad Central de Venezuela. Para
asegurar la calidad del repelente se le practicaron pruebas dermatolgicas y
microbiolgicas. Las dos concentraciones fueron probadas con voluntarios en la poblacin
de Ortiz; Estado Gurico; escogiendo la de mayor accin repelente. Finalmente se realiz
un estudio para investigar el mercado de los repelentes existentes en el pas.
En el capitulo 1 se presenta el planteamiento del problema, en el 2 los fundamentos tericos
de la investigacin. El marco metodolgico empleado para alcanzar los objetivos se
encuentra en el capitulo 3, finalmente en los captulos 4 y 5 se presentan los resultados y
las

conclusiones

recomendaciones.

CAPITULO I
Planteamiento del problema
A continuacin se presenta en forma detallada la formulacin del problema as como los
motivos que justifican y limitan la investigacin, tomando en cuenta los antecedentes que
guardan relacin con dicha investigacin.
Formulacin del Problema
Los aceites esenciales son sustancias voltiles obtenidas por un proceso fsico a partir de
material vegetal oloroso de un solo gnero y especie botnica, el cual posee todas las
caractersticas olorosas y del que generalmente lleva su nombre.
Estos aceites esenciales son usados como saborizantes y aromatizante en la industria
alimenticia y cosmtica, as como tambin en la elaboracin de fragancias para la
industria del perfume y tambin se han usado como repelentes de insectos. La primera
estrategia empleada para combatir los mosquitos e insectos, fue estrujar las hojas de
plantas aromticas y frotar en la piel el aceite de semillas para reducir las picaduras y
evitar la transmisin de enfermedades.
Esta estrategia fue abandonada con la aparicin de los repelentes sintticos, y el desarrollo
de insecticidas, pero en los ltimos aos se ha demostrado que los mismos producen
efectos adversos sobre la salud y el medio ambiente, lo que ha conducido a fuertes crticas
ecolgicas, inicindose el retorno a los mtodos naturales anteriormente abandonados. En
este contexto, surge la necesidad de aprovechar el efecto repelente de ciertos aceites
esenciales, estudiados e industrializados en otros pases. En la Unidad

de Fluidos

Supercrticos de la Facultad de Ingeniera se han realizado investigaciones en las cuales

solo se ha evaluado la extraccin de aceites esenciales de algunas plantas, pero no se ha
desarrollado ninguna aplicacin de los mismos. Se ha pensado en este sentido desarrollar

un repelente natural de insectos basado en el aceite esencial del limn, que pudiera sustituir
a los repelentes sintticos y que sea menos contaminante para el medio ambiente.
1.1.1. Situacin Actual
Hoy da el mercado de los repelentes en Venezuela lo ocupan en su mayora los repelentes
sintticos, los cuales constituyen una forma eficaz de evitar las picaduras de insectos
transmisores de enfermedades; estudios posteriores han demostrado que stos pueden
causar serios problemas al medio ambiente y a la salud, especialmente si se usan
inadecuadamente a concentraciones altas, razn por la cual han surgido los repelentes
naturales basados en los aceites esenciales de plantas los cuales han sido poco utilizados en
Venezuela, mientras que en otros pases es un mercado en constante crecimiento.
1.1.2 Situacin Deseada
Disponer de una evaluacin para el desarrollo de un repelente de insectos basado en el
aceite esencial del limn, que represente una alternativa frente a los repelentes sintticos
existentes en el mercado y que no dae al medio ambiente, ni cause efectos adversos a la
salud.

Justificacin
En Venezuela la produccin industrial de aceites esenciales es prcticamente nula. En el
ao 2000 se gastaron 175 millones de dlares en la importacin de los mismos segn lo
reportado

por la Instituto Nacional

de Estadstica (INE), lo cual permite inferir

perfectamente la necesidad de informacin e investigacin con el fin de incursionar en ese

mercado.
Por tanto es de suma importancia la posibilidad de aprovechar los aceites esenciales con
fines comerciales, por lo que sera algo novedoso usar el aceite esencial extrado del limn
como repelente natural de insectos. Tambin este trabajo justifica su realizacin porque
estimula en el estudiante el espritu investigativo, creando la expectativa de explorar
situaciones en otras reas, como parte de su formacin integral.

Este tipo de investigacin adems de otorgarle prestigio a la Universidad de Carabobo

podra incentivar el inters de otros estudiantes a desarrollar nuevas tecnologas utilizando
los aceites esenciales.
1.3 Antecedentes
A continuacin se presentan algunos antecedentes relacionados con la investigacin
planteada.
BETANCOURT, Lucio (1984): Extraccin, evaluacin y aprovechamiento del aceite
esencial del mastranto. Trabajo especial de Grado, Ingeniera Qumica, Universidad de
Carabobo, Valencia.
El objetivo principal de este trabajo fue establecer tcnicas y mtodos para la extraccin
del aceite esencial del mastranto, por sus caractersticas aromticas y su posible accin
como repelente natural de insectos.
Dicha investigacin permiti concluir que: el aceite esencial de mastranto en solucin a 70
ppm es txico para insectos y bachacos, y a 100 ppm para abejas, segn se comprob al
rociar los insectos con el aceite obtenido, verificando su efecto repelente.
La extraccin del aceite esencial del mastranto y la preparacin del repelente en diferentes
concentraciones, as como la verificacin del efecto repelente, constituyen las semejanzas
principales con la investigacin aqu planteada, pero difieren en el aceite esencial que es
limn, y el uso que se le quiere dar, aqu estar destinado para ser usado en humanos con la
finalidad de repeler los insectos que causan picaduras en la piel y no en bachacos y abejas
como ya se realiz.
ROJAS, Eliana(1997): Extraccin del aceite esencial de la hojas de Citrus Medica con
uso para la proteccin personal contra mosquitos transmisores. Trujillo, Venezuela.
Disponible en: http://www.Ambiente ecologico.com
Este trabajo tuvo como objetivo principal la extraccin del aceite esencial de la hoja del
limn para ser usado como repelente personal y como fumigante domstico. La tcnica de

extraccin que se emple fue el arrastre con vapor de agua, utilizando hojas recolectadas en
diferentes horas del da. Obtenindose diferencias significativas entre los volmenes de
aceite esencial de hojas cosechadas en horas matutinas y en horas vespertinas de una misma
cosecha.
El trabajo mostrado difiere del presente en que est ha considerado slo la extraccin del
aceite esencial, mientras que en el trabajo propuesto adems de realizar estos estudios se
quiere desarrollar a escala de laboratorio un producto en el que se emplee dicho aceite.
Otra de las diferencias significativas es que no identifican los componentes presentes en el
aceite esencial extrado de las hojas, lo que s est planteado mediante un anlisis
cromatogrfico del aceite extrado de la corteza del fruto del limn.
La semejanza ms resaltante de esta investigacin con la propuesta la constituye la
escogencia del aceite esencial del limn por su alta actividad repelente, as como tambin la
forma de obtener el aceite esencial a travs de un mtodo de extraccin. En cuanto a las
diferencias se puede decir que se evala la extraccin del aceite esencial de las hojas del
limn para usarlo como repelente de insectos, mientras que en el trabajo propuesto se
pretende evaluar la extraccin del aceite esencial de la corteza del fruto por considerar que
contiene mayor cantidad de aceite. Tambin se plantea usar varios mtodos de extraccin y
compararlos para seleccionar el de mayor rendimiento y usar el aceite extrado como
ingrediente principal del repelente a desarrollar. Al mismo se le realizarn las pruebas
dermatolgicas que confirmaran el grado de irritabilidad drmica, para posteriormente
comprobar el efecto repelente en humanos.
GONZLES, Mario (1997): Uso de la crema repelente de pimenta dioica por
combatientes de una unidad militar. (En lnea).Instituto Superior de medicina Militar Dr.
Luis Soto. .La Habana. Disponible en: http://bvs.Sld.cu/ revistas / mil / vol 26_2_97 / mil
02297.htm
En esta investigacin fue estudiada una crema con aceite esencial de pimienta dioica para
conocer su eficacia como repelente de insectos; fue realizada en una unidad militar con 38

combatientes divididos en dos grupos. A un grupo se le aplic la crema sin el aceite

estudiado y al otro la crema con pimienta dioica; fueron expuestos a los mosquitos durante
cinco horas en una zona costera y se tom como criterio de repelente la ausencia de
molestia y un mnimo de cinco picaduras en las reas tratadas, obtenindose como resultado
que la crema de pimienta dioica mantuvo una repelencia en el 100% de los casos siendo
estadsticamente superior a la crema sin pimienta dioica.
El uso de un aceite esencial extrado de una planta como ingrediente de un repelente de
insectos, constituye la semejanza principal que guarda este trabajo con el planteado y
difieren en que en el primero no se realiza la evaluacin de la extraccin, ni se considera la
formulacin del producto, es decir el porcentaje de aceite esencial que posee el producto,
solamente se evala el efecto repelente.
McGaw, V. Paltoo, C. Hahg Yen (1998): Impacto de la extraccin con fluidos
supercrticos en la industria de fragancias y bouquet en el caribe (Impact of supercritical
fluid extraction on the lavour and fragrance industry of the Caribean). (En lnea).
Departamento de Ingeniera Qumica de la Universidad de Las Indias Occidentales. St
Augustine,

Trinidad.

Disponible

en:

http://www.uwichill.edu.bb/bnccde/sk&n/conference/papers/Dr Mc Gaw. htm. Presentado

en el VI Congreso de Fluidos Supercrticos en el Reino Unido, 1999.
El objetivo principal que se deseaba alcanzar era estudiar la factibilidad de establecer en el
rea del Caribe una planta de extraccin de aceites esenciales empleando fluidos
supercrticos, determinando si su instalacin

era viable comercialmente

econmicamente; aqu se logr estimar un beneficio econmico entre 500% y 8000% al

comparar el costo de la materia prima empleada ( jengibre, cscara de naranja y cscara de
toronja) con el costo de aceite esencial obtenido resultando que es viable la instalacin de
una planta que emplee esta
desarrollo.

tecnologa en el Caribe por su ingreso y potencial

de

La principal semejanza con el presente trabajo radica en que el mtodo de extraccin

empleado es con fluido supercrtico y difiere del presente en el hecho de que no se plantea
realizar un estudio de factibilidad.
GROSSE, Roraima (2000): Estudio del aceite esencial de la flor de la Murraya
Paniculada. Trabajo Especial de Grado, Facultad de Ciencia y Tecnolgia, Departamento
de Qumica, Universidad de Carabobo.
El objetivo principal de esta investigacin fue seleccionar el mtodo adecuado para la
extraccin del aceite esencial de la flor de Murraya Paniculada; la extraccin se realiz
con solventes y con CO2 supercrtico. Entre las conclusiones mas resaltantes se obtuvo que
los mejores resultados de la extraccin del compuesto fueron obtenidos usando ter de
petrleo como solvente. En cuanto a la extraccin con CO2 supercrtico se concluy que
el rendimiento no fue el mejor, pero en cuanto a la calidad del extracto s lo fue.
La seleccin

en este trabajo de un mtodo de extraccin adecuado basado en el

rendimiento es la semejanza que guarda con la investigacin propuesta y difieren en que

ste no es el objetivo principal, ya que se plantea desarrollar un repelente de insectos
usando el producto extrado como meta principal.
FIGUEROA, Yalitza (2001) Aplicacin del diseo estadstico de experimentos a la
extraccin con CO2 supercrtico del aceite esencial de la hoja de malagueta (Pimenta Dioica
(L) MERR). Trabajo de ascenso, Facultad de Ciencia y Tecnolgia, Departamento de
Quimica, Universidad de Carabobo.
Esta investigacin tuvo como objetivo principal aplicar el diseo de experimentos para
optimizar las condiciones de extraccin del aceite esencial de la hoja de malagueta, usando
CO2 supercrtico. Entre las conclusiones ms relevantes del proceso de extraccin, se
obtuvo que las variables ms influyentes en el proceso fueron la presin y el tiempo de
extraccin. La mayor proporcin de eugenol se obtuvo a una presin de 250 bar y a un
tiempo de 420 minutos obtenindose un rendimiento de 0,1967 %.

La semejanza que tiene este trabajo con la investigacin propuesta es el diseo estadstico
de la extraccin del aceite esencial del limn, para evaluar el proceso. En cuanto a la
diferencia se puede decir que en el trabajo propuesto se quiere ir mas all de la evaluacin,
desarrollando una aplicacin, es decir, buscar la utilidad de la extraccin de los aceites
esenciales desarrollando un repelente de insectos, que proteja de las picaduras y
enfermedades transmitidas por los mismos.
1.4. Limitaciones
Entre las principales limitaciones existentes en este trabajo especial de grado se pueden
citar las siguientes:
La poca informacin estadstica acerca del uso de los aceites esenciales.
El mtodo de extraccin por fluido supercrtico es muy poco utilizado en Venezuela solo se
conocen estudios realizados por universidades extranjeras.
Los repuestos del equipo de extraccin solo estn disponible en el exterior.
Otra limitante es el periodo de cosecha del limn (meses de junio y julio), tiempo durante el
cual debe realizarse la fase experimental, a fin de asegurar la frescura de la materia prima y
el bajo costo, ya que en otra poca los costos aumentan considerablemente.

Objetivos

Objetivo General
Desarrollar un repelente natural de insectos basado en el aceite esencial del limn.

Objetivos Especficos
Seleccionar un diseo experimental que permita evaluar la influencia que ejercen las
variables involucradas.

Realizar la extraccin del aceite esencial del limn con CO2 supercrtico, con la finalidad
de establecer las mejores condiciones de operacin en dicho proceso.
Comparar la extraccin del aceite esencial del limn empleando EFSC con otro mtodo
convencional de extraccin, para escoger el de mayor rendimiento.
Analizar los extractos obtenidos con cada uno de los mtodos de extraccin para
determinar la composicin del aceite esencial del limn.
Realizar un estudio del mercado venezolano de repelentes, para estimar la factibilidad de
producir el mismo.
Identificar las pruebas dermatolgicas y microbiolgicas requeridas para establecer el
funcionamiento del repelente.
Preparar el repelente a diferentes concentraciones de aceite esencial de limn, con la
finalidad

de

escoger

la

de

mayor

repelencia.

CAPITULO II
Fundamentos tericos
A continuacin se presentan los fundamentos tericos que sustentan el presente trabajo de
investigacin.
2.1 Resea histrica de la Malaria
La Historia de la Malaria se remonta a la poca ms antigua de la humanidad, nadie podra
decir cuando ocurri el primer caso de esta enfermedad, pero hay indicios para creer que
la malaria ha existido desde la formacin del mundo. El nombre le fue dado en Italia por
que se crea que la enfermedad era causada por el aire proveniente de los terrenos
pantanosos, cuyo nombre italiano era palude para posteriormente adoptar los nombres de
fiebre paldica o paludismo.
El Paludismo para nuestro pas ha jugado un papel muy importante para su desarrollo segn
opinin del Dr. Arnoldo Gabaldn encargado de dirigir la gran lucha antimalrica de los
aos (1940- 1950).En ese entonces Venezuela posea 1.000.000 de casos de paludismo en
una poblacin de 3.500.000 habitantes, tal motivo oblig al Congreso a sancionar la Ley
de defensa contra el paludismo y a crear la direccin especial de Malariologa y la escuela
para la formacin de expertos malarilogos en el recin creado Ministerio de Sanidad y
Asistencia Social, nombrando al Dr. Gabaldn, Director Y Dr. Alberto J. Fernandez,
Adjunto.
Pero no es sino a partir de 1948 cuando se observa una amplia erradicacin de la malaria o
por lo menos en gran parte del pas, por lo que se decide prolongar sus actividades a otras
enfermedades debido a que para conservar el rea saneada era necesario contar con un
personal especializado que pudiera apagar cualquier foco. En 1957 se logra disminuir el

10

nmero de enfermos a la menos de 10.000 pero lamentablemente en los ltimos aos ha

habido un repunte de Malaria aumentando el nmero de enfermos a 50000 casos la
mayora del Estado Bolvar.
2.2 Enfermedades ocasionadas por insectos o mosquitos transmisores de enfermedades.
2.2.1 Malaria o Paludismo ( Mondolfi A., 1989)
Es una enfermedad infecciosa transmitida por la picadura de un mosquito hembra infectado
llamado Anopheles que se encuentran en muchas zonas del pas sobre todo en las reas de
baja elevacin. En Venezuela hay dos tipos principales de Malaria producido por dos
especies diferentes de parsito Plasmodium.
La primera es causada por el Plasmodium Vivax y es considerada benigna por que es
menos severa que la causada por el Plasmodiun Falciparun. Los sntomas ms comunes de
ambas enfermedades son dolor de cabeza, escalofros, malestar a nivel muscular y articular
acompaada de fiebres altas, y en la forma mas severa puede llegar a causar la muerte.
2.2.2 Dengue.
El mosquito Aedes. aegypties es el principal vector del complejo dengue. Se caracteriza por
fiebres repentinas acompaada de dolor de cabeza, dolor articular y muscular, prdida del
apetito y alteraciones del aparato gastrointestinal; esta sintomatologa se prolonga
usualmente por 5 das rara vez menos de siete. En los ltimos aos se ha convertido en una
epidemia presentndose en su forma clsica y hemorrgica convirtindose en un evento
cuya vigilancia, prevencin y control presenta especial inters de salud pblica.

