Apostila de

Microbiologia
Geral
(MIG)

Importncia dos microrganismos para os homens

Ns vivemos em um universo microbiano. A cada respirao, milhares de microrganismos
penetram no nosso organismo. Um simples punhado de solo rico pode conter bilhes de
microrganismos. A grande maioria dos microrganismos beneficia os homens, reciclando os
elementos da vida, produzindo muito alimentos, produtos industrializados e servindo de
ferramentas para pesquisas. Outros microrganismos so causadores de doenas.
Ao longo dos sculos, os costumes sociais e as tradies levaram as pessoas a aceitar e
gostar de alguns alimentos produzidos por microrganismos. Por meio do processo de
fermentao, os microrganismos podem transformar os constituintes orgnicos contidos nos
alimentos. Por exemplo, as bactrias que existem naturalmente em pepinos multiplicam-se dentro
deles e digerem parte do tecido do fruto, transformando-o em saborosos picles. Os salames
resultam do crescimento microbiano que ocorrem na carne e nos temperos. So chamados de
embutidos fermentados. Diferentes tipos de salames podem ser produzidos, dependendo dos
tipos de carne e de temperos utilizados e do microrganismo capaz de alterar os componentes
qumicos da carne. Para preparar pes e rocamboles, o padeiro inclui, na massa, leveduras que
metabolizaro os carboidratos, formando dixido de carbono (CO 2), o que far a massa crescer.
Muitos produtos derivados de leite so produzidos a partir da atividade metablica de
microrganismos. Por exemplo, o queijo feito a partir do aquecimento do leite, adio de enzimas
para coagular as protenas do leite e uma combinao de bactrias ou fungos. Durante o processo
de maturao, os microrganismos produzem compostos qumicos que conferem sabores
diferentes aos vrios tipos de queijos. Por exemplo, o sabor do queijo cheddar originado pelos
cidos produzidos pelos lactobacilos e pelos estreptococos que crescem no coalho maduro. O
iogurte um tipo de leite no qual bactrias produziram cidos a partir do acar do leite.
Os microrganismos so os grandes recicladores dos elementos da natureza. Algumas
bactrias, por exemplo, liberam nitrognio a partir de resduos animais. Outros microrganismos
crescem nas razes de plantas leguminosas, trazendo o nitrognio de volta para o ciclo da vida e
usando-o na formao de compostos orgnicos. Esses compostos so liberados no solo, onde
so reutilizados como nutrientes por diversas plantas como as leguminosas (ervilha e feijo).
Os microrganismos tm tambm emergido como novas fontes de produtos e processos
para o benefcio da sociedade. A gama de produtos industriais de origem microbiana grande e
inclui diversos produtos, como perfumes e antibiticos como a penicilina. Outro exemplo a
aplicao de uma protease (enzima) bacteriana na remoo de fragmentos de matria orgnica
da pele dos animais durante a manufatura do couro. Algumas bactrias produzem enzimas que
aceleram a transformao de compostos orgnicos. Por exemplo, a enzima pectinase decompe
as fibras de pectina, que ligam as fibras de celulose nas plantas. Uma vez dissolvida a pectina, a
celulose pode ser usada para fazer o linho. Outras bactrias so empregadas na produo de
enzimas para gerar o amido, utilizado durante a produo do papel.
Muitos microrganismos so usados para o estudo de processos vitais, como modelos e
instrumentos de pesquisa em laboratrios. Isso possvel porque os processos qumicos dos
microrganismos so similares aos de outras formas de organismos vivos. Usando uma tcnica
chamada de engenharia gentica, genes de outros organismos so inseridos em bactrias. Esta
tcnica capaz de programar uma bactria com informaes genticas que a tornam capaz de
produzir determinada substncia qumica, como a insulina humana. A insulina um hormnio que
garante o funcionamento da mquina metablica do corpo e, assim, essencial para a vida.
Quando o diabetes mellitus se instala no jovem, o hormnio existe em quantidades muito
pequenas. Durante anos, somente a insulina bovina, extrada do pncreas de bezerro, era
disponvel para o tratamento do diabetes, e alguns pacientes no podiam utiliz-la. Hoje, a
insulina produzida em quantidades ilimitadas por bactrias transformadas por engenharia gentica
pode ser ministrada para restabelecer os nveis do hormnio no corpo.
Os microrganismos tm um grande potencial para ajudar na limpeza do ambiente: da
decomposio de componentes de petrleo em derramamento de leos decomposio de
herbicidas e inseticidas usados na agricultura. Alm disso, muitos microrganismos tm sido
utilizados como agentes biolgicos, ao invs de defensivos qumicos, para o controle de pragas.
Apesar de todos os benefcios relatados, ao longo da histria, os microrganismos tm sido

associados somente a agentes causadores de doenas. Somente uma minoria dos

microrganismos patognica (causadora de doenas), mas o conhecimento prtico sobre eles
de extrema importncia para o desenvolvimento da medicina. Vale ressaltar que quando
transmitidos de uma pessoa para outra, alguns microrganismos so responsveis por doenas
como peste, catapora, febre tifide, sfilis e SIDA (AIDS). Alm disso, os microrganismos so
associados frequentemente a infeces desagradveis (exemplo: doena que ocorre no p,
causada por um fungo e chamada de p-de-atleta), ou a inconvenincias mais comuns, como
comida estragada.
medida que ler sobre os microrganismos, voc aprender a apreciar o mundo
frequentemente invisvel de bactrias, algas, fungos, protozorios e vrus!
Atividade em equipe:
Os microrganismos tm sido utilizados pelo homem em diferentes processos e de
diferentes maneiras. Debata com seus colegas do grupo e descreva no mnimo trs aplicaes de
microrganismos diferentes das citadas no texto.

Introduo Microbiologia
O que voc pensa quando ouve as palavras germe e micrbio? Pequenas criaturas que
causam MAL e no se encaixam em nenhuma categoria da diviso: animal, vegetal ou mineral.
Os micrbios, tambm chamados de microrganismos, so minsculos seres vivos,
individualmente muito pequenos para serem vistos a olho nu. O grupo inclui bactrias, fungos
(leveduras e mofos), protozorios e algas microscpicas. Tambm inclui vrus, os quais so
acelulares, muitas vezes considerados como sendo o limite entre seres vivos e no-vivos.
Voc ser apresentado a cada um desses grupos no decorrer das aulas.
Microbiologia o estudo de organismos microscpicos. Esse nome deriva de trs palavras
gregas: mikros (pequeno), bios (vida) e logos (cincia). Assim, microbiologia significa o estudo
da vida microscpica.
Os cientistas deduziram que os microrganismos originaram-se aproximadamente h quatro
bilhes de anos, a partir de um material orgnico complexo em guas ocenicas, ou
possivelmente de nuvens que circundavam nossa primitiva Terra. Como os primeiros indcios de
vida na Terra, os microrganismos so considerados ancestrais de todas as outras formas de vida.
Embora os microrganismos sejam antigos, a microbiologia uma cincia jovem.
Pesquisadores observaram microrganismos pela primeira vez somente h 300 anos e eles foram
pouco compreendidos durante muitos anos aps sua descoberta. Existe um perodo de quase 200
anos entre as primeiras observaes at o reconhecimento de sua importncia.
Em meio a muitas tentativas cientficas de se obter novos conhecimentos sobre
microrganismos, algumas merecem ser mencionadas por terem contribudo mais intensamente ao
reconhecimento da microbiologia como cincia.
A primeira delas surgiu na segunda metade do sculo XIX, quando os cientistas provaram
que os microrganismos originaram-se de pais iguais a eles prprios e no de causas
sobrenaturais ou de plantas e animais em putrefao. Mais tarde, os cientistas provaram que os
microrganismos no so o resultado, mas sim a causa dos processos fermentativos no suco de
uva para a produo de vinho.
Eles tambm descobriram que um tipo especfico de microrganismo causa uma doena
especfica.
Estas informaes foram o incio do reconhecimento e da compreenso da influncia
destas novas formas de vida sobre a sade e o bem-estar do homem. Durante o incio do sculo
XX, os microbiologistas aprenderam que os microrganismos so capazes de realizar muitas
reaes qumicas, que envolvem a quebra de substncias e a sntese de novos compostos.
Igualmente importante foi a observao de que o mecanismo pelo qual as reaes
qumicas so produzidas pelos microrganismos muito semelhante quele que ocorre em formas
de vida superiores.
Durante as ltimas dcadas, os microrganismos tm surgido como parte do eixo principal
das cincias biolgicas. Entre as razes para isto, est o conceito de unidade em bioqumica,
que significa que muitos dos processos bioqumicos que ocorrem em microrganismos so
essencialmente os mesmos em todas as formas de vida, inclusive o homem. Alm disso, toda a
informao gentica de todos os organismos, dos microrganismos a seres humanos, codificada
pelo DNA.
Em virtude da relativa simplicidade em realizar experimentos com microrganismos,
associada rpida velocidade de crescimento e de sua variedade de atividades bioqumicas, os
microrganismos tornaram-se o modelo experimental de escolha para o estudo da gentica e de
fenmenos biolgicos fundamentais.
Para compreender o atual estgio da cincia da microbiologia, precisamos conhecer como
ela chegou at onde estamos atualmente.
A descoberta do mundo microbiano inclui histrias sobre orgulho, nacionalismo, clamor
pblico para curas e questes sobre tica. Os primeiros cientistas que optaram por estudar
microbiologia foram motivados, no decorrer de suas descobertas, por competio, inspirao e
sorte. Houve conceitos errneos que levaram a verdade, e verdades que no foram inicialmente
reconhecidas. Tudo comeou com indivduos fascinados pelo que os outros no podiam ver...

Uma breve histria da Microbiologia

A cincia da microbiologia iniciou h apenas algumas centenas de anos. Na verdade, os
ancestrais das bactrias foram os primeiros seres vivos na Terra.
As primeiras observaes
Uma das descobertas mais importantes na histria da biologia.
1. Robert Hooke observou em um microscpio extremamente simples que amostras de
cortia eram compostas de pequenas caixas; ele introduziu o conceito de clula (1665).
Eram as menores unidades vivas.

2. As observaes de Hooke marcaram o incio da teoria celular, o conceito de que todas as

coisas vivas so compostas por clulas. Ele no tinha tcnicas de colorao, por isso s
viu as clulas e no conseguiu visualizar claramente os micrbios.
3. Antoni van Leeuwenhoek, utilizando um microscpio muito simples, foi o primeiro a
observar os microrganismos vivos atravs de lentes de aumento (1673). Ele os chamava
de animlculos. Ele fez desenhos detalhados dos animlculos de gua de chuva, em
lquido do qual gros de pimenta foram submersos e no material removido de seus dentes.
Eram representaes de bactrias e protozorios.

O debate sobre a Gerao Espontnea

Aps van Leuwenhoek descobrir o mundo dos microrganismos invisveis, o interesse da
comunidade cientfica voltou-se para a origem dessas minsculas coisas vivas.
At a segunda metade do sculo XIX muitos cientistas acreditavam que algumas formas
de vida poderiam aparecer espontaneamente da matria morta, eles chamavam de gerao
espontnea. H pouco mais de 100 anos, as pessoas facilmente acreditavam que sapos, cobras e
camundongos poderiam nascer de solos midos; que moscas poderiam emergir do estrume; e
que larvas de insetos e larvas de moscas poderiam surgir a partir de corpos em decomposio.
1. At a metade de 1880, muitas pessoas acreditavam na gerao espontnea, a ideia de
que os organismos vivos poderiam surgir a partir da matria no-viva.
2. Um forte oponente gerao espontnea Francesco Redi demonstrou que larvas de
insetos surgiam na carne em decomposio somente quando moscas depositavam seus
ovos sobre a carne (1668).
Encheu 3 jarras com carne em decomposio e lacrou-as fortemente. Fez o mesmo com
outras 3 jarras e deixando-as abertas. As larvas apareceram nas jarras abertas, aps
moscas entrarem nessas jarras e depositarem seus ovos, mas o contedo dentro das
jarras lacradas no apresentou sinal de larvas.

Antagonistas no se convenceram, eles argumentaram que o ar

fresco era necessrio para a gerao espontnea.
Iniciou novo experimento, 3 jarras foram cobertas com uma fina
rede, ao invs de serem lacradas. Nenhuma larva apareceu nas
jarras, embora ar fresco estivesse presente. As larvas apareciam
somente se fosse permitido que moscas deixassem seus ovos
sobre a carne.
Foi um forte golpe mas muitos cientistas ainda acreditavam que
pequenos
organismos
como
os
animlculos,
eram
suficientemente simples para serem gerados a partir de materiais
no-vivos.
3. A favor da gerao espontnea Jonh Needham declarou que os
microrganismos poderiam aparecer espontaneamente em caldos
nutrientes fervidos (1745).
Ele descobriu que, mesmo aps aquecer caldos nutrientes (caldo de galinha ou milho)
antes de coloc-los em frascos cobertos, a soluo resfriada era logo abundantemente
ocupada por microrganismos que desenvolviam-se espontaneamente a partir de caldos.

4. 20 anos depois... Lazzaro Spallanzani repetiu os experimentos de Needham e sugeriu que

os resultados de Needham eram devido aos microrganismos presentes no ar, que
entravam em contato com o meio nutriente (com os caldos nutrientes aps eles terem sido
fervidos) (1765). Ele mostrou que os caldos nutrientes aquecidos, aps terem sido
primeiramente lacrados em um frasco, no desenvolviam crescimento microbiano.

Needham respondeu que a fora vital necessria para a gerao espontnea tinha sido
destruda pelo calor e foi mantida fora dos frascos pelos lacres.
A fora vital recebeu mais crdito quando Laurent Lavoisier mostrou a importncia do
oxignio para a vida. Criticaram que no havia oxignio suficiente nos frascos lacrados de
Spallanzani para sustentar a vida mirobiana.
5. Contra a abiognese: Franz Schulze (1815-1873) e Theodor Schwann (1810-1882) 60 a 70
anos depois: realizaram experincias onde aeraram infuses fervidas, fazendo o ar
atravessar solues cidas (Schulze), e outra que forava o ar atravs de tubos aquecidos
ao rubro (Schwann).
Os defensores da gerao espontnea no se
convenciam. Em nenhum dos casos surgiram
microrganismos mas eles argumentavam que o
cido e o calor alteravam o ar, fazendo com que o
meio no permitisse o crescimento.

6. Contrrio a abiognese: Schreder e Von Dush (1850)

Tamponao com algodo. Realizaram experincia
semelhante a anterior, fazendo o ar passar por um algodo
para os frascos que tinham o ar aquecido.
As bactrias foram retidas no algodo (filtro) e no houve
crescimento de microrganismos no caldo. Nascia a tcnica
de fechar os tubos de ensaio e erlenmeyers com tampes
de algodo.
7. A questo ainda estava sem soluo quando Rudolf Virchow introduziu o conceito da
biognese: clulas vivas somente podem surgir a partir de clulas preexistentes (1858).
Os argumentos sobre a gerao espontnea continuaram at 1861 quando a questo foi
resolvida por Louis Pasteur.
8. Louis Pasteur demonstrou que os microrganismos esto presentes no ar e em todos os
lugares e ofereceu provas para a teoria da biognese (1861).
Afirmou que os microrganismos podiam contaminar solues estreis, embora o prprio ar
por si s no criasse micrbios.
Ele encheu vrios frascos, que continham a extremidade da abertura no formato de um
pescoo curto, com caldo de carne e ferveu seus contedos. Alguns deles, ele deixou que
esfriassem abertos. Em poucos dias estes frascos estavam contaminados com micrbios.
Os outros frascos, lacrados aps fervura, estavam livres de microrganismos. Concluiu que
os micrbios do ar eram os responsveis pela contaminao da matria no-viva, assim
como os caldos nos frascos de Needham.
A seguir, colocou meio de cultura em frascos com a extremidade da abertura no formato de
um pescoo longo na forma da letra S. O contedo dos frascos foi fervido e resfriado. O
meio de cultura nos frascos no apodreceu e nem mostrou sinais de vida, mesmo aps
meses. O modelo criado por Pasteur permitia que o ar entrasse no frasco, mas o pescoo
curvado prendia qualquer microrganismo presente no ar e que pudesse contaminar o meio.

Alguns frascos originais, que foram lacrados mais tarde, esto

no Instituto Pasteur Paris, e ainda hoje no demonstram
sinal de contaminao.
Pasteur demonstrou que os microrganismos podem estar na
matria no-viva sobre slidos, dentro de lquidos e no ar.
Ele demonstrou que a vida microbiana pode ser destruda
pelo calor e que podem ser elaborados mtodos para impedir
o acesso dos microrganismos presentes no ar aos ambientes
nutrientes.
9. As descobertas de Pasteur levaram ao desenvolvimento de tcnicas de assepsia,
utilizadas em laboratrios e nos procedimentos mdicos para prevenir a contaminao
pelos microrganismos no desejados.
Os cientistas agora acreditavam que uma forma de gerao espontnea provavelmente
ocorreu na Terra primitiva, quando surgiu a primeira vida, mas que isso no aconteceu sob
as condies ambientais atuais.

A Idade de Ouro da Microbiologia

1. Os rpidos avanos na cincia da microbiologia foram obtidos entre 1857 e 1914.
Chamada de Idade de Ouro. Rpidos avanos liderados por Pasteur e Robert Koch
levaram ao estabelecimento da microbiologia como uma cincia. Os microbiologistas
estudaram as atividades qumicas dos microrganismos, aperfeioaram tcnicas de
microscopia e de cultivo dos microrganismos e desenvolveram vacinas e tcnicas
cirrgicas.
Fermentao e Pasteurizao
Etapa fundamental que estabeleceu relao entre microrganismos e doenas, ocorreu
quando um grupo de mercadores franceses pediu que Pasteur descobrisse porque os vinhos e
cervejas azedavam. Eles queriam impedir a deteriorao destas bebidas quando elas eram
enviadas a longas distncias. Muitos cientistas acreditavam que o ar convertia o acares desses
fluidos em lcool.
1. Pasteur descobriu que microrganismos chamados as leveduras fermentavam o acar a
lcool (convertiam na ausncia de ar). Esse processo chamado fermentao e usado
na produo de vinho e cerveja. O azedamento e a danificao so causados por
microrganismos diferentes, as bactrias e que as bactrias podem oxidar o lcool a cido
actico.
2. A soluo de Pasteur foi aquecer o vinho e a cerveja o suficiente para matar a maioria das
bactrias que causavam o estrago. Um processo de aquecimento, denominado
pasteurizao, utilizado para matar bactrias em algumas bebidas alcolicas e no leite. A
relao entre danificao de comidas e microrganismos foi o passo mais importante para
estabelecer a relao entre doenas e micrbios.
A teoria do germe da doena
A relao entre doenas e micrbios era desconhecida at relativamente pouco tempo.
Antes disso, tratamentos efetivos para muitas doenas eram descobertos por tentativa e erro, mas
as causas das doenas era desconhecidas. Essa relao alertou os cientistas para a possibilidade
dos microrganismos terem relao semelhante com plantas e animais especificamente
causando doenas. Essa ideia foi chamada de Teoria do Germe da Doena. Teoria difcil de
acreditar porque muitos acreditavam que a doena era uma punio para crimes ou pecados
individuais ou por demnios.
1. Agostino Bassi (1835) provou que uma doena do bicho-da-seda era causada por um
fungo e Pasteur (1865) provou que outra doena do bicho-da-seda era causada por um
protozorio e desenvolveu mtodo para identificar as larvas do bicho-da-seda que estavam
contaminadas mostraram uma forte relao entre os microrganismos e as doenas.
2. Joseph Lister introduziu o uso de um desinfetante para a limpeza das roupas cirrgicas, a
fim de controlar as infeces nas pessoas (dcada de 1860). Era um cirurgio e aplicou
essa teoria nos procedimentos mdicos, que naquela poca no desinfetavam as mos e
transmitiam infeces (febre s crianas recm-nascidas) de um paciente a outro.
Conheceu trabalhos de Pasteur. Desinfetantes no eram usados mas Lister sabia que o
fenol matava bactrias e comeou a tratar ferimentos cirrgicos com soluo de fenol. Isso
reduziu as infeces e as mortes e outros cirurgies adotaram o procedimento. Seus
estudos provaram que microrganismos so a causa das infeces cirrgicas.
3. Robert Koch provou que os microrganismos causam doenas. Ele utilizou uma srie de
procedimentos, chamados de postulados de Koch (1876), que so utilizados at hoje para
provar que um determinado microrganismo causa uma determinada doena.
Era mdico e rival de Pasteur na disputa para descobrir a causa do antraz (carbnculo)
que destrua rebanhos de gado e ovelha na Europa. Koch descobriu uma bactria em
forma de basto (Bacillus anthracis) no sangue do gado que morrera de antraz. Ele
cultivou a bactria em meio nutriente e depois injetou amostras da cultura em animais
sadios. Quando esses animais adoeceram e morreram ele isolou a bactria de seus
sangues e comparou as novas bactrias com as isoladas originalmente, e concluiu que as
duas amostras tinham a mesma bactria.
Ele estabeleceu uma srie de procedimentos experimentais para relacionar diretamente
micrbio especfico com doena especfica, chamados de postulados de Koch.

POSTULADOS DE KOCH
1. O microrganismo deve estar sempre presente
nas leses das plantas ou animais doentes
(ASSOCIAO CONSTANTE)
2. O microrganismo deve ser isolado e cultivado
em CULTURA PURA
3. O microrganismo isolado deve REPRODUZIR
OS SINTOMAS quando inoculado em uma
planta ou animal sadio
4. O microrganismo deve ser REISOLADO da
planta ou animal inoculado artificialmente e
corresponder, em todas as suas caractersticas,
com o isolado da primeira leso.

