PRUEBA DE LA REDUCTASA

I.

INTRODUCCIN

Prueba rpida y sencilla para determinar la calidad de leche mediante la

Prueba de Reductasa. Esta prueba consiste bsicamente en la incubacin de 10
ml de leche, adicionado con 1 ml del reactivo Azul de Metileno en un tubo de
ensaye en un bao mara a 37.5 oC ( 2 oC) registrando el tiempo inicial, as
como el tiempo que la leche dura en perder el color azul, lo cual nos
proporciona el tiempo de reductasa. Esta enzima se encuentra solo en la leche
de vaca.
Para estimar el nmero aproximado de microorganismos en la leche cruda se
utiliza el mtodo indirecto basado en la reduccin del color azul de metileno
que es un indicador de xido-reduccin (es azul cuando esta oxidado e incoloro
cuando est reducido).
Para estimar el nmero aproximado de microorganismos en la leche cruda se
utiliza un mtodo indirecto basado en la reduccin del colorante azul de
metileno que es un indicador de xido-reduccin (es azul cuando est oxidado
e incoloro cuando est reducido). La actividad reductora de los
microorganismos se manifiesta por el tiempo de la reduccin del colorante a
una temperatura de 37 a 38 grados centgrados la cual se indica en el
siguiente cuadro:

Objetivos
Determinar la calidad higinica de la leche fresca empleando azul de
metileno como indicador de xido reduccin.
Familiarizar al estudiante con la realizacin de la prueba de la reductasa.

II.

MATERIAL
1. BIOLGICO:
-Muestra: Leche
2. DE LABORATORIO:
-Tubos de 150x15mm con tampones de jebe o tapa rosca
- Pipetas de 1 y 10 mL.
-Gradilla de acero inoxidable
3. EQUIPOS:
-Bao mara regulado a 35C a 37C

III.

PROCEDIMIENTO
I.1.

CONTROL POSITIVO
Pipetear 1mL de agua destilada estril y 10 mL de leche
hervida o

I.2.

cruda a un tubo estril. Invertir el tubo

suavemente sin agitar.

CONTROL NEGATIVO
Pipetear 1mL de azul de metileno y 10 mL de leche hervida

a un tubo estril.
Invertir el tubo suavemente sin agitar.
I.3. TUBO CON MUESTRA PROBLEMA
1. Pipetear 1mL de azul de metileno y 10 mL de leche cruda a
un tubo estril. Invertir el tubo suavemente sin agitar.
2. Colocar todos los tubos en una gradilla y llevarlos a bao
mara a 35-37C.
3. Realizar la primera lectura a las 2 horas. Ver si hay
decoloracin (reduccin) de azul de metileno.

IV.

ESQUEMA DE TRABAJO

Tubo 1: Problema : Azul de metileno

Tubo 2: Control : Leche + azul de metileno
Tubo 3: Testigo: Leche

V.

RESULTADOS

Tubo problema cambio de color

VI.

COMENTARIO

Con la aplicacin peridica de la Prueba de Reductasa, es posible determinar la

calidad de la leche de los termos y de los productores de manera individual,
con el objeto de establecer programas sanitarios y de manejo de los hatos, lo
cual se reflejar en la calidad de la leche entregada a las Compaas
Industrializadoras.
La prueba de Reductasa puede ser establecida fcilmente en
explotacin lechera promedio, ya que se requiere nicamente de
Mara, tubos de ensaye, pipetas, un termmetro y el indicador
Metileno. Todo este material es relativamente econmico y
adquisicin.
VII.

cualquier
un Bao
Azul de
de fcil

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
Adams, M. y M. Moss. 1997. Microbiologia de los alimentos. Edit. Acribia,
S.A. Zaragoza, Espaa.
Garcia, M., R. Quintero y A. Lopez Mungia. 1993. Biotecnologa
Alimentaria. Limusa Noriega Editores. Mxico D.F.