2.3Control de insectos.
2.3.1 Mtodos qumicos.

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En este rengln incluimos todas aquellas sustancias elaboradas con la finalidad de

ahuyentar o eliminar los insectos:
2.3.1.1 Repelentes.
Sustancia que al ser aplicada sobre la piel crea una especie de barrera a su alrededor que
impide el acercamiento de algunos insectos voladores constituyendo as una herramienta
eficaz para evitar sus picaduras, molestias y por ende las enfermedades que transmiten. De
acuerdo a su ingrediente activo estos pueden ser repelentes naturales como por ejemplo
Citronella, Limn, Eucalipto,Neem,

etc. repelente sinttico como: el DEET, DMP,

Etilhexanediol, Indalone, etc.

En la tabla 2.1 se presenta las principales ventajas, desventajas y contraindicaciones
existentes entre el DEET y el d-limoneno. Se tom el DEET por ser el ingrediente activo
utilizado en la mayora de los repelentes existentes en el mercado y el d- limoneno por ser
el ingrediente mayoritario presente en el aceite esencial de limn.
2.3.1.2 Insecticidas.
Son de gran inters para muchos, porque son productos intoxicantes utilizados en el control
de las plagas e insectos. Muchas plantas tienen propiedades insecticidas o de repelente entre
estas podemos mencionar las siguientes:
2.3.1.2.1 El piretro ( Chrysanthemun Cinerariaefolium )
Es uno de los ms viejos y seguros insecticidas disponibles se extrae de las flores de un
crisantemo y causa en el insecto una parlisis casi inmediata. Sin embargo, a menos que sea
formulado con un sinergisante, la mayora de los insectos paralizados se recuperan.
Tabla 2.1
Ventajas y desventajas entre los Ingredientes activos DEET y
d- limoneno

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Ingrediente

Ventajas

Desventajas

Contraindicaciones

Activo

Activo frente mosquito e No puede ser usado en Irritaciones Cutneas

insectos.

personas

con

problemas suaves.

dermatolgicos o de piel
sensible.
A mayor concentracin Para nios menores de 10 Efectos Neurotoxicos
mayor duracin del efecto aos la concentracin debe tales como sntomas
DEET

repelente pero no mayor ser menor al 10%.

de insomio, cambios

eficacia.

de humor episodios
psicopticos

que

Puede ser usado sobre la Si requiere un uso continuo pueden llegar al coma
ropa o sobre la piel.

debe alternarse con otros si no son tratados a

repelentes

que

no tiempo.

contengan DEET.
Activo frente a mosquitos Su accin repelente no es Se han descrito casos
e insectos.

duradera.

de

hipersensibilidad

atribuibles
Puede ser usado por nios
d-Limoneno o por personas de piel
sensible.

la

aplicacin tpica del

aceite.

13

2.3.1.2.2 Rotenona o rotenoides ( Derris y Lonchocarpus)

Se extrae de las races de una leguminosa que crece principalmente en Per, es de amplio
uso en la actualidad en el control de oruga comedoras de follaje..

En Sudamrica se

usaba para paralizar los peces, haciendo que subieran a la superficie y pudieran ser
capturados fcilmente.
2.3.1.2.3 Neem ( Azadiractina )
El extracto de aceite de neem se obtiene exprimiendo las semillas del rbol. El ingrediente
activo es la azadiractina la cual posee propiedades insecticidas, fungicidas y bactericidas
realmente sensacionales, e incluyendo cualidades como regulador del crecimiento de los
insectos.
2.3.1.2.4 Poleo (Mentha pulegium)
Las hojas trituradas y secas son uno de los remedios ms efectivos que existen contra las
garrapatas de los animales domsticos. Se aplica sobre la piel del animal y los lugares
donde descansa, tambin lavando el animal con una infusin bien concentrada de la planta
ha arrojado efectos sorprendentes.
2.4 Las Pruebas Dermatolgicas.
Son llevadas a cabo para formular y probar nuevos medicamentos y otras preparaciones
farmacuticas y para incrementar el conocimiento disponible acerca de la forma de actuar
de los animales (y por inferencia de los humanos) para productos o aplicaciones
odontolgicas o veterinarias, en la investigacin de enfermedades como por ejemplo, el
cncer, problemas del corazn, el SIDA etc.

14

Hoy en da existen alrededor de 30 pruebas incluidas dentro de esta clasificacin: Irritacin

drmica, irritacin ocular, sensibilidad drmica, fototoxicidad y foto sensibilizacin,
mutagnesis, toxicidad aguda y crnica, carcinogenesis, toxicidad reproductiva y
teratogenesis.
2.4.1 Test de Irritacin drmica.
El experimentador afeita el pelo del animal, coloca la sustancia a probar, luego que es
cubierta con plstico; el animal est inmovilizado en su jaula para prevenir que forcejee
mientras el experimentador aplica los qumicos que le quemen la piel. El resultado vara
segn la especie animal.
2.4.2 Test de Toxicidad aguda.
Las pruebas de toxicidad agudas comnmente llamadas

pruebas de la dosis mortal

determina el riesgo de la exposicin a corto plazo de un producto o a un ingrediente activo

con el uso frecuente, contacto accidental en los ojos, piel ingerido accidentalmente, dos
ejemplos de estas pruebas son la LD50 (que estima la dosis necesaria para matar a mitad
de un grupo de ratas u otros animales de la prueba) y las pruebas de la irritacin del ojo y
de la piel de Draize.
2.4.3 Test de Irritacin Ocular ( Test Draize).
Inventada por John Draize, se usa para evaluar la habilidad de la sustancia probada para
daar los tejidos oculares. Se eligen conejos no por que su cornea sea la mas parecida a la
humana sino por que no tienen lgrimas para enjuagar los irritantes y por que sus ojos son
lo suficiente grandes como para que la inflamacin sea bien visible. Las reacciones
incluyen hinchazn, inflamacin del iris, ulceracin, sangrado, deterioro masivo y ceguera.
Estos efectos son verificados durante 3 a 21 das luego se mata al animal. Este experimento
ha sido condenado ya que es muy cruel y no produce resultados confiables.
2.4.4 Test de sensibilizacin drmica.
Mide el grado de alergia que puede causar una sustancia con la aplicacin

15

repetida. Hay unos 15 diferentes test que requieren ser hechos varias veces, generalmente
en caballos. Se usan en cantidades exageradas y no tienen validacin internacional. La
respuesta es siempre diferente en el humano.
2.4.5 Fototoxicidad y fotosensibilizacin
Mide la reaccin de la piel a la sustancia con la exposicin a la luz. Se usan en caballos,
cerdos, ratas y ratones sin pelos.

2.4.6 Carcinogenicidad.
Este test sirve para identificar sustancias que pueden causar cncer en las personas. Son
realizadas en ratas y ratones elegidas por su corta vida, pequeo tamao, bajo costo de
adquisicin y fcil manejo. Sin embargo hay sustancias en las que los animales reaccionan
de forma diferente a los humanos, como por ejemplo, el arsnico y el benceno que causa
cncer en los humanos, no lo hacen en ratas o ratones.
2.4.7 Test de teratogenicidad.
Se trata de probar una sustancia en animales hembras preadas para ver si ocurren defectos
de nacimiento. Como por ejemplo el medicamento talidomida no causa defectos de
nacimiento en conejillos de indias, ratas o ratones. Sin embargo, tiene gravsimas
consecuencias si es administrado a una mujer embarazada. De hecho, 10.000 nios en
Inglaterra resultaron lisiados y/o con malformaciones cuando a sus madres se le prescribi
talidomida durante el embarazo. No ocurri en EE.UU. porque la E.P.A no aprob el
medicamento.
2.4.8 Pruebas Dermatolgicas sin usar animales.
Las pruebas dermatolgicas con animales han sido

altamente protestadas por las

organizaciones protectoras de animales, hasta el punto que en los pases desarrollados

estn prohibidas y existen planes para erradicarlas por completo y se han desarrollado
mtodos para sustituirlas, algunos ejemplos de dichos mtodos o alternativas son: humanos

16

voluntarios, tejidos de cadveres o recogido tras ciruga, tcnicas de simulacin, plantas y

microbios, programas de computacin, modelos de animales artificiales, uso de sustancias
que han sido probadas travs de muchos aos, y la simple abstinencia. Entre los mtodos
mas conocidos se tienen los siguientes:

2.4.8.1 Cultivo de clulas in Vitro.

Las sustancias se exponen a una compleja fusin de qumicos para determinar, de acuerdo a
su reaccin, el grado de peligrosidad para los seres humanos en esta lnea figuran la
prueba EYTEX que utiliza un gel de la protena de la haba de gato para simular la crnea
del ojo; la irritacin del ojo es indicada por la coagulacin de esta protena.
2.4.8.2 Test de Corrositex.
Un compuesto de mezclas qumicas es situado sobre una matriz barrera de colgeno que
sirve como especie de piel artificial una vez que esta penetra en la barrera el compuesto
qumico provoca un cambio de color en un sistema de deteccin lquido compuesto con
tintes indicadores de pH. El tiempo que tarda el compuesto qumico en penetrar en la
barrera y producir un cambio de color es comparado con una grfica clasificadora para
determinar la corrosividad.
2.4.8.3 Modelos matemticos y de computacin.
Basados en la estructura y propiedades fisicoqumicas de una sustancia, permite predecir el
comportamiento de un qumico dado. A travs de un paquete electrnico predice la
toxicidad oral, efectos mutagnicos, carcinognicos y teratognico e incluso sirve para las
pruebas de irritacin drmica y ocular.
2.5 Los aceites esenciales.
Los aceites esenciales se consideran sustancias voltiles obtenidas por un proceso fsico de
material vegetal oloroso y/o spido de un slo gnero y especie botnica del cual posee las
caractersticas olorosa spidas y del que generalmente lleva su nombre. Se pueden
localizar en diversos lugares dentro de las especies vegetales. En algunos casos se
distribuyen uniformemente por todas las clulas.

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A menudo los aceites esenciales contienen mas de 200 componentes los ms abundantes
son los terpenos, los cuales son una familia muy diversa de compuestos cuyo esqueleto de
carbono est compuesto de

unidades de isopentilo (isopreno). Estos se clasifican en

unidades de 10 tomos de carbono, es decir un terpeno contiene 10 tomos de carbono y se

le denomina monoterpeno (2 unidades de isopreno), un diterpeno contiene 20 tomos de
carbono y con 15 tomos de carbono (tres unidades de isopreno), a estos se les llama
sesquiterpenos, y significa que tienen 1 veces los 10 tomos de carbono. (Wade, 1991).
Los compuestos presentes en menor cantidad en los aceites esenciales generalmente son
importantes para el olor y el sabor, de hecho un slo compuesto puede cambiar el aroma
(Figueroa, Yalitza, 2001).
Las industrias que ms usan aceites esenciales son la cosmtica (perfumes y aromatizantes),
alimentos (condimentos y saborizantes) y farmacutica.
2.5.1 Aceite esencial de limn.
El aceite esencial del limn est constituido por compuestos complejos, con propiedades
fisicoqumicas diferentes, las cuales

estn influenciadas por el proceso de extraccin

utilizado. Estn constituidos en un 92 - 94 % por terpenos y sesquiterpenos; el ms

importante es el limoneno y el resto son

sustancias oxigenadas,

estas ltimas en

proporcin de 6 a 8 %, el mayor componente es el citral (Rothe Fabor J., 1985) constituido

por una mezcla de dos ismeros geomtricos: el Neral (Citral a Cis- citral) y Geranial
(Citral b trans- Citral).
A mediados de 1980, los Estados Unidos liderizan la produccin del aceite de limn con
aproximadamente 25% del rendimiento total del mundo (2300 toneladas mtricas), seguido
de Italia y Argentina. A pesar de la amplia produccin domstica, el aceite esencial de
limn y otros aceites esenciales, excepto el de naranja son importados de los Estados
Unidos, estas importaciones ascienden hasta aproximadamente 700 toneladas mtricas.
(Chamble. T., y otros, 1991).

18

El aceite esencial de limn ha sido ampliamente estudiado, Chamble T. Y otros (1991)

reportan en su trabajo Anlisis cuantitativo de los constituyentes voltiles del aceite
esencial de la piel del limn 56 componentes del aceite esencial del limn Californiano y
Siciliano. En la tabla 2.2 se muestran los componentes determinados en mayor porcentaje,
se puede observar que los componentes mayoritarios son los hidrocarburos monoterpnicos
entre los cuales el limoneno representa el 65% del total de los constituyentes voltiles.
2.5.2 Algunos factores que influyen en la extraccin del aceite esencial de limn.
En el resultado de la extraccin del aceite esencial de limn, influye el grado de madurez
del fruto, ya que un fruto fresco y con un buen grado de madurez (Piel color verde oscuro)
presenta una corteza de fcil rotura y ms apta para la expulsin del aceite. Cuando el
proceso de madurez avanza, la corteza

tiende a adquirir una dureza que impide la fcil

rotura de las glndulas. El tiempo transcurrido entre la cosecha y su posterior manipulacin

y elaboracin, influye sobre los rendimientos.
Los rendimientos los ms elevados se obtendrn siempre de los frutos frescos, recin
recogidos y con el mnimo golpe magullamiento. Los insectos y otras plagas afectan
tambin al rendimiento.
2.5.3 Procedimientos de extraccin del aceite esencial de limn
Existen diferentes mtodos para extraer el aceite esencial de limn,

entre los ms

empleados se tienen: prensado en fro, extraccin por arrastre de vapor de agua, extraccin
con solvente y mas recientemente se ha desarrollado la extraccin con fluidos supercrticos.
Tabla 2.2
Componentes del aceite esencial de la piel del limn Californiano
COMPUESTO

LIMN

y Siciliano.

LIMN

19

SICILIANO (%)

CALIFORNIANO (%)

MONOTEPENOS

91.06

91.49

Pineno

1.84

1.75

Sabineno

1.79

1.85

b- pineno

10.52

11.13

Limoneno

65.16

65.65

a-terpineno

8.86

8.32

ALCOHOLES

0.53

0.51

Linalool

0.18

0.13

a- terpineol

0.19

0.16

Geraniol

0.02

0.03

ALDEHIDOS

3.78

2.32

Nonanal.

0.12

0.12

Neral.

1.26

0.74

Geranial.

2.05

1.18

HIDROCARBUROS

1.16

HIDROCARBUROS

SESQUITERPENOS
Trans-bergamoteno/citrollyl

1.24
0.36

0.38

b-bisaboleno.

0.52

0.55

ESTERES

0.96

1.18

Acetato de Nerilo.

0.52

0.60

Acetato deGeranylo.

0.38

0.52

0.03

0.03

propianato.

20

KETONES Y XIDOS
Cis- limoneno 1,2 oxide

0.004

0.06

Camfor

0.01

0.008

SESQUITERPENOS

0.09

0.29

Campherenol

0.03

0.03

a-bisabolol

0.04

0.04

NO IDENTIFICADOS

0.20

0.29

TOTAL VOLATILES

97.81

97.16

ALCOHOLES

Fuente: Chamblee t; Journal of Agricultura and Food Chemistry,1991,39,(162-169)

El prensado en fro en sus inicios se realizaba con una pequea prensa accionada a mano,
pero actualmente el mtodo se ha industrializado con un sistema mecnico de prensado en
fro, donde el aceite es separado de los residuos por un sistema de centrifugacin, por lo
que el mtodo tambin es conocido como centrifugado. El aceite esencial obtenido por este
mtodo posee caractersticas aromticas superiores y adems son ms estables debido a los
antioxidantes naturales presentes.
El inconveniente

lo presenta la friccin interna durante el centrifugado que

puede

provocar un aumento de temperatura no controlable produciendo la degradacin trmica y

un oscurecimiento del aceite (Cerpa Chvez, 2000).
La extraccin por arrastre de vapor de agua consiste en colocar la muestra vejetal cortada
en trozos pequeosen una cmara y hacerle pasar una corriente de vapor de agua, para
arrastrar los componentes voltiles con la corriente de vapor, los cuales son recuperados

21

condensando el vapor. La calidad del aceite obtenido generalmente

se altera por

degradacin trmica, es decir se inducen cambios qumicos indeseables como oxidacin,

hidrlisis y oligomerizacin; pero an con estos cambios es uno de los procesos de
extraccin que arroja mayor rendimiento, Adems de la degradacin este mtodo presenta
altos costos operativos por el consumo de energa para producir el vapor de agua.
La extraccin por solventes se realiza poniendo en contacto la muestra con solventes
orgnicos tales como alcoholes, cloroformo, etc. Estos solventes solubilizan la esencia,
obteniendo todos los compuestos de la muestra vegetal; pero con el inconveniente de que se
requieren etapas adicionales de purificacin para separar el aceite y recuperar el solvente, lo
cual se traduce en altos costos operativos.