Vacinao
Frequentemente, um tratamento ou uma medida preventiva desenvolvido antes que os
cientistas saibam como funciona. A vacina contra varola um exemplo disso. Em 4 de maio de
1796, quase 70 anos antes de Koch estabelecer que um microrganismo especfico era o causador
do antraz, Edward Jenner, jovem mdico britnico, iniciou experimento para encontrar uma
maneira de proteger as pessoas contra a varola.
As epidemias de varola eram muito temidas. A doena aparecia periodicamente por toda
Europa, matando milhares e liquidou 90% dos nativos na Costa Oeste norte-americana quando os
colonizadores europeus levaram a infeco para o Novo Mundo.
1. Na vacinao, a imunidade (resistncia a uma determinada doena) conferida pela
inoculao com uma vacina.
2. Em 1798, Edward Jenner demonstrou que a inoculao com material de vacnia
proporciona imunidade aos seres humanos contra varola.
Quando uma jovem que trabalhava na ordenha de vacas informou a Jenner que ela no
contrairia varola porque j havia estado doente de vacnia doena muito mais amena
que a varola ele decidiu testar a histria da garota. Primeiro, ele coletou amostras de
feridas de vacnia. Ento inoculou um voluntrio saudvel de 8 anos de idade com o
materia retirado das feridas de vacnia por meio de pequenos arranhes no brao do
garoto com uma agulha contaminada. Os arranhes deram origem s bolhas, tpicas da
doena. Em poucos dias, o voluntrio estava medianamente doente, mas se recuperou
rapidamente e nunca mais contraiu vacnia nem varola.
O processo foi chamado de vacinao, da palavra
latina vacca, significando gado. Pasteur deu esse
nome em homenagem ao trabalho de Jenner. A
proteo contra uma doena fornecida pela
vacinao (ou pela recuperao da prpria
doena) chamada de imunidade.
3. Por volta de 1880, Pasteur descobriu que uma
bactria no-virulenta poderia ser utilizada como
uma vacina para a clera em aves domsticas; ele
criou a palavra vacina.
Anos aps os experimentos de Jenner, por volta de 1880, Pasteur descobriu como
funcionava a vacinao. Ele descobriu que a bactria que causava a clera nas aves
domsticas perdia a capacidade de causar a doena (perdia a virulncia ou tornava-se
avirulenta) depois que era mantida por longos perodos no laboratrio. Entretanto, este e

outros microrganismos com virulncia diminuda eram capazes de induzir imunidade contra
infeces subsequentes de seus companheiros virulentos. A descoberta desse fenmeno
forneceu a chave para o sucesso do experimento de Jenner com vacnia. Ambas, vacnia e
varola, so causadas por vrus. Mesmo que o vrus que causa vacnia no seja um
derivado do vrus da varola produzido em laboratrio, sua semelhana com o vrus da
varola to grande que ele pode induzir imunidade para ambas as viroses. Pasteur usou
o termo vacina para as culturas de microrganismos avirulentos, utilizadas para inoculao
preventiva.
4. As vacinas modernas so preparadas a partir de microrganismos no-virulentos, de
patgenos mortos, ou de componentes de patgenos e pela tecnologia do DNA
recombinante.
O experimento de Jenner foi o primeiro que ocorreu na cultura ocidental que utilizou um
agente viral vivo o vrus da vacnia para produzir imunidade. Na China antiga, os
mdicos imunizavam seus pacientes pela remoo de escamas de pstulas ressecadas de
pessoas que estavam sofrendo de casos moderados de varola, transformavam essas
escamas em um p fino e inseriam esse p nas narinas das pessoas para serem
protegidas.
Algumas vacinas ainda so produzidas a partir de linhagens avirulentas de micrbios, que
produzem imunidade contra as linhagens virulentas. Outras vacinas so feitas a partir de
micrbios mortos, de componente isolados dos microrganismos virulentos ou pelas
tcnicas de engenharia gentica.
O nascimento da quimioterapia moderna: sonhos de uma bala mgica
Aps estabelecer relao microrganismos-doenas, mdicos microbiologistas direcionaram
suas pesquisas para as substncias que poderiam destruir os microrganismos patognicos sem
prejudicar os animais infectados ou os seres humanos.
1. Quimioterapia o tratamento qumico de uma doena. O tratamento das doenas
utilizando substncias qumicas chamado de quimioterapia. (Esse termo tambm referese geralmente ao tratamento qumico de doenas no-infecciosas como o cncer.)
2. Dois tipos de agentes quimioterpicos so as drogas sintticas (qumicos preparados em
laboratrio) e antibiticos (substncias produzidas naturalmente por bactrias e fungos
para inibir o crescimento de outros microrganismos). A base do sucesso da quimioterapia
est no fato de que alguns qumicos so mais venenosos para os microrganismos que
para os hospedeiros infectados por esses micrbios.
3. Paul Ehrlich utilizou um produto qumico contendo arsnico, denominado salvarsan, para o
tratamento da sfilis (1910). Ele disparou o primeiro tiro na revoluo da quimioterapia.
Como estudante de medicina, especulou a respeito de uma bala mgica, que poderia
combater e destruir um patgeno, sem prejudicar o hospedeiro infectado. Aps testar
centenas de substncias, encontrou o salvarsan, derivado de arsnico, efetivo no combate
sfilis. Salvarsan = salvao para a sfilis e por ter arsnico.
Antes da descoberta o nico composto qumico conhecido era um extrato retirado da casca
de uma rvore sul-americana, quinino, que havia sido utilizado pelos conquistadores
espanhis no tratamento da malria.
No final da dcada de 30, haviam sido desenvolvidas outras drogas para destruir
microrganismos. Muitas eram derivadas de corantes (testavam corantes sintetizados e
produzidos para tecidos na busca de propriedades antimicrobianas). As sulfonamidas
(drogas derivadas da sulfa) foram sintetizadas no mesmo perodo.
4. Alexander Fleming observou que o bolor (fungo) Penicillium inibia o crescimento de uma
cultura de bactrias. Ele chamou o ingrediente ativo de penicilina (1928).
O primeiro antibitico foi descoberto por acidente. Alexander Fleming quase estava
descartando algumas culturas em placas que haviam sido contaminadas por fungos
quando observou cuidadosamente o curioso padro de crescimento nas placas
contaminadas. Havia uma rea clara ao redor do fungo onde a cultura de bactria havia
sido inibida.
Ele observou que um tipo de fungo podia inibir o crescimento da bactria.
O fungo foi mais tarde identificado como Penicillium notatum e, em 1928, Fleming nomeou

10

o inibidor ativo do fungo de penicilina. Assim, penicilina um antibitico produzido por um

fungo. Sua utilidade no foi aparente at a dcada de 40, quando foi testada clinicamente
e produzida em grande escala.

A penicilina tem sido utilizada clinicamente como antibitico desde a dcada de 40.
5. Os pesquisadores esto atacando o problema de resistncia dos micrbios s drogas.
PROBLEMA 1: Muitos antibiticos foram desenvolvidos. Infelizmente, antibiticos e outras
drogas quimioterpicas no esto livres de problemas. Muitos qumicos antimicrobianos
so muito txicos para os seres humanos para serem aplicados; matam os micrbios
patognicos mas tambm prejudicam o hospedeiro infectado.
A toxicidade para o homem um problema especfico no desenvolvimento de drogas para
o tratamento de doenas virais. O crescimento viral depende dos processos vitais de
clulas normais do hospedeiro. Portanto, existem poucas drogas antivirais usadas com
sucesso, uma vez que um droga interfere na reproduo viral provavelmente afeta tambm
as clulas saudveis do organismo.
PROBLEMA 2: Outro problema com as drogas antimicrobianas o aparecimento e a
disperso de variedades novas de microrganismos que so resistentes aos antibiticos. A
resistncia a drogas resulta de mudanas genticas nos micrbios que os torna tolerantes
a uma certa quantidade de antibitico que normalmente inibiria seu crescimento.
Progressos recentes na microbiologia
1. Bacteriologia o estudo das bactrias, micologia o estudo dos fungos, virologia o
estudo dos vrus e parasitologia o estudo dos parasitas e vermes protozorios.
2. Os microbiologistas esto usando a genmica, o estudo de todos os genes de um
organismo, para classificar os microrganismos. Era de ouro da classificao.
3. As novas tcnicas da biologia molecular e da microrcopia eletrnica forneceram
ferramentas para o avano do conhecimento na virologia. Desenvolvimento do microscpio
eletrnico em 1940 permitiu a observao detalhada da estrutura dos vrus.
4. O desenvolvimento da tecnologia do DNA recombinante tem promovido avanos em todas
as reas da microbiologia.
Os microrganismos podem ser geneticamente manipulados para produzir grandes
quantidades de hormnios humanos e outras substncias mdicas urgentemente
necessrias. No final da dcada de 60, Paul Berg mostrou que fragmentos do DNA de
seres humanos ou de animais que codificam protenas importantes (genes) podem ser
ligados ao DNA de uma bactria. A molcula hbrida resultante foi o primeiro exemplo de
DNA recombinante. Quando o DNA recombinante inserido dentro da bactria (e de outros
micrbios), pode ser utilizado para produzir grandes quantidades da protena desejada. A
tecnologia que se desenvolveu a partir dessa tcnica chamada de tecnologia do DNA
recombinante ou engenharia gentica. Ela teve sua origem em duas reas: gentica
microbiana, que estuda os mecanismos pelos quais os microrganismos herdam suas
caractersticas, e a biologia molecular, que estuda especificamente como a informao
gentica transmitida nas molculas de DNA e como o DNA direciona a sntese das
protenas.

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Exerccios
1. Qual o conceito de clula? Qual pesquisador empregou esse conceito pela primeira vez? Que
instrumento ele utilizou?
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2. Quem foi o primeiro a observar os microrganismos vivos atravs de lentes de aumento? Como ele
os chamava?
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3. Explique o conceito de gerao espontnea. Qual o outro nome dado a esse conceito? Cite
exemplos das crenas relacionadas a essa teoria.
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4. Explique o conceito de biognese.
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5. O que era a fora vital? Qual sua funo?
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6. Faa um resumo de cada pesquisador e do experimento por ele desenvolvido na busca de
comprovar a gerao espontnea ou a biognese.
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7. O que foi a Idade de Ouro da Microbiologia?
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8. Explique, em detalhes, qual foi a etapa fundamental que estabeleceu relao entre microrganismos
e doenas (qual experimento foi feito, por quem, qual a concluso).
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9. O que era a Teoria do Germe da Doena? Como a teoria da biognese abriu o caminho para a
teoria do germe da doena?
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10. Quais as principais contribuies dos seguintes pesquisadores:
a) Agostino Bassi:
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b) Joseph Lister:
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c) Robert Koch
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11. Explique como foi a descoberta da vacina. Qual pesquisador foi responsvel?
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12. O que significa bactria virulenta e bactria avirulenta?
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13. Como so feitas as vacinas modernas?
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14. O que quimioterapia? Cite e explique os dois tipos de agentes quimioterpicos.
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15. O que penicilina? Como ela foi descoberta? Por qual cientista?
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16. Cite e explique dois problemas atuais relacionados ao uso indiscriminado de antibiticos.
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17. Pesquise na Internet e faa a correspondncia entre pesquisadores e contribuies para o avano
da microbiologia.
___ Avery, MacLeod e McCarty

(a) Desenvolvimento da vacina contra a varola

___ Beadle e Tatum

(b) Descobriu como o DNA controla a sntese de

protenas dentro de uma clula

___ Berg
___ Ehrlich
___ Fleming
___ Hooke
___ Iwanowski
___ Jacob e Monod

(c) Descobriu a penicilina

(d) Descobriu que o DNA pode ser transferido de uma
bactria para outra
(e) Refutou a gerao espontnea
(f) O primeiro a caracterizar um vrus

___ Jenner

(g) O primeiro a utilizar

procedimentos cirrgicos

___ Koch

(h) O primeiro a observar as bactrias

___ Lancefield

(i) O primeiro a observar clulas em material vegetal e

a nome-las

___ Lederberg e Tatum

___ Lister
___ Pasteur
___ Stanley
___ van Leeuwenhoek
___ Virchow
___ Weizmann

desinfetantes

nos

(j) Observou que os vrus eram passveis de serem

filtrados
(k) Provou que o DNA o material hereditrio
(l) Provou que os microrganismos podem causar
doenas
(m) Preconizou que as clulas vivas surgem a partir
de clulas vivas preexistentes
(n) Mostrou que os genes codificam as enzimas
(o) Misturou DNA animal com DNA de bactrias
(p) Utilizou bactrias para produzir acetona
(q) Utilizou o primeiro agente quimioterpico sinttico
(r) Props um sistema de classificao para os
estreptococos com base nos antgenos de suas
paredes celulares

15

Classificao dos microrganismos.

A clula como a unidade estrutural da vida
As clulas so consideradas as unidades bsicas de qualquer organismo, desde os
microrganismos constitudos por uma nica clula s formas de vida com tecidos especializados e
rgos complexos. A palavra clula surgiu em 1665 quando o ingls Robert Hooke usou-a para
descrever cortes finos de cortia que observou em um microscpio (semelhantes a um favo de
mel formado pelas paredes das clulas). Baseado nestas e outras informaes, Matthias
Schleiden e Theodor Schwann desenvolveram a teoria celular em 1838-1839. Eles sugeriram
que as clulas so as unidades estruturais e funcionais bsicas de todos os organismos.
Com a aceitao da teoria celular, os investigadores especularam sobre a substncia
dentro da clula, o protoplasma (do grego prtos, primeiro; plsma, substncia formada). O
protoplasma uma mistura complexa e gelatinosa de gua e protenas, lipdeos e cidos
nuclicos. Ele envolvido por uma membrana flexvel e algumas vezes por uma parede celular
rgida.
Dentro das clulas existe uma regio que controla a funo celular e a hereditariedade. Em
algumas clulas, chamadas de clulas eucariticas, esta regio representada por uma
estrutura denominada ncleo, que circundada por uma membrana nuclear ou carioteca. Em
clulas mais simples, chamadas de clulas procariticas, existe um material similar, porm no
separado fisicamente do restante da clula por uma membrana. Em cada tipo celular, envolto ou
no por membrana nuclear, esse material que contm a informao gentica, as instrues
codificadas que permitem a transmisso de caractersticas hereditrias dos organismos para suas
geraes seguintes. A outra parte do protoplasma, a rea no-nuclear, chamada de citoplasma
(ver FIGURA).
Em um organismo unicelular (formado por uma nica clula), todos os processos vitais
ocorrem dentro da clula. Se um organismo contm muitas clulas, ele multicelular. Em formas
de vida superior, como as plantas e os animais, estas clulas esto arranjadas em estruturas
chamadas de tecidos ou rgos, com funes especficas. Todos os organismos, unicelulares ou
multicelulares, apresentam as seguintes caractersticas:
1- reproduo
2- utilizao de alimento como fonte de energia
3- sntese de substncias e estruturas celulares
4- excreo de substncias
5- resposta a alteraes ambientais
6- mutaes, que so alteraes sbitas em suas caractersticas hereditrias, embora ocorram
raramente.
Classificao dos organismos vivos
H cerca de 10 milhes de espcies de organismos vivos no mundo, incluindo milhares de
espcies microbianas. A necessidade de organizar esta quantidade e variedade de organismos
caracterstica da mente humana. Assim, os cientistas tentam coloc-los em grupos baseados em
suas similaridades.
A cincia da taxonomia inclui a classificao (arranjo), nomenclatura (nome) e
identificao (descrio e caracterizao) dos organismos vivos. Os bilogos agrupam os
organismos que compartilham certas caractersticas comuns em grupos taxonmicos
denominados taxa (singular txon). O txon bsico a espcie, que uma coleo de cepas
com caractersticas similares especialmente em seu material hereditrio. (Uma cepa formada
por descendentes de uma nica colnia em uma cultura pura.) Outras caractersticas usadas para
agrupar os organismos em espcies incluem morfologia e exigncias nutricionais. Espcies
intimamente relacionadas so agrupadas em gneros, os gneros em famlias, as famlias em
ordens, as ordens em classes, as classes em filos ou divises, e os filos ou divises em reinos
(RE FI C O FA G E).

16

A Tabela mostra esquemas de classificao de 3 espcies: uma bactria, uma alga e um

animal.
Organismo
Taxa (categorias)
Reino ou grupo principal

Gato

Alga

Bactria

Animal

Plantae

Eubacteria

Chlorophyta

Gracillicutes

Chlorophyceae

Scotobacteria

Diviso
Filo

Chordata

Subfilo

Vertebrata

Classe

Mammalia

Subclasse

Eutheria

Ordem

Carnivora

Volvocales

Spirochaetales

Famlia

Felidae

Chlamydomonadaceae

Leptospiraceae

Gnero

Felis

Clamydomonas

Leptospira

Espcie
F. domesticus
C. eugametos
L. interrogans
O sistema de nomenclatura (nomeao) em uso atualmente para os organismos foi
estabelecido em 1735 por Carolus Linnaeus. Os nomes cientficos so latinizados porque o latim
era a lngua tradicionalmente utilizada pelos estudantes. A nomenclatura cientfica para cada
organismo designa para cada organismo dois nomes o gnero o primeiro nome, sempre
iniciado com letra maiscula; o epteto especfico (nome das espcies) segue o gnero e no se
inicia por letra maiscula. Assim, o nome de uma espcie sempre dado como uma combinao
latina de duas partes (binomial): nome do gnero + nome especfico que denota a espcie.
O organismo designado pelos dois nomes, o gnero e o epteto especfico, ambos sendo
sublinhados ou escritos em itlico. Por tradio, aps um nome cientfico ter sido mencionado uma
vez, ele pode ser abreviado com a inicial do nome do gnero seguido pelo epteto especfico. Por
exemplo, o homem pertence espcie Homo sapiens, enquanto a bactria que causa a doena
de Lyme pertence espcie Borrelia burgdorferi.
CERTO: Staphylococcus aureus.
ERRADO: Staphylococcus aureus, Staphylococcus Aureus, staphylococcus aureus, Estafilococos
aureus, etc.
Os nomes cientficos podem, entre outras coisas, descrever um organismo, homenagear
um pesquisador ou identificar os hbitos de uma espcie. Por exemplo, considerando
Staphylococcus aureus, uma bactria comumente encontrada na pele humana. O gnero
Staphylo descreve o arranjo agrupado das clulas; coccus indica que as clulas possuem forma
de esferas. O epteto especfico aureus significa ouro em latim, a cor de muitas colnias dessa
bactria. As bactrias do gnero Escherichia coli foram nomeadas por um cientista, Theodor
Escherich, enquanto que o epteto especfico, coli, lembra-nos que E. coli vive no clon ou no
intestino grosso.
No h consenso na nomenclatura e classificao de cada txon. Por exemplo, os
zoologistas e os botnicos concordam com o arranjo das plantas e dos animais em filos (os
botnicos preferem o termo diviso). J os microbiologistas ainda no estabeleceram um filo que
satisfaa aos bacteriologistas, ficologistas, protozoologistas e outros. Assim, em concordncia, o
gnero e a espcie permanecem como as duas taxas mais importantes entre as bactrias.
Classificao dos microrganismos
Durante a metade do sculo XVIII, todos os organismos vivos foram distribudos por
Carolus Linnaeus em dois reinos, Plantae e Animalia. Embora seu trabalho pioneiro tenha grande

17

contribuio cientfica, este e outros sistemas de classificao iniciais apresentavam falhas ou

esquemas errados, porque eram baseados em informaes imprecisas. Atualmente, os sistemas
de classificao, particularmente aqueles para microrganismos, esto evoluindo ainda, pois os
pesquisadores esto descobrindo mais informaes sobre as caractersticas fsicas e qumicas
dos organismos.
1) Reino Protista
Em seu sistema de classificao, Linnaeus colocou os protozorios no reino animal e
outros microrganismos com as plantas. Mas esse conceito simples era impraticvel para os
microrganismos, alguns dos quais so predominantemente semelhantes s plantas, outros aos
animais e outros tm caractersticas de ambos. Em 1866, Ernst H. Haeckel props um terceiro
reino para resolver o dilema, o reino Protista, que inclua aqueles microrganismos que tinham
caractersticas tanto de plantas como de animais. De acordo com ele, bactrias, algas e
protozorios foram includos nesse reino. Mas com acesso s informaes sobre as estruturas
internas dos microrganismos, a validade do reino Protista foi questionada.
Principais esquemas de classificao de organismos vivos.
Esquema de classificao
Reinos
Organismos includos
Linnaeus (1753)

Plantae
Animalia

Bactrias, fungos, algas, plantas.

Protozorios e animais superiores

Haeckel (1865)

Plantae
Animalia
Protista

Algas multicelulares e plantas.

Animais.
Microrganismos
incluindo
bactrias,
protozorios, algas, bolores e leveduras.

Whittaker (1969)

Plantae
Animalia
Protista
Fungi
Monera

Algas multicelulares e plantas.

Animais.
Protozorios e algas unicelulares.
Bolores e leveduras.
Todas as bactrias (procariotos)

Woese (1977)

Archaeobacteria

Bactrias que produzem gs metano,

requerem altas concentraes de sal ou altas
temperaturas.
Todas as outras bactrias, incluindo aquelas
mais familiares aos microbiologistas, tais
como causadoras de doenas, bactrias de
solo e da gua e bactrias fotossintticas.
Protozorios, algas, fungos, plantas e
animais.

Eubacteria

Eucaryotes

2) Microrganismos procariticos e eucariticos

Os avanos da microscopia eletrnica na dcada de 1940 mostrou muito mais a estrutura
celular interna do que era possvel com os microscpios ticos. Uma descoberta particularmente
importante em termos de taxonomia foi que as clulas microbianas podem ser divididas em
eucariticas e procariticas. Esta diferena a base para a separao das bactrias de outros
tipos de microrganismos e de todas as outras clulas, de plantas e animais. As bactrias tm uma
estrutura celular procaritica e so procariotos. Outras clulas, incluindo algas, fungos,
protozorios e clulas vegetais e animais tm uma estrutura celular eucaritica e so eucariotos.
3) O conceito de classificao dos cinco reinos
A maneira pela qual o organismo obtm nutrientes de sua alimentao a base do sistema
de cinco reinos de classificao proposto em 1969 por Robert H. Whittaker. Ele ampliou o sistema
de classificao e sugeriu 3 nveis de organizao celular para acomodar os 3 modos principais
de nutrio: (1) fotossntese, o processo pelo qual a luz fornece energia para converter o dixido
de carbono (CO2) em gua e acares; absoro, a captao de nutrientes qumicos dissolvidos
em gua; e (3) ingesto, entrada de partculas de alimentos no-dissolvidas.

