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DES DBUTS DE LA GNTIQUE AUX

6 Les enzymes de restriction et le gnie gntique

Entre les annes 1950 1970, la structure de lADN, son mode de rplication, les modalits dexpression des
gnes et le code gntique ont t dcouverts. On ne dispose cependant daucun outil permettant de
manipuler facilement lADN et les gnes quil contient. La dcouverte des enzymes de restriction constitue
une avance dcisive en ce sens.
Quels sont les apports des enzymes de restriction ?

Doc1. Les enzymes de restriction : des ciseaux molculaires.


Qu1. Rechercher la particularit de la squence des bases des sites de restriction. Comment lADN est-il
coup dans les sites prsents ?
Toutes les espces ont, dans leur ADN, des sites de restriction pour diffrentes enzymes. Une enzyme de
restriction dcoupe par consquent nimporte quel ADN. On peut ainsi disposer de petits morceaux dADN, ou
fragments de restriction, plus simples manipuler que des molcules entires.
Qu2. Estimer le nombre de fragments attendus en dcoupant le chromosome 1 de lhomme (270.106 paires de
bases ; 1 site de restriction en moyenne toutes les 3000 bases).

Un fragment dcoup se termine


par un bout collant qui peut
tablir des liaisons hydrogne
avec la squence de bases
complmentaire
dun
autre
fragment. La soudure dfinitive
des deux fragments est ralise
par une autre enzyme, lADN
ligase.
On fabrique de cette faon une
nouvelle molcule qui est un
ADN recombinant.
Doc2. Deux outils pour un couper-coller dADN.
Qu3. Quelle perspective offre le couper-coller de lADN ?

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PS : nuclases de restriction=
enzymes de restriction.

Doc3. La sparation des fragments de restriction dun ADN


viral.

Note : en employant plusieurs enzymes de restriction diffrentes, on obtient des fragments de restriction de
tailles diffrentes que lon peut rorganiser par la suite, de manire obtenir des cartes de restriction.
Qu4. tablir la relation qui existe entre la taille des fragments et leur vitesse de migration. Comment peut-on
estimer leur taille en nombre de paires de bases ?

Prcision : lADN est dabord dnatur (sparation des


deux brins) avant llectrophorse.

Doc4. la recherche des gnes. Cette mthode, mise au point par E. Southern, sappelle un Southern Blot.
Qu5. Pourquoi dnaturer lADN avant de lhybrider avec une sonde ?

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Les bactries ont t les premiers organismes utiliss pour cloner les gnes. Ces microorganismes possdent, en
plus de leur grand chromosome, des petites molcules dADN circulaire, les plasmides qui peuvent tre coups
par une enzyme de restriction au niveau dun site unique et se refermer aprs avoir intgr un gne dun
organisme quelconque dcoup par la mme enzyme. De plus, les bactries se reproduisent trs vite (une
division toutes les 20 minutes dans des conditions trs favorables).

Doc5. Le principe du clonage.


Qu6. Pourquoi lADN du plasmide et celui de lorganisme dont on veut cloner le gne sont-ils dcoups par la
mme enzyme de restriction ? Par quels mcanismes la multiplication du gne clon est-elle assure ?

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Doc6. Une mthode moderne pour squencer rapidement lADN.


Qu7. Dterminer la squence des nuclotides 15 25.
Synthse. Rpondre la question de dpart.
Documents : 1, 2, 5 et 6 Bordas TS 2002 ; 3 Hatier TS 2002 ; 4 Didier TS 2002.

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