En cuanto a la extraccin con fluidos

supercrticos, esta surgi ante la necesidad

de preservar el medio ambiente, de la

contaminacin causada por los solventes y agentes qumicos. Este mtodo consiste en usar
sustancias en condiciones supercriticas

como solventes, es decir a unas condiciones

operativas de presin y temperatura por encima del punto critico, donde las sustancias se
comportan como fluidos

y tienen gran poder disolvente semejante a los solventes

convencionales. Los extractos obtenidos presentan mayor frescura y aroma natural.

2.5.4 Variedades de limones en Venezuela
Las variedades de limones existentes en el mercado de Valencia son tres; el limn criollo,
llamado tambin lima mejicano limn gallego, es un fruto muy pequeo por lo que no es
rentable comercialmente y se vende cuando las otras variedades escasean. Es la especie
ms susceptible al virus de la tristeza. El limn persa limn sin semilla (Lima Tahit,
(Citrus Latifolia)). Introducido a California desde Tahit entre 18501880, originalmente de
Persia (Irn), fue introducido a Venezuela por los aos 1934 - 1935. Es el limn ms
comercial ya que posee mayor cantidad de jugo y es menos cido que el limn criollo. Se
produce en los valles de Carabobo y en el estado Mrida y es exportado a Curazao.
Por ltimo, se conoce un limn no comercial, el Chinotto, variedad Eureka o limn
Europeo, de corteza rugosa, con poco jugo, es una de las variedades cultivadas en

22

California, originado en 1887 por T. Agrey es un hbrido de varios rboles de limn

Siciliano (Guenter, 1949). Esta especie no se adapta bien en nuestras condiciones climticas
por lo cual este fruto no se comercializa en el pas (Avilan, Luis, 1997).
2.6 Extraccin con fluidos supercrticos.
Es un proceso de extraccin en el que actan como solventes sustancias a temperaturas y
presiones por encima de sus valores crticos, las cuales se comportan como un fluido. A
estas condiciones estos fluidos poseen fuerzas de solvatacin similares a los solventes
lquidos, lo que permite que muchas sustancias se disuelvan en ellos, debido a propiedades
como la densidad, viscosidad y difusividad de dichos fluidos.

La difusividad y la baja

viscosidad de los fluidos supercrticos permiten el transporte y la fluidez de los materiales

disueltos y en cuanto a la densidad. D. Fernndez y Fernndez Prini. (1997) tambien
sealan que la acumulacin de molculas alrededor del soluto se produce en su mximo
grado cuando las densidades son lo suficientemente bajas como para que predominen los
efectos atractivos, lo que explica el efecto de solvatacin de los fluidos en condiciones
criticas cuando las densidades son muy bajas.
Pero no todos los solutos son solubles en los fluidos supercrticos, D. Fernndez y R.
Fernndez P. tambin sealan que las interacciones particulares que se establecen entre el
soluto dado con el disolvente supercrtico influyen en las solubilidad; como consecuencia,
molculas parecidas pueden tener solubilidades muy diferentes.
El dixido de carbono es considerado el solvente supercrtico ideal, porque no es txico, ni
inflamable, es barato, y con una baja temperatura crtica (31C), se considera el disolvente
apropiado para manejar sustancias lbiles a la temperatura (como lo son por ejemplo,
muchas esencias naturales y productos farmacuticos), ya que es un buen solvente para
molculas no polares como los hidrocarburos y tambin molculas polares como alcoholes,
steres, aldehdos y cetonas. (Figueroa Yaliza, 2001).

23

El proceso de extraccin con fluidos supercrticos es un proceso semi continuo, donde la

alimentacin slida es cargada en un envase extractor. (Ver figura 2.1).
Generalmente el proceso industrial comprende las siguientes etapas: Extraccin,
Expansin, Separacin y Compresin del solvente. Los cuatro equipos del proceso son: Un
envase extractor de alta presin, una vlvula de reduccin, un separador de baja presin y
una bomba para elevar la presin del solvente reciclado.

C a le n ta m ie nto

FS C

E xtra c c i n

C o m p re s i n

S e pa ra c i n

C o nd e ns a c i n

E xtra c to

Fig.2.1 Diagrama bsico del proceso de EFS, I.S.A.S.F., Francia.

Al comenzar el proceso se alimenta generalmente un slido molido al envase extractor. El
fluido supercrtico (CO2) es alimentado al envase extractor a travs de una bomba de alta
presin. Una vez calentado en un intercambiador de calor hasta la temperatura de
extraccin es comprimido hasta la presin de trabajo. Y es cuando se procede a extraer la
esencia de la planta (races, tallo, flores, etc.) alimentada.

24

El fluido supercrtico (CO2) y el extracto es enviado a un separador, con un previo paso a

travs de una vlvula de reduccin. A la temperatura y presin reducidas, el extracto
precipita espontneamente en el separador, mediante un proceso de expansin. Esto evita
tener que aumentar la temperatura para eliminar el solvente por evaporacin, como sucede
con los solventes lquidos tradicionales.
Actualmente el proceso de extraccin con fluidos supercrticos se utiliza en las industrias
qumicas.
2.6.1 Usos y aplicaciones de la extraccin con fluidos supercrticos. (Fernndez D. y
Fernndez Prini., 1997).
Desde hace ya treinta aos que se emplean solventes supercrticos en procesos de gran
escala. Los ms utilizados son los que emplean CO2 para extraer la cafena del caf y para
el extracto de lpulo, y el fraccionamiento con pentano de los componentes pesados del
petrleo. El costo asociado con la compresin y el confinamiento de los fluidos a alta
presin hacen que la mayora de las veces los mtodos tradicionales sean ms econmicos.
Sin embargo la simpleza, la selectividad y la baja o nula agresividad ambiental que ofrecen
los fluidos supercrticos ha hecho que residuos txicos, suelos o sedimentos fluviales
contaminados con pesticidas, como DDT, u otros contaminantes orgnicos se
exitosamente con CO2, mientras que fenoles

traten

y productos relacionados se extraen

eficientemente de disoluciones acuosas.

Para la destruccin de desechos txicos, el agua supercrtica presenta una alternativa
ventajosa frente a la incineracin, la cual a altas temperaturas (superiores a los 1200 C)
produce la emisin

de substancias

contaminantes al ambiente, como las dioxinas

producidas durante la incineracin incompleta de muchas substancias; pero

la alta

corrosividad del agua supercrtica es su principal inconveniente.

Los fluidos supercrticos tambin son utilizados en los mtodos analticos separativos a
travs de la cromatografa que utiliza fluidos supercrticos y la cristalizacin controlada de
distintos slidos.

25

Muchas otras propuestas para desarrollar procesos que utilicen fluidos supercrticos estn
siendo evaluadas por la industria. Estas incluyen la posibilidad de incrementar el poder
disolvente del CO2 supercrtico para las substancias polares mediante el agregado de
surfactantes (sustancias que modifican la tensin superficial de un liquido, como los
detergentes). De esta forma ya ha sido posible solubilizar protenas de alto peso molecular
en dixido de carbono sin que pierdan su actividad biolgica.
Tambin es empleado el dixido de carbono supercrtico para la produccin de polmeros
como opcin que elimina el uso de disolventes muy agresivos.
2.6.2 Ventajas y limitaciones de la extraccin con fluidos supercrticos.
La extraccin con fluidos supercrticos posen diversas ventajas por lo cual estn siendo
investigadas ampliamente por diferentes instituciones e investigadores en todo el mundo,
ya que representa una alternativa para sustituir los solventes contaminantes del medio
ambiente. Otra de las ventajas ms importantes es que no hay que someter al extracto a
procesos costosos de purificacin luego de la extraccin, como sucede con los solventes
comunes. Tambin se obtienen extractos con mayor frescura y aroma natural y actualmente
se han diseado equipos automatizados que facilitan la extraccin.
La extraccin con fluidos supercrticos tiene sus limitaciones, Cerpa Chvez, (2001)
expone que al igual que los procesos de extraccin convencional, es necesario disponer de
datos de equilibrio para conocer cmo se distribuye el componente de inters en las
distintas fases y determinar la composicin del producto extrado para cualquier
composicin de la mezcla inicial. Este es el mayor problema de la EFSC, ya que apenas se
disponen de datos experimentales para realizar los clculos imprescindibles.
Otro de los inconvenientes son los altos costos de los equipos, ya que como se trabaja a
altas presiones se requieren equipos especiales.
2.7 Anlisis y diseo de experimentos.

26

Disear un experimento significa planificarlo, ejecutarlo y analizarlo de forma que se

renan los datos referentes al problema investigado, los cuales deben tener validez
estadstica para poder obtener conclusiones vlidas y objetivas.
Los procesos son una combinacin de mquinas, recursos humanos, materiales, mtodos,
medio ambiente, mediciones, los cuales transforman las entradas del proceso en una que
tiene una o varias respuestas observables, comnmente llamadas variables de respuestas.
Existen fuentes de variacin o factores que afectan la variable de respuesta, es decir
aquellos que al modificar su comportamiento alteran el comportamiento de dicha variable.
Uno de los objetivos del diseo de experimentos es determinar cuales son estas fuentes de
variacin o factores y determinar su influencia en la variable de respuesta; para lo cual se
debe realizar un planteamiento claro del problema, eligiendo la variable de respuesta, los
factores o fuentes de variacin y sus niveles, as como tambin elegir el modelo del diseo
experimental, realizar los experimentos y analizar los datos empleando mtodos
estadsticos de tal forma que se puedan obtener conclusiones con validez estadstica,
aunque los mtodos estadsticos solamente permiten obtener el error probable de una
conclusin, o asignar un nivel de confiabilidad a los resultados.
Para que un experimento pueda tener validez estadstica se deben cumplir al menos dos
condiciones: reproducibilidad y aleatoriedad; La primera

significa que las pruebas se

puedan repetir bajo las mismas condiciones en ms de una ocasin. Por lo cual la
reproduccin nos permitir cuantificar el error (Errores de observacin, errores de
medicin, variacin del material experimental.) inherente al proceso, adems de lograrse
una mejor estimacin de los parmetros.
En cuanto a la segunda condicin significa que para que una prueba sea aleatoria tanto el
material asignado como el orden en que se realizan deben seleccionarse al azar o de manera
aleatoria. La aleatoriedad es importante porque permite anular o confundir los efectos de
los factores no controlables; as como tambin valida las pruebas estadsticas al hacer que
los errores experimentales sean estadsticamente independientes.

27

2.7.1 Diseos experimentales factoriales.

Los diseos experimentales factoriales son aquellos en los cuales se investigan todas las
posibles combinaciones de los niveles de los factores o variables a estudiar, con el fin de
determinar los efectos de dichos factores sobre la variable de respuesta seleccionada; as
como tambin los efectos principales de los factores, es decir el cambio en la respuesta
producido por un cambio en el nivel del factor. Por ejemplo el efecto principal de un factor
A puede interpretarse como la diferencia entre la respuesta promedio en el primero y
segundo nivel de ese factor; el cual se interpreta que al incrementar el nivel del factor de 1 a
2 se produce un cambio en la variable de respuesta promedio.
Cuando la diferencia en la respuesta entre los niveles de un factor no es la misma en todos
los niveles de los factores, se dice que existe una interaccin entre los niveles del factor.
Existen mtodos grficos para interpretar las interacciones, generalmente determinados
automticamente por los programas de computadoras, pero para verificarlas se emplea un
anlisis de varianza para confirmar esta interpretacin.(Montgomery, 1996).
2.7.2 Anlisis de Varianza (ANOVA).
Para evaluar si el efecto de un factor es significativo en la variable de respuesta, se debe
probar estadsticamente que la respuesta promedio en sus diferentes niveles es diferente,
para decir que el factor afecta la variable de respuesta. Esto se logra mediante una prueba
de hiptesis de igualdad de medias entre los niveles del factor.
El procedimiento para probar hiptesis de igualdad de medias se le conoce como anlisis
de Varianza o ANOVA por sus siglas en ingls (Analisis Of Variante). Este procedimiento
plantea un modelo estadstico de la variable de respuesta, el cual expresa la forma en que se
comporta dicha variable debido a la variacin natural o error.

28

Para probar la hiptesis de igualdad de medias se determina como estadstico de prueba, el

factor de Fisher experimental para cada factor, determinado como el cociente entre el
cuadrado medio del factor y el cuadrado medio del error, el cual es comparado con el factor
de Fisher terico Fo(, v1, v2); donde es el nivel de confianza Y ( v1, v2) son los grados
de libertad del numerador y el denominador respectivamente. Este se determina empleando
las tablas de puntos porcentuales de la distribucin F. Si el factor de Fisher experimental
resulta mayor al terico existe evidencia estadstica de que el efecto del factor afecta la
variable de respuesta.
Cuando se utiliza el anlisis de varianza para probar hiptesis de igualdad de medias, es
necesario cumplir con tres requisitos indispensables para validar los resultados que el
ANOVA arroja, estos requisitos son los siguientes: Normalidad de errores, Varianza
constante e Independencia de errores.
Los tres requisitos estn enfocadas a evaluar, en primer lugar, que los residuos (errores
aleatorios) provengan de una distribucin normal con media cero ( = o) y desviacin
estndar ( = MSE); esto se debe a que el mtodo utilizado para probar la hiptesis es la
prueba Fisher, la cual est condicionada a que dichos residuos sean normales. En segundo
lugar debe existir una variacin constante en los datos es decir que el intervalo entre el
valor mximo y mnimo no sea muy grande, es decir la varianza debe ser constante. Y por
ultimo debe existir aleatoriedad en los errores con la finalidad de que los errores sean
estadsticamente independientes. Existen diferentes mtodos grficos para probar los
supuestos del anlisis de varianza.

2.7.3 Diseos factoriales 2k.

Los diseos factoriales 2K son casos especiales en los cuales los factores K solo tienen
dos niveles que pueden ser cuantitativos (temperatura, presin, tiempo, etc.) o cualitativos

29

(dos mquinas, dos operadores, nivel bajo, etc.) generalmente estos niveles son alto (+) y
bajo (-).
Los efectos principales de los factores A y B, las interacciones (AB) son sencillos de
estimar y a travs del anlisis de varianza se estima la significancia de dichos factores.
Cuando se considera un diseo experimental con 4 factores cada uno con dos niveles, se
tiene un diseo factorial 24

con 16 corridas o combinaciones de tratamientos o

experimentos que permite estimar los efectos principales, adems de las interacciones entre
los factores que afectan la variable de respuesta, para lo cual es necesario realizar un
anlisis de varianza.
Este diseo posee 4 efectos principales, 6 interacciones entre dos factores, 4 interacciones
entre tres factores y una interaccin entre cuatro factores. Cuando el nmero de factores
es moderadamente grande (K> 4 5) se aplica el principio de dispersin de los efectos, es
decir, usualmente el sistema est dominado por los efectos principales y las interacciones
de orden inferior.(Montgomery, 1996).
El anlisis de varianza en estos diseos supone que las observaciones estn distribuidas de
manera normal e independiente, con la misma varianza para cada tratamiento nivel del
factor, esta suposicin se verifica mediante el examen de los residuos. Un residuo es la
diferencia entre una observacin y la correspondiente media observada para el tratamiento.
Entonces la suposicin de normalidad puede verificarse mediante la construccin de una
grafica de probabilidad normal de los residuos y para verificar la suposicin de varianzas
iguales para cada nivel de tratamiento, se hace una grafica de los residuos contra los niveles
del factor y se compara la dispersin de los residuos. (Montgomery, 1996).
.2.7.4 Mtodos de superficie de respuesta
La metodologa de superficie de respuesta (MSR) es un grupo de tcnicas matemticas y
estadsticas tiles para el modelo y anlisis en aplicaciones donde la respuesta de inters

30

est influenciada por varias variables y el objetivo es optimizar esta respuesta. En un

proceso cuya respuesta es una funcin de dos factores se tiene: donde
observado
por:

en

la

respuesta

( y ) = f (x1; x2 ) = ,

y.

si

la

respuesta

representa el error

esperada

entonces la superficie representada por

se

denota

se denomina

superficie de respuesta. La respuesta se representa como una superficie slida en un espacio

tridimensional.

% Rendimiento

Superficie de Respuesta Estimada

0.41
0.37
0.33
0.29
0.25
0.21
0.17
40

42

44

46

Temperatura

48

50

80

84

88

92

96

100

Presin

Figura 2.2 Superficie de respuesta tridimensional.