18

Nesse esquema de classificao, os procariotos constituem o reino Monera, que at

recentemente foi considerado o reino mais primitivo e acreditava-se que era o ancestral dos
eucariotos. Os procariotos normalmente obtm nutrientes somente por absoro, e no podem
ingerir alimentos ou realizar fotossntese (como as plantas). O reino Protista inclui os
microrganismos eucariticos unicelulares, que representam os 3 tipos nutricionais: as algas so
fotossintticas, os protozorios podem ingerir seu alimento e os fungos limosos (inferiores)
somente absorvem os nutrientes. Organismos eucariticos superiores so colocados nos reinos
Plantae (plantas verdes fotossintticas e algas superiores), Animalia (animais que ingerem os
alimentos) e Fungi, organismos que tm parede celular mas no apresentam o pigmento
fotossinttico clorofila encontrado em outras plantas, portanto eles absorvem os nutrientes.

Assim, os microrganismos foram colocados em 3 dos 5 reinos: Monera (bactrias),

Protista (protozorios e algas microscpicas) e Fungi (fungos microscpicos: leveduras e
bolores). Este sistema coloca todas as bactrias no reino Monera e sugere um ancestral comum
para todos os membros deste reino. Entretanto, pesquisas mais recentes sugerem um ancestral
diferente entre os microrganismos.
4) Arqueobactrias, eubactrias e eucariotos
At 1977, os cientistas achavam que os procariotos eram os mais primitivos de todos os
organismos. O prefixo pro significa mais primitivo que, ficando subentendido que esses
organismos, por causa da simplicidade estrutural, eram os ancestrais de eucariotos mais
complexos. Ento Carl Woese descobriu que nenhum grupo tinha se desenvolvido a partir de
outro e que os procariotos e eucariotos aparentemente tinham evoludo por vias completamente
diferentes de uma forma ancestral comum.

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Evidncias para sustentar essa ideia vieram de estudos com o cido ribonuclico
ribossmico, ou rRNA, que essencial para a sntese protica e, portanto, para a sobrevivncia
da clula. Foi descoberto que nos ribossomos de todos os organismos vivos, o rRNA composto
de muitas unidades pequenas denominadas ribonucleotdeos. Existem 4 tipos de
ribonucleotdeos, arranjados em vrias combinaes para formar uma nica e longa cadeia de
centenas de unidades. O rRNA de qualquer organismo particular tem um arranjo distinto de
ribonucleotdeos, ou seja, uma sequncia nucleotdica especfica. (O RNA difere do DNA por ser
uma fita simples, apresentar ribose em vez de desoxirribose, e uracila (U) em vez de timina (T). As
outras 3 bases adenina (A), guanina (G) e citosina (C) ocorrem tanto em RNA quanto em DNA.)
Os genes que controlam a sequncia nucleotdica de rRNA variam lentamente durante
milhes de anos de evoluo. Portanto, o rRNA pode servir como um indicador de como os
organismos esto intimamente relacionados e algumas regies da molcula de rRNA de todos os
organismos vivos permanecem quase as mesmas. Esta constncia sustenta a ideia de que todos
os organismos tm se desenvolvido de formas ancestrais comuns.
Ao mesmo tempo, a quantidade de diferenas entre as outras regies de rRNA pode ser
usada para medir o grau de relacionamento entre os organismos. Por exemplo, se as sequncias
de ribonucleotdeos de dois tipos de organismos diferem em grande extenso, a relao entre
ambos muito distante; isto , os organismos divergiram h muito tempo de um ancestral comum.
Porm, se as sequncias mostram mais similaridades, os organismos esto intimamente
relacionados e tm um ancestral em comum relativamente recente.
Usando essas tcnica, Woese descobriu que as molculas de rRNA em grupos de
organismos diferem no arranjo e na sequncia de seus nucleotdeos. Os eucariotos possuem um
tipo geral de sequncia e o procariotos, um segundo tipo. Mas ele tambm descobriu que alguns
procariotos tm um terceiro tipo de rRNA e o arranjo desse rRNA difere dos outros procariotos e
dos eucariotos. Em outras palavras, existem dois tipos principais de bactrias, chamadas de
arqueobactrias e eubactrias, que so to diferentes uma das outras como tambm so dos
eucariotos.

A explicao mais razovel que arqueobactrias, eubactrias e eucariotos evoluram por

caminhos diferentes a partir de um ancestral comum. Woese props que arqueobactrias,
eubactrias e eucariotos representam os 3 reinos primrios da vida.

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Exerccios
1) O que teoria celular?
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2) O que protoplasma? De que ele formado?
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3) Qual a diferena entre procariontes e eucariontes?
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4) Qual a funo do material que fica no ncleo de uma clula, envolto ou no por uma
membrana?
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5) Quais as 3 partes que compem a taxonomia e a funo de cada uma delas?
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6) Qual a unidade taxonmica bsica?
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7) Cite os taxa (categorias) a partir do mais especfico para o mais geral.
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8) O que uma cepa?
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9) Quais a regras para escrever o nome cientfico de um organismo?
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10) Escreva corretamente o nome cientfico dos microrganismos:

a) o gnero de uma bactria clostridium e o epteto especfico botulinum:
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b) o gnero de uma bactria escherichia e o epteto especfico coli:
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11) Quais os dois reinos em que Linnaeus classificava os organismos?
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12) Quais os trs reinos em que Haeckel classificava os organismos? Qual continha os
microrganismos?
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13) Qual a principal descoberta embasou a mudana da classificao de Haeckel para a de
Whittaker?
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14) Qual a base do sistema de classificao de cinco reinos proposto por Whittaker? Quais so
os trs modos principais? Descreva cada um deles.
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15) Quais so os cinco reinos propostos por Whittaker? Que organismos esto presentes em cada
um deles?
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16) Em que se baseia a diferena entre as eubactrias e as arqueobactrias?
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17) Quais os trs reinos da classificao de Woese?
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Metabolismo microbiano.
1. Metabolismo microbiano
- Metabolismo a soma de todas as reaes qumicas dentro de um organismo vivo. Como as
reaes qumicas liberam ou requerem energia, o metabolismo o balanceamento de energia.
- Metabolismo pode ser dividido em duas classes de reaes qumicas: reaes que liberam
energia e reaes que requerem (absorvem) energia.
- Nas clulas vivas, as reaes reguladas por enzimas que liberam energia esto envolvidas no
catabolismo, a quebra de compostos orgnicos complexos em compostos mais simples. So
reaes chamadas de catablicas ou degradativas. Essas reaes so geralmente de hidrlise
(reaes que usam gua e nas quais ligaes qumicas so quebradas) e so exergnicas
(produzem mais energia que consomem). Exemplo: clulas quebram acares em dixido de
carbono e gua.
- As reaes reguladas por enzimas que requerem energia esto envolvidas no anabolismo, a
construo de molculas orgnicas complexas a partir de molculas orgnicas mais simples. So
chamadas de reaes anablicas ou biossintticas. Essas reaes muitas vezes envolvem
reaes de sntese por desidratao (reaes que liberam gua) e so endergnicas (consomem
mais energia do que produzem). Exemplos: formao de protenas a partir de aminocidos, cidos
nuclicos a partir de nucleotdeos e polissacardeos a partir de acares simples. Essas reaes
biossintticas geram os materiais para o crescimento celular.
- As reaes catablicas fornecem os blocos construtivos para as reaes anablicas e a energia
necessria para dirigi-las. Esse acoplamento (juno) de reaes que requerem energia e liberam
energia possvel atravs da molcula de trifosfato adenosina (ATP). O ATP estoca energia
derivada de reaes catablicas e a libera mais tarde para dirigir reaes anablicas e realizar
outros trabalhos celulares.
- O ATP formado por uma adenina, uma ribose e trs grupos fosfato. Quando o grupo fosfato
terminal retirado do ATP, difosfato de adenosina (ADP) formado, e energia liberada para
dirigir as reaes anablicas.
ATP ADP + P + energia
A energia das reaes catablicas usada para combinar ADP e um P para sintetizar novamente
ATP:
ADP + P + energia ATP
- As reaes anablicas esto acopladas quebra do ATP e as reaes catablicas esto
acopladas sntese do ATP.
- A composio qumica de uma clula viva est constantemente mudando, algumas molculas
so quebradas enquanto outras esto sendo sintetizadas. Esse fluxo balanceado de compostos
qumicos e energia mantm a vida de uma clula.
- Vias metablicas que existem nas clulas so sequncias de reaes qumicas catalisadas por
enzimas.

23

2. Produo de energia
- Molculas nutrientes, como todas as molculas, tm energia associada com os eltrons que
formam as ligaes entre seus tomos.
- Quando essa energia est distribuda por toda a molcula, difcil para a clula utiliz-la.
- Vrias reaes em vias catablicas, contudo, concentram a energia dentro das ligaes do ATP,
que serve como um transportador de energia.
- ATP tem ligaes de alta energia, ou ligaes instveis. Embora a quantidade de energia
nessas ligaes no seja excepcionalmente grande, ela pode ser liberada rpida e facilmente.
- ATP = querosene (lquido altamente inflamvel), embora uma grande tora de madeira possa
eventualmente queimar e produzir mais calor que uma xcara de querosene, o querosene tem
ignio mais fcil e proporciona calor mais rpido. De forma semelhante, as ligaes instveis de
alta energia do ATP suprem a clula com energia prontamente disponvel para reaes
anablicas.
2.1 Reaes de oxidao-reduo (redox)
- Oxidao = remoo de eltrons de um tomo ou molcula, uma reao que muitas vezes
produz energia
- Reduo = ganho de eltrons de um tomo ou molcula
- Exemplo de uma oxidao em que a molcula A perde um eltron para a molcula B. A molcula
A sofreu oxidao (significando que ela perdeu um ou mais eltrons), enquanto a molcula B
sofreu reduo (significando que ela ganhou um ou mais eltrons).

reduo

A oxidada B reduzida

oxidao
- Reaes de oxidao-reduo sempre esto acopladas, cada vez que uma substncia
oxidada, uma outra simultaneamente reduzida.

24

- Os organismos liberam e armazenam energia de molculas orgnicas por meio de uma srie de
reaes controladas, ao invs de ser uma nica exploso. Se a energia fosse liberada toda de
uma s vez, como uma grande quantidade de calor, ela no poderia ser prontamente utilizada
para impulsionar as reaes qumicas e causaria, de fato, danos clula. Para extrair energia de
compostos orgnicos e a armazenar na forma qumica, os organismos passam eltrons de um
composto a outro por meio de uma srie de reaes redox.
3. Catabolismo de carboidratos
- Maioria dos microrganismos oxida carboidratos como fonte primria de energia celular.
Catabolismo de carboidratos para produzir energia de grande importncia no metabolismo
celular.
- Glicose a fonte mais comum de energia de carboidrato utilizada pelas clulas, mas
microrganismos tambm podem catalisar lipdios e protenas para produzir energia
- Para produzir energia a partir da glicose, os microrganismos usam dois processos gerais:
respirao celular e fermentao.
- Respirao ocorre em trs etapas: gliclise, ciclo de Krebs e a cadeia (sistema) de transporte de
eltrons.
- Fermentao tambm inicia com a etapa da gliclise, mas aps converter glicose em cido
pirvico, este convertido em um ou mais produtos diferentes, dependendo do tipo de clula, por
exemplo: lcool (etanol) e cido ltico. Rendimento de ATP menor.

25

- Respirao definida como um processo de gerao de ATP em que molculas so oxidadas e

o receptor final de eltrons (quase sempre) uma molcula inorgnica. Existem 2 tipos de
respirao: aerbica, que usa oxignio e onde o receptor final de eltrons o O 2; e anaerbica,
que no usa oxignio e ainda pode ser morto por ele e o receptor final de eltrons uma molcula
inorgnica (exceto oxignio molecular) ou raramente, uma molcula orgnica. A respirao
anaerbica importante para ciclos de enxofre e nitrognio (bactrias que usam nitrato e sulfato
como aceptores finais de eltrons). A quantidade de ATP gerada na respirao anaerbica varia
com o microrganismo e a via. Como somente uma parte do ciclo de Krebs funciona sob condies
anaerbicas, e como nem todos os transportadores participam da cadeia transportadora de
eltrons, o rendimento de ATP nunca to alto como na respirao aerbica, consequentemente,
os anaerbios crescem mais lentamente que os aerbios.

26

- Fermentao:
- libera energia de acares ou molculas orgnicas, tais como aa, cidos
orgnicos, purinas e pirimidinas
- no requer oxignio (mas algumas vezes pode ocorrer na presena desse)
- no requer uso do ciclo de Krebs ou de uma cadeia de transporte de
eltrons
- usa molcula orgnica como aceptor final de eltrons
- produz pequenas quantidades de ATP, porque grande parte da energia
original da glicose permanece nas ligaes qumicas dos produtos finais orgnicos, como cido
ltico ou etanol.
4. Fotossntese
- em todas as vias anteriores, os microrganismos obtm energia para o trabalho celular pela
oxidao de compostos orgnicos. Mas onde os microrganismos obtm esses compostos
orgnicos?
- Muitos microrganismos e animais alimentam-se de matrias produzidas por outros organismos.
Ex.: bactrias podem catabolizar compostos de plantas e animais mortos ou podem obter alimento
de um hospedeiro vivo.
- Outros microrganismos sintetizam compostos orgnicos complexos a partir de substncias
inorgnicas simples. O principal mecanismo a fotossntese, usado por plantas e microrganismos.
- Fotossntese a converso da energia luminosa do sol em energia qumica. Energia qumica
ento usada para converter o gs carbnico da atmosfera em compostos de carbono como
acares.
6 CO2 + 12 H2O + energia luminosa C6H12O6 + 6 O2 + 6 H2O
5. Diversidade metablica entre os organismos
- microrganismos podem ser classificados metabolicamente de acordo com seu padro nutricional
de fonte de energia e fonte de carbono.
- Fonte de energia:
- fototrficos: usam luz como fonte de energia primria
- quimiotrficos: dependem de reaes de redox de compostos orgnicos ou
inorgnicos para energia
- Fonte de carbono:
- autotrficos: nutrio prpria, usam dixido de carbono
- heterotrficos: nutrio depende dos outros, requerem fonte de carbono
orgnica
- Combinando as fontes de energia e carbono, surge a seguinte classificao:
- fotoautotrficos
- foto-heterotrficos
- quimioautotrficos
- quimio-heterotrficos
Exerccio
1) Leia o texto abaixo e faa um resumo de cada grupo: fotoautotrficos, foto-heterotrficos,
quimioautotrficos e quimio-heterotrficos.

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28

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Morfologia, reproduo e classificao bacteriana.

Eucariontes Plantae, Animalia, Protista, Fungi

clulas eucariontes ou eucariotas

possuem a carioteca (membrana
nuclear), individualizando o material
nuclear da clula

Procariontes Monera

clulas procariontes ou
procariotas
no possuem carioteca
(membrana nuclear),
membrana que separa o
material gentico do citoplasma

Existe material gentico nas duas, mas nas procariontes este est boiando no
citoplasma, e na clula eucarionte o material gentico est no ncleo separado pela carioteca do
restante da clula.

BACTRIAS
1) Estrutura
- grego bakteria = basto
- so seres microscpicos menor ser vivo
- unicelulares
- clula bacteriana procariota (material gentico no envolto por membrana nuclear)
- ausncia de estruturas membranosas intracelulares

30

Citoplasma

Membrana
plasmtica

Parede celular
Cpsula
Fmbrias

DNA associado
ao mesossomo

Flagelo

a) Parede celular
- complexa, semi-rgida e responsvel pela forma da clula
- circunda a membrana plasmtica frgil
- componente principal uma rede de macromolculas chamada PEPTIDEOGLICANO
(glicoprotena)
PEPTIDEO = Filas adjacentes de polissacardeo so ligadas por polipeptdeos
GLICANO = Dissacardeo repetitivo formando polissacardeo - Esqueleto de carboidratos

N-acetil-cido murmico
Staphylococcus aureus

N-acetilglucosamina

Peptdeos

Classificao
- de acordo com suas respostas colorao de Gram, as bactrias se dividem em 2 grupos:
Gram positivas: 90 % da parede formada de peptideoglicana (at 20 camadas) 30-60 nm
Esquema de bactria com
parte da clula removida.

Parede celular
formada por camada
espessa de
peptidoglicano

Membrana plasmtica
Esquema de parte da parede celular e da membrana
plasmtica de bactria gram-positiva.
Exemplo: Estreptococos; Estafilococos; Enterococos

31

Gram negativas: 10 % de peptideoglicano = (1-2 camadas) 2-3 nm

Protena

Camada lipoprotica
externa, espessa,
semelhante membrana
plasmtica, com
lipopolissacardeos

Parede celular

Esquema de bactria com

parte da clula removida.

Lipoprotenas
Esquema de parte da parede celular e da
membrana plasmtica de bactria gram-negativa.

Membrana plasmtica

Exemplos: Vibrio colrico; Clostridium; salmonelas

b) Estruturas externas parede celular
- Glicoclice
- cpsula = revestimento de acar
- polmero viscoso e gelatinoso situado externamente parede celular
- composio varivel: polissacardeos e/ou polipeptdeos
- proteo e adeso as superfcies
Exemplo 1: certas espcies, cpsulas so importantes para a virulncia bacteriana, protegem
bactrias patognicas da fagocitose pelas clulas do hospedeiro: Bacillus anthracis somente a
bactria encapsulada causa o antraz (carbnculo)
Exemplo 2: Streptococcus pneumoniae, causa pneumonia somente quando as clulas so
protegidas por cpsula de polissacardeo
Exemplo 3: S. mutans, causa crie dentria pois se fixa na superfcie dos dentes por meio de seu
glicoclice

32

- Flagelos
- presena no obrigatria
- apndices longos, finos e helicoidais
- originam-se na membrana plasmtica
- distribudos em nmero varivel
- mobilidade por rotao (at 12.000 rpm)

Clulas bacterianas podem alterar a

velocidade e a direo de rotao dos
flagelos.
So capazes de vrios padres de
motilidade (capacidade de um organismo
se mover por si prprio).
- bactria se move em uma direo por
um perodo de tempo = corrida ou nado
- corridas so interrompidas por alteraes
peridicas, abruptas e aleatrias na
direo = desvios

- Fmbrias
- presena no obrigatria
- apndices proticos, pequenos e imveis
- adeso a substratos/superfcies, vrias unidades por clula, biofilmes
Fmbrias da bactria que causa gonorreia
ajudam sua fixao nas membranas mucosas
para causar a doena, se no existirem
(mutao gentica) no ocorre colonizao e
no aparece doena.

33

- Pili
- presena no obrigatria
- apndices proticos, pequenos e imveis
- unem clulas bacterianas na transferncia de DNA de uma clula para outra (conjugao),
geralmente 1 unidade por clula

c) Estruturas internas parede celular

- Membrana plasmtica
- estrutura fina no interior da parece celular que reveste o citoplasma
- composio: fosfolipdeos e protenas
- permeabilidade seletiva
- Citoplasma
- material em soluo (sais minerais, protenas, carboidratos, lipdios)
- ribossomos (RNA + protena): sntese protica
- nucleide: formado pelo cromossomo bacteriano (nica molcula longa, contnua, em forma
circular de DNA de dupla fita)
DNA
Citoplasma
Ribossomos

- Endosporos
- clulas de repouso formadas por certas bactrias gram-positivas quando nutrientes essenciais
se esgotam
- estruturas de resistncia ao calor, radiaes, cidos, produtos qumicos e enzimas
- dormentes por milhares de anos, podem iniciar germinao
- exemplo 1: endosporos com 7500 anos de Thermoactinomyces vulgaris do lodo congelado do
lago Elk (EUA) germinou quando reaquecido e colocado em meio nutriente
- exemplo 2: endosporos com 25 a 40 milhes de anos, intestino de abelha sem ferro aprisionada
em mbar (resina de rvore endurecida) na Repblica Dominicana germinaram quando colocados
em meio nutriente.
- Gnero Clostridium (gangrena, ttano, botulismo, intoxicao alimentar); gnero Bacillus (antraz
ou carbnculo e intoxicao alimentar)
- indstria alimentcia
- Esporulao ou esporognese = germinao (retorno ao estado vegetativo)

34

2) Morfologia
- so unicelulares, exceto os actinomicetos
- de acordo com a forma que apresentam, as bactrias so classificadas em: cocos, vibries
- cada grupo possui subdivises.
COCO ESFRICO: forma arredondada oval, alongada ou achatada em uma extremidade
diplococos = em pares
ttrade = grupos de 4
sarcina = grupos de 8, cubo
estreptococos = cadeia
estafilococos = cacho
BACILO: forma de basto
diplobacilos = em pares
estreptobacilos = cadeia
VIBRIES: tem forma de vrgula
espirilos = helicoidal (saca-rolhas)
espiroquetas = helicoidal e flexvel
Exerccio - Nomeie as figuras abaixo de acordo com a forma das bactrias.