El primer paso en el MSR consiste en determinar una aproximacin adecuada a la relacin
funcional entre y y el conjunto de variables independientes. Por lo general se emplea un
polinomio de orden bajo sobre alguna regin de las variables independientes. Si la
respuesta es descrita adecuadamente por una funcin lineal de las variables independientes,
la funcin de aproximacin es un modelo de primer orden:

y = B0 + B1 x1 + B2 x2 + ......Bk xk +

31

Donde,

B0 ; B1; B2 ; Bk ,

representan los coeficientes de regresin

x1 , x 2 , x k ,

representan las variables codificadas. Cuando existe curvatura en el sistema se

debe usar un polinomio de mayor grado como por ejemplo un modelo de segundo orden.
El MSR es una tcnica secuencial, cuyo objetivo consiste en determinar las condiciones de
operacin mas adecuadas para un sistema, o determinar la regin del espacio de los factores
en

la

que

se

satisfacen

las

condiciones

de

operacin.

32

Con frecuencia, la estimacin de las condiciones de operacin ptimas del sistema esta
lejos del ptimo real, en tales circunstancias, el objetivo es moverse rpidamente hacia la
vecindad general del ptimo, lo usual es suponer que el modelo de primer orden es una
aproximacin adecuada de la superficie verdadera. Por lo general esto se logra con el
empleo del mtodo de mxima pendiente en ascenso (MMPA), es un procedimiento para
avanzar secuencialmente en la direccin del mximo incremento de la respuesta.

CAPITULO III
Marco metodolgico
En este captulo se presentan las fases de la metodologa empleada para alcanzar los
objetivos planteados de esta investigacin.
3.1 Materiales y Equipos.
3.1.1 Materia Prima.
La materia prima empleada fueron limones Persa o sin semillas (Citrus Latifolia o Lima
Tahit.) completamente verdes y sin magulladuras de varios proveedores del Mercado de
Mayoristas de Valencia.
3.1.2 Equipos
Los equipos utilizados principalmente en esta investigacin fueron un cromatgrafo de
gases, un equipo de Extraccin Supercrtico y otro de extraccin con arrastre con vapor.
Cromatgrafo de Gases.
El cromatgrafo de gases empleado es marca Varian, Modelo 3300, equipado con
detectores de Ionizacin a la Llama (FID) y Conductividad Trmica

(TCD). Utiliza una

columna capilar J y W de Silica fundida DB-5 ( 30 m, 0.1mm. i.d , 0.1 m f.t). El gas

33

portador o gas de arrastre empleado es hidrgeno de alta pureza y se emple aire para
producir la combustin en el detector FID.
Este equipo est acoplado a un sistema computarizado para analizar, registrar e imprimir el
Cromatograma. Este sistema contiene el software PEAKSIMPLE II versin 3.5. El
programa es alimentado por los tiempos de retencin de los compuestos puros o patrones,
esto le permite identificar los compuestos presentes en las muestras.

Equipo de Extraccin Supercrtica.

Para realizar la extraccin del aceite esencial del Limn con CO2 supercrtico se us una
planta de extraccin a escala de laboratorio (Applied Separations Spe-ed SFE), la cual
requiere para funcionar dixido de Carbono lquido (CO2) El equipo est conformado por
tres mdulos que son: el mdulo de la bomba de alta presin, el mdulo del horno y el
mdulo de descarga y recoleccin, adems cuenta con un sistema de enfriamiento y un
compresor (ver figura 3.2).
El compresor (C) suministra aire a una presin mxima de 125 psig, alimentando a un
cilindro pulmn (CPT) de aproximadamente 1200 m3 de capacidad, al llenarse este tanque
el compresor se apaga automticamente, luego al disminuir la presin a 75 psi comienza a
funcionar hasta reponer nuevamente la presin. El mdulo de la bomba (BM) de alta
presin es alimentado con aire comprimido proveniente del tanque pulmn (TP), para
comprimir el dixidode Carbono liquido suministrado por empresa Oxicar en un cilindro
(CD) de 6 m3 de capacidad, el cual est conectado con la bomba de alta presin La
mxima presin de operacin de esta bomba es de 690 bar y posee una vlvula que regula
la presin del aire alimentado (VRP); adems posee un indicador de presin digital (PIB),
donde se indica la presin del Dixido de Carbono y un indicador de presin del aire (PI4).
El sistema de refrigeracin tambin est conectado con el mdulo de la bomba de alta
presin, el hace recircular un lquido refrigerante a travs de la bomba de alta presin para

34

retirar el calor que se produce por la compresin del Dixido de Carbono. El modulo del
Horno (MH) consiste de un horno elctrico diseado para calentar hasta 240 C; en su
interior

se encuentra el cilindro extractor (CE) de acero inoxidable con 1 litro de

capacidad, diseado para soportar una presin de 10.000 psi. Este cilindro est conectado
por su tapa inferior con las tuberas de la bomba de alta presin y por la tapa superior con el
sistema de recoleccin y descarga.

Figura 3.1 Equipo de Extraccin Supercrtica

V3

V7
B2

FI

PI3
V8

V2

PI4

PI2

S2

PI1

BM
B1

TP
T
P

V5
V1

VM

CE

S4
VRP S4

CD
CD
S1

P IB

TI1

V6

TI2

TI3

TI4

MR

S7
S7 S6
S6 S5
S5
S1
S1

S2

SE

HM
Leyenda
C: Compresor.
TP: Tanque pulmn.
CD: Cilindro de CO 2
SE: Sistema de enfriamiento.
BM: Bomba modular.
CE: Cilindro de extraccin.
MR: Modulo de descarga

37

Una termocupla mide la temperatura del cilindro extractor (TI4), la vlvula (V6) regula la
entrada de Dixido de Carbono al cilindro extractor, y para descargarlo al ambiente se
usa la vlvula (V7 ),

tambin posee una vlvula para regular la salida del producto

extrado (V8) y conectarlo con el mdulo de

recoleccin y descarga. El mdulo de

recoleccin y descarga est constituido por dos vlvulas micromtricas independientes

(VM) las cuales regulan el flujo de CO2 que sale del cilindro de extraccin (CE) hasta un
mximo de 5 l /min. Su temperatura es controlada hasta 100C en el panel de control de
horno. Estas vlvulas estn conectadas con el envase de recoleccin.
Este equipo de Extraccin Supercrtica es operado de dos formas una extraccin esttica en
la cual el Fluido Supercrtico se mantiene en contacto con la muestra por cierto
tiempo(Tiempo de extraccin esttico)

y luego es con la muestra por cierto

tiempo(Tiempo de extraccin esttico) y luego es la Extraccin Dinmica en la cual el

Fluido Supercrtico fluye continuamente dentro del cilindro pasando por la muestra por un
cierto continuamente dentro del cilindro pasando por la muestra por un cierto tiempo
(Tiempo

de

extraccin

dinmico).

tiempo

(Tiempo

de

extraccin

dinmico)

38

Equipo de Extraccin de Arrastre con Vapor.

Este equipo est formado por una plancha de calentamiento (PL), un reactor (R), que posee
un indicador de temperatura (TI1) y en su interior tiene una rejilla metlica para separar la
muestra del agua y permitir que el vapor pase a travs de esta. En la tapa de la olla existe
una abertura donde se conecta a una trampa Clevenger (TPH), donde se recolecta el
lquido condensado por el condensador(C) conectado en la parte superior de dicha trampa.
Tambin en la tapa de la olla se conecta un embudo de separacin para reponer el agua en
la olla (ER) (ver figura 3.2).
Fases Metodolgicas de la Investigacin.
A continuacin se presentan las fases metodolgicas utilizadas para alcanzar el

objetivo

general propuesto en esta investigacin. Estas fases metodolgicas son cuatro; en la

primera se evala la extraccin del aceite esencial del limn con CO2 supercrtico; en la
segunda se identifican las pruebas dermatolgicas y microbiolgicas necesarias, en la
tercera se formula el repelente de insectos a varias concentraciones de aceite esencial de
limn y finalmente se investiga el mercado de los repelentes en Venezuela.
3.2.1. Evaluacin de la extraccin del aceite esencial del limn
Seleccin de la materia prima para realizar la extraccin.
Para seleccionar la materia prima fue realizada una investigacin preliminar sobre las
variedades de limn existente en el mercado de Mayoristas de Valencia, a travs de la cual
se pudo conocer que existen tres variedades de limn que son: 1) limn criollo (tambin
llamado limn mexicano), 2) limn Persa limn sin semilla (Citrus Latifolia o Lima
Tahit.) y 3) el limn Chinotto (Eureka o limn Europeo).De estas tres variedades fueron
tomados limones completamente verdes y sin magulladuras a los cuales se les extrajo el
aceite esencial de la piel del fruto con Hexano, con la finalidad de realizar un anlisis
cromatografico para determinar cual variedad presenta mayor cantidad de limoneno.

39

Por ser este el compuesto mayoritario presente en el aceite del limn; el criterio tomando
fue el porcentaje de rea registrado en el cromatograma, el procedimiento seguido fue el
siguiente:
Sobre un papel de aluminio (no sobre papel normal porque absorbe el aceite) se ralla la
piel del Limn hasta obtener aproximadamente 2 gramos.

Figura

3.2

Equipo

de

Extraccin

de

arrastre

V1

de

vapor

de

Leyenda
C

C
OLL
PL
PLI
ER
VP
TPH

ER

TPH
IT1

PLI

VP
S1

PL

: Condensador
: Reactor
: Plancha de calentamiento
: Piel de limn
: Embudo de reposicin
: Vapor de agua
: Trampa de Clevenger

agua

39

Luego se transfiere a un erlermeyer de 10 ml y se mezcla con

5 ml de Hexano.
Se agita constantemente durante un tiempo estipulado, luego se recoge el extracto en un
tubo de ensayo de 10 ml, y se deja al ambiente hasta que el nivel del lquido no vare.
Se repite el mismo procedimiento dos veces ms, para realizar posteriormente realizarle la
cromatografa de gases.

39

Para cada variedad fueron realizadas tres extracciones y con el anlisis cromatogrfico se
determin el porcentaje de rea

correspondiente al limoneno, las cuales fueron

promediadas para obtener un porcentaje de rea promedio.

El resultado de este anlisis arroj que el Limn Persa contiene mayor porcentaje de
Limoneno seguido del Limn Criollo y el Limn Chinotto, por esta razn fue seleccionado
el Limn Persa como materia prima para realizar esta investigacin.
Seleccin del diseo experimental.
La seleccin del diseo experimental para su ejecucin requiri una serie de pasos que se
presentan a continuacin la cual condujo a evaluar estadsticamente la influencia que
ejercen las variables involucradas en el proceso de extraccin:
Identificacin de las variables o factores.
Para evaluar la influencia que ejercen las variables en el proceso de extraccin del aceit
con CO2 supercrtico las variables fueron identificadas utilizando como un diagrama
causa efecto; para lo cual fue necesario familiarizarse con el proceso a travs del estudio
del funcionamiento del equipo de Extraccin Supercrtica, y de los antecedentes, es decir
otras investigaciones realizadas en este equipo. Tambin fueron identificadas las variables
controladas (que pueden ser medidas o cuantificadas) y las no controladas (que no se
pueden medir).
Seleccin de las variables o factores.
Luego de esta identificacin de las variables, fueron seleccionadas para el diseo
experimental las variables controlables.
Definicin del modelo de anlisis.
A travs de una revisin bibliogrfica fue seleccionado

el modelo para analizar

estadsticamente el efecto de las variables seleccionadas sobre el proceso de extraccin,

como es el diseo experimental factorial
Seleccin de los niveles de los factores.
Los niveles del diseo factorial fueron seleccionados tomando como referencia el trabajo de
Grosse R. y Marquina-Chidsey G. de la extraccin del aceite esencial de la naranja cajera

40

(Citrus Aurantium Amara l.) con CO2 supercrtico, ya que se trat de un fruto ctrico. Estos
fueron introducidos en el programa estadstico Statgraphics Plus el cual arroj la matriz
del diseo experimental en la cual se combinan todos los niveles.
Ejecucin del diseo experimental factorial 24.
La extraccin del aceite esencial del limn fue realizada segn el diseo factorial 24
establecido en la matriz del diseo experimental utilizando la planta a escala de laboratorio
de extraccin Supercrtica, es decir se realizaron los 16 experimentos establecidos en dicha
matriz mas una rplica, para lo cual fue necesario seguir una serie de pasos para el
arranque, operacin y parada del proceso en cada extraccin, estos pasos son los siguientes
(Ver diagrama de flujo, figura 3.2):
Arranque:
Encender el Compresor (S1) y mantener V1 cerrada hasta que el indicador de presin del
Compresor (PI1) llegue hasta 125 psi, cuando esto ocurra se debe abrir V1 y cerrar V2 para
comenzar a llenar el Tanque Pulmn (TP).
Encender el sistema de enfriamiento (SE) con los interruptores S3 y S2.
Preparacin de la muestra:
Quitar la piel de los limones seleccionados completamente verdes.
Picar la piel del limn en el molino elctrico y pesar 80 g.
Pesar el envase recolector vaco y colocarlo en el mdulo de recoleccin y descarga.
Cargar la muestra en el cilindro de extraccin: introducir en el fondo de cilindro el filtro
(Guata), colocar 130 metras y sobre ellas colocar otro filtro (Guata) encima de este segundo
filtro colocar los 80 g. de muestra tapndola con un tercer filtro, luego cerrar el cilindro de
extraccin.
Introducir el cilindro de extraccin en el modulo del horno (ME) y conectar su tapa
superior e inferior (Conexiones B1 y B2) con las tuberas del horno:
Colocar una capa de tefln en la rosca del tornillo y en la frula.
Conectar las tuercas apretando con la mano y no con herramienta.
Introducir la termocupla en el orificio superior del cilindro de extraccin.
Verificar que la temperatura del sistema de enfriamiento sea 0C (TI1).
Verificar que las vlvulas V7, V8, VM, VRP y V3 estn cerradas.

41

Fijar las condiciones de temperatura en los indicadores de temperatura TI2 y TI3 :

Apagado el horno, presionar SP y desplazar el cursor hasta los dgitos que se desea
cambiar.
Colocar los valores deseados y pulsar SP para fijarlos.
Comenzar el calentamiento del horno accionando el interruptor S5 hasta que los valores
fijados de temperatura en el horno y el cilindro de extraccin sean iguales.
Operacin:
Abrir la vlvula V5 y verificar la recirculacin de refrigerante en la bomba de alta presin
(MB).
Abrir las vlvulas V2, V3, V4 para permitir el flujo de dixido de carbono

y aire

comprimido en la bomba de alta presin.

Encender la bomba de alta presin con el interruptor S4 y anotar la lectura del indicador
PIB (ver precauciones).
Abrir la Vlvula V6 para que fluya el CO2 en el Cilindro de extraccin.
Chequear si hay fugas en las conexiones (B1 y B2) del cilindro rociando espuma de jabn.
En caso de haber, corregir la fuga de la siguiente forma:
Cerrar la vlvula V6 y V4 para impedir la entrada de CO2 al Cilindro de extraccin.
Despresurizar el Cilindro de extraccin abriendo la vlvula V7 lentamente.(No se debe
despresurizar la bomba porque se gasta todo el CO2 presurizado que todava no ha pasado
al cilindro, tampoco se debe hacer entre cada extraccin.
Abrir la puerta del horno y cuando el cilindro se

enfre desmontarlo para cargar otra

muestra.
En caso de no haber fuga abrir la vlvula VRP lenta y cuidadosamente

para presurizar el

CO2 hasta la presin de operacin.

Alcanzada la presin de operacin accionar el cronmetro para medir el tiempo de
extraccin esttico.
Alcanzado este tiempo abrir la vlvula V8 y fijar el flujo de operacin en el indicador de
flujo (FI) con la vlvula micromtrica (VM), simultneamente accionar el cronmetro para
medir el tiempo de extraccin dinmico.
Parada

42

Cerrar las vlvulas V8, VM (no completamente), V6, V4, V3.

Apagar el calentamiento del horno (S7) y la vlvula micromtrica (S6).
Abrir lentamente V7 para despresurizar el cilindro de extraccin. Abrir la puerta del Horno
para que se enfre, cuando esto suceda, desmontarlo y cargar otra muestra (Ver
precauciones).
Desmontar el envase de recoleccin y pesarlo con su contenido.
Si es la ltima extraccin:
Abrir la vlvula V6 para despresurizar la bomba de alta presin, cuando el indicador est en
cero apagar la bomba (S4).
Apagar el calentamiento del horno (S6) y la vlvula micromtrica (S7) y el horno (S5).
Desmontar el cilindro de extraccin.
Cerrar todas las vlvulas y apagar el Compresor.
Limpiar las tuberas del modulo de recoleccin y descarga, inyectando Eter de petrleo en
las conexin del cilindro, con las vlvulas V8, VM abiertas.
Apagar los equipos y desenchufarlos.
4. Precauciones:
Las conexiones del cilindro de extraccin deben se apretadas con los dedos y no con
herramienta por que se daa la rosca del tornillo.
Si la lectura de la Bomba de alta presin es menor de 58 Bar se debe reponer el cilindro de
CO2.
Mientras se descarga el CO2 al ambiente debe ser encendida la campana extractora y
tambin deben alejarse del equipo todas las personas, ya que este gas en exceso puede ser
txico.
No debe ajustarse la presin de operacin antes de alcanzar la temperatura de operacin.
El frasco recolector debe estar envuelto en una tela metlica, para proteccin en caso de que
explote
Si las perlitas del medidor de flujo no se mueven cerrar inmediatamente la vlvula V8, y
revisar si la aguja de descarga est obstruida, ya que puede explotar el frasco recolector.
Los datos experimentales fueron recolectados empleando el formato de la Tabla 3.3.

43

g) Anlisis estadstico de los datos.

Luego de realizados los 16 experimentos y recolectados los datos, estos fueron
introducidos en el programa de computacin estadstico Statgrapfis Plus el cual realiza el
anlisis estadstico del diseo experimental aplicando el anlisis de Varianza (ANOVA) a
las cuatro variables seleccionadas; lo cual arrojo la influencia de estas variables y sus
interacciones sobre el rendimiento de la extraccin del aceite esencial de limn.
3.1.2.2 Obtencin de las condiciones ptimas de presin y temperatura.
Los niveles seleccionados para establecer las condiciones optimas de presin y temperatura
del proceso de extraccin fueron seleccionadas empleando el mtodo de superficie de
respuesta, paro lo cual se realiz un diseo experimental factorial 32, con tres niveles: bajo,
alto y un punto central los niveles fueron seleccionados por encima de los considerados en
el diseo 24 con la finalidad de explorar otros niveles que
rendimiento de la extraccin.

pudieran maximizar el

51

Los niveles seleccionados, al ser introducidos en el programa estadstico Statgraphics Plus

genera la matriz del diseo el cual consta de 9 tratamientos y fue ejecutado de igual forma
que el diseo 24 .
Los datos

recolectados del rendimiento de la extraccin fueron introducidos en el

programa estadstico, el cual dio las condiciones ptimas estadsticamente y la ecuacin

empleada, para llegar a estas condiciones de temperatura y presin, las cuales fueron
verificadas experimentalmente.

53

3.2.1.3 Comparacin de la extraccin del aceite esencial de limn con CO2 supercrtico con
otro mtodo convencional.

37

Entre de extraccin convencionales considerados para realizar la extraccin del aceite

esencial de limn estuvieron: la extraccin por solvente, por arrastre con vapor de agua y la
extraccin por prensado en fro.Los mtodos Fue seleccionado el mtodo de arrastre con
vapor de agua por ser el ms econmico, sencillo y adems de contar con el equipo para
realizar la extraccin.
La extraccin de arrastre con vapor se realiz empleando el equipo mostrado en la figura
3.3. Para lo cual se siguieron los siguientes pasos:

Tabla 3.1
Formato para recolectar los datos del diseo experimental factorial.

Condiciones de operacin del tratamiento

(P 1)Bar

(Q 0.1)l/min

(T

1)C

Resultados experimentales

(tD 0.02)s

(m1 0.01) (m2 0.01)g (m3 0.01)g % Rendimiento

g

Fuente: Elaboracin propia.

Donde:
m1: Masa de la muestra m2: Masa del envase recolector vaci m3: Masa del envase recolector con el extracto.

46

Se coloca un litro de agua en la olla (ver figura 3.2) y se comienza el calentamiento hasta
que hierva, cuando esto suceda se coloca sobre la malla metlica 80 gramos de piel de
limn picada, seguidamente se cierra el reactor y ; se conectan en su tapa: el Clevenger, el
condensador y el embudo de separacin. Seguidamente se toma el tiempo de inicio de la
extraccin, continuando con la extraccin hasta que no se observen cambios en el volumen
de extracto recogido, para esto se uso la tabla 3.2.
Tabla 3.2
Formato para recolectar los datos de la extraccin con arrastre de vapor de agua
Masa del limn
Experimento N

Masa

de

aceite Rendimiento %

esencial
(m 0.001)g

(m

0.001)g

(% R

0.022)

46

Luego de la extraccin se desmonta el equipo y el extracto es decantado en un embudo de

separacin, luego es desecado con Sulfato de Aluminio. El extracto final fue pesado para
determinar los gramos de extracto obtenido.

Por ltimo para evitar la oxidacin se le

agrego el antioxidante BHT y se determin el rendimiento empleando la siguiente formula:

%R =

m2
(100 )%
m1

(3.1)

Donde:
m1: Gramos de corteza de limn, g.
m2: Gramos de aceite esencial de limn, g.
Fueron realizadas un total de 6 extracciones de las cuales se calcul el rendimiento
promedio, que fue comparado con el mtodo de Extraccin Supercrtica seleccionando el
mayor Rendimiento.

El formato empleado para recolectar los datos es mostrado en la

tabla 3.2.
3.2.1.4 Identificacin de los componentes principales del aceite esencial de limn.
Para identificar los componentes principales del aceite esencial de limn se realiz un
anlisis cromatogrfico de las muestras obtenidas con extraccin supercrtica y con arrastre
de vapor para realizar dicho anlisis fue necesario establecer los tiempos de retencin de los
compuestos puros para compararlos con los de la muestra. Para llevar a cabo esta
identificacin se siguieron los siguientes pasos:
Preparacin de la solucin patrn
Esta solucin se preparo agregando en un tubo de ensayo 5 ml de hexano, y 5 l
(microlitro) de cada compuesto puro (solucin patrn al 1%), el volumen inyectado fue de
1l en modo Splitless, se realizo su respectiva cromatografa para identificar claramente
los tiempos de retencin.

47

Obtencin de la rampa de temperatura

Para realizar el anlisis Cromatogrfico fue necesario establecer una rampa de temperatura
para separar los compuestos y as poderlos identificarlos, ya que algunos tienen tiempos de
retencin muy similares.
Identificacin de los compuestos
Una vez obtenida la rampa fueron inyectada las muestras e identificados los componentes
presentes en el aceite esencial de limn a travs de los tiempos de retencin de los
compuestos puros. Para corroborar dicha identificacin se hizo la espectrometra de masa
de uno de los extractos por fluido supercrtico como por arrastre con vapor de agua.

Formulacin del repelente con aceite esencial de limn.

3.2.2.1 Construccin de curva de calibracin.
Se prepararon varias soluciones a diferentes concentraciones de d-limoneno para obtener el
porcentaje de

rea a travs de un anlisis cromatogrfico una vez obtenidos estos

porcentajes de reas fueron procesados en el programa estadstico Statgraphics Plus para

obtener una ecuacin que relacione la concentracin con el porcentaje de rea. Dicho
estudio fue realizado en un Varian 3800 perteneciente a la Facultad de Ciencia y
Tecnologa equipado con un detector de ionizacin a la llama y una columna WCOT
capilar de silica fundida CP-Wax 52 CB ( 25 m, 0,25 ID,0,39 OD), el gas portador fue
hidrgeno.
3.2.2.2 Seleccin de la Concentracin.
En la formulacin de la crema repelente utilizaremos la base Unibase (O/W) la cual fue
formulada en la Facultad de Farmacia de la Universidad Central de Venezuela. A est se le
incorpor el aceite esencial a diferentes concentraciones de d-limoneno, para
posteriormente realizarle el criterio de repelencia, una vez seleccionada la concentracin se
le realiz las pruebas de estabilidad qumica y fsica.

48

3.2.2.3 Criterio de Repelencia.

El estudio se realizo con voluntarios de ambos sexos entre edades comprendidas entre 20
y 30 aos de edad, la muestra estuvo constituida por 20 personas distribuidos
aleatoriamente en grupos de 10: grupo I (control) al que se le aplic la crema repelente OFF
y el grupo II (experimental) que recibi la crema con aceite de limn. Las evaluaciones se
efectuaron a las 1 y 3 horas de la aplicacin y consisti en contar el nmero de picaduras y
anotar las molestias causadas por los insectos. El criterio

para evaluar

el grado de

repelencia fue el siguiente:

Repele si el sujeto siente pocas molestias por los insectos en las reas tratadas y si en ellas
aparece menos de 5 picaduras, una vez restadas las existentes que pudieran haber en el
inicio del experimento.
No repele, si el sujeto ha notado molestias por los insectos y tiene de 5 o ms picaduras en
las reas tratadas aparecidas despus de aplicar la crema.
3.2.2.4 Estabilidad del producto
3.2.2.4.1 Estabilidad Qumica.
Por lo general en el reconocimiento de una inestabilidad qumica hay que tomar en cuenta
los ensayos de estabilidad por envejecimiento acelerado los cuales son de indiscutible
utilidad. Estas consisten en pruebas de envejecimiento artificial donde la temperatura que
en general se utiliza para la exposicin isotrmica es de 40C que se acompaa de otras dos
dependientes del punto de fusin por ejemplo: (5, 25, 40, o 20, 30, 40) C en este caso las
temperaturas de estudio fueron (5, 25 y 40)C por tener mayor margen de variacin una
vez formulada la crema se elaboro UV Visible cada 3 das por 2 semanas equivalente a seis
meses de vida del producto para observar cuanto se haba degradado el principio activo.
3.2.2.4.2 Estabilidad Fsica.

49

La estabilidad fsica de los sistemas farmacuticos puede acarrear importantes

consecuencias afectando dos efectos fundamentales:
La apariencia del producto esto incluye aspectos como el color, olor, texturas de la muestra.
Uniformidad de la dosis.
3.2.5 Identificar las pruebas Dermatolgicas y Microbiolgica que aseguren la calidad del
producto.
Al hablar de la calidad de un producto nos referimos a la capacidad que este posee para
conservar sus especificaciones de diseo dentro de ciertos lmites y por cierto tiempo, de
modo que se pueda asegurar su efectividad, calidad y pureza. Manteniendo inalterables o
dentro

del

limite

permisible

sus

propiedades

organolpticas,

fsico-qumica,

microbiolgicas.
a) Pruebas Dermatolgica.
Para llevar a cabo la identificacin de las pruebas dermatolgicas se realizo una bsqueda
exhaustiva en la bibliografa, la informacin recopilada se ha expuesto detalladamente en
l capitulo 2 (Marco Terico). En la seleccin de dicha prueba se desecharon en primera
instancia las pruebas con animales por ser extremadamente crueles y se realiz con
humanos voluntarios con el fin de determinar si producan reacciones alrgicas. Es la
denominada Prueba de Parche la cual es valida para la apreciacin de Irritacin drmica
de preparados dermatolgicos el procedimiento a seguir es el siguiente:
Se coloco un parche con el preparado en el reverso del antebrazo. Si el material es untuoso
se coloca aproximadamente 0,4 gr. En caso de lquidos o slidos se coloca
aproximadamente 0.5 ml o 0,5 gr respectivamente.
Luego se cubre con un adhesivo plstico para evitar la cada de los parches y retardar la
evaporacin de los lquidos voltiles con el preparado.
Luego de 24 horas se aparta el parche y se aprecia la reaccin local en la piel por la
intensidad de la irritacin producida transcurrido un intervalo de 24 horas, se repite la
prueba y se observa. Si hay reaccin y su intensidad se procede as hasta diez veces
aplicando un da y dejando descansar otro. Dos semanas despus de la dcima aplicacin se
hace otra mas analizando el resultado luego de 24, 48, 72, y 168 horas.

50

La accin sensibilizante, si existe se manifiesta por eritema ligero (+), eritema (++), eritema
y edema (+++)

edema y vesiculacion (++++). En estos casos de reaccin positiva

corresponde investigar a que componente del preparado debe atribuirse. Para ello se
preparan frmulas parcializadas de la crema, conteniendo cada uno todos los ingredientes
salvo uno. Se escogen los voluntarios entre aquellos que mostraron signos de
sensibilizacin en la primera prueba. Aplicados los parches correspondientes se analizan los
lugares de aplicacin a las 24, 48, 72 horas de haberlos quitados.
Pruebas microbiolgicas.
Uno de los aspectos fundamentales en la elaboracin de todo producto farmacutico o
cosmetolgico, es garantizar la calidad de los mismos lo cual implica asegurar que el
producto no est contaminado con microorganismos que puedan afectar su seguridad,
eficacia, estabilidad y/o aceptabilidad.
La presencia de microorganismos en estos productos es inaceptable por dos razones
fundamentales:
Un producto contaminado puede constituir un riesgo de infeccin para el usuario.
La contaminacin microbiana puede ocasionar el deterioro del producto.
Esto

se llev a cabo tomando en cuenta las normas Covenin 2130:1998 los cuales

establecen los mtodos microbiolgicos a utilizar para el conteo de Mohos, Levaduras y

Aerobios Mesfilos los cultivos utilizados fueron Agar Sabouraud dextrosa y Agar Cuenta
Estandar (ver apndice 2).
3.2.3 Estudio del mercado Venezolano de repelente.
3.2.3.1 Aspectos generales del Estudio de mercado.
Al realizar un estudio de mercado es costumbre realizarlo basndose en el dficit existente,
pero en algunos casos donde el objetivo principal es visualizar la posibilidad de introducir
un producto con caractersticas diferentes a los existentes, es motivo suficiente de no
poseer una informacin precisa acerca del consumo, importacin, exportacin o cualquier

51

variable que nos permita estimar la situacin en que se encuentra este tipo de repelente en
el pas por lo tanto dicho estudio se realiz tomando en cuenta el mercado de los repelentes
sintticos
3.2.3.2 Objetivos del Estudio de mercado.
A continuacin se presentan los objetivos primordiales que obligaron a la realizacin de
este estudio de mercado.
a)

Estimar la demanda existente en el mercado venezolano de los repelentes con la

finalidad de introducir en el mismo un repelente natural de insectos basado en el aceite

esencial de limn.
Cuantificar e Identificar los principales repelentes existentes en el mercado
as como la proporcin del mercado que ellos manejan.
c) Identificar los diferentes segmentos del mercado que estaran ms interesados en el uso
de este tipo de repelente.
3.2.3.3 Determinacin de las Fuentes de Informacin.
Todo estudio de investigacin

de mercado ha de basarse de una u otra forma en

informacin. Al examinar el proceso de investigacin conviene dividir la informacin en

dos tipos informacin secundaria y primaria.
a) Fuentes de informacin secundaria.
La informacin secundaria se obtuvo por medio del Instituto Nacional de Estadstica
(I.N.E), empresas privadas, Internet, y material bibliogrfico en general. Constituye la
fuente mas utilizada de informacin de mercadotecnia, los datos estn disponibles y a
menudo son adecuadas para contestar algunos de los objetivos de la investigacin. En
comparacin con los datos primarios la informacin secundaria ofrece la ventaja de ser
rpida de obtener y menos costosa aunque a veces no guarda estrecha relacin con el
problema.
b) Fuentes de Informacin Primaria.

52

Constituye los datos que rene o genera el investigador para contemplar los objetivos del
proyecto en que se esta trabajando. Se caracterizan por su aplicabilidad al problema en
cuestin pero tienen la desventaja de ser muy costosas si se le compara con los datos
secundarios un ejemplo de estas son:
Encuesta.
Entrevista Personal
Sesin de Grupo.
Observacin.
Existen otros mtodos de recoleccin de datos o fuentes primarias, pero los anteriores
resultan ser los ms efectivas y comunes.
3.2.3.4 Demanda nacional.
Para estimar la demanda nacional de los repelentes se procedi en primera instancia a
identificar a los principales repelentes existentes en el mercado; se Pudo apreciar la
empresa fabricante, la marca del producto, las presentaciones existentes, el ingrediente
activo y su concentracin.
Seleccin del mtodo de investigacin.
La eleccin del mtodo de investigacin implica muchas decisiones interrelacionadas pero
la decisin mas importante es la eleccin del enfoque de la investigacin puesto que esta
determinar la forma como la informacin ser obtenida. El estudio se basar en una
investigacin exploratoria ya que no existen datos anteriores sobre los cuales se puedan
edificar, pero la ausencia de estos datos nos permitir realizar una bsqueda profunda de
ideas y claves interesantes acerca de la situacin existente.
Una vez definido dicho enfoque se procedi a tomar las decisiones tcticas que involucran
toda investigacin para lo cual se eligi el sondeo por encuesta.
Determinacin de la Muestra.
La muestra es una parte representativa del universo, entendiendo como universo al grupo al
que deseamos estudiar. La muestra se calcula con la finalidad de hacer ms sencillo el
proceso de investigacin, ya que en ocasiones resulta prcticamente imposible encuestar a
todo el grupo objetivo. Para la definicin del espacio muestral de este estudio se procedi

53

inicialmente a la identificacin de los principales segmentos del mercado que estaran ms

interesados en el uso de este tipo de repelentes.
Recoleccin de Datos
Para que los resultados de un estudio basados en encuestas sea considerado como vlido
hay que elegir una muestra representativa y aleatoria de la poblacin objeto de estudio. Para
ello se utiliz la siguiente ecuacin, la cual es aplicable a poblaciones finita (menores de
100.000 personas).

n=

N * p*q
( N 1) * ( E / K ) 2 + p * q

(3. 2)

Donde:
n: tamao de la muestra
N: tamao del universo
p: probabilidad de ocurrencia del evento
q: probabilidad de que no ocurra el evento
E: error en trminos decimales
K: desviacin estndar con respecto a la media, funcin del nivel de confianza.
Tabulacin y Anlisis de los Datos
Antes de realizar el tratamiento estadstico de los datos se han depurado las encuestas esto
se realiz con la finalidad de corregir los errores detectados y poder repetir aquellas que
presentaran incoherencias. Para el tratamiento estadstico de los datos se utiliz
programa y el resultado del estudio se resume en una serie de datos y grficos.

un

54

CAPITULO IV
Anlisis de Resultados

A continuacin se presentan los resultados experimentales obtenidos, durante la ejecucin

de cada una de las fases metodolgicas de esta investigacin, para alcanzar el objetivo
general planteado.
4.1Evaluacin de la extraccin del aceite esencial
4.1.1 Resultados de la Seleccin de la materia prima
En la tabla 4.1 se presentan los resultados obtenidos de la seleccin de la materia prima, en
la cual se puede ver que el limn persa (Citrus latifolia) o sin
semilla es el contiene mayor porcentaje de rea de limoneno, seguido del limn Criollo y
el limn Chinotto o limn Eureka. La seleccin del limn se llev a cabo analizando el
contenido de limoneno ya que este es el compuesto que est en mayor proporcin.
Tabla 4.1
Resultado del anlisis cromatogrfico realizado a 3 variedades de limones existentes.