Chlamydia trachomatis
________________________________

________________________________

Streotococcus
________________________________

________________________________

________________________________

________________________________

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Mycobacterium tuberculosis
________________________________

________________________________

________________________________

Vibrio cholerae
________________________________

Treponema pallidum
________________________________

________________________________

RESUMINDO...

a) estreptococos; b) diplococos; c) ttrade; d) sarcina; e) estafilococos

36

3) Reproduo
Assexuada, por bipartio ou diviso binria simples
- 2 clulas filhas iguais, multiplicao

Sexuada, por conjugao, rara

- algumas bactrias podem passar parte de seu material gentico (plasmdio) para outras (Pili)
- surgem assim novas variedades de bactrias

4) Respirao
- Aerbias estritas: necessitam de O2 para sua sobrevivncia (ar contm 21% de O2)
- Aerbias microaerfilas: necessitam de O2 mas em concentrao menor que a encontrada no ar
- Aerbias facultativas: podem crescer tanto na presena como na ausncia de oxignio. No
necessitam de O2, crescem melhor com O2. Podem usar O2 quando disponvel, mas na sua
ausncia, so capazes de continuar seu crescimento atravs da respirao anaerbia ou da
fermentao.
- Anaerbias obrigatrias: no toleram O2 (letal).
- Anaerbias aerotolerantes: no necessitam de O 2, crescem melhor sem O2 pois no podem uslo para seu crescimento.
AERBIAS
ESTRITAS

ANAERBIAS AERBIAS
ANAERBIAS
MICRO
ESTRITAS FACULTATIVAS AERFILAS AEROTOLERANTES

37

5) Nutrio
- Hetertrofos (maioria):
- Saprfitos = decompem material orgnico de animais e plantas mortas e absorvem os
nutrientes. Reciclagem papel ecolgico
- Parasitas = absorvem os nutrientes de hospedeiros vivos. Patgenos de plantas e animais
- Mutualistas = associao ntima com outros organismos
- Auttrofos
- Fotoautotrficos = obtm a energia na forma de luz, para a fotossntese
- Quimioautotrficos = obtm energia pela oxidao de compostos qumicos: acar, protenas,
gorduras, celulose, petrleo, mangans, gasolina,
6) Importncia
- decompositoras, fazem a reciclagem e a fertilizao do solo
- fixadoras de nitrognio atmosfrico (N 2), so capazes de utilizar N gasoso diretamente da
atmosfera
* bactrias dos gneros Rhizobium e Bradyrhizobium = obteno de N para elas e para
plantas que convivem simbioticamente (leguminosas: soja, feijo)
* cultivo de leguminosas = maior fertilidade do solo sem a necessidade de implementao
de fertilizantes qumicos, liberam nitratos (NO-3) no solo
- alimentos = produo de iogurtes, queijos, pickles, chucrute, leites fermentados, vinagre,
bebidas, carnes curadas (salames e embutidos), molho de soja
- produtos de valor industrial = antibiticos, vitaminas, acetona, metanol, butanol,
- tratamento de esgotos = degradao dos resduos orgnicos
- usinas de reciclagem de lixo = produo de adubos de compostagem
- biotecnologia = ferramentas da engenharia gentica = bactrias capazes de produzir drogas
teraputicas (insulina), bactrias p/ biodegradao de lixos txicos (derrames de hidrocarbonetos)
- cirurgia plstica = toxina botulnica (espcie de Clostridium botulinum) paralisa musculatura,
relaxando-a = Botox, usado em pequenas quantidades p/ atenuao de rugas e marcas de
expresso
- bacterioses humanas = antraz, botulismo, crie, clera, coqueluche, febre tifide, gastroenterites,
gonorria, hansenase (lepra), intoxicao alimentar, meningite, pneumonia, sfilis, ttano,
tuberculose
Exerccios
1) Quais so as 3 formas bsicas das clulas bacterianas?
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__________________________________________________________________________________
2) Quais so os arranjos celulares comuns das bactrias cocides?
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__________________________________________________________________________________
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3) Quais so os arranjos celulares comuns dos bacilos?
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__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
4) Qual o componente principal da parede celular bacteriana? Qual sua funo para a clula
bacteriana?
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__________________________________________________________________________________
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5) Como as bactrias so classificadas de acordo com a colorao de Gram?

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__________________________________________________________________________________
6) Quais so as diferenas entre as paredes celulares das bactrias Gram-negativas e Grampositivas?
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7) Qual a definio de glicoclice? Quais so as suas funes?
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__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
8) Qual a definio de flagelo? Qual sua funo?
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__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
9) Qual a diferena entre fmbria e pili?
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__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
10) Qual a definio de membrana plasmtica? Qual sua composio e funo?
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__________________________________________________________________________________
11) De que composto o citoplasma de uma bactria?
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12) Qual a funo dos ribossomos?
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__________________________________________________________________________________
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13) O que so endosporos? Para que servem?
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14) Explique por que a formao dos endsporos nas bactrias no um modo de reproduo da
clula.
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15) Como o endosporo bacteriano pode causar problemas na indstria alimentcia?

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16) Cite duas formas de reproduo nas bactrias.
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17) Quais as formas de nutrio das bactrias? Explique-as em detalhe.
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18) Descreva 3 situaes que demonstrem a importncia das bactrias.
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19) H um cuidado que deve ser tomado quando se compra um alimento enlatado. Devemos observar
no s a data de fabricao e o prazo de vencimento do produto, mas tambm o aspecto da lata que
no deve se apresentar estufada, pode ter-se desenvolvido, dentre outras bactrias, a produtora do
botulismo, uma doena frequentemente fatal.
a) Que tipo de respirao essa bactria mantm no interior da lata fechada?
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
b) No caso do produto contaminado, o que causou a presso no interior da lata, estufando a tampa?
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
c) Quem o causador do botulismo? Qual sua forma de transmisso?
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__________________________________________________________________________________
20) A bactria no possui:
a) membrana plasmtica.
c) parede celular.
e) carioteca.

b) ribossomos.
d) DNA.

21) A meningite meningoccica, cuja profilaxia, principalmente entre escolares, se fez com vacinas
conhecidas como tipo A e tipo C, uma infeco causada:
a) somente por vrus.
b) por bactrias formadas por basto ou bacilos.
c) por bactrias de forma esfrica.
d) por vrus e bactrias.
e) por vrus e riqutsias

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22) Bactrias causadoras de infeco e que so vistas ao microscpio como grupamento de glbulos
em cacho certamente so:
a) estafilococos.
b) estreptococos.
c) diplococos.
d) micrococos.
e) bacilos.
23) Muitas doenas humanas so produzidas por vrus. Marque da relao seguinte a nica de origem
bacteriana:
a) gripe
b) caxumba
c) ttano
d) sarampo
e) varola
24) Numere a Segunda coluna de acordo com a primeira e de pois assinale a alternativa que contenha
a sequncia correta:
Coluna I
Coluna II
(1) bacilos
( ) cocos em grupos densos
(2) estreptococos
( ) cocos em grupos aproximadamente cbicos
(3) estafilococos
( ) cocos em fileira
(4) ttrades
( ) filamentos helicoidais
(5) sarcina
( ) bastonete reto em geral de 1 a 15 micra
(6) espirilos
( ) cocos em grupo de quatro
a) 3-2-5-6-1-4
b) 3-5-2-6-1-4
c) 3-5-2-1-6-4
d) 3-5-2-6-4-1
e) 3-5-1-2-4-6
25) Em relao a morfologia, as bactrias com formas esfricas, de basto, em cacho de uva e em
colar denominam-se, respectivamente:
a) cocos, bacilos, estafilococos, estreptococos.
b) bacilos, cocos estafilococos, estreptococos.
c) cocos, bacilos, estreptococos, estafilococos.
d) bacilos, cocos, estreptococos, estafilococos.
e) estreptococos, estafilococos, bacilos, cocos.
26) Bacilos so:
a) vrus em forma de bastonete.
c) bactrias em forma de bastonete.
e) fungos unicelulares e de forma alongada.

b) bactrias esfricas, agregadas em fio.

d) hifas de fungos do grupo dos basidiomicetos.

27) Bactrias so organismos microscpicos, unicelulares, procariotos, encontrados praticamente em

todos os ambientes. Afirma-se:
I. Bactrias saprfitas so importantes organismos decompositores de matria orgnica morta.
II. So doenas bacterianas: clera, difteria, pneumonia, lepra, tuberculose, ttano e disenteria bacilar.
III. Esporos so clulas resistentes formadas quando as condies de alimento para as bactrias so
favorveis.
Est correto o que se afirmou em
a) I, apenas.
b) II e III, apenas.
c) I e III, apenas.
d) I e II, apenas.
e) I, II e III.
28) Assinale a afirmao incorreta para bactrias:
a) Possuem ncleo individualizado.
b) A maioria heterotrfica.
c) So seres vivos unicelulares.
d) Algumas possuem uma camada gelatinosa ao redor da membrana celular.
e) Algumas so parasitas.

41

29) A gua oxigenada utilizada na limpeza de ferimentos, ao entrar em contato com o sangue, libera
gs oxignio, impedindo a sobrevivncia de bactrias, como as do ttano, por exemplo.
Pode-se dizer, ento, que a bactria Clostridium tetani :
a) Aerbica facultativa, pois utiliza o oxignio, quando disponvel, para a obteno de energia.
b) Anaerbica obrigatria, pois no utiliza o oxignio para a obteno de energia.
c) Anaerbica facultativa, pois, na falta de oxignio, fermentam acares.
d) Quimiossinttica, pois utiliza a energia proveniente das descargas eltricas.
e) Fotossintetizante, j que utiliza o Sol para a obteno de energia.
30) O principal tipo de reproduo das bactrias :
a) Homogonia
c) Cissiparidade
e) Isogamia

b) Brotamento
d) Segmentao

42

COLORAO DE GRAM
Coloraes simples tornam possvel a visualizao das bactrias ao microscpio, mas isso
no faz distino entre organismos de morfologia similar. Para tanto, necessrio realizar uma
colorao diferencial. Existem diversos mtodos de colorao utilizados para a anlise de
bactrias. Entre estes, o mais utilizado a colorao desenvolvida por Christian Gram em 1884.
Usando duas seqncias de colorao, com diferentes corantes, este mtodo permite a diviso
das bactrias em 2 grandes grupos.
O primeiro grupo, que retm a cor do primeiro corante (o cristal violeta), denominado
Gram positivo. O segundo grupo perde a cor do primeiro corante e retm a cor do segundo
corante utilizado (fucsina) e denominado Gram negativo.
Uma soluo de iodo (lugol) utilizada como mordente (um composto qumico que fixa um
corante ou outra substncia ao se combinar com o mesmo e formar um composto insolvel) para
a primeira etapa da colorao.
H tambm um agente descorante entre a utilizao de um e
outro corantes. Pode-se utilizar diferentes descorantes, de acordo com a velocidade de
descolorao desejada. O lcool etlico a 95% um agente descorante mais devagar, enquanto a
acetona agiliza essa etapa. Geralmente utiliza-se uma mistura de lcool etlico e acetona (95:5),
obtendo uma velocidade de descolorao intermediria.
A maioria dos cocos Gram positiva com exceo dos gneros Neisseria e Veillonella que
so os nicos Gram negativos. Assim tambm acontece com os bacilos, sendo a maioria Gram
negativos. Entre os bacilos Gram positivos incluem-se aqueles pertencentes aos gneros
Corynebacterium, Listeria, Bacillus, Lactobacillus e Clostridium. Os vbrios so Gram-negativos.
A investigao das caractersticas morfolgicas e de colorao (morfo-tintoriais) das
bactrias etapa inicial de grande importncia no isolamento e identificao de bactrias de
material clnico bem como de alimentos. No entanto, a identificao completa de uma bactria
sempre necessitar de dados fisiolgicos ou genticos da mesma.
A colorao de Gram baseia-se na diferena das paredes celulares das diversas bactrias
e como estas sero coradas de forma distinta. As bactrias denominadas Gram negativas
possuem uma fina camada de glicoprotena recoberta por uma espessa camada formada
principalmente por lipoprotenas e substncias lipdicas. J as consideradas Gram positivas
possuem uma nica e espessa camada de glicoprotena.
Antes de iniciar a colorao, necessrio fazer um esfregao, ou seja, pegar uma colnia
previamente isolada ou uma alada de uma cultura pura e transferir para uma lmina limpa. Se for
utilizada uma colnia, deve-se adicionar uma gota/alada de soluo salina a 0,9%,
homogeneizando-a. importante que o esfregao seja bem preparado, para que, ao final da
colorao, seja possvel a visualizao das bactrias. Tambm importante no esquecer de
fixaro esfregao na chama do Bico de Bunsen, evitando que a massa de clulas a ser analisada
se perca durante as etapas da colorao.
Na primeira etapa da colorao, o corante violeta adicionado sobre o esfregao. O
corante, ento, penetra na parede da bactria, independente se esta Gram positiva ou Gram
negativa. Ao adicionar o lugol, este se combina com o corante Cristal Violeta, formando um grande
complexo, o Cristal Violeta-Iodo (CV-I), fixando o corante na parede a bactria. O lcool tem papel
fundamental neste mtodo. Ao ser adicionado sobre o esfregao corado com o Cristal violeta vai
diferenciar as bactrias:
- as Gram positivas, com sua parede rica em complexas cadeias de peptidoglicano sero
desidratadas, e os poros na parede sero reduzidos, impedindo a sada do complexo CV-I e
tornando a parede permanentemente corada de roxo (a cor do complexo CV-I);
- as bactrias Gram negativas possuem uma fina camada de peptidoglicano, mas acima desta
camada encontra-se uma outra, de carter lipdico (rica em LPS, lipoprotenas e outros
componentes). Essa camada lipdica, em contato com o lcool, dissolve-se, deixando a camada
de peptidoglicano desprotegida e permitindo a sada do complexo CV-I, tornando a clula
descorada neste momento.
importante lembrar de lavar a lmina aps a etapa de descolorao, pois se restar algum
resduo de lcool, a prxima etapa no ser realizada adequadamente, e os resultados podero
ser alterados.

43

O esfregao ento tratado com fucsina, que no ter efeito algum sobre as clulas Gram
positivas, que esto com os poros de sua parede reduzidos; mas penetrar na parede das clulas
Gram negativas, corando-as de vermelho. Esta colorao utilizada para a maioria das
bactrias, mas h algumas que no se coram por este mtodo, como as micobactrias, as
bactrias espiraladas e as bactrias que no possuem parede celular. Para estes, h outros
mtodos de colorao, como o mtodo de Zihel-Neelsen, o de Fontana-Tribondeau e o mtodo de
visualizao em campo escuro.
Alguns fatores podem influenciar nos resultados obtidos na colorao:
- Os corantes empregados na tcnica, se no filtrados, podem deixar resduos (cristais) na lmina.
- Um descoramento excessivo ou insuficiente pode levar a uma incorreta diferenciao da bactria
pelo lcool.
- A idade da cultura bacteriana tem importncia fundamental na colorao de Gram. Em culturas
envelhecidas, clulas Gram-positivas freqentemente se tornam Gram-negativas.
Enzimas lticas excretadas normalmente por culturas envelhecidas podem causar danos
membrana e parede da clula, como por exemplo, alterando a permeabilidade aos solventes.
Conseqentemente, o complexo iodo-cristal violeta poder ser retirado da clula.
Na prtica:
Preparo e fixao do esfregao
Etapas

Observaes

Transferir uma alada da cultura ou uma Ao fazer o esfregao a partir de diferentes

colnia da placa para uma lmina de culturas deve-se observar alguns detalhes:
microscpio limpa.
de placa: deve-se coletar apenas 1 colnia,
espalhando-a pela lmina isso evitar a
observao de colnias diferentes na lmina e
que seja coletado um inculo muito carregado,
o que dificultar a visualizao das clulas
coradas.
de caldo: deve-se coletar apenas uma alada
e espalh-la na lmina isso evita que seja
coletado um inculo muito carregado.

Com o auxlio da ala, espalhar a cultura. Se Para o inculo coletado de caldo no

tiver sido colhida colnia da placa, adicionar necessrio adicionar soluo salina. Mas para
salina estril para facilitar o espalhamento.
colnia coletada de placa necessrio fazer a
diluio na lmina, evitando que o esfregao
fique muito concentrado o que dificulta a
visualizao
das
clulas
coradas
ao
microscpio.

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Passar a lmina com o esfregao sobre a importante fixar o esfregao para que este
chama do Bico de Bunsen, at que este esteja no se perca durante as etapas de lavagem
completamente seco.
entre a utilizao de um e outro corantes

Colorao do esfregao
Etapas da colorao

O que est
bactria?

acontecendo

na pareda

da

Cobrir o esfregao com soluo de Cristal O Cristal Violeta penetra a parede de ambos os
Violeta por cerca de 1 minuto.
tipos de clulas (Gram + e Gram -)

A seguir, lavar em gua corrente com o pissete. A lavagem com gua importante aps cada
etapa para que uma substncia utilizada no
interfira na ao da prxima.
Nesse caso, a lavagem serve para retirar o
excesso de corante.

45

Cobrir o esfregao com soluo de Lugol fraco O Lugol uma soluo de Iodo e funciona
por cerca de 1 minuto.
como mordente neta etapa da colorao, ou
seja, ele fixa o corante Cristal Violeta na parede
da clula, pois forma um complexo grande: o
CV-I.

Novamente lavar com gua, e ento lavar com O lcool absoluto, ou soluo de lcoollcool absoluto at que no saia mais corante acetona, funciona como diferenciador da
da lmina (10 15 segundos).
colorao:
nas Gram +, o lcool desidrata a matriz
glicoproteica (peptidoglicano), reduzindo os
poros da parede e impedindo a sada do
complexo CV-I, corando a clula de roxo:

nas Gram -, o lcool dissolve a membrana

externa, de carter lipdico (lipoprotenas,
fosfolipdeos, LPS), fazendo com que o
complexo CV-I saia da parede, deixando a
clula descorada e com os poros da matriz
glicoproteica abertos:

46

Lavar com gua corrente em abundncia, para importante prestar bastante ateno nesta
que no reste lcool sobre a lmina.
etapa, pois se restar algum lcool na lmina a
colorao no prosseguir, j que o prximo
corante no se fixar na lmina.

Cobrir o esfregao com fucsina por cerca de 30 A fucsina age de diferentes formas nas
segundos.
diferentes clulas:
nas Gram +, os poros esto reduzidos,
impedindo que a fucsina penetre na parede
celular, no alterando a cor roxa:

nas Gram -, os poros da camada de

peptidoglicano esto abertos, permitindo que a
fucsina penetre, corando-as de vermelho:

Lavar com gua e secar suavemente com Aps secar suavemente a lmina, observar ao
papel.
microscpio na objetiva de imerso (100x), com
leo de cedro/mineral e identificar a clula
corada.

SantAnna, R.S; Cerqueira, A.M.F. Apostila de Aulas Prticas Bacteriologia. Nutrio. Instituto biomdico.
Departamento de Microbiologia e Parasitologia. Universidade Federal Fluminense, 2007.

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Exerccios
Isso s porque
eu sou uma
Gram negativa?

1) Em que se baseia o mtodo da colorao de Gram?

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__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
2) Por que o lcool considerado como agente diferenciador da colorao de Gram?
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
3) Qual o papel do mordente (lugol)?
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
4) Explique a relao entre as paredes celulares das bactrias e o mecanismo da colorao de
Gram.
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
5) Faa um esquema resumindo as etapas da colorao de Gram.
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________

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Morfologia, reproduo e classificao dos fungos.

Caractersticas do Reino Fungi
- seres eucariontes, uni e pluricelulares
- j foram classificados como vegetais por possurem parede celular, mas sua parede possui
quitina (polissacardeo tpico dos insetos e que no encontrado em plantas) e no celulose
- so quimio-heterotrficos (no produzem seu prprio alimento), por no possurem clorofila
- leveduras, mofos e cogumelos
1) Definio
- Representados pelos cogumelos, bolores, mofos, orelhas-de-pau e leveduras
- Organismos eucariotos
- Uni ou pluricelulares
- Aclorofilados
- Parede celular com quitina
- Quimio-hetertrofos (nutrio por absoro)
- Reserva energtica de glicognio (= reserva de carboidrato dos animais)
- Reproduo sexuada ou assexuada
- MICOLOGIA = mykes + logos = estudo dos fungos
2) Morfologia
Do ponto de vista morfolgico so divididos em:
a) Leveduras
b) Bolores
- Fungos filamentosos
- Fungos dimrficos
a) Leveduras
- Fungos unicelulares: esfricos ou ovais, no-filamentosos.
- Amplamente encontradas na natureza, p branco cobrindo frutas e folhas.

Saccharomyces cerevisiae

Candida albicans

b) Bolores
Fungos filamentosos
- Maior parte dos fungos, pluricelulares, clulas multinucleares
- Corpo = miclio (massa de filamentos)

Miclio composto por filamentos tubulares longos de clulas conectadas hifas rpida
capacidade de crescimento

- Hifas:
- septadas com septos incompletos p/ separar as clulas (os poros dentro dos septos
permitem a livre circulao)
- cenocticas sem septos

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- Hifas crescem por alongamento da extremidade, e quando um fragmento quebrado, ele pode
se alongar para formar uma nova hifa.
Hifa vegetativa = poro da hifa que obtm nutrientes
Hifa reprodutiva ou area = hifa que se projeta acima da superfcie sobre a qual o fungo
est crescendo

Fungos dimrficos
- Especialmente fungos patognicos
- Dimorfismo (duas formas de crescimento): forma de fungos filamentosos e forma de leveduras
- Forma de fungo filamentoso produz hifas vegetativas e reprodutivas
- Forma de levedura se reproduz por brotamento
- Dependente de temperatura: 37C forma de levedura e 25C forma de fungo filamentoso

* Caso especial:
Em alguns casos esporos sexuais so produzidos e o miclio se reorganiza em um corpo frutfero
(chamado de cogumelo).