Tipo de limn

Area del limoneno

% de rea del limoneno Promedio del % de

rea

Persa

Chinotto

91.15

12.27

316.58

4.98

647.05

0.081

38.12

0.0052

73.53

0.0095

78.41

0.0105

71.86

0.83

5.77

0.0084

55

Criollo

86.72

0.92

732.51

6.95

2.900

El limn Eureka a pesar de que tiene una corteza de mayor espesor y la apariencia de
poseer mayor cantidad de aceite en su corteza presenta menor porcentaje de rea de
limoneno, esto podra deberse a que esta variedad no se adapta bien a las condiciones
climticas del pas como lo seala Avilan (1997), por lo cual tampoco es comercial.
En cuanto al limn Criollo, este posee un tamao muy pequeo para recogerlo, se necesita
mayor mano de obra. Al rallar la corteza de este limn se pudo notar que es de menor
espesor que la del limn Chinotto, por lo tanto el contenido de aceite es menor.
El limn Persa o sin semilla es un limn que se adapta bien a las condiciones climticas
donde se cultivan los frutos, y cuenta con mayores cuidados por ser el ms comercial. Los
frutos son de mejor calidad, lo cual podra incidir en el porcentaje de limoneno presente en
su corteza.
Seleccin del diseo experimental
El diseo experimental fue seleccionado para evaluar la influencia que ejercen las variables
involucradas en la extraccin del aceite esencial de limn con CO2 supercrtico, los
resultados de los pasos seguidos para esta seleccin se presentan a continuacin:
Identificacin de variables o factores.
Las variables identificadas a travs del diagrama causa- efecto (Ver figura 4.1) como
controlables, supuestamente influyen en el proceso de extraccin del aceite esencial de
limn. Estas fueron las siguientes:
Temperatura del cilindro de extraccin.
Presin del Dixido de Carbono.
Flujo del Dixido de Carbono.
Tiempo de extraccin (Esttico y Dinmico).

56

Temperatura del sistema de recoleccin y descarga.

Estas variables fueron seleccionadas como controlables por ser las que se pueden medir o
controlar en el proceso de extraccin.
En cuanto a las variables no controladas identificadas esta fueron las siguientes:
Rendimiento de la extraccin.
Presin del aire comprimido.
Condiciones del cultivo del limn.
Grado de madurez del limn.
Solubilidad del CO2.
Estas variables son las seleccionadas por no poder medirlas o por que escapa de nuestro
alcance ejercer alguna influencia sobre ellas.
De las variables no controladas fue seleccionada como la variable de respuesta el
porcentaje de rendimiento de la extraccin, a travs de ella se mide el efecto de las
variables sobre el proceso de extraccin.
b)Seleccin de las Variables.
Cuatro de las variables controladas fueron seleccionadas para el diseo experimental con
algunas consideraciones como las siguientes:
Se decidi mantener la temperatura del sistema de recoleccin y descarga o sea la vlvula
micromtrica

fija en 100 C, ya que al revisar los antecedentes se observ que a

temperaturas menores a esta las tuberas tienden a obstruirse, sobre todo cuando se emplean
condiciones de flujo bajo. Tambin el tiempo de extraccin esttico se fij en 15 minutos,
con la finalidad de reducir el nmero de variables.
Entre los tiempos de extraccin dinmico y esttico se seleccion el tiempo dinmico y el
esttico se fij en 15 minutos, ya que en los antecedentes se encontr que la interaccin
entre ambos result estadsticamente significativa en un diseo factorial 22, donde se
consideraron ambos tiempos.

Figura

4.1.

Diagrama Causa -Efecto para seleccionar las variables que influyen en la Extraccin del aceite esencial de limn con CO2
supercrtico.
Temperatura

Edificaciones adecuadas

EQUIPOS

MANO DE OBRA

Condiciones de trabajo
Temperatura del envase

Cilindro de extraccin

recolector
Fugas

Normas de Seguridad
Fuga de Gas

Modulo de

Conocimiento del proceso

descarga y

Sistema de Enfriamiento

recoleccin

Operador
Temperatura
Errores de medicin
Recirculacin
de Refrigerante

Obstruccin de tuberas

EXTRACCIN DEL
ACEITE ESENCIAL
DE LIMN

Variedad de limn
Madurez
Flujo

Presin
Tiempo de extraccin esttica
Piel de limn

CO2
Extraccin dinmica
Extraccin esttica

Peso de la muestra

Tiempo de extraccin dinmica

Temperatura
METODOS
MATERIALES

Tamao de partculas

59

b) Definicin del modelo de anlisis.

Con las variables seleccionadas para el diseo factorial se estableci como hiptesis la
siguiente:

59

La presin, el flujo del dixido de carbono, la temperatura del cilindro de extraccin y el

tiempo de extraccin dinmico afectan el rendimiento de la extraccin del aceite esencial
de limn.
En este diseo factorial

24, el exponente representa las cuatros variables: caudal,

temperatura, presin y tiempo de extraccin, mientras que la base representa los dos niveles
de dichas variables.
Seleccin de los niveles de los factores.
En la tabla 4.2 se presentan los

dos niveles

establecidos

para lo 4 factores..

59

Tabla 4.2
Niveles de las variables seleccionadas para el diseo experimental factorial 24.
VARIABLES O FACTORES
NIVELES
Presin

Caudal (l/min.)

Temperatura(C) Tiempo de

(bar)
ALTO

100

Extraccin (min.)
3.5

50

15

59

BAJO

80

2.0

40

25

Los cuales introducidos en el programa estadstico genera los 16 tratamientos del diseo
experimental, el resultado de los 16 tratamiento y su rplica se presentan en las tabla 4.3 y
4.4 respectivamente como lo es el valor obtenido del porcentaje de rendimiento de la
extraccin los valores obtenidos estn entre 0.11 % y 0.6534%.
El anlisis estadstico de este diseo experimental se realiz a travs de un anlisis de
varianza mostrado en la tabla 4.4. Este anlisis consiste en una prueba de hiptesis sobre
las medias de cada tratamiento, la cual se prueba mediante la descomposicin de de la
variabilidad total presente en los datos, medida con la suma total de cuadrados.
Anlisis estadstico de los resultados del diseo factorial
El anlisis estadstico de los datos del diseo factorial 24 proporcionados por el programa
estadstico Statgraphics plus presenta en primer lugar los resultados grficos, los cuales son
estimaciones realizadas por dicho programa que deben ser confirmadas por el Anlisis de
Varianza, los cuales se muestran en el apndice 1 y el Anlisis de Varianza que est en la
tabla 4.5.
Para probar que los efectos de la presin no influyen en el rendimiento de la extraccin , se
plantea en este anlisis de varianza como hiptesis nula que: Los efectos de la presin
del dixido de carbono sobre el porcentaje de rendimiento de la extraccin es igual a cero
( H0 : = 0), esta hiptesis se rechaza con un nivel de significanca de 0.01, esto es la
probabilidad de cometer un error de tipo I, es decir rechazar la hiptesis nula cuando esta
es verdadera .Si el factor de Fisher experimental (estadstico de prueba) es mayor que el
terico determinado con las tablas de puntos porcentuales de la distribucin F se obtuvo
que F (0.01; 1; 15) = 8.68 y del anlisis de varianza se tiene que F0 para la presin tiene un
valor de 118, es decir comprobamos que F0 > F(0.01; 1; 15)con lo cual rechazamos la
hiptesis nula de que la presin no afecta el porcentaje de rendimiento de la extraccin y
aceptamos la hiptesis alternativa de que la presin si afecta el rendimiento de la

60

extraccin, aplicando este mismo anlisis a los dems factores principales, concluimos que
la temperatura del cilindro de extraccin y el flujo tambin afectan el rendimiento de la
extraccin del aceite esencial de limn, pero en el caso del tiempo de extraccin dinmico
el factor de Fisher experimental es
hiptesis

menor al Terico, es decir no se puede rechazar la

nula.

Tabla 4.3 Resultados experimentales del diseo factorial 24 (original)

Condiciones de operacin del tratamiento

(P 1)Bar

(Q 0.1)l/min (T

1)C

Resultados experimentales

(tD 0.02)s

(m1 0.01 (m2 0.01)g (m3 0.01)g % Rendimiento

)g

80

40

15

80.000

185.500

185.640

0.1750

80

50

15

80.070

125.49

125.620

0.1623

100

40

15

80.080

185.510

185.990

0.599

100

50

15

80.060

125.140

125.230

0.1124

80

3.5

40

15

80.030

125.190

125.350

0.1992

80

3.5

50

15

80.020

126.310

126.510

0.2499

100

3.5

40

15

80.010

125.530

125.880

0.4374

100

3.5

50

15

80.080

125.500

125.810

0.3871

80

40

25

80.035

121.936

122.150

0.2174

10

80

50

25

80.080

126.280

126.400

0.1498

11

100

40

25

80.022

123.079

123.282

0.2536

12

100

50

25

80.000

125.530

125.650

0.1500

13

80

3.5

40

25

80.030

125.510

125.720

0.2624

14

80

3.5

50

25

80.010

125.200

125.310

0.1374

15

100

3.5

40

25

80.080

126.280

126.760

0.5994

16

100

3.5

50

25

80.380

126.290

126.460

0.2114

Donde: m1: Masa de la muestra; m2: Masa del envase recolector vaco; m3: masa del envase recolector con el extracto.

Tabla 4.4 Resultados experimentales del diseo factorial 24 (rplica)

Condiciones de operacin del tratamiento

(P 1)Bar

(Q 0.1)l/min (T

1)C

Resultados experimentales
(tD 0.02)s

(m1 0.01)g (m2 0.01)g (m3 0.01)g %

Rendimiento

80

40

15

80.097

123.067

123.170

0.1287

80

50

15

80.010

121.985

122.123

0.1724

100

40

15

80.040

122.304

122.827

0.6534

100

50

15

80.039

125.510

125.650

0.1700

80

3.5

40

15

80.600

125.500

125.610

0.1364

80

3.5

50

15

80.030

125.170

125.320

0.1874

100

3.5

40

15

80.060

123.057

123.405

0.4346

100

3.5

50

15

80.047

121.988

122.247

0.3235

80

40

25

80.030

125.490

125.630

0.1749

10

80

50

25

80.010

125.170

125.300

0.1624

11

100

40

25

80.080

125.180

125.340

0.1998

12

100

50

25

80.010

125.200

125.32

0.1500

13

80

3.5

40

25

80.098

121.981

122.194

0.2647

14

80

3.5

50

25

80.040

126.300

126.470

0.2123

15

100

3.5

40

25

80.025

123.026

123.433

0.5398

16

100

3.5

50

25

80.010

125.490

125.700

0.2624

Donde: m1: Masa de la muestra; m2: Masa del envase recolector vaci; m3: masa del envase recolector con el extracto

63

Tabla 4.5
Anlisis de varianza para el diseo factorial 24.

Factor

Suma

Df

Cuadrado medio

Fo

de cuadrados
A :Temperatura

0.0716406

0.0716406

72.49

B: Presin

0.116608

0.116608

188.00

C: Flujo

0.0613813

0.0613813

62.11

D: Tiempo

0.00484374

0.00484374

4.90

AB

0.0503317

0.0503317

50.93

AC

0.000197508

0.000197508

0.20

AD

0.00224618

0.00224618

2.27

BC

0.0194883

0.0194883

19.72

BD

0.0167399

0.0167399

16.94

CD

0.00266268

0.00266268

2.69

ABC

0.000589103

0.000589103

0.60

ABD

0.00834955

0.00834955

8.45

ACD

0.0268946

0.0268946

27.22

BCD

0.00143782

0.00143782

1.45

ABCD

0.0111117

0.0111117

11.24

Blocks

0.000560288

0.000560288

0.57

Error total

0.0148234

15

0.000988224

Total (corr.)

0.409907

31

63

Montgomery seala que ms que decir se acepta Ho, se prefiere la terminologa incapaz
de rechazar la hiptesis nula, esta incapacidad de rechazar H0 implica que no se ha
encontrado evidencia suficiente para rechazar la hiptesis nula.
Las interacciones entre la presin del dixido de carbono y la temperatura del cilindro de
extraccin (AB) son las que presentan evidencia estadstica de afectar el porcentaje de
rendimiento de la extraccin con F0= 50.93 mayor que el terico; cambien las interacciones
entre la presin del CO2 y el flujo (BC) y el flujo (BD) parecen afectar pero como F0 es
pequeo en comparacin con el de la presin (118), se puede concluir que no se tiene
evidencia para decir que si afectan.
Otro de los sealamientos hechos por Montgomery (1996) es que primero se deben evaluar
las interacciones y luego los efectos principales. Si la

interaccin no es significativa la

interpretacin de las pruebas sobre los efectos principales es directa, pero cuando la
interaccin es significativa, los efectos principales que participan en la interaccin no
tienen mucho valor interpretativo prctico. El conocimiento de la interaccin es en general
ms importante que el de los efectos principales; en este caso el efecto de la interaccin
entre la presin del CO2 y la temperatura del cilindro de extraccin priva sobre los efectos
individuales de estos factores.
Estos resultados obtenidos de los efectos de los factores considerados solamente son la
evidencia estadstica

de acuerdo a la variabilidad de los datos, no quiere decir que

experimentalmente sea as; solamente se tiene una evidencia estadstica que debe ser
probada experimentalmente.
h) Validacin del Anlisis de Varianza.
El Anlisis de Varianza se valid verificando por mtodos grficos los tres supuestos
bsicos

de dicho anlisis; como son la suposicin de que las observaciones estn

distribuidas

de

manera

normal,

la

varianza

constante

66

para cada tratamiento o nivel del factor y la independencia de los errores para que sean
estadsticamente independientes para que pueda existir aleatoriedad en los mismos.
El supuesto de normalidad se verific con la recta obtenida en la grfica de probabilidad
normal de los residuos obtenida en la figura 4.2. (Un residuo es la diferencia entre una
observacin y la correspondiente media.).

65

Probabilida acumulada

Grafico de Probabilidad Normal

99.9
99
95
80
50
20
5
1
0.1
-5

-3

-1

Residuo
Figura 4.2 Grfico de probabilidad normal de los residuos
El supuesto de varianza constante se verifica graficando los residuos en funcin de su
valor esperado, como esta grfica no presenta ningn patrn (forma de embudo) que haga
suponer que las varianzas son diferentes se concluye que las varianzas son constantes (Ver
figura 4.3); esto implica que los resultados del anlisis de varianza para el diseo factorial
24 tienen validez. La independencia de errores es verificada a travs de la grfica de los
residuos en funcin del tiempo o la secuencia en que fueron obtenidos al no presentar los
puntos en la grfica patrones de comportamientos (ver figura 4.4) concluye que
los

errores

son

independientes.

65

Analisis Residual para el Rendimiento

0.1

Residuo

0.06
0.02
-0.02
-0.06
-0.1
0

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

Valor esperado

Figura 4.3 Grfico para verificar el supuesto de varianzas constantes.