Corpo de frutificao:
parte visvel do fungo,
responsvel pela
reproduo

Conjunto de filamentos
(hifas), parte invisvel do
fungo

esporos = estruturas de
disperso dos fungos

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3) Estrutura
a) Membrana citoplasmtica
- lipoprotica
- regula trocas com meio ambiente
b) Parede celular
- rgida: polissacardeos, protenas e lipdeos
- proteo e resistncia s presses osmtica e mecnica
- reconhecimento: sexual, simbioses
c) Citoplasma
- organelas: vacolos, mitocndrias, retculo endoplasmtico, complexo de Golgi, ribossomos,
material de reserva (glicognio)
d) Ncleo
- nuclolo, vrios cromossomos e protenas, envolvidos por membrana nuclear (carioteca =
eucariontes)
4) Adaptaes nutricionais
a) Temperaturas de crescimento
- tima: 25-30C
- mnima: 10C
- mxima: 40C
- algumas espcies termfilas (> 50C) e psicrfilas (< 0C)
b) pH
- entre 4 e 7
c) Oxignio
- aerbios estritos (maioria): necessitam de O2 para sua sobrevivncia (ar contm 21% de O2)
- anaerbios facultativos (leveduras): podem crescer tanto na presena como na ausncia de
oxignio. No necessitam de O2 mas crescem melhor com O2. Podem usar O2 quando disponvel,
mas na sua ausncia, so capazes de continuar seu crescimento atravs da respirao anaerbia
ou da fermentao. Respirao e fermentao.
d) Luz
- desnecessria para o crescimento vegetativo
- pode ser importante para induo de estruturas reprodutivas
- orientao das estruturas para descarga dos esporos
e) Grau de umidade
- Podem crescer sobre substncias com baixo grau de umidade (to baixo que impede
crescimento de bactrias)
f) Metabolismo de substncias complexas
- Fungos podem metabolizar substncias complexas como lignina (componente da madeira) que
bactrias no usam como nutriente
5) Nutrio
a) Modo de vida: fungos so organismos quimio-heterotrficos:
- Saprfitas (absorvem os nutrientes da matria morta): principais decompositores de celulose e
lignina que so os componentes principais das paredes celulares vegetais
- Parasitas facultativos ou obrigatrios (absorvem os nutrientes de hospedeiros vivos)
- Predadores (adaptaes para capturar protistas microscpicos ou animais): secreo de
substncias mucilaginosas que levam adeso dos organismos. As hifas invadem a presa,

51

espalhamse por todo o corpo, absorvem os nutrientes, e podem causar a morte do organismo.
- Mutualistas (vivem em associao ntima com outros organismos, ambos se beneficiam)
b) Nutrio por absoro
- partculas de alimentos so muito grandes para entrarem nas hifas e serem digeridas
- hifas liberam enzimas digestivas para o meio (exoenzimas), ocorrendo digesto extracelular,
quebra de diferentes molculas insolveis (carboidratos e lipdeos)
- aps digesto forma-se uma grande variedade de produtos metabolizados
- esses produtos so absorvidos, difundindo-se pelas hifas para todo o fungo
* necessidade de gua livre para difuso

corpo
frutfero

hifa

miclio

hifa

substncia
orgnica
complexa

enzimas
substncia
orgnica absoro
simples

6) Reproduo
- Muitos fungos se reproduzem sexuada e assexuadamente.
- Fungos filamentosos podem se reproduzir assexuadamente pela fragmentao de suas hifas.
- Reproduo assexuada e reproduo sexuada podem ocorrer pela formao de esporos.
- Leveduras se reproduzem de forma assexuada (diviso e esporos assexuais).
a) Reproduo assexuada
- sem cariogamia (fuso de ncleos)
- produo de esporos assexuais no interior de um saco (esporngio)
- produo de esporos assexuais nus nas pontas das hifas condios
- simples quebra do miclio (fragmentao das hifas)

- diviso celular em fungos unicelulares (leveduras):

- Leveduras de fisso: diviso simtrica. Ex: Schizosaccharomyces
- Leveduras de brotamento: diviso assimtrica formando um pequena clula filha
gema. Ex: Saccharomyces

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b) Reproduo sexuada
- esporos sexuais formados pela unio de 2 clulas com fuso de seus ncleos (cariogamia)
- sem diferenas morfolgicas entre estruturas e , apenas linhas + e pois fungos so
heterotlicos
- reproduo sexual s ocorre entre talos/hifas de linhagens + e , o que impede auto-fertilizao
- citoplasma de dois indivduos com linhagens sexuais distintas ligam-se (plasmogamia) muito
antes da fuso dos ncleos (cariogamia)

7) Divises
Reino Fungi dividido em 4 grupos, baseado no modo e nas estruturas de reproduo:
- Zigomiceto
- Ascomiceto
- Basidiomiceto
- Deuteromiceto
a) Zigomiceto
- fungos pequenos e simples, filamentosos com hifas cenocticas (sem septo)
- corpo de frutificao formado apenas por uma massa pequena de esporos sobre uma haste
- habitat: variado: solo, plantas e animais (parasitas)
- reproduo: assexual e sexual
- modo de vida: saprfitas:
- importncia
* mofo preto do po (Rhizopus nigrans)
* Rhizopus e Mucor: produo de enzimas amilolticas (amilases e glucoamilases) para a
produo de alimentos.
b) Ascomiceto
- fungos de saco
- grupo complexo e diversificado
* fungos com miclio septado e leveduras
* presena de ascos (sacos): estruturas com esporos
- habitat: variado: solo, gua, plantas, animais
- reproduo: assexual e sexual
- modo de vida:
* saprfitas: decompondo diferentes tipos de materiais (excrementos, madeira, folhas, ...)

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* parasitas: plantas (os mais importantes), insetos, peixes

* simbiontes: lquens, micorrizas
- importncia:
* produo de antibiticos (Penicillium chrysogenum)
* doenas: plantas, animais (Pneumocystis carinii)
* micotoxinas (Aspergillus spp.)
* espcies comestveis de alto valor: trufas
c) Basidiomiceto
- grupo grande e diverso, inclui fungos que produzem cogumelos
* esporos sexuais externos produzidos em basdios
* miclio bem desenvolvido e septado
- habitat: fungos terrestres: solo, plantas, animais e madeira
- reproduo:
* sexual: atravs da produo de esporos em basdios
* assexual - esporos
- gemulao (leveduras)
- fragmentao de hifas
- importncia: comestveis e venenosos
- modo de vida:
* decompositores: principais agentes de decomposio de celulose e lignina
* simbiontes: micorrizas
* patgenos: principalmente de plantas (ferrugens)
At agora...
* grupos com fungos TELEOMORFOS, que produzem esporos sexuais e assexuais
* alguns ascomicetos perderam a capacidade de se reproduzir sexualmente e so chamados
ANAMORFOS. Exemplo: Penicillium um anamorfo que surgiu da mutao de um teleomorfo
* muitas vezes o mesmo fungo, em formas diferentes (sexual e assexual), estava classificado em
dois filos diferentes e somente aps a verificao que estas duas formas pertenciam ao mesmo
fungo que ele era definitivamente classificado.
d) Deuteromiceto
- Categoria de espera
- Fungos em que o ciclo sexual ainda no foi observado
- Uso de sequenciamento de rRNA para classificar os fungos
8) Importncia
- Desde a antiguidade:
* vinho
* po
* cerveja
* uso na medicina pelos nativos
- Nossas vidas esto ligadas aos fungos: descoberta da Penicilina
- Decomposio da matria orgnica
* atividade de maior importncia recicladores de nutrientes do meio ambiente
* liberao de nutrientes para as plantas
- Destruio de produtos
* madeira: postes, estradas de ferro, navios, casas, tecidos, lentes,
- Micotoxinas
* ocratoxinas: Aspergillus ochraceous e Penicillium viridicatum: cereais, atrofia renal
* aflatoxinas: Aspergillus flavus e A. parasiticus: gros oleaginosos, cncer do fgado
* fumonisinas: Fusarium moniliforme: milho, cncer do esfago
- Antibiticos e outros medicamentos
* penicilina: Penicillium chrysogenum

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* cefalosporina: Cephalosporium acremonium

* ciclosporina: Cylindrocladium lucidum, Tolypocladium infatum
* Propriedades antitumorais e antivirais
- Alimentos
* cogumelos: cultivados desde ano 600 na China; a partir de 1650 na Frana, Agaricus bisporus, o
champignon de Paris, Tuber melanosporum, a trufa negra.
- Produo de alimentos
* Queijos gorgonzola, camembert (Penicillium camembertii), roquefort (P. roquefortii)
* pes
* cervejas
* Saqu (Aspergillus oryzae)
- Produtos de valor industrial
* lcool
* enzimas: amilases, celulases, catalases, proteases, pectinases, lacases
* cidos orgnicos: fumrico, lctico (Rhizopus spp.), ctrico (Aspergillus niger)
* vitaminas B: leveduras
* reguladores de crescimento de plantas: ex. Giberelinas
- Simbiontes
* Micorrizas (associao entre fungos e razes).
* Lquens (associao entre algas e fungos)
- Doenas de plantas
* perdas econmicas
* controle biolgico de plantas daninhas (mico herbicidas)
- Doenas no homem e animais
* pouco agressivos
* mais comuns em regies tropicais
* pacientes imunodeprimidos: AIDS, cncer, transplantes, ex. Candidases, Pneumocystis carinii pneumonia em aidticos
- Envenenamentos
* Amanita spp.
- Alergias
* esporos
- Controle biolgico de doenas e pragas
* Trichoderma spp., Penicillium spp., Clonostachys rosea
Exerccios
1) Quais microrganismos formam o grupo dos fungos? Defina esse grupo a partir das principais
caractersticas.
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2) Como os fungos se dividem do ponto de vista morfolgico?
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3) O que so as leveduras?
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4) Como so classificados os bolores?

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5) Defina as seguintes estruturas:
a) miclio
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b) hifa
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c) hifa cenoctica
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d) hifa septada
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e) hifa vegetativa
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f) hifa reprodutiva
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6) O que um fungo dimrfico?
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7) Qual a diferena de crescimento entre fungos e bactrias com relao ao grau de umidade?
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8) Descreva os modos de vida dos fungos de acordo com a nutrio.
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9) Como os fungos realizam sua nutrio? Descreva com detalhes.
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10) Os fungos filamentosos e as leveduras podem realizar reproduo assexuada. Explique quais as
formas para cada um dos grupos.
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11) Como ocorre a reproduo sexuada nos fungos?
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12) Quais so as divises do Reino Fungi?
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13) Cite dois benefcios e dois prejuzos causados pelos fungos ao homem.
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14) No processo de fabricao do po, um ingrediente indispensvel o fermento, constitudo por
organismos anaerbicos facultativos.
a) Que organismos formam o fermento?
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b) Por que o fermento faz o po crescer?
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15) "Engana-se quem acha que uma salada com cogumelos um prato vegetariano. Cientistas
descobriram que as caractersticas genticas dos fungos (categoria qual pertence os cogumelos)
esto muito mais prximas s dos animais do que s dos vegetais. Cite trs caractersticas dos fungos
que os tornam mais prximos de animais do que dos vegetais.
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16) O molho de soja mofado vem sendo usado na China, h mais de 2.500 anos, no combate a
infeces de pele. Durante a 2a Guerra Mundial, prisioneiros russos das prises alems, que
aceitavam comer po mofado, sofriam menos infeces de pele que os demais prisioneiros que
recusavam esse alimento.
a) O que mofo?
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b) Por que esses alimentos mofados podem combater as infeces de pele?
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17) Planta ou animal? Os fungos no so nem uma coisa nem outra. Cite uma caracterstica dos
fungos que se assemelha aos animais e uma outra que se assemelha s plantas.
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18) Quanto a indivduos do Reino Fungi podemos afirmar que:
a) podem produzir antibiticos e fazer fotossntese.
b) podem formar micorrizas e fazer fermentao
c) so exclusivamente unicelulares e procariotos
d) so autotrficos e pluricelulares
e) so eucariotos e quimiossintticos
19) Certos fungos so empregados na produo de queijos, sendo responsveis por sabores
caractersticos. Os fungos Penicillium roquefortii e Penicillium camembertii, por exemplo, so utilizados
na fabricao de queijos tipos roquefort e camembert, respectivamente. Pela anlise dos nomes
cientficos acima citados, podemos concluir que esses seres NO pertencem ao () mesmo(a):
a) gnero.
b) classe.
c) famlia.
d) ordem.
e) espcie.
20) Os fungos esto presentes em nossa vida diariamente, tanto na fabricao de alimentos como
parasitando plantas e animais, inclusive o homem. Por apresentarem caractersticas particulares que
os diferem das plantas e dos animais, constituem um reino particular: o Reino Fungi. Dentre as
caractersticas a seguir, assinale aquela EXCLUSIVA dos fungos.
a) Reproduzem-se por esporos.
b) Armazenam glicognio.
c) So hetertrofos por absoro.
d) So aclorofilados e parasitas.
e) No apresentam tecidos condutores de seiva.
21) Entende-se por miclio:
a) um conjunto de hifas emaranhadas.
c) o mesmo que basidisporo.
e) nenhuma das anteriores.

b) o corpo de frutificao dos fungos.

d) um processo de unio sexual das hifas.

22) Todos os itens indicam alguma importncia ligada atividade de fungos, exceto:
a) podem causar doenas chamadas micoses.
b) desempenham papel fermentativo.
c) produo autotrfica de substncias orgnicas para consumo de outros seres.
d) alguns produzem antibiticos.
e) participao na formao de liquens.
23) Assinale a alternativa incorreta a respeito dos fungos.
a) existem espcies parasitas
c) possuem reproduo sexuada e assexuada
e) as suas hifas contm basicamente celulose

b) existem alguns tipos unicelulares

d) tm nutrio heterotrfica

24) Em qual das atividades humanas listada abaixo no h participao de fungos?

a) Produo de lcool combustvel
b) Fabricao de certos antibiticos
c) Indstria de cerveja e do vinho
d) Pesquisas em controle biolgico
e) Produo industrial de iogurte
25) A ferrugem do cafeeiro, o sapinho da boca e a histoplasmose so doenas causadas por:
a) vrus
b) fungos
c) bactrias
d) protozorios

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Morfologia, caractersticas e propriedades gerais dos vrus.

VRUS UM GRUPO A PARTE
- At agora: vida se organiza em unidades mnimas, as CLULAS, e as organelas e as molculas
que as constituem normalmente no tm vida independente
- Exceo: VRUS vida organizada em estruturas mais simples que as clulas
- Descobertos em 1935, mas suspeitavam da sua existncia pois muitas doenas infecciosas no
eram causadas por nenhum microrganismo visvel ao microscpio comum
- Apenas com microscpio eletrnico foi possvel descobrir inmeros vrus e esclarecer suas
estruturas
- Vrus = basicamente molculas vivas de DNA ou RNA, envolvidas por uma cpsula protica, e
com capacidade de se reproduzir unicamente no interior de clulas hospedeiras so parasitas
- Primeiro vrus isolado = vrus do mosaico do tabaco (TMV)
1) Estrutura e morfologia
Do ponto de vista morfolgico: vrias formas: cilndricos, arredondados, polidricos,...

- Material gentico: DNA ou RNA, ambos de fita simples ou dupla

- Capsdeo: camada de protenas que envolve o material gentico
- Envelope ou cpsula externa (em alguns vrus): de composio lipoprotica, semelhante
membrana plasmtica das clulas
- Parasitas obrigatrios: dependem da mquina celular (ribossomos, enzimas) para se multiplicar
- Especificidade: cada vrus s se reproduz dentro de determinado tipo de clula, h os que
parasitam apenas vegetais, apenas animais ou apenas bactrias

59

- A maioria dos pesquisadores da rea biolgica considera complexa a tarefa de definir se os vrus
so seres vivos ou seres no-vivos.
- Argumentos a favor
1. Os vrus apresentam reproduo; embora necessitem da ajuda da clula hospedeira para se
reproduzirem;
2. A presena de material gentico (DNA ou RNA), e consequentemente a capacidade de
sofrerem mutao;
3. Capacidade de adaptao.
- - Argumentos contra
1. O fato dos vrus serem acelulares.
2. A ausncia de metabolismo prprio,necessitando portanto, de constituintes celulares de outro
organismo.
2) Retrovrus transcrio invertida
- Seres vivos celulares: DNA como material gentico, transcreve para RNA que comanda a sntese
de protenas.

DNA

transcrio

RNA

tradu
o

protena

Em
alguns
vrus o material
gentico o RNA, eles tm uma enzima especial chamada transcriptase reversa para transformar
o RNA em DNA aps a infeco da clula hospedeira. S assim podem fazer a sntese de
protenas para se reproduzir. O caminho da transcrio invertido e por isso esses vrus so
chamados de RETROVRUS

RNA

transcrio

DNA

transcrio

RNA

tradu
o

protena

- Exemplo: HIV, vrus causador da AIDS (SIDA) um retrovrus com alta especificidade pois ataca
os linfcitos, clulas relacionadas defesa imunolgica
3) Bacterifagos DNA Vrus
- Bacterifagos (fagos) so vrus parasitas de bactrias
- Ao se instalar em uma bactria, o bacterifago inicia um ciclo vital que pode ser:
ciclo ltico
ciclo lisognico
a) Ciclo ltico: provoca a morte da clula hospedeira.

60

b) Ciclo lisognico: no provoca a morte da clula hospedeira. Mas posteriormente pode se

transformar em um ciclo ltico.

4) Vrus e as doenas
- Algumas doenas humanas causadas por vrus: AIDS, sarampo, rubola, gripe, hepatite, herpes,
poliomielite, caxumba, varola, raiva (hidrofobia), dengue, febre amarela,
- Como os vrus causam doenas?
* causar lise da clula hospedeira quando eles se multiplicam
* induzir organelas das clulas chamadas lisossomos a liberar suas enzimas no citoplasma,
causando uma autodigesto da clula
* produzir certas substncias que atuam como toxinas, alterando o metabolismo celular
- Alguns vrus causadores de doenas podem permanecer por anos no indivduo, ficando ativos
em certas pocas e inativos em outras. Exemplo: vrus do herpes.
5) Nossas defesas contra os vrus
- Antibiticos - so eficientes contra os vrus como so contra as bactrias?
- Infelizmente eles no tm nenhuma ao contra os vrus.
- Os vrus dependem do equipamento bioqumico das clulas para se reproduzirem, dificilmente
podem ser atacados por substncias que interferem nas suas reaes qumicas, pois as clulas
parasitadas tambm teriam seu metabolismo prejudicado!
- Drogas antivirais: para a AIDS existe o AZT (inibidor da transcriptase reversa) e o Saquinavir
(inibidor de protease, que impede sntese das protenas componentes das cpsulas dos novos
vrus). Coquetel uma associao de drogas inibidoras de enzimas, reduz muito a taxa de vrus
no sangue de portadores quando iniciado logo que a doena diagnosticada.
- Vacinas: melhor soluo at o momento a imunizao pelas vacinas (sarampo, caxumba,
rubola, hepatite, poliomielite). Infelizmente no h vacina muito eficaz contra gripe vrus sofrem
mutaes muito rapidamente. O mesmo problema acontece com o vrus da AIDS, para o qual
ainda no h vacina.

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Exerccios
1) O que so os vrus?
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2) Como so constitudos (partes bsicas)?
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3) Onde se reproduzem os vrus?
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4) A que se deve a especificidade dos vrus?
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5) Alguns estudiosos consideram que os vrus so seres vivos. Em que se baseia essa ideia?
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6) Alguns estudiosos consideram que os vrus no so seres vivos. Em que se baseia essa ideia?
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7) O vrus responsvel pela Sndrome da Imunodeficincia Adquirida (AIDS) um retrovrus. Qual o
tipo de cido nuclico que constitui o material gentico dos retrovrus? A denominao retrovrus
refere-se a que caracterstica desse vrus?
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8) O que um bacterifago?
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9) Quais os ciclos vitais que um bacterifago pode iniciar ao se instalar em uma bactria? Explique a
diferena entre os ciclos.
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10) Os antibiticos so eficazes contra os vrus? Por qu?
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11) Cite cinco exemplos de viroses humanas.
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12) A AIDS uma doena que, sem dvida, ameaa a humanidade. As tentativas para o
desenvolvimento de uma vacina tm sido infrutferas. Explique, do ponto de vista gentico, qual a
causa desse insucesso.
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13) Explique onde atua o AZT (droga que compem o coquetel contra o HIV), o que ela impede e qual
a consequncia de seu uso para o vrus.
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14) Em 1917, o sbio francs d'Herelle verificou que uma cultura de bacilos da disenteria estava sendo
destruda por um agente cuja visualizao no era possvel de ser feita. Essa foi a primeira
constatao da existncia de vrus que somente atacavam bactrias. Mais tarde esses vrus foram
genericamente denominados:
a) bacteriostticos
b) bacterifagos
c) bacterides
d) bactrios
e) bactericidas

64

15) O HIV (vrus da imunodeficincia humana) o causador da AIDS (sndrome da imunodeficincia

adquirida). Em relao a esse vrus podemos afirmar que composto de:
a) DNA e ataca as hemcias.
b) RNA e ataca as hemcias.
c) DNA e ataca os linfcitos T.
d) RNA e ataca os linfcitos T.
e) RNA e ataca as plaquetas.
16) Indique em qual dos seres vivos, citados a seguir, o cido desoxirribonuclico (DNA) e o cido
ribonuclico (RNA) no ocorrem em um mesmo indivduo:
a) bactria
b) protozorio
c) vrus
d) fungos
e) algas
17) Entre as caractersticas biolgicas citadas a seguir, a nica pode ser encontrada nos vrus um:
a) programa gentico especfico que permite a reproduo de novos seres do mesmo tipo.
b) processo metablico que requer compostos nitrogenados e de carbono, incluindo os produzidos
pelos auttrofos.
c) maquinaria biolgica que pode utilizar a energia armazenada em sua clula ou obtida dos alimentos.
d) maquinaria biossinttica para a sntese de protenas.
e) membrana celular que estabelece um limite e regula as trocas de matria e energia.
18) Medicina do futuro recruta vrus "bonzinhos" para vencer cncer e AIDS atravs de batalhas
genticas.- Utilizando vrus inofensivos como vetores de genes, cientistas esto colocando, nas clulas
dos pacientes, o material gentico que os mdicos desejam. (Folha de So Paulo-dez/92). Tal tcnica
possvel, pois, na clula hospedeira, o DNA do vrus:
a) inativa as diferentes funes vitais.
b) comanda a produo de protenas.
c) inibe a respirao celular.
d) induz uma mensagem deletria.
e) estimula a duplicao do DNA celular.
19) caracterstica do ciclo reprodutivo de um bacterifago a:
a) penetrao por inteiro na clula hospedeira.
b) injeo do material gentico, RNA, no interior da clula hospedeira.
c) injeo do material gentico, DNA, no interior da clula hospedeira.
d) reproduo sexuada denominada conjugao.
e) reproduo assexuada denominada diviso binria.
20) O vrus da AIDS formado por uma cpsula esfrica contendo em seu interior o material gentico.
Este tipo de vrus chamado RETROVRUS porque:
a) o RNA produz um "molde" de molcula de DNA.
b) o RNA, torna-se uma molcula autoduplicvel.
c) o DNA possui cadeia simples sem timina.
d) o DNA possui mecanismos de retroao.
e) o DNA e RNA no se pareiam
21) Os vrus so entidades que s apresentam propriedades de vida quando esto no interior de
clulas vivas. Fora delas, deixam de apresentar tais propriedades e podem cristalizar-se, como os
minerais. Os vrus so importantes agentes causadores de doenas humanas, como:
a) AIDS, sarampo e difteria.
b) sarampo, catapora e herpes.
c) clera, febre amarela e ttano.
d) febre amarela, sarampo e ttano.
e) disenteria bacilar, hansenase e poliomielite.

65

22) O grfico abaixo demonstra, no organismo humano, a relao entre os linfcitos T e o vrus da
imunodeficincia humana (HIV), ao longo de dez anos de curso da sndrome da deficincia
imunolgica adquirida (AIDS).Explique as razes das quedas das concentraes de:

a) linfcitos T
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b) HIV.
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23) VRUS E ANTIBITICOS
Considerados como uma das maiores conquistas da cincia moderna, os antibiticos, juntamente com
as vacinas e os soros, tm salvado muitas vidas. Substncias quimicamente muito diferentes entre si,
os antibiticos podem ser naturais quando produzidos por seres vivos, como fungos e bactrias
ou sintticos quando produzidos em laboratrio a partir de produtos qumicos.
Os antibiticos
atuam de diferentes maneiras sobre as clulas bacterianas: Podem bloquear a sntese da parede
celular; desorganizar estruturalmente a membrana plasmtica; agir sobre a atividade dos cidos
nuclicos, quando inibem a duplicao do DNA ou interferem na sntese de protenas, bloqueando, por
exemplo, a formao do RNA mensageiro (RNAm). Mas os vrus so organismos acelulares; no
possuem parede celular nem membrana plasmtica e se mostram absolutamente inertes quando fora
de uma clula viva. Assim, os antibiticos no fazem qualquer efeito sobre eles; os vrus so, pois,
"imunes" ao destas substncias. Porm, graas natureza protica da cpsula viral, que atua
como antgeno, um organismo infectado pode se defender contra os vrus produzindo anticorpos
especficos, como acontece na gripe. Em alguns casos, a produo de anticorpos especficos pode ser
"incentivada" atravs do uso de vacinas; o caso, por exemplo, das vacinas anti-rbica e
antipoliomieltica, de eficcia largamente comprovada.
Sobre o texto Vrus e antibiticos, responda:
a) Os antibiticos tm algum efeito sobre os vrus? Por qu?
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b) Como nosso organismo pode se defender contra as viroses?
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Crescimento microbiano
- Crescimento microbiano refere-se ao aumento no NMERO de clulas e no ao TAMANHO das
clulas.
- Microrganismos em crescimento esto, na verdade, aumentando seu nmero e se acumulando
em colnias (grupos de clulas que podem ser visualizadas sem o uso de microscpio)
- Uma clula dar origem a duas ao fim de um certo tempo, chamado de tempo de gerao ou de
duplicao.
- Por que estudar o crescimento microbiano?
* controlar o crescimento dos microrganismos patognicos
* controlar o crescimento dos microrganismos que contaminam e degradam os alimentos
* estimular o crescimento dos microrganismos que estamos interessados em estudar
1) Fatores fsicos
- Temperatura
- pH
- presso osmtica
a) Temperatura
Taxa de crescimento X temperatura
- Temperatura de crescimento mnima:
< temperatura onde a espcie capaz de crescer
- Temperatura de crescimento tima:
onde a espcie apresenta melhor crescimento
- Temperatura de crescimento mxima:
> temperatura, onde ainda possvel o crescimento

- Maioria dos microrganismos cresce dentro de variaes limitadas de temperatura, com somente
30 oC de diferena entre a temperatura mxima e a mnima de crescimento
- Maioria dos microrganismos cresce bem nas temperaturas ideais para os seres humanos
- Microrganismos so classificados em 3 grupos principais considerando as variaes nas
temperaturas de crescimento:
- PSICRFILOS: crescem em baixas temperaturas
- MESFILOS: crescem em temperaturas moderadas
- TERMFILOS: crescem em altas temperaturas
SURGIRAM MAIS DUAS CLASSES...
Curva de crescimento caracterstica de diferentes microrganimos
Termfilos
extremos

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Psicrfilos inicialmente eram organismos capazes de crescerem a 0 oC mas existem 2 grupos

diferentes capazes de crescerem a 0 oC
1o grupo:
- contm somente psicrfilos,
- podem crescer a 0 oC, mas temperatura tima de crescimento 15 oC,
- so extremamente sensveis a altas temperaturas e no crescem na temperatura ambiente (25
o
C)
- profundezas de oceanos, regies polares, no causam problemas na preservao de alimentos
2o grupo:
- podem crescer a 0 oC, mas crescimento timo entre 20 oC e 25 oC,
- no crescem em temperaturas maiores que 40 oC
- podem crescer nas temperaturas usadas em refrigeradores, so mais encontrados em alimentos
estragados
- so chamados de PSICROTRFICOS
Mesfilos
- mais encontrados
- Temperatura tima de crescimento entre 30 oC e 40 oC
- se adaptaram para viver no corpo de animais: muitas bactrias patognicas tm temperatura
tima de crescimento de 37 oC
- maioria dos microrganismos que degradam alimentos e so patognicos
Termfilos
- crescem em altas temperaturas
- temperatura tima de crescimento entre 60 oC e 65 oC: solo aquecido pelo sol e guas termais
- muitos no crescem em temperaturas abaixo de 45 oC
- endosporos de bactrias termoflicas so resistentes ao calor
- podem sobreviver ao tratamento por aquecimento em alimentos enlatados
- elevao da temperatura nos alimentos estocados pode permitir a germinao destes
endosporos, degradando os alimentos
- no so considerados um problema de sade pblica
Hipertermfilos ou termfilos extremos
- Temperatura tima de crescimento = 90 oC ou superior, encontrados em fontes de guas
quentes associadas atividade vulcnica (normalmente usam enxofre no seu metabolismo)
- Temperaturas mais alta em que crescimento bacteriano foi observado de 110 oC encontrada
nas regies hidrotermais nas profundezas do oceano
Refrigerao
- mtodo para preservao de alimentos pois diminui a velocidade de reproduo dos
microrganismos em baixas temperaturas
- microrganismos podem sobreviver em temperaturas prximas ao congelamento (dormentes)
mas seu nmero diminui gradualmente
- psicrotrficos no crescem bem em baixas temperaturas (comparado com os psicrfilos) mas
dependendo do tempo de contato eles podem degradar os alimentos miclios de fungos
recobrindo alimentos podem causar alterao de cor e sabor
- IMPORTANTE: manter refrigeradores com temperaturas bem ajustadas pois assim os
psicrotrficos crescero lentamente e a maioria dos patognicos sero incapazes de crescer
Quando os microrganismos se multiplicam nos alimentos?
Condies ideais nutrientes, umidade e temperatura!

68

Microrganismos
patognicos se
multiplicam em T
entre 5C a 60C
(zona de perigo).
Preferem T de vero
ou do nosso corpo
(37C). GELADEIRA!

Temperaturas em que ocorre degradao dos alimentos

Baixas temperaturas so
importantes para evitar o
crescimento de patgenos ou
de microrganismos que
degradam os alimentos.

b) pH (acidez ou alcalinidade de uma soluo)

- Bactrias: maioria cresce melhor em variaes pequenas de pH, sempre perto da neutralidade
(pH 6,5 7,5), poucas bactrias crescem em pH cido (pH 4,0)
- alimentos como chucrute, pepino em conserva e muitos queijos no sofrem deteriorao, pois
tm cidos produzidos durante a fermentao bacteriana
- Fungos filamentosos e leveduras: crescem em variaes de pH maiores que as bactrias, com
valores timos de pH entre 5 e 6
- Alcalinidade (base) inibe o crescimento microbiano mas pouco usada na preservao de
alimentos

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c) Presso osmtica (concentrao de sal)

- Microrganismos necessitam de gua para crescimento. Eles retiram da gua, presente no seu
meio ambiente, a maioria dos nutrientes solveis. Cada clula possui 80 90 % de gua.
- Osmose o movimento lquido de molculas de solvente atravs de uma membrana
seletivamente permevel, de uma rea com alta concentrao de molculas de solvente (baixa
concentrao de molculas de soluto) para uma rea de baixa concentrao de molculas de
solvente (alta concentrao de molculas de soluto).
- Nos sistemas vivos, principal solvente a gua!
- Presso osmtica:
- presso necessria para impedir o movimento de gua pura (gua sem solutos) para
uma soluo contendo alguns solutos
OU
- presso necessria para interromper o fluxo de gua atravs da membrana
seletivamente permevel
- 3 tipos de solues osmticas:
- soluo isotnica
- soluo hipotnica
- soluo hipertnica

* Quando uma clula microbiana se encontrar em uma soluo contendo uma concentrao de
solutos superior quela do interior da clula (hipertnica), ocorrer a passagem da gua de dentro
da clula, por meio da membrana plasmtica, para o meio com alta concentrao de solutos. A
perda de gua por osmose causa a plasmlise ou a diminuio (encolhimento) do citoplasma da
clula.

- Qual a importncia desse fenmeno?

Inibe o crescimento no momento em que a membrana se separa da parede celular!

70

- Como usar esse fenmeno na preservao dos alimentos?

- Adio de sais (ou outros solutos como acar) em uma soluo (causa aumento da
presso osmtica);
- Alimentos como: peixe salgado, mel e leite condensado so preservados por esse
mecanismo;
- Alta concentrao de sal ou de acar remove a gua do interior da clula microbiana
impedindo seu crescimento!!!
- Classificao dos microrganismos com relao ao sal:
- No Halfilos: no necessitam de sal e no toleram a presena de sal no meio
- Halotolerantes: no necessitam de sal mas toleram a presena no meio
- Halfilos: necessitam de sal em uma concentrao moderada
- Halfilos extremos: necessitam de sal em altas concentraes para crescimento
(microrganismos do Mar Morto, 30% de sal para crescimento)

2) Fatores qumicos
- gua
- fontes de carbono, nitrognio, enxofre e fsforo
- fontes de potssio, magnsio e clcio
- oligoelementos
- oxignio
- fatores orgnicos de crescimento
a) gua
- Essencial para os microrganismos
- Disponibilidade varivel no ambiente
- Regulao da presso osmtica: em ambiente com baixa concentrao de gua, o
microrganismo usa mecanismos para obter gua atravs do aumento da concentrao de solutos
internos, seja pelo bombeamento de ons para o interior celular ou pela sntese de solutos
orgnicos (acares, lcoois ou aminocidos).
- Regulao trmica
b) Fontes de carbono, nitrognio, enxofre e fsforo
- Carbono:
- essencial para sntese dos compostos orgnicos para a viabilidade celular (elemento
estrutural bsico para os seres vivos)
- organismos quimio-heterotrficos: obtm C a partir de materiais orgnicos (protenas,
carboidratos e lipdeos)
- organismos quimio-autotrficos e os fotoautotrficos: obtm C a partir de dixido de
carbono (CO2)
- Nitrognio: sntese do grupo amino dos aminocidos (protenas), sntese dos cidos nuclicos
(DNA, RNA) e ATP (molcula energtica)
- Enxofre: sntese de aminocidos contendo S (protenas) e de vitaminas (tiamina e biotina)
- Fsforo: sntese dos cidos nuclicos (DNA, RNA), fosfolipdeos componentes da membrana
celular e ATP (molcula energtica)

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c) Fontes de potssio, magnsio e clcio

- tambm so elementos essenciais para os microrganismos
- frequentemente encontrados como co-fatores para as reaes enzimticas
d) Oligoelementos (elementos traos)
- ferro, cobre, molibdnio, zinco
- utilizados como co-fatores essenciais para atividade de algumas enzimas
- gua contm todos os elementos traos
e) Oxignio
- extremamente importante no desenvolvimento microbiano

AERBIOS
- Estritos ou obrigatrios: necessitam de O2 para sua sobrevivncia (ar contm 21% de O2);
- Facultativos (ou anaerbios facultativos): no necessitam de O 2 mas crescem melhor com ele.
Na ausncia de O2 so capazes de continuar seu crescimento pela respirao anaerbia ou
fermentao. A eficincia na produo de energia diminui quando o O 2 no est disponvel. Ex:
Escherichia coli,
- Microaerfilos: necessitam de O2 mas em concentrao menor que a encontrada no ar. So
sensveis a algumas formas txicas de oxignio produzidas em concentraes letais quando em
altas concentraes de oxignio.
ANAERBIOS
- Aerotolerantes: no necessitam de O2 mas crescem melhor sem ele pois no podem us-lo para
seu crescimento. Ex: Lactobacillus;
- Estritos ou obrigatrios: no toleram O2 (letal). Ex: gnero Clostridium = ttano e botulismo.

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f) Fatores orgnicos de crescimento

- So compostos orgnicos essenciais que o microrganismo no capaz de sintetizar e precisam
ser retirados do seu meio ambiente
- Vitaminas so fatores orgnicos de crescimento para os homens, atuam como coenzimas
(necessrias para atividades das enzimas)
- Fatores necessrios para algumas bactrias: vitaminas (coenzimas), aminocidos, purinas e
pirimidinas
Exerccios
1) O crescimento microbiano se refere a um aumento de nmero ou de tamanho de clulas
microbianas? Explique.
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2) Por que importante estudar o crescimento microbiano?
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3) Quais fatores fsicos so necessrios para o crescimento microbiano?
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4) Quais fatores qumicos so necessrios para o crescimento microbiano?
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5) De acordo com a temperatura de crescimento, descreva os 5 grupos de classificao dos
microrganismos. Desenhe o grfico para auxiliar na descrio.
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6) Em um grfico de Taxa de crescimento X Temperatura, quais so as 3 temperaturas que podem ser

definidas?
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7) Quando se prepara uma grande quantidade de alimento, no caso arroz, como devemos proceder o
resfriamento? Por qu? Observe o grfico para auxiliar na explicao.
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8) Por que devemos manter os refrigeradores bem ajustados? Qual a efeito das temperaturas baixas
nos microrganismos?
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9) Qual o principal grupo, com relao a classificao por temperatura, que degrada os alimentos?
Por qu?
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10) Qual o problema com os endosporos de bactrias termfilas?
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11) Qual o pH de crescimento das bactrias? E dos fungos?
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12) O que presso osmtica?
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13) Explique e ilustre utilizando uma clula bacteriana os 3 tipos de solues osmticas existentes.
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14) Como o uso de sal ou de acar interfere no crescimento microbiano? Explique em detalhes. Cite 2
exemplos de alimentos preservados por esse mecanismo.
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15) De acordo com a quantidade de sal, descreva os 4 grupos de classificao dos microrganismos.
Desenhe o grfico para auxiliar na descrio.
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16) Normalmente os macronutrientes (necessrios em quantidades relativamente altas) so

designados como CHONPS. Qual o significado de cada letra e para que cada um desses elementos
necessrio?
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17) Para que so usados potssio, magnsio e clcio?

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18) O que so elementos traos? Como podem ser chamados? Quais so? Para que servem?
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19) De acordo com as necessidades de oxignio, descreva os 5 grupos de classificao dos
microrganismos. Desenhe a figura dos tubos de ensaio para auxiliar na descrio.
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20) O que so fatores orgnicos de crescimento? Cite um exemplo

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21) Qual das temperaturas certamente causaria a morte de um microrganismo mesoflico?
a) 20 oC
b) 9 oC
c) 37 oC
d) 60 oC
22) A denominao de oligoelementos se refere:
a) aos elementos CHONPS
b) s vitaminas
c) ao nitrognio, fsforo e enxofre
d) aos elementos minerais necessrios em pequenas quantidades
e) s substncias txicas

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Meios de Cultura
- Definio de Meio de Cultura:
Associao equilibrada de agentes qumicos (nutrientes, pH, ) e fsicos (temperatura,
viscosidade, atmosfera, ) que permitem o cultivo de microrganismos fora de seu habitat natural.
OU
Material nutriente preparado no laboratrio para o crescimento de microrganismos.
- grandes variaes: bactrias que crescem em qualquer meio de cultura, outras precisam de
meios especiais e existem aquelas que no so capazes de crescer em nenhum meio de cultura
j desenvolvido.
- Inculo: microrganismos colocados em um meio de cultura para iniciar o crescimento (verbo
inocular)
- Cultura: microrganismos que crescem e se multiplicam nos meios de cultura
- Aplicao:
- Isolamento
- Identificao
- Quantificao
- Conservao
- Multiplicao

a) Critrios para escolher o meio de cultura para o crescimento de um microrganismo

- Meio adequado: conhecer fisiologia dos microrganismos
- Conter os nutrientes corretos para que o microrganismo de interesse possa crescer:
Fonte de Carbono
Fonte de Nitrognio
Fonte de Energia
Fonte de Sais Minerais
Vitaminas e Aminocidos
- Conter a quantidade de gua necessria
- pH ajustado
- Quantidade especfica de oxignio ou mesmo sua ausncia
* Alm disso, devemos saber que:
- Meio dever inicialmente ser estril (no dever conter microrganismos vivos, somente os
microrganismos desejados que foram adicionados ao meio)
- Cultura dever ser incubada na temperatura adequada para seu crescimento
- Grande variedade de meios de cultura: no h meio de cultura universal
- Maioria dos meios, disponveis em forma comercial, j contm todos os componentes desejados,
sendo necessrio somente adicionar gua e esterilizar
b) Preparo de um meio de cultura
- Pesagem dos componentes
- Solubilizao dos componentes
- Determinao e ajuste de pH
- Distribuio em recipientes adequados
- tampar com chuchu ou outro meio adequado
- acondicionar para esterilizao
- Esterilizar (autoclavao), temperatura 121 oC
- Tempo de esterilizao (ver variveis)
- Conservao tempo e temperatura
- recipientes:
* Placa
- slido
* Tubo

- lquido
- slido: horizontal e inclinado

77

c) Classificao dos meios de cultura

1. Quanto origem
Naturais meios que existem prontos na natureza. Ex. leite, sangue, caldo de frutas, etc.
Artificiais - meios elaborados. Ex. Agar nutriente, caldo simples, etc.
2. Quanto composio
Complexos ou Indefinidos meios que, alm de todos os componentes conhecidos, contm em
sua composio sangue, ovos, extrato de levedura, leite, extratos de plantas, entre outros, que
no possuem a composio qumica totalmente conhecida
Sintticos ou Quimicamente definidos meios com composio qumica conhecida. Quantidades
precisas de compostos qumicos orgnicos ou inorgnicos altamente purificados, adicionados a
gua destilada. Ex. Meio para lactobacilos e bifidobacterias
3. Quanto ao estado fsico (ou consistncia):
Meios lquidos nutrientes dissolvidos em uma soluo aquosa, como um caldo. Utilizados para
ativao das culturas, repiques de microrganismos, ...
Meios semisslidos possuem na sua composio, alm dos nutrientes, uma quantidade de gar
(agente solidificante) na porcentagem de 0,75 a 0,5% (concentrao menor que 15g/L), que
confere consistncia intermediria, permitindo crescimento de microrganismos em tenses
variadas de oxignio ou a verificao da motilidade e para conservao de culturas.
Meios slidos tm uma quantidade maior do agente solidificante, cerca de 1,5% a 2% de gar
(concentrao maior que 15g/L). So utilizados para cultivo, isolamento e avaliao de
populaes microbianas (contagens).
4) Quanto finalidade:
Meios de pr-enriquecimento meios para dessensibilizao de microrganismos injuriados, so
usados em amostras que sofreram algum tipo de tratamento (trmico ou qumico). Ex. gua
peptonada, caldo lactosado
Meios de enriquecimento meios para estimular o crescimento de determinados microrganismos,
mas alguns podem inibir o crescimento de outros. Ex. Caldo Tetrationato e Selenito-Cistina para
cultivo de Salmonelas (lquidos).
Meios enriquecidos meios que proporcionam nutrientes adequados ao crescimento de
microrganismos presentes usualmente em baixo nmero ou de crescimento lento, bem como
microrganismos exigentes e fastidiosos (com dificuldades de nutrio). Ex. Agar sangue, BHI
(Brain Heart Infusion), Sabouraud, Meios com leite.
Meios diferenciais meios que tm substncias que permitem estabelecer diferenas entre
microrganismos de um determinado grupo ou espcie bacteriana facilitando a deteco do
microrganismo desejado.
Ex. meio Eosina Azul de Metileno, gar MacConkey , gar sangue.
Meios seletivos meios que tm substncias que inibem o desenvolvimento de determinados
grupos de microrganismos, favorecendo o crescimento do microrganismo de interesse. Ex. gar
Salmonella-Shigella (SS) e gar MacConkey.
Meios de triagem meios que avaliam determinadas atividades metablicas permitindo
caracterizao e identificao de muitos microrganismos. Ex. gar trplice acar e ferro.

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Meios de identificao meios para realizao de provas bioqumicas e verificao de funes

fisiolgicas de organismos submetidos a identificao. Ex. meios Oxidao/Fermentao, Agar
Citrato, Caldo nitrato, Caldo triptofano.
Meios de dosagem meios para dosagem de substncias como: vitaminas, aminocidos,
antibiticos e desinfetantes.
Meios de contagem meios para determinao quantitativa da populao microbiana. Ex. Agar de
Contagem em Placas, Agar Batata Dextrose (BDA).
Meios de transporte, estocagem ou manuteno meios para manter a viabilidade dos
microrganismos por mais tempo. Ex: gar Sabouraud, Meios com leite.