Grfico de anlisis residual para el rendimiento

(X 0.001)
58

Residuo

38
18
-2
-22
-42
0

10

20

30

40

Orden del Tratamiento

Figura 4.4 Grfico Anlisis residual para el rendimiento
4.1.3 Obtencin de las condiciones optimas de presin y temperatura.
El diseo experimental factorial 32 empleando para optimizar la presin del dixido de
carbono y la temperatura del cilindro de extraccin a travs del mtodo de superficie de
respuesta requiri establecer los 3 niveles mostrados en la tabla 4.6. Un nivel alto, uno bajo
y un punto central entre los dos.
Tabla 4.6

66

Niveles del diseo factorial 32

Nivel

Temperatura (C)

Presin ( bar)

Alto

70

120

Bajo

50

110

Punto central

60

115

El diseo factorial 32 dio como resultado 9 tratamientos cuyos resultados se reportan en la

tabla 4.6 donde se puede observar para cada tratamiento el porcentaje de rendimiento de la
extraccin. Introducidos los datos experimentales en el programa estadstico, ste realiza
una aproximacin a la relacin funcional entre el porcentaje de rendimiento, la presin del
dixido de carbono y la temperatura del cilindro de extraccin a travs del siguiente
polinomio:

( )

% R = 58.6398 + 0.949633(P ) + 0.1155(T ) 0.00399 P 2 0.0003(P )(T )

El programa tambin genera la grfica tridimensional de superficie de respuesta mostrada

en la figura 4.5. Adems estima los pasos de la superficie

en ascenso mostrados en la

tabla 4.8; Donde se predice el rendimiento para varias condiciones de presin y temperatura
con los cuales se realizaron 3 experimentos seleccionando dos de las condiciones estimadas
en tabla 4.8 para buscar las condiciones ptimas reales, los resultados se muestran en la
tabla 4.9 donde se puede ver que el rendimiento estimado no es igual al rendimiento real
para presiones altas, adems que al realizar el anlisis cromatogrfico se encontr que los
componentes estaban presente en menores proporciones, es decir los componentes se
volatilizan, por lo que se decidi realizar un tercer experimentos con una temperatura de
40C y una presin de 117 bar; con el cual se obtuvo mayor rendimiento

67

Tabla 4.7
Resultado del diseo experimental 32 de la superficie de respuesta.

Condicin de operacin de los tratamientos

% Rendimiento
Presin ( bar)

Temperatura (C)

110

50

0.168

115

50

0.287

120

50

0.314

110

60

0.305

115

60

0.468

120

60

0.468

110

70

0.352

115

70

0.567

120

70

0.438

Tabla 4.8
Pasos de la mxima pendiente en ascenso para el rendimiento de la extraccin con CO2
supercrtico.

Presin (bar)

Temperatura (C)

% Rendimiento

115.0

60.0000

0.42022

116.0

63.7049

0.516442

117.0

66.7079

0.525199

112.0

65.4247

0.514728

68

119.0

64.2376

0.496714

120.0

64.3462

0.47109

Estableciendo estas condiciones

como las ptimas reales. No se realizaron otros

experimentos para confirmar ya que en los datos del diseo factorial 24 (ver tablas 4.3 y
4.4)se observa que los mayores rendimientos se obtiene a presiones altas y temperaturas
bajas, confirmando as las condiciones ptimas reales.
Uno de los inconvenientes que se presentaron para realizar estos experimentos fue que por
la entrada de las lluvias, la piel del limn se humedece y el aceite obtenido se emulsiona
con el agua presentando un color blanco lechoso. Esto sucedi a tiempo de extraccin
dinmico de 15 minutos, por lo cual este se disminuy a 10 minutos y el tiempo de
extraccin esttico se aument a 30 minutos, ya que durante uno de los experimentos se
encontr una fuga en el sistema de recoleccin y descarga mientras sta fue corregida el
tiempo de extraccin esttico lleg a 30 minutos y en esta extraccin se observ un mayor
rendimiento, esto podra deberse al aumento de la solvatacin de las molculas.

Superficie de respuesta estimada

%Rendimiento

0.54
0.44
0.34
0.24
0.14
110

112

114

Presin

116

118

Figura 4.5 Superficie de respuesta estimada

120

50

54

58 62

66

70

Temperatura

69

Comparacin de la extraccin con dixido de carbono supercrtico con otro mtodo

convencional.
La extraccin del aceite esencial de limn empleando el mtodo de arrastre con vapor de
agua, di como resultado un rendimiento promedio de 1.683 % de un total de 6
extracciones realizadas, tal como se muestra en la tabla 4.10
Tabla 4.10
Rendimiento del proceso de extraccin con arrastre de vapor de agua.

N Experimento

Masa del limn

Masa

(m 0.001)g

esencial
(m

de

aceite Rendimiento %
(% R

0.001)g

83.038

1.027

1.236

83.001

1.437

1.740

83.566

1.767

1.120

71.530

1.246

1.750

83.027

1.956

2.360

76.887

1.447

1.890

Promedio

80.174

1.480

1.683

0.022)

Tabla4.9
Experimento para encontrar las condiciones ptimas reales para extraccin con CO2 supercrtico del aceite esencial de limn.

Condiciones de operacin

Resultados experimentales

1)C

(P 1)Bar

(Q 0.1)l/min (T

(tD 0.02)s (m1 0.01)g (m2 0.01)g (m3 0.01)g % Rendimiento

117

3.5

63

15

80.189

124.176

125.429

0.3135

119

3.5

65

15

80.015

124.967

125.176

0.2612

117

3.5

40

10

80.035

122.303

122.826

0.6534

Donde:
m1: Masa de la muestra
m2: Masa del envase recolector vaci
m3:

Masa

del

envase

recolector

con

el

extracto

71

Al comparar este resultado con el porcentaje de rendimiento de la extraccin realizada con

CO2 supercrtico (ver tablas 4.3 y 4.4) en el diseo experimental se observa que es mucho
menor, aunque la calidad del aceite obtenido con arrastre de vapor de agua generalmente se
altera por degradacin trmica, es decir se inducen cambios qumicos indeseables como
oxidacin, hidrlisis y oligomerizacin. En la experiencia prctica se observ que a tiempos
de extraccin mayor a 20 minutos el aceite toma un olor desagradable; mientras que el
obtenido con CO2, el aroma es ms fuerte y agradable, es decir el aroma es superior al
obtenido con arrastre de vapor de agua.
En la extraccin con CO2 se pudo observar que en poca de lluvia la corteza adquiere
humedad y el aceite se emulsiona con el agua, obteniendo un aceite blanco lechoso cuando
el tiempo de extraccin dinmico es mayor a los 10 minutos.
Tambin se observ que el grado de madurez del limn afecta el contenido de limoneno en
el aceite, es decir mientras ms maduro, menor es el contenido de limoneno presente.
4.4.1.3 Anlisis de los componentes principales del aceite esencial del limn.
a) Preparacin de la solucin patrn
Los compuestos puros utilizados y los tiempos de retencin, se reportan en la tabla 4.11,
estos fueron suministrados por el programa del computador acoplado al cromatgrafo, para
identificar los compuestos al comparar con los compuestos puros.
Obtencin de la rampa de temperatura.
La identificacin de la rampa de los tiempos de retencin de la solucin Patrn, y de los
extractos se llevaron a cabo utilizando la siguiente rampa de temperatura:
Se comienza a 50C con 3 minutos de permanencia hasta 65C a 5C/ min. con 10
minutos de permanencia a 75C a 1C /min. y 1 minuto de permanencia hasta 200C a 6C
/min. con 3 minutos de permanencia hasta 230C a 25C a 25C/min con 20 minutos de
permanencia

72

Tabla 4.11
Tiempos de retencin de los compuestos puros en la solucin patrn.

Compuesto

Tiempo ( min. )
Inicial

Final

Medio

- Pineno

4.89

5.46

4.98

- Terpineno

5.65

6.23

5.84

Benzaldehido

7.38

7.76

7.57

Limoneno

7.86

8.34

8.15

Octanol

10.35

10.73

10.54

Linalol

12.08.

12.50

12.36

Acetato de Bencilo

17.93

18.79

18.21

Nonanol

19.08

19.84

19.56

Terpineol

20.23

20.90

20.71

Nerol

25.12

25.98

25.50

Acetato de linalylo

28.47

28.86

28.86

Acetato de Geranilo

33.36

34.61

34.13

cis -Fornesol

42.76

42.95

42.86

Trans- Fornesol

43.34

43.53

43.43

Benzoato de Bencilo

44.01

44.39

44.20

Identificacin de los componentes presentes en el aceite esencial de limn.

En las tabla 4.12 y 4.13 se puede observar los compuestos identificados en las extracciones
con arrastre con vapor de agua y con CO2 supercrtico a travs de la cromatografa de
gases. Posteriormente se realiz la espectrometra de masa a uno de los extractos para

73

corroborar dicha identificacin, y la presencia de otros componentes del aceite esencial de

limn que no fueron identificados por no contar con todos los patrones ver (tabla 4.14).

250

Temperatura (C)

200

150

100

50

0
3

10

20

T ie m p o d e p e r m a n e n cia ( m in )

Figura 4.6 Rampa de temperatura utilizada para identificar los compuestos presentes en el
aceite esencial de limn.

Tanto en la cromatografa de gases como por espectrometra de masa hay mayor nmero de
compuestos identificados por extraccin con CO2 supercrtico. Este mtodo a pesar de tener
un menor rendimiento mas masico implica una mejor calidad en el aceite.

74

Tabla 4.12
Componentes identificados en el aceite esencial de limn extrado con arrastre de vapor de
agua empleando cromatografa de gases

Corridas
Compuestos
- Pineno
-Terpineno
Benzaldehido
Limoneno
Octanol
Linalol
Acetato de Bencilo
Nonanol
Terpineol
Nerol
Acetato de linalyl
Acetato de Geranilo
cis -Farnesol
Trans- Farnesol
Benzoato de Bencilo

Donde:

75

: Compuesto presente

76

Tabla 4.13
Componentes identificados en el aceite esencial de limn extrado con CO2 supercrtico empleando cromatografa de gases.
Corrida
Compuestos

- Pineno
- Terpineno
Benzaldehido
Limoneno
Octanol
Linalol
Acetato de Bencilo.
Nonanol
Terpineol
Nerol
Acetato de linalylo
Acetato de Geranilo
cis Farnesol
Trans- Farnesol

Original Replica

Original Replica

Original Replica

Original Replica

Benzoato de Bencilo

Continuacin Tabla 4.13

Componentes identificados en el aceite esencial de limn extrado con CO2 supercrtico empleando cromatografa de gases.
Corrida
Compuestos

5
Original

- Pineno
- Terpineno
Benzaldehido
Limoneno
Octanol
Linalol
Acetato de Bencilo.
Nonanol
Terpineol

6
Replica

Original

7
Replica Original

8
Replica Original

Replica

Nerol
Acetato de linalylo
Acetato de Geranilo
cis Farnesol
Trans- Farnesol
Benzoato de Bencilo

Continuacin Tabla 4.13

Componentes identificados en el aceite esencial de limn extrado con CO2 supercrtico empleando cromatografa de gases.
Corrida
Compuestos

- Pineno
- Terpineno
Benzaldehido
Limoneno
Octanol
Linalol
Acetato de Bencilo.
Nonanol
Terpineol
Nerol
Acetato de linalylo
Acetato de Geranilo

10

11

12

Original Replica

Original Replica

Original Replica

Original Replica

cis -Farnesol
Trans- Farnesol
Benzoato de Bencilo

Continuacin Tabla 4.13

Componentes identificados en el aceite esencial de limn extrado con CO2 supercrtico empleando cromatografa de gases.

Corrida
Compuestos
- Pineno

13

14

15

16

Original Replica

Original Replica

Original Replica

Original Replica

- Terpineno
Benzaldehido
Limoneno
Octanol
Linalol
Acetato de Bencilo.
Nonanol
Terpineol
Nerol
Acetato de linalylo
Geranil Acetato
cis -Farnesol
Trans- Farnsol
Benzoato de Bencilo

79

Tabla 4.14
Componentes identificados en el aceite esencial de limn. con Espectroscopa de Masa
Extraccin con Arrastre con Vapor

Extraccin con CO2 Supercrtico

Thujene

Thujene

- Pineno

- Pineno

Sabine

Sabine

-Myrcen

- Pineno

-Terpinen

-Myrcen

Limoneno

Limoneno

-Terpinolen

-Terpinolen

1-4 Terpineol

Octatriene( 1,3,6)

-Terpineol

Linalool

Feenol

Phenol

Citral

-Terpineol

Geranial

Decanal

Bergamoten

Citral

Trans-Caryophyllen

Geranial

Acetato de Nerilo

Hexadecanal

Acetato de Geranilo

Acetato de Nerilo
Acetato de Geranilo
1,1 Dodecanal
Trans-Caryophyllen
-Bergamoten
-Humelen
-Bisabolen
-Cubene

80

Trans- - Farnesen
-Selin

79

4.2 Formulacin del Repelente con aceite esencial de limn.

4.2.1 Construccin de la curva de calibracin.
Una vez preparadas las soluciones a diferentes concentraciones de d-limoneno se
realizaron, las inyecciones para obtener el porcentaje de rea del pico de d-limoneno. El
programa de temperatura usado fue de 40C de temperatura inicial con un tiempo de
permanencia de 2 minutos, luego un incremento de temperatura a una rata de 0,5 C /min.
hasta 45 C con un tiempo de permanencia de 2 minutos; finalmente un aumento de
temperatura a una rata de 15 C /min. hasta 250C permaneciendo en este durante 2
minutos (ver Tabla 4.15 ).
Tabla 4.15
Datos para la Construccin de la curva de calibracin

Solucin

Concentracin (P/V)

rea Bajo del pico %

0.005

0.00248

0.019

0.00303

80

0.020

0.00423

0.07

0.00711

0.1

0.012

La ecuacin de la recta es la siguiente:

Y = -0.0153114 + 10.0713X

Donde:
Y = Concentracin del d- limoneno (P/V).
X = rea bajo el pico (%).
Este modelo tiene un coeficiente de correlacin de 0,97613 y un
R2= 95.283%.
Estos datos fueron procesados mediante el programa estadstico Statgraphics Plus
curva de calibracin resultante se presenta en la figura 4.7

la

81

0 .1 2

0 .1

0 .0 8

0 .0 6

0 .0 4

0 .0 2

0
0

0 .0 0 2

0 .0 0 4

0 .0 0 6

0 .0 0 8

0 .0 1

0 .0 1 2

Are a ( % )

Figura 4.7 Curva de Calibracin para determinar la concentracin de limoneno presente en

el aceite esencial de Limn.
4.2.2 Seleccin de la concentracin.
En la seleccin de la concentracin de la crema repelente basado en el aceite esencial de
limn se siguieron los siguientes pasos:
Como mtodo de extraccin se escogi el que tuviese mayor rendimiento que es el arrastre
con vapor como se hizo referencia anteriormente.
Al extracto obtenido se le realiz la cromatografa de gases para conocer su porcentaje de
rea de d-limoneno y posteriormente sustituirla en la ecuacin anterior arrojando como
resultado una concentracin del 60%, por lo que se realiz la formulacin basndose en
este valor.
La eleccin de la concentracin del repelente se escogi tomando como referencia a un
producto formulado sobre la base de DEET y Piretrina (MOSKIL) cuya concentracin
oscila entre (1-5) %. Una vez elaborados los productos se les aplic el criterio de repelencia
establecido.

0 .0 1 4

82

4.2.3 Resultados del Criterio de repelencia.

La aplicacin de los criterios de repelencia obtenidos en esta investigacin se muestran en
la tabla 4.16. Dicha prueba fue aplicada en la poblacin de Ortiz Estado Guarico.
En los individuos tratados con la crema a una concentracin del 1% de aceite esencial de
limn no existi una repelencia considerable. El efecto repelente no fue muy eficaz a esa
concentracin por lo que se procedi a formular a 5%, los resultados se presentan en la
tabla (4.17).
Tabla 4.16
Lesiones encontradas en los individuos voluntarios a las 3 horas de aplicacin del repelente
con 1% de aceite esencial de limn.

N de individuos

N de Lesiones

Efecto

Repelente

No repelente

No repelente

Los individuos sometidos a una concentracin de 5 % tuvieron una repelencia de un 100%

de los casos hasta 3 horas despus de aplicada en cuanto a los individuos sometidos con el
repelente Off no presentaron molestia alguna durante ese intervalo de tiempo.
Tabla 4.17
Lesiones encontradas en los individuos voluntarios a las 3 horas de aplicacin del repelente
con 5 % de aceite esencial de limn.