79

d) gar ou agar
- gar = agente solidificante utilizado quando se quer um meio slido
- polissacardeo complexo obtido de algas marinhas
- usado para deixar alimentos como gelias e sorvetes mais espessos
- poucos microrganismos podem degrad-lo
- ele se liquefaz (torna-se lquido) a cerca de 100 oC (temperatura de ebulio da gua) e ao nvel
do mar permanece lquido at que a temperatura diminua at 40 oC
- para usar em laboratrio, gar mantido em banho-maria a uma temperatura de 50 oC, que no
causa danos as bactrias quando adicionados sobre elas
- aps solidificao o gar pode ser incubado at 100 oC sem perder suas caractersticas
e) Armazenamento dos meios de cultura
- Inicialmente devem ser guardados na geladeira dentro de plsticos para evitar a desidratao;
- Tubos de ensaio devem ser isolados com chuchus ou rolhas e alumnio na geladeira;
- Placas de petri devem ser mantidas invertidas para evitar condensao de gua na tampa da
placa;
- Aps a inoculao deve ser incubado em estufa a temperatura ambiente;
- Identificao do contedo, data de preparao e vencimento.
f) Inoculao dos meios de cultura
- Utilizar procedimentos asspticos, como:
- higienizao das mos, bancada ou fluxo laminar com lcool 70%,
- EPI's adequados,
- materiais previamente esterilizados,
- Alas de inoculao devem ser flambadas no Bico de Bunsen antes e depois da inoculao;
- Deve-se esperar o resfriamento da ala de inoculao antes de coloc-la em contato com o
inculo;

- Os recipientes contendo meios e inculo devero ser abertos somente na zona de esterilidade
gerada pelo Bico de Bunsen;
- A boca do tubo de ensaio deve ser aquecida na chama do Bico de Bunsen antes e depois de ser
retirado o tampo;
- O tampo nunca deve ser apoiado na bancada ou na mesa do fluxo laminar;
- Identificao do contedo e data de inoculao;
- Aps a inoculao as placas de Petri ou tubos de ensaio devem ser incubados em estufa na
temperatura adequada.
g) Mtodos de inoculao
1) Placas de Petri
Estriagem

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Esgotamento
- Tcnica mais usada para obter colnias puras de microrganismos.
- Mergulhe a Ala de Platina esterilizada na cultura bacteriana que lhe apresentada.
- Faa estrias em cada diviso, respeitando as linhas e utilizando da melhor forma possvel toda a
superfcie da placa.
A direo da semeadura est indicada
por setas.
A semeadura na regio 1 realizada a
partir da cultura original da bactria.
A ala de inoculao deve ser
esterilizada entre as fases de
inoculao 1, 2 e 3.
Nas fases 2 e 3 a ala usada para
retirar bactrias das fases anteriores,
desta forma diluindo o nmero de
organismos a cada semeadura.

2) Tubos de ensaio
Semear - Meio lquido
- Mergulhe a Ala de Platina esterilizada na cultura bacteriana que lhe apresentada.
- Mergulhe a ala carregada de bactrias no tubo com o meio de cultivo e agite a ala.

Picagem profunda (at 2/3 de profundidade)- Meio semisslido horizontal

- Mergulhe a Agulha de nquel-cromo esterilizada na cultura bacteriana que lhe fornecida.
- Faa uma injeo com a agulha carregada com bactrias no meio de cultivo semisslido.

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Estriagem - Meio slido inclinado

- Mergulhe a Ala de Platina esterilizada na cultura bacteriana que lhe apresentada.
- Encoste levemente a ala na parte mais baixa do plano inclinado e suba fazendo estrias na
superfcie do gar.

Exerccios
1) Defina os seguintes termos:
a) meio de cultura
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
b) inculo
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
c) cultura
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
2) Para que so usados meios de cultura?
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__________________________________________________________________________________
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3) Se voc quer realizar o crescimento de uma determinada bactria, que critrios devem ser
observados na escolha do meio de cultivo?
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__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
4) De modo geral, como feita a preparao de um meio de cultivo?
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__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
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__________________________________________________________________________________
5) Como so classificados os meios de cultura quanto origem? Explique.
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6) Como so classificados os meios de cultura quanto composio? Explique.

__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
7) Como so classificados os meios de cultura quanto ao estado fsico. Explique.
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
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__________________________________________________________________________________
8) Como so classificados os meios de cultura quanto finalidade? Explique.
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
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__________________________________________________________________________________
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9) O que gar? Qual sua fonte? Para que serve?
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
10) Como pode ser feita a inoculao de microrganismos em placas de Petri?
__________________________________________________________________________________
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11) Explique como feita a tcnica de esgotamento. Para que ela serve?
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12) Explique as seguintes tcnicas de inoculao em tubos de ensaio contendo:

a) meio lquido
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
b) meio semi-slido
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
c) meio slido inclinado
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
Use a informao a seguir para responder as questes 13 e 14. Dois meios de cultura foram incubados
com 4 diferentes bactrias. Aps a inoculao foram obtidos os seguintes resultados:
Organismo
Meio de cultura 1
Meio de cultura 2
Escherichia coli

Colnias vermelhas

Ausncia de crescimento

Staphylococcus aureus

Ausncia de crescimento

Crescimento

S. epidermidis

Ausncia de crescimento

Crescimento

Salmonella enterica

Colnias incolores

Ausncia de crescimento

13) O meio de cultura 1 :

a) Seletivo

b) Diferencial

c) Seletivo e diferencial

14) O meio de cultura 2 :

a) Seletivo

b) Diferencial

c) Seletivo e diferencial

15) Qual a afirmativa correta com relao ao gar?

a) um polissacardeo obtido de fungos
b) Torna-se liquefeito na temperatura de 40 oC
c) Solidifica-se na temperatura de 100 oC
d) uma fonte de nutrientes para os microrganismo quando adicionado ao meio de cultivo
e) metabolizado por poucas bactrias

84

Crescimento Microbiano - Bactrias

- Crescimento bacteriano = aumento do nmero de indivduos e no aumento de tamanho de uma
determinada clula
- Bactrias normalmente se reproduzem por bipartio ou diviso / fisso binria simples = 2
clulas filhas iguais, multiplicao
- Tempo de gerao ou de duplicao = tempo necessrio para uma clula se dividir (e sua
populao dobrar de tamanho)
* 1 processo de diviso celular origina 2 clulas
2 processos de diviso celular origina 4 clulas
e assim sucessivamente...

- tempo de gerao depende do microrganismo e das condies ambientais, como temperatura

- maioria das bactrias tem tempo de gerao de 1 a 3 h, mas algumas precisam de mais de 24 h
para cada gerao
- exemplo: bactria E. coli em condies ideias de cultivo tem tempo de gerao de 20 min.
Aps 20 geraes (aproximadamente 7 h), ter 1 milho de clulas.
Aps 30 geraes (aproximadamente 10 h), ter 1 bilho de clulas.
Aps 24 h, ser um nmero com 21 zeros.
Para representar populaes to grandes, usa-se escala logartmica.

Logaritmo do nmero de clulas

a) Fases do crescimento
- Curva de crescimento microbiano demonstra crescimento das clulas durante um perodo de
tempo - 4 fases de crescimento:

Fase
estacionria
Fase log

Fase declnio
ou morte
celular

Fase lag

tempo
1) Fase lag
* bactrias no se reproduzem imediatamente quando colocadas em meio de cultivo novo
* pouca ou ausncia de diviso celular (fase de adaptao) pode durar at 1 hora
* clulas em estado de latncia, com intensa atividade metablica (sntese de enzimas e
molculas variadas)
2) Fase log ou de crescimento exponencial
* clulas iniciam processo de diviso e entram no perodo de crescimento ou aumento logartmico
* reproduo celular extremamente ativa e tempo de gerao atinge valor constante
* perodo de maior atividade metablica da clula e o estgio preferido para fins industriais
(produto produzido eficientemente)
* microrganismos so sensveis as mudanas ambientais e compostos antimicrobianos

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3) Fase Estacionria
* em determinado momento a velocidade de crescimento diminui, o nmero de morte celular
igual ao nmero de clulas novas e a populao se torna estvel = perodo de equilbrio
* n de clulas vivas = n de clulas mortas
* no so conhecidos os motivos que induzem a fase exponencial a diminuir sua atividade,
diversos fatores poderim influenciar: trmino de nutrientes, acmulo de produtos da degradao,
mudanas no pH, ...
4) Fase de Morte Celular ou de Declnio
* n de clulas mortas maior que o de clulas novas
* fase continua at que a populao tenha diminudo para uma pequena frao do nmero de
clulas da fase anterior, ou at que tenha desaparecido totalmente
b) Mtodos para quantificar o crescimento microbiano
Quantificao direta
1) Contagem direta ao microscpio do n. total de indivduos, vivos ou mortos. Usa cmaras de
contagem e microscpio para avaliar n. partculas presentes em um determinado volume
2) Contagem em placas de UFC (unidades formadoras de colnias), para bactrias e leveduras.
Faz diluies adequadas da suspenso e semeadura das alquotas na superfcie de meios
slidos, seguida de contagem das colnias que cresceram. Usa:
- Diluio seriada + Mtodo de espalhamento em placa
OU
- Diluio seriada + Mtodo de Pour plate
3) Mtodo do nmero mais provvel (MNP), para bactrias que no crescem em meio slidos. Faz
o crescimento em meio lquido com diferentes diluies de bactrias e usa tabelas (95% de
confiabilidade) para avaliar resultado.
4) Filtrao, para regies em que o nmero de bactrias se encontra muito pequeno (lagos e
fontes de gua)
Quantificao indireta
1) Determinao de peso seco ou mido
2) Determinao qumica de componentes celulares, como protena, cidos nuclicos
3) Turbidimetria. Medida da turvao de uma amostra microbiana pela absorbncia em
espectrofotmetro (massa de microrganismos presente)

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Mtodos para quantificao direta

Existem diferentes mtodos para quantificar o crescimento microbiano. Alguns determinam o
nmero de clulas e outros analisam a massa total da populao, que diretamente proporcional ao
nmero de clulas. A quantificao de uma populao geralmente realizada considerando o nmero
de clulas em 1 mL do meio lquido ou 1 g do material slido. Mas como populaes bacterianas so
muito grandes, so usadas pequenas amostras dessas para contagem por mtodos diretos ou
indiretos. Depois, o resultado colocado em frmulas matemticas para calcular o valor final. Ex.: um
milionsimo de mL (10-6 mL) de leite azedo tem 70 bactrias. Dever existir 70 milhes de bactrias
em cada mL de leite. Trabalhar com nmeros to pequenos no prtico. Foram desenvolvidos
mtodos quantitativos usando diluies seriadas das culturas ou amostras.
1) Contagem em Placa
a tcnica mais utilizada na determinao do tamanho de uma populao bacteriana.
VANTAGEM: as clulas viveis (vivas) so quantificadas. DESVANTAGEM: tempo de incubao longo,
em geral 24 h, para o aparecimento das colnias visveis em placa. Esse tempo pode impedir o uso
dessa tcnica em reas como no controle da qualidade do leite pois no possvel manter o lote por
um perodo longo. Esse mtodo considera que cada colnia originada do crescimento e da
multiplicao de uma bactria. Isso nem sempre verdade, uma vez que as bactrias frequentemente
crescem em cadeias ou em grumos. Para refletir essa realidade, as contagens em placas so feitas
nas chamadas unidades formadoras de colnias (UFC).
Para realizar esse mtodo, essencial que somente um nmero limitado de colnias cresa
em cada placa. Quando muitas colnias esto presentes, ocorre saturao impedindo o crescimento
de algumas colnias e dificultando a contagem. Pela conveno do Food and Drug Administration,
rgo norte-americano que controla alimentos e medicamentos, deve-se realizar a contagem em
placas que contenham de 25 a 250 colnias, mas microbiologistas preferem de 30 a 300 colnias.
Quando essa metodologia empregada, deve-se utilizar o mtodo da diluio seriada para
garantir que o nmero de colnias na placa permanea na faixa desejada. (FIGURA)
Diluio seriada. Exemplo amostra de leite com 10 mil bactrias / mL. A inoculao de 1 mL
dessa amostra em uma placa com meio de cultivo resultar no crescimento de 10 mil colnias e ser
impossvel fazer a contagem. Mas se 1 mL de leite for transferido para um tubo contendo 9 mL de gua
estril (diluio), cada mL da amostra deste tubo conter 1000 bactrias. Esse nmero ainda grande
para fazer a contagem. Portanto, uma nova diluio seriada dever ser realizada, transferindo 1 mL
(com 1000 bactrias) para um novo tubo com 9 mL de gua estril). Nesse ltimo tubo, cada mL
conter 100 bactrias, que quando inoculado dever originar 100 colnias, que podem ser facilmente
contadas.

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Existem dois mtodos para se realizar a contagem de bactrias em placa: mtodo de

espalhamento em placa e mtodo pour plate.
Mtodo pour plate. No mtodo pour plate o inculo pode ser realizado com um volume de 1,0
mL ou 0,1 mL da diluio bacteriana diretamente na placa de Petri. O meio de cultivo, mantido em
banho-maria a 50 oC para impedir a solidificao do gar, vertido sobre a amostra, que ser
misturada por agitao suave da placa. Aps solidificao do gar, a placa incubada na temperatura
de crescimento da bactria. Nesse mtodo o crescimento das colnias das bactrias ocorre dentro do
meio de cultivo e na superfcie do meio cultivo. DESVANTAGEM: microrganismos sensveis ao calor
podem ser danificados pelo gar fundido (lquido a 50 oC) e podem ficar impossibilitados de formar
colnias; quando alguns meios de cultivo diferenciais so usados, a aparncia caracterstica de uma
colnia na superfcie do meio essencial para que haja o diagnstico e as colnias formadas abaixo
da superfcie no so apropriadas para estes testes.
Mtodo de espalhamento em placa. Mtodo mais usado. O inculo de 0,1 mL adicionado
superfcie do meio contendo gar j solidificado. O inculo , ento, espalhado uniformemente na
superfcie com a ala de Drigalski. Esse mtodo no tem as desvantagens do mtodo pour plate
porque as colnias crescem somente na superfcie do meio e no entram em contato com o gar
fundido (lquido a 50 oC).

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2) Filtrao
Aplicado para contar amostras em que o nmero de bactrias muito pequeno, como lagos e
fontes de gua. Esse mtodo permite que a bactria seja concentrada sobre a superfcie de uma
membrana de filtro de poros muito pequenos (bactria no passa pelos poros) aps passagem de um
volume de 100 mL de gua. Essa membrana transferida para uma placa de Petri com um suporte
embebido em nutriente lquido, que permite que as bactrias se desenvolvam sobre a membrana. Esse
mtodo usado para deteco e registro de coliformes (indicadores de poluio fecal) em amostras de
alimentos e guas. Coliformes podem ser identificados por meios de cultivo diferenciais.

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3) Mtodo do Nmero Mais Provvel (NMP)

uma tcnica estatstica com base no seguinte princpio: quanto maior o nmero de bactrias
em uma amostra, maior ser o nmero de diluies necessrias para eliminar totalmente o
crescimento em tubos com meio de cultura. Esse mtodo mais usado quando as bactrias a serem
contadas no cresceriam em meio slido (como bactrias quimiautotrficas nitrificantes), ou quando o
crescimento de bactrias em um meio lquido diferencial usado para identificar os microrganismos
(como coliformes em gua, que seletivamente fermentam lactose produzindo cido). O mtodo fornece
somente uma estimativa de 95% de probabilidade de a populao bacteriana conter um nmero de
bactrias e que o NMP da tabela estatisticamente o nmero mais provvel. (FIGURA)

90

4) Contagem Direta ao Microscpio

Nesse mtodo um volume conhecido de soluo bacteriana colocado em uma rea definida
de uma lmina especial de microscpio denominada clula de contagem Petroff-Hausser.
DESVANTAGEM: dificuldade para contar bactrias mveis, clulas mortas acabam sendo contadas
como as vivas, necessrio um grande nmero de clulas de bactrias (cerca de 10 milhes de
bactrias por mL) para ter uma contagem satisfatria. VANTAGEM: para quantificar as bactrias por
esse mtodo no h necessidade de perodos de incubao, portanto, ela pode ser usada quando se
necessita de resultados imediatos.

91

Mtodos para quantificao indireta

Muitas vezes no necessrio contar as clulas microbianas para determinar seu nmero.
1) Turbidimetria
Em alguns experimentos possvel monitorar o crescimento bacteriano atravs da turbidez da
cultura. Quando uma bactria se multiplica em meio lquido, esse meio fica trbido ou com alta
densidade de clulas. O espectrofotmetro (ou colormetro) o instrumento mais usado para
determinar a turbidez de uma amostra. Nele existe um feixe de luz que transmitido atravs da
soluo de bactrias para um detector fotossensvel. Com o crescimento bacteriano, menos luz
atingir o detector. Essa alterao ser registrada na escada do aparelho como uma porcentagem de
transmisso. Tambm ser registrada na escala do aparelho a absorbncia (densidade tica ou OD)
que um valor usado para confeccionar grficos de crescimento bacteriano. O grfico Absorbncia X
Tempo ser uma linha quase reta quando a bactria estiver na fase log (logartmica) de crescimento ou
morte celular. Se durante as leituras de absorbncia for realizada a contagem do nmero de clulas,
esses valores podem ser usados para estimar o nmero de bactrias em experimentos futuros em que
somente a turbidez seja medida. Para usar esse mtodo necessrio ter mais de um milho de
clulas por mL de cultura, mas para leitura no aparelho a suspenso (soluo de bactrias) deve ter
entre 10 e 100 milhes de clulas por mL. DESVANTAGEM: difcil usar esse mtodo quando poucas
bactrias esto presentes no meio.

92

2) Atividade Metablica
Nesse mtodo feita a determinao da atividade metablica da populao microbiana. Ele
considera que a quantidade de um certo produto do metabolismo dos microrganismos, como cido ou
CO2, pode ter relao direta com o nmero de clulas presentes. DESVANTAGEM: uso restrito a
alguns ensaios e microrganismos.
3) Peso Seco
Os mtodos apresentados at agora no tm resultados bons quando usados em bactrias
filamentosas e fungos. A contagem em placa no capaz de quantificar o aumento da massa
(crescimento do miclio) dos fungos filamentosos. O nmero de esporos assexuais contado na
contagem em placa mas no uma determinao satisfatria do crescimento. A melhor maneira de
analisar crescimento de fungos filamentosos pela determinao do peso seco. Para isso, o fungo
removido do meio de cultivo por filtrao, para eliminar outros materiais. Depois ele seco em
dessecador e pesado. Pode-se usar a mesma metodologia com bactrias.
Exerccios
1) Como as bactrias normalmente se reproduzem?
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2) O que tempo de gerao? Ele igual para todos os microrganismos? Justifique sua resposta.
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3) Durante o preparo de um sanduche ocorreu acidentalmente a sua contaminao com seis clulas
de E. coli. Considerando que o tempo de gerao dessa bactria de 20 minutos, explique quantas
clulas deveriam existir no sanduche aps:
a) 20 minutos
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b) 1 hora
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c) 2 horas
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4) Como so chamadas as 4 fases de uma curva de crescimento microbiano?
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5) Descreva os principais acontecimentos de cada uma das fases de crescimento.

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6) Na fase estacionria os microrganismos param de crescer. Essa informao est correta? Justifique
sua resposta.
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7) Cite 4 mtodos usados para quantificao direta do crescimento microbiano.
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8) Cite 3 mtodos usados para quantificao indireta do crescimento microbiano.
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9) Qual a tcnica mais utilizada na determinao do tamanho de uma populao bacteriana?
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10) Qual a principal vantagem e a principal desvantagem do mtodo de contagem em placa?
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11) Qual a diferena entre o mtodo de espalhamento em placa e o mtodo de pour plate?
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12) Quais as desvantagens do mtodo pour plate?
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13) O que significa UFC? Por que ela foi escolhida no lugar de colnia como unidade para o mtodo
de contagem em placa?
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14) Qual o nmero de bactrias por mL encontrado em uma amostra de leite se a placa usada para
contagem apresentava 127 UFC em uma diluio seriada de 1:1000?
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__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
15) Em que ocasio utilizado o mtodo de filtrao?
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
16) O que o mtodo do nmero mais provvel? Em que ocasio esse mtodo usado? Qual o
nvel de confiabilidade deste mtodo?
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
17) De acordo com a tabela de NMP (pag. 90) qual o nmero estatisticamente provvel de bactrias
presentes em uma amostra e os limites inferiores e superiores para as seguintes combinaes de
tubos positivos:
a) 4-2-1:
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
b) 5-1-2:
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
c) 5-3-0:
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
18) Quais as desvantagens da contagem direta ao microscpio? Quando essa metodologia
empregada?
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
19) Em que fato se baseia o mtodo da turbidimetria? Que instrumento usado nesse mtodo?
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________

95

20) Qual a relao feita no mtodo da atividade metablica?

__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
21) Para quais microrganismos indicado o uso do mtodo do peso seco?
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________

96

Controle do Crescimento Microbiano.