N de individuos

N de Lesiones

Efecto

83

Repelente

Repelente

Repelente

4.2.4 Estabilidad del Producto

4.2.4.1 Estabilidad Qumica
El espectro de absorcin UV-visible de un compuesto puede ser considerado como una
forma de identificacin confiable, fiel, objetiva. Por lo que constituye una caracterstica
fsica que es constante y que junto con otras caractersticas como el punto de fusin y el
ndice de refraccin se pueden utilizar para caracterizar un compuesto. En nuestro estudio
de envejecimiento acelerado se asumi que no hubo formacin de otro compuesto por que
se mantuvieron constantes las bandas de absorcin durante todo el perodo de estudio, al
menos que se halla formado un producto que no posea absorcin UV- visible y para lo cual
se requieren otros mtodos de anlisis.
4.2.4.2 Estabilidad Fsica
Algunas de las propiedades pueden cambiar con la temperatura debido a que hay un
aumento de la energa cintica de las partculas alterando el equilibrio energtico y por lo
tanto la estabilidad de la emulsin. Por lo que es imprescindible determinar la estabilidad
fsica, en el estudio de envejecimiento acelerado dicho estudio se hizo paralelamente a la
estabilidad qumica usando las mismas condiciones extremas.
La preocupacin primordialmente se situo en la estabilidad de la base (ruptura de la
emulsin al aadir otros ingredientes), durante ese intervalo de estudio no hubo una
evidencia significativa en ninguno de los ciclos de temperaturas posiblemente por que las
emulsiones O/W con emulsificantes inicos la estabilidad es directamente proporcional a la
concentracin del emulsificante. En cuanto a las propiedades organolpticas no hubo
cambio de color, ni olor y el pH se mantuvo constante (pH=6) durante todo el periodo de
estudio.

84

4.2.5 Identificacin de las pruebas microbiolgicas y dermatolgicas.

Las pruebas dermatolgicas ms usadas para analizar cosmticos y medicamentos se
identificaron en la bibliografa, estas se presentan en la tabla
4.14. Se escogiern humanos voluntarios para determinar si producan reacciones alrgicas,
en la prueba sealada no se observaron presencia de ninguna reaccin al cabo de 24h por
lo que se procedi a repetir la misma arrojando el mismo resultado.
En cuanto a las pruebas microbiolgicas estas se llevaron a cabo siguiendo la normas
Covenin 2130:1998 en ella se establece los mtodos de ensayos para determinar el nivel y
tipo de contaminacin microbiolgica mediante la utilizacin de tcnicas apropiadas. Estas
fueron el conteo de mohos,

levaduras y aerobios mesfilos ver (apndice IV ) los

resultados se muestran a continuacin:

Tabla 4.18
Recuento Total de Microorganismos presentes en la crema repelente
Muestras
Microorganismos ( ufc /g )

Mohos

4.5*102

Levaduras
Aerobios Mesfilos
Fuente: Elaboracin propia.

4.5*102

4.0*102

85

Donde:
: Menos de 10ufc/g
ufc : unidades formadoras de colonias
Los resultados observados se encuentran dentro de los lmites permisibles segn la Norma
Covenin 902 aceptados en productos cosmticos la cual establece que:
Para nios 500ucf/g, para adultos: 1000 colonias /g y en ningn caso debe ser aceptado la
existencia de microorganismos patgenos y si existen deben ser menor de 1000colonias /g.
Los mohos son una especie de hongos y levaduras estas necesitan ciertas condiciones para
su proliferacin, por lo que tienen que tener un rango de pH favorable para el crecimiento
ptimo, sin embargo la mayora crece a pH 7.0 escasa humedad, baja temperatura. El
ambiente en el cual se desarrolla el producto y los materiales tambin pudo influir sobre la
calidad microbiolgica.

4.3 Estudio de Mercado Venezolano de repelente para estimar la factibilidad de producirlo.

Para llevar a cabo el resultado de este objetivo se procedi en primera instancia a la
identificacin de la poblacin universo, el cual est representado por los grupos
excursionistas y ecologistas de Valencia este dato fue suministrado por Defensa Civil
Carabobo. Una vez seleccionada la poblacin se determin el tamao de la muestra
(ecuacin 3.2) utilizando los siguientes valores:
Tamao del universo, N = 871 personas, probabilidad de aceptacin en trminos decimales,
E = 0.10; desviacin estndar con respecto a la media para un nivel de confianza del 90%,
corresponde un valor de K = 1.64. Sustituyendo en la ecuacin 3.2:
n = (871*0.5*0.5) / [(871-1)*(0.1/1.64)2 + (0.5*0.5)] = 63.197243

86

El tamao de la muestra es 64 personas.

Corregidas y aplicadas las encuestas se realiz el tratamiento estadstico de los datos a
travs del programa Spss (versin 10), con lo que se pretende responder
los objetivos planteados en dicho estudio.

Tabla 4.19
Pruebas dermatolgicas identificadas en la bibliografa empleadas para analizar cosmticos.
Medio de aplicacin

Pruebas

Aspecto evaluado

Irritacin drmica.

Corrosividad de las sustancias

Toxicidad aguda.

Riesgos de exposicin a corto plazo

.

Animales

Irritacin ocular( test Draizer)

Habilidad para daar los tejidos oculares.

Sensibilidad drmica.

Grado de alergia causado por aplicacin

repetida.

Fototoxicidad.
Fotosensibilizacin.

Reacciones con la exposicin al sol.

Carcinogenicidad

Riesgos de contraer cncer.

Teratogenicidad.

Defectos de nacimiento.

Protenas

Cultivo de clulas in Vitro.

Grado de peligrosidad para los humanos.

Mezclas qumicas

Corrositex.

Corrosividad sobre la piel.

Toxicidad oral, Efectos Mutagnicos

Paquetes electrnicos

Modelos matemticos y de computacin.

Carcinognicos y TeratognIcos.

Humanos Voluntarios

Prueba de parche.

Irritacin drmica.

Fuente: Elaboracin propia.

88

89

4.3.1 Estimar la demanda existente en el mercado venezolano de los repelentes con la

finalidad de introducir en el mismo un repelente natural de insecto basado en el aceite
esencial de limn.
Se ha definido dos tipos de demanda partir de los resultados de las encuestas:
Demanda Actual
Demanda con reserva
La demanda actual esta conformada por aquellas personas que respondieron
afirmativamente a la pregunta del uso de repelente de insectos tabla 4.20.
Tabla 4.20
Consumidores de los repelentes sintticos por parte del grupo encuestado.
Motivos

del

uso

del

repelente

Frecuencia

Porcentaje (%)

Es alrgico a los insectos

12

18,8

Practica excursionismo

24

37,5

Prevenir enfermedades

10

15,6

Otras razones

1,6

No lo usa

17

26,6

Total

64

100,0

La demanda con reserva estn constituida por las personas que usan repelente de
insectos, o no lo usan pero estaran dispuestas a usar otro tipo de repelente o se
muestran indecisas ante este tipo de producto ver tabla (4.21)
Tabla 4.21
Disposicin a la compra de un repelente natural de insecto
Frecuencia

Opciones

Porcentaje (%)

38

Si

59,4

No

3,1

90

24

Tal vez

37,5

64

Total

100

Conveniente conocer la presentacin a desarrollar ya que este producto

podra

representar una alternativa frente a los repelentes sintticos.

Tabla 4.22
Presentacin aceptada para el nuevo producto
Presentacin

Frecuencia

Porcentaje (%)

Locin

17

26,6

Crema

32

50,0

Aerosol

15

23,4

Total

64

100,0

4.3.2 Cuantificar e Identificar los principales repelentes existentes en el mercado as

como la proporcin del mercado que ellos manejan.
La identificacin de los principales repelentes existentes en el mercado se llev a cabo a
travs de visitas personales en diferentes establecimientos tales como Supermercados,
farmacias, perfumeras, etc. A continuacin presentamos la Tabla (4.23) donde se
aprecian las presentaciones existentes, donde se aprecian las presentaciones existentes,
el ingrediente activo y su concentracin.

Mientras que el

consumo, frecuencia,

aceptacin de estos productos se ven reflejadas en las tablas (4.24, 4.25, 4.26)
Tabla 4.23
Principales repelentes existentes en el mercado venezolano
Nombre
empresa

de

la

Marca
del

Presentacin

Producto

Ingrediente

Concentracin

activo

Aerosol
Bayer

Autan

Locin

Bayrepel

10%

91

Jhonson

Aerosol
Off

Locin

DEET

Aerosol
Intercos

Avispa

25%

Locin

DEET

Crema

Laboratorios

Moskil

15%

25%
10%

Locin

Norvarcas

DEET

15%

Piretrina

(1-3)%

Fuente: Elaboracin propia

Tabla 4.24
Consumo de repelente sintticos por parte de la poblacin excursionista del estado
Carabobo.

Marca del Repelente

Frecuencia

Porcentaje

Off (Locion)

4,7

Off (Aerosol)

9,4

Off (Crema )

24

37,5

Autan ( Aerosol)

1,6

Autan (Crema)

3,1

Moskil ( Aerosol)

4,7

Avispa ( Aerosol)

1,6

92

Avispa (Crema)

7,8

Otros

3,1

No respondi

17

26,6

Total

64

100,0

Tabla 4.25
Frecuencia de uso de los repelentes sintticos
Uso del repelente

Frecuencia

Porcentaje

Una vez al mes

7,8

22

34,4

10,9

13

20,3

Cada

dos

tres

meses
Cada cuatro o seis
meses
Una o dos veces al
ao

93

No respondi
total

17

26,6

64

100

Tabla 4.26
Aceptacin en cuanto al costo

por parte de los grupos excursionistas del estado

Carabobo
Uso del repelente

Frecuencia

Porcentaje

11

17,2

16

25,0

Valor promedio

19

29,7

Valor malo

1,6

No respondi

17

26,6

Total

64

100

Muy buen valor

Bastante buen valor

4.3.3 Identificar los diferentes segmentos del mercado que estaran mas interesados en
el uso de este tipo de repelente.
La identificacin de los principales segmentos en el mercado que estaran ms
interesados en este tipo de repelente lo es:
Grupos excursionistas y ecologistas.
Visitantes asiduos a las playas.

94

Personas con problemas Dermatolgicos de Piel sensible.

Nios menores de 10 aos.

CAPITULO V

Conclusiones y Recomendaciones

CONCLUSIONES.

En Venezuela existen 3 variedades de limn: el limn persa o sin

semilla (Citrus

Latifolia.); limn Chinotto de la variedad Eureka y limn criollo o lima mexicano. De

estos el limn Persa posee mayor contenido de limoneno.
En un diseo experimental factorial las interacciones entre dos factores privan sobre los
efectos principales. Por lo tanto el efecto de interaccin entre la presin del CO2 y la
temperatura del cilindro de extraccin afectan estadsticamente el porcentaje de
rendimiento del aceite esencial.
No se encontr evidencia estadstica de que el tiempo de extraccin dinmico afecte el
rendimiento de la extraccin del aceite esencial de limn.
Se encontr evidencia estadstica de que el efecto de la presin del dixido de carbono y
la temperatura del cilindro de extraccin afectan el porcentaje de rendimiento de la
extraccin del aceite esencial de limn.
Los mayores rendimientos del aceite esencial de limn se obtienen a condiciones de
presiones altas y temperaturas bajas. Las condiciones ptimas de presin del CO2 y
temperatura del cilindro de extraccin son 117 bar y 40C.
La extraccin de arrastre con vapor de agua tiene un rendimiento promedio de 1.87 % y
es mayor al rendimiento obtenido con CO2 supercrtico que fue de 0.65 %.
Tanto en la cromatografa de gases como por espectrometra de

masa hay mayor

nmero de compuestos identificados por extraccin con CO2 supercrtico. Este mtodo a
pesar de tener un menor rendimiento msico implica una mejor calidad en el aceite.
Los individuos sometidos a una concentracin de 5 % tuvieron una

repelencia de un

100% de los casos hasta 3 horas despus de aplicada, en cuanto a los individuos

95

sometidos con el repelente Off no presentaron molestia alguna durante ese intervalo de
tiempo.
En estudio de envejecimiento acelerado se asumi que no hubo

formacin de

otro compuesto por que se mantuvieron constantes las bandas de absorcin durante todo
el periodo de estudio.
En cuanto a las propiedades organolpticas no hubo cambio de color, olor. El pH se
mantuvo constante (pH=6) durante todo el periodo de estudio.
El conteo microbiolgico estuvo dentro del limite permisible segn la norma Covenin
(menor de 500 ufc/gr).
5.1.12.El producto formulado puede constituir una alternativa frente a los
sintticos segn resultados obtenidos por el estudio de mercado.

repelentes

96

RECOMENDACIONES.

5.2.1. Se recomienda realizar un estudio donde se determine la influencia del tiempo

de extraccin esttico y la cantidad de muestra introducida sobre el rendimiento de la
extraccin con CO2 supercrtico.
5.2.2. Se recomienda estudiar la posibilidad de realizar un diseo

experimental

donde se incluyan mayor nmero de variables y menor nmero de experimentos.

5.2.3. Evaluar el efecto repelente a una concentracin entre ( 2 y 4 )%.
5.2.4. Para descartar la formacin de otros compuestos que no posean absorcin UVvisible es conveniente realizar otros tipos de anlisis a la crema repelente.
5.2.5. Es conveniente realizar las pruebas de fotosensibilizacin y fototoxicidad a la
crema repelente.
Estudiar el efecto repelente a tiempos mayores de tres horas y con un mayor nmero de
voluntarios.
El ambiente en el cual se desarrolla el producto y los materiales tambin influyen sobre
la calidad microbiolgica; por lo que se recomienda contar con un laboratorio que
cuente con todas las normas antispticas necesarias para el desarrollo de productos
como el laboratorio donde se preparo.

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Acadmico.
ORTEGA, Aracelis M.(1988)Estabilidad de Productos Cosmticos, Ciencia &
Cosmtica, Volumen 7,ao 1988, (7-10).
BASTARDO DE MENDOZA, Yajaira(1988) Calidad Microbiolgica: Normativa
nacional e internacional, Ciencia & cosmtica, Volumen 7, ao 1988,(11-15).
NEWBURGERS (1977), Manual of Cosmetic Analysis, Secondnd Edition, Alan J.
Senz, Editor.

100

APNDICES

Resultados del anlisis cromatogrfico de la seleccin de la materia prima

101

102

103

104

Apndice II
Identificacin de los componentes presentes en el aceite esencial de limn obtenido por
arrastre con vapor de agua y CO2 supercrtico.

105

106

107

108

109

Espectrometria de Masa del Aceite esencial de Limn utilizando como de Extraccin

Arrastre con Vapor

110

111

112

113

114

115

Espectrometria de Masa del Aceite esencial de Limn utilizando como de Extraccin

supercrtica

116

Apndice III
Resultados grficos del diseo experimental

117

118

119

120

Apndice IV
Normas COVENIN (Cosmticos. Mtodos microbiolgicos)
Pruebas de Estabilidad Qumica del producto terminado.

121

122

123

124

125

126

Prueba de Estabilidad

127

Espectrofotometria UV del Aceite esencial de Limn

Espectrofotometra UV de la crema repelente a 3 das de envejecimiento acelerado

128

Espectrofotometra UV de la crema repelente a 6 das de envejecimiento acelerado

129

Espectrofotometra UV de la crema repelente a 9 das de envejecimiento acelerado

130

Espectrofotometra UV de la crema repelente a 12 das de envejecimiento acelerado

131

Apndice V
Estudio del mercado de los repelentes

132

133

88

UNIVERSIDAD DE CARABOBO
FACULTAD DE INGENIERIA
ESCUELA DE QUIMICA
TRABAJO ESPECIAL DE GRADO
ENCUESTA

88

Usa usted repelente de insectos

____Una o dos veces al ao.

de usarlo por que lo hace :

____ Es alrgico a los zancudos.
____

Practica

Que expresin describe mejor su

excursionismo

otras actividades afines.

opinin respecto al valor

de ese

producto?

____ Para prevenir enfermedades

(Dengue, Paludismo, etc.).

_____Muy buen valor.

____ Otras razones, especifique

_____Bastante buen valor.

____ No ( ir a la pregunta 5 )

_____Valor promedio.
_____Valor malo.
_____Muy mal valor.

Si la respuesta anterior es afirmativa, que

marcas de repelentes compra y en que

Estara dispuesto

presentacin lo hace.

repelente Natural de insecto basado en

a utilizar un

el aceite esencial de limn.

Locin Aerosol Crema
___ Off

____

____

____

___Si.

___ Autan

____

____

____

___No.

___ Moskil ____

____

____

___Tal vez.

___ Avispa ____

____

____

___ Otros

____

____

____

Qu tan diferente cree usted que este

Que expresin describe mejor la frecuencia

producto sea en comparacin con otros

con que usted compra este producto?

que estn ahora en el mercado?

____Una vez cada dos o tres semanas.

___Muy diferente.

____Una vez al mes .

___Algo diferente.

____Una cada dos o tres meses.

___Apenas diferente.

____Una vez cada cuatro o seis meses.

___Nada diferente.

89

Cul de estas expresiones describe mejor

lo que siente usted respecto a la compra de
este producto?
____Definitivamente lo comprara.
____Probablemente lo comprara.
____Podra o no comprarlo.
____Probablemente no lo comprara.
____Yo definitivamente no lo comprara.
En

que

presentacin

le

gustara

que

estuviese ofertado en el mercado.

___Locin.
___Crema.
___Aerosol.
Cunto bolvares estara dispuesto a pagar
por la adquisicin de este producto?
____ (2000 - 3000).
____ (3500 5000).
____ (10000 o ms).

88