O controle cientfico do crescimento microbiano comeou h cerca de 100 anos. Lembrese de que o trabalho de Pasteur sobre os microrganismos levou os cientistas a acreditarem que os
micrbios eram uma possvel causa de doenas. Na metade do sculo XIX, o mdico hngaro
Ignatz Semmelweiss e o mdico ingls Joseph Lister utilizaram essa ideia em algumas das
primeiras prticas de controle microbiano para procedimentos mdicos. Essas prticas incluam a
lavagem das mos com cloreto de cal, que matava os micrbios, e tcnicas de cirurgia asspticas
para impedir a contaminao microbiana das feridas cirrgicas. At aquele momento, as infeces
adquiridas em hospital, ou infeces nosocomiais, eram a causa mortis em pelo menos 10% dos
casos cirrgicos, e as mortes de porturientes eram to elevadas quanto 25%. A ignorncia a
respeito dos micrbios era tanta que, durante a Guerra Civil Americana, um cirurgio poderia
limpar seu bisturi na sola da bota, entre as incises. No ultimo sculo, os cientistas continuaram a
desenvolver uma sria de mtodos fsico e agentes qumicos para controlar o crescimento
microbiano.
A Terminologia do controle Microbiano
Objetivo do Aprendizado: Definir os seguintes termos-chave relacionados ao controle microbiano:
esterilizao, desinfeco, anti-sepsia, degerminao, sanitizao, biocida, germicida,
bacteriostase e assepsia.
Um termo frequentemente usado, e mal utilizado, ao discutir o controle do crescimento
microbiano a esterilizao. Esterilizao a destruio de todas as formas de vida microbiana.
O aquecimento o mtodo mais comum usado para matar micrbios, incluindo as formas mais
resistentes, como os endosporos. A remoo de micrbios de lquidos ou gases pode ser feita por
outra forma de esterilizao, a filtrao.
As pessoas pensam que os alimentos enlatados venda em supermercados so
completamente estreis. Na realidade, o tratamento com calor requerido para assegurar a
esterilidade absoluta iria degradar desnecessariamente qualidade do alimento. Ao invs disso, o
alimento e submetido somente ao calor suficiente para destruir os endosporos de Clostridium
botulinum, que pode produzir uma toxina mortal. Esse tratamento limitado de calor denominado
esterilizao comercial. Os endosporos de uma srie de bactrias termoflicas, capazes de causar
deteriorao do alimento, mas no doena humana, so consideravelmente mais resistentes ao
calo que C. botulinum. Se estiverem presentes, iro sobreviver, mas sua sobrevivncia
normalmente no tem consequncia prtica; eles no crescero nas temperaturas normais de
armazenamento do alimento. Se os enlatados de um supermercado forem incubados em
temperaturas na faixa de crescimento dessas termfilas (acima de 45 graus Celsius), uma grande
quantidade de alimentos iria se deteriorar.
A esterilizao completa muita vezes no necessria em outros cenrios. Por exemplo,
as defesas normais do corpo podem lidar com alguns micrbios que penetram em uma ferida
operatria. Um copo ou garfo em um restaurante necessita apenas de um controle microbiano
suficiente para prevenir a transmisso de micrbios possivelmente patognicos de uma pessoa
para outra.
O controle voltado para a destruio de microrganismos nocivos denominado
desinfeco. Normalmente refere-se destruio dos patgenos de vegetais (no formadores de
endosporos), o que no igual esterilidade completa. A desinfeco pode fazer uso de
substncias qumicas, radiao ultravioleta, gua fervente ou vapor. Na prtica, o termo aplicado
mais comumente ao uso de um produto qumico (um desinfetante) para tratar uma superfcie ou
substncia inerte. Quando esse tratamento dirigido ao tecido vivo, denominado anti-sepsia, e
produto qumico denominado um anti-sptico. Assim, na prtica, a mesma substncia qumica
pode ser denominada um desinfetante para uso e um anti-sptico para outro. claro que muitos
produtos aceitveis para lavar uma mesa seriam muito agressivos para usar sobre o tecido vivo.
Existem modificaes da desinfeco e da anti-sepsia. Por exemplo, quando algum
precisa receber uma injeo, a pele limpa com lcool o processo de degerminao, que

97

resulta principalmente da remoo mecnica, em vez da morte, da maioria dos micrbios em uma
rea limitada. Os copos, as louas e os talheres dos restaurantes esto sujeitos sanitizao, que
destinada a reduzir as contagens microbianas a nveis seguros de sade pblica e minimizar as
chances de transmisso de doena de um usurio para outra. Isso normalmente obtido por
lavagem em alta temperatura ou, no caso das louas em um bar, lavagem em uma pia seguida
por imerso em um desinfetante qumico.
A Tabela 1 resume a terminologia relativa ao controle do crescimento microbiano.
Os nomes dos tratamentos que causam a morte direta dos micrbios possuem o sufixo
-cida, significando morte. Um biocida, ou germicida mata os microrganismos (geralmente com
certas excees, como os endosporos); um fungicida mata os fungos; um viricida inativa os vrus;
e assim por diante. Outros tratamentos inibem o crescimento e multiplicao das bactrias; seu
nomes tm sufixo -sttico ou -stase, significando parar ou diminuir, como na bacteriostase. Uma
vez que o agente bacteriosttico removido, o crescimento pode ser retomado.
Sepse, do termo grego para estragado ou podre, indica contaminao bacteriana, como
nas fossas spticas para tratamento de esgoto. (O termo tambm usado para descrever uma
condio de sade). Assptico significa que um objeto ou rea est livre de patgenos. Assepsia
a ausncia de contaminao significativa. Tcnicas asspticas so importantes em cirurgia para
minimizar a contaminao dos instrumentos, da equipe cirrgica e do paciente.

TABELA 1

Terminologia Relacionada ao Controle do Crescimento

Microbiano
Definio

Comentrios

Esterilizao

Destruio de todas as formas Normalmente feito com vapor

de vida microbiana, incluindo sob presso ou um gs
os endosporos.
esterilizante como o xido de
etileno.

Esterilizao Comercial

Tratamento de calor suficiente

para matar os endsporos do
Clotridium
botulinum
nos
alimentos enlatados.

Desinfeco

Destruio dos patgenos dos Pode fazer uso de mtodos

vegetais.
fsicos ou qumicos.

Anti-sepsia

Destruio dos patgenos em O tratamento quase sempre

vegetais em tecido vivo.
por antimicrobianos qumicos.

Degerminao

Remoo dos micrbios de Basicamente uma remoo

uma rea limitada, como a pele mecnica por um algodo
em torno do local uma injeo. embebido em lcool.

Sanitizao

Tratamento destinado a reduzir

as contagens microbianas nos
utenslios
alimentares
at
nveis seguros de sade
pblica.

Os
endsporos
mais
resistentes
das
bactrias
termfilas podem sobreviver,
mas no iro germinar e
crescer sob condies de
armazenamento normais.

Pode ser feita por meio de

lavagem com alta temperatura
ou mergulhando em um
desinfetante qumico.

98

TABELA 2

Mtodos Fsicos Usados para o Controle do Crescimento

Microbiano
Mecanismo
de Comentrio
Uso Preferencial
Ao

Mtodo
Calor
1. Calor mido
a. Fervura

Desnaturao
Protenas

b. Autoclave

Desnaturao
Protenas

2. Pasteurizao

Desnaturao
protenas

das Mata
fungos
e
clulas bacterianas
vegetativas
patognicas
e
quase todos os
vrus em 10 min;
menos efetivo para
endsporos.
das Mtodo
muito
efetivo
de
esterilizao;
em
cerca de 15 psi de
presso (121 C),
todas as clulas
vegetativas e seus
endsporos
so
mortos em cerca de
15 minutos.
das Tratamento
com
calor para o leite
(72C por cerca de
15 seg) que mata
todos os patgenos
e a maioria dos
no-patognicos.

Pratos, bacias, jarros,

equipamento variado.

Meios
microbiolgicos,
solues, roupas de
cama,
utenslios,
curativos,
equipamento e outros
itens que podem
suportar temperatura
e presso.
Leite, creme e certas
bebidas
alcolicas
(cerveja e vinho).

3. Calor seco
a. Chama direta

Queima
os
contaminantes at
se tornarem cinzas.
Queima
at
se
tornarem cinzas.

b. Incinerao

c. Esterilizao
quente

Filtrao

com

Mtodo
muito Alas de inoculao
eficaz
de
esterilizao.
Mtodo
muito Copos
de
papel,
eficaz
de curativos
esterilizao.
contaminados,
carcaas de animais,
sacos e panos de
limpeza.
ar Oxidao
Mtodo
muito Vidros
vazios,
eficaz
de instrumentos,
esterilizao, mas agulhas e seringas
requer temperatura de vidro.
de 170C por cerca
de 2 horas.
Separao
das Remove
os til para esterilizar
bactrias do lquido micrbios atravs lquidos
(enzimas,
de suspenso
da passagem de vacinas) que so
um lquido ou gs destrudos pelo calor.
atravs
de
um

99

material
semelhante a uma
tela; a maioria dos
filtros
em
uso
consiste de acetato
de celulose ou
nitrocelulose.
Frio
1. Refrigerao

2. Congelamento
profundo

3. Liofilizao

Alta Presso

Dessecao

Presso Osmtica

Reduo
das
reaes qumicas e
possveis alteraes
nas protenas.
Reduo
das
reaes qumicas e
possveis alteraes
nas protenas.

Tem
efeito Conservao
dos
bacteriosttico.
alimentos, drogas e
culturas.

Reduo
das
reaes qumicas e
possveis alteraes
nas protenas.

Conservao
dos
alimentos, drogas e.
Culturas.

Um mtodo eficaz
para
conservar
culturas
microbianas,
em
que as culturas so
congeladas
rapidamente
a
-50C e -95C.
Mtodo eficaz para
a
conservao
prolongada
de
Conservao dos
alimentos, drogas e
culturas
microbianas;
a
gua removida
por alto vcuo em
baixa temperatura.
Conservao
de
cores, sabores e
valores nutricionais.

Alterao
da
estrutura molecular
de
protenas
e
carboidratos.
Interrupo
do Envolve a remoo
metabolismo.
de
gua
dos
micrbios;
principalmente
bacteriosttica.
Plasmlise
Resulta na perda
de
gua
das
clulas
microbianas.

Conservao
dos
alimentos, drogas e
culturas.

Sucos de fruta.

Conservao
alimentos.

dos

Conservao
alimentos.

dos

Radiao
1. Ionizante

Destruio do DNA.

2. No-Ionizante

Leso do DNA.

No-disseminado
Usado para esterilizar
na esterilizao de produtos
rotina.
farmacuticos
e
suprimentos mdicos
e dentrios.
Radiao
no Controle de ambiente
muito penetrante.
fechado
com
lmpada
UV
(germicida).

100

TABELA 3
Agente Qumico

Agentes Qumicos para Controlar o Crescimento Microbiano

Mecanismo de Ao

Uso preferencial

Comentrio

Fenol e Compostos Fenlicos

1. Fenol

Ruptura da membrana Raramente

usado,
plasmtica,
exceto como padro
desnaturao
das de comparao.
enzimas.

2. Compostos
Fenlicos

Ruptura da membrana
plasmtica,
desnaturao
das
enzimas.

3. Bifenis

Superfcies
ambientais,
instrumentos,
superfcies cutneas
e
membranas
mucosas.
Provvel ruptura da Sabonete para as
membrana plasmtica.
mos
e
loes
hidratantes.

Biguanidas (clorexidina)

Ruptura da membrana Desinfeco da pele

plasmtica.
especialmente para
escovao cirrgica.

Halognicos

O iodo inibe a funo

das protenas e um
forte agente oxidante; o
cloro forma o agente
oxidante forte cido
hipocloroso, que altera
os
componentes
celulares.

lcoois

O iodo um antisptico
eficaz
disponvel
como
tintura
e
como
iodofor; o gs cloro
usado
para
desinfetar
o
equipamento
de
fbricas de laticnios,
utenslios
para
refeies,
itens
domsticos
e
vidraria.
Desnaturao
das Termmetros
e
protenas e dissoluo outros instrumentos;
dos lipdeos.
ao limpar a pele com
lcool antes de uma
injeo,
a
maior
parte
da
ao
desinfetante
provavelmente
provm
de
simplesmente
remover
(degerminar) o p e
alguns micrbios.

Raramente
usado
como desinfetante ou
anti-sptico devido
possibilidade
de
irritao
e
odor
desagradvel.
Os derivados do fenol
so reativos mesmo
em
presena
de
material orgnico; um
exemplo o Ofenilfenol.
O triclosano um
exemplo
especialmente comum
de um bifenol, Ampla
utilizao, porm mais
eficaz contra grampositivos.
Bactericida
contra
gram-positivos
e
gram-negativos,
atxicos, persistente.
O iodo e o cloro
podem
agir
isoladamente ou como
componentes
de
compostos
inorgnicos
e
orgnicos.

Bactericida
e
fungicida, mas ineficaz
contra endsporos ou
vrus
noenvelopados; alcois
comumente
usados
so o etanol e o
isopropanol.

101

Metais pesados e Seus Desnaturao

da O nitrato de prata Os metais pesados
Compostos
enzimas e de outras pode ser usado para como a prata e o
protenas essenciais.
prevenir a oftalmia mercrio so biocidas.
gonorrica neonatal;
o
mercurocromo
desinfeta a pele e as
membranas
mucosas; o sulfato
de cobre um
algicida.
Agentes de Superfcie
1. Sabes
e Remoo mecnica dos
detergentes cido- micrbios atravs da
aninicos
escovao.
aninicos.
2. Detergentes cido- Incerto; pode envolver a
aninicos
inativao ou ruptura
das enzimas.
3. Detergentes
catinicos
compostos
amnio
quarternrio)

Inibio de enzimas,
) desnaturao
das
de protenas e ruptura das
membranas
plasmticas.

cidos Orgnicos

Inibio
metablica,
afetando principalmente
os bolores; ao no
relacionada

sua
acidez.

Aldedos

Desnaturao
protenas.

das

Esterilizantes Gasosos

Desnaturao
protenas

das

Peroxignios
Oxidantes)

(Agentes Oxidao

Degerminao
da Muitos
sabes
pele e remoo de antibacterianos
resduos.
contm
antimicrobianos.
Sanitizao
em Amplo espectro de
indstrias
de atividade;
atxicos,
processamento
de no-corrosivos e de
lacticnios
e ao rpida.
alimentos.
Anti-sptico para a Bactericidas,
pele, instrumentos, bacteriostticos,
utenslios, objetos de fungicidas e viricidas
borracha.
contra
vrus
envelopados;
exemplos de qual so
o
Cepacol
e
o
Zephiram.
cido srbico e cido Amplamente usados
benzoico efetivos em para controlar bolores
baixo pH, parabenz e algumas bactrias
muito usado em AM
alimentos
e
cosmticos, xampus; cosmticos.
propianato de clcio
usado em po.
O glutaraldedo Antimicrobianos muito
menos irritante que o efetivos.
formaldedo
e

usado
para
a
desinfeco
de
equipamentos
mdicos.
Excelente
agente O xido de etileno o
esterilizante,
mais
comumente
especialmente para usado.
objetos que seriam
danificados
pelo
calor.
Superfcies
O
oznio

contaminadas;
amplamente
usado
alguns
ferimentos como
suplemento
profundos, em que para a clorao; o
eles
so
muito perxido
de
efetivos
contra hidrognio um anti-

102

anaerbicos
sensveis
oxignio.

sptico fraco, mas um

ao bom desinfetante. O
cido peractico
especialmente efetivo.

RESUMO PARA ESTUDO

A TERMINOLOGIA DO CONTROLE MICROBIANO
1. O controle do crescimento microbiano pode prevenir infeces e deteriorao dos
alimentos.
2. A esterilizao o processo de destruir toda a vida microbiana em um objeto.
3. A esterilizao comercial o tratamento com calor dos alimentos enlatados para destruir
os endsporos de C. botulinum.
4. A desinfeco o processo de reduzir ou inibir o crescimento microbiano em uma
superfcie inanimada.
5. Anti-sepsia o processo de reduzir ou inibir os microrganismos em tecido vivo.
6. O sufixo -cida significa matar; o sufixo statico significa inibir.
7. Sepse a contaminao bacteriana.
A TAXA DE MORTE MICROBIANA
1. As populaes bacterianas sujeitas ao calor ou a produtos qumicos antimicrobianos
morrem em uma taxa constante.
2. Esta curva de mortalidade, quando representada logaritmicamente, mostra a taxa
constante de morte como uma linha reta.
3. O tempo que leva para matar uma populao microbiana proporcional ao nmero de
micrbios.
4. As espcies microbianas e fases do ciclo de vida (p. ex., endsporos) possuem diferentes
suscetibilidades aos controles fsico e qumico.
5. A matria orgnica pode interferir com os tratamentos de calor e agentes de controle
qumico.
6. A exposio mais longa a menos calor pode produzir o mesmo efeito que o perodo mais
curto sob calor mais intenso.
AES DOS AGENTES DE CONTROLE MICROBIANO
Alterao da Permeabilidade de Membrana
1. A sensibilidade da membrana plasmtica se deve a seus componentes lipdicos e
proteicos.
2. Certos agentes de controle qumico lesam a membrana plasmtica, alterando sua
permeabilidade.
Dano s Protenas a aos cidos Nuclicos
1. Alguns agentes de controle microbiano lesam as protenas celulares ao romper as pontes
de hidrognio e as ligaes covalentes.
2. Outros agentes interferem com a replicao do DNA e RNA e com a sntese proteica.
MTODOS FSICOS DE CONTROLE MICROBIANO
Calor
1. O calor frequentemente usado para eliminar os microrganismos.
2. O calor mido mata os micrbios pela desnaturao das enzimas.
3. O ponto de morte trmica (PMT) a menor temperatura em que todos os micrbios em
uma cultura lquida sero mortos em 10 minutos.
4. O tempo de morte trmica (TMT) a durao de tempo necessrio para matar todas as
bactrias em uma cultura lquida em uma dada temperatura.
5. O tempo de reduo decimal (TRD) a durao de tempo necessria para que 90% de
uma populao bacteriana seja morta em uma dada temperatura.
6. A fervura (100C) mata muitas clulas vegetais e vrus dentro de 10 minutos.

103

7. A autoclave (vapor sob presso) o mtodo mais efetivo de esterilizao com calor mido.
O vapor deve entrar em contato direto com o material a ser esterilizado.
8. Na pasteurizao HTST, uma alta temperatura usada por um curto perodo (72C por 15
segundos) para destruir os patgenos sem alterar o sabor do alimento, o tratamento com
temperaturas ultra-elevadas (UHT) (140C por 3 segundos) usado para esterilizar
laticnios.
9. Os mtodos de esterilizao com calor seco incluem a chama direta, incinerao e
esterilizao com ar quente. O calor seco mata por oxidao.
10. Diferentes mtodos que produzem o mesmo efeito (reduo no crescimento microbiano)
so denominados tratamentos equivalentes.
Filtrao
1. A filtrao a passagem de um lquido ou gs atravs de um filtro com poros pequenos o
suficiente para reter os micrbios.
2. Os micrbios podem ser removidos do ar por filtros de partculas de alta eficincia.
3. Os filtros de membrana compostos de nitrocelulose ou acetato de celulose so comumente
usados para filtrar bactrias, vrus e mesmo protenas de alta massa molecular.
Baixas Temperaturas
1. A eficcia das baixas temperaturas depende do microrganismo particular e da intensidade
da aplicao.
2. A maioria dos microrganismos no se reproduz em temperaturas comuns de refrigerador
(0-7C).
3. Muitos micrbios sobrevivem (mas no crescem) nas temperaturas abaixo de zero, usadas
para armazenar alimentos.
Alta Presso
1. Alta presso desnatura as protenas nas clulas vegetais.
Dessecao
1. Na ausncia de gua, os microrganismos no podem crescer, mas podem permanecer
viveis.
2. Vrus e endsporos podem resistir dessecao.
Presso Osmtica
1. Os microrganismos em altas concentraes de sais e aucares sofrem plasmlise.
2. Os bolores e as leveduras so mais capazes que as bactrias de crescer em matrias com
baixa umidade ou alta presso osmtica.
Radiao
1. Os efeitos da radiao dependem de seu comprimento de onda, intensidade e durao.
2. A radiao ionizante (raios gama, raios X e feixes de eltrons de alta energia) tem um grau
de penetrao e exerce seu efeito principalmente ionizando a gua e formando radicais
hidroxila altamente reativos.
3. A radiao ultravioleta (UV), uma forma de radiao no-ionizante, tem baixo grau de
penetrao e causa leso celular produzindo dmeros de timina no DNA, que interferem
com a replicao do DNA; o comprimento de onda germicida mais efetivo 260 nm.
4. As microondas podem matar os micrbios indiretamente medida que as matrias de
aquecem.
MTODOS QUMICOS DE CONTROLE MICROBIANO
1. Os agentes qumicos so usados em tecidos vivos (como anti-spticos) e em objetos
inanimados (como desinfetantes).
2. Poucos agentes qumicos atingem a esterilidade.
PRINCPIOS DA DESINFECO EFETIVA
1. Muita ateno deve ser dada s propriedades e concentrao do desinfetante a ser
usado.
2. A presena de matria orgnica, o grau de contato com os microrganismos e a
temperatura tambm devem ser considerados.

104

Avaliando um Desinfetante
1. No teste de uso-diluio, a sobrevivncia bacteriana (S.choleraesuis, S. aureus e P.
aeruginosa) na diluio de um desinfetante recomendado pelo fabricante determinada.
2. Vrus, bactrias formadoras de endsporos, microbactrias e fungos tambm podem ser
usados no teste de uso-diluio.
3. No mtodo de disco-difuso, um disco de papel filtro embebido com uma substncia
qumica e colocado em uma placa de agar inoculada; uma zona de inibio indica
efetividade.
TIPOS DE DESINFETANTE
Fenol e Compostos Fenlicos
1. Os compostos fenlicos exercem sua ao lesando as membranas plasmticas.
Bifenis
1. Bifenis, como o triclosano (venda liberada) e hexaclorofeno (prescrito) so amplamente
usados em produtos domsticos.
Biguanidos
1. A clorexidina lesa as membranas plasmticas das clulas vegetais.
Halognios
1. Alguns halognios (iodo e cloro) so usados isoladamente ou como componentes de
solues inorgnicas ou orgnicas.
2. O iodo pode ser combinado com certos aminocidos para inativar enzimas e outras
protenas celulares.
3. O iodo est disponvel como tintura (em soluo com lcool) ou como iodofor (combinando
a uma molcula orgnica).
4. A ao germicida do cloro baseia-se na formao de cido hipocloroso quando o cloro
adicionado gua.
5. O cloro usado como desinfetante em forma gasosa (Cl ou ClO) ou em um composto,
como o hipoclorito de clcio, o hipoclorito de sdio, o dicloroisocianurato de sdio e as
cloraminas.
lcoois
1. Os alcois exercem sua ao desnaturando as protenas e dissolvendo os lipdeos.
2. Em tinturas, eles aumentam a efetividade de outros produtos qumicos antimicrobianos.
3. O etanol aquoso (60 a 95%) e o isopropanol so usados como desinfetantes.
Metais Pesados e seus Compostos
1. Prata, mercrio, cobre e zinco so usados como germicidas.
2. Eles exercem sua ao antimicrobiana pela ao oligodinmica. Quando os ons de metal
pesado se combinam com os grupos sulfidrila (-SH), as protenas so desnaturadas.
Agentes de Superfcie
1. Os agentes de superfcie reduzem a tenso entre as molculas de um lquido; os sabes e
os detergentes so exemplos.
2. Os sabes possuem ao germicida limitada, mas auxiliam na remoo dos
microrganismos pela escovao.
3. Os detergentes possuem cido-aninicos so usados para limpeza do equipamento de
lacticnios.
Compostos Quarternrios de Amnio (Quarts)
1. Os quarts so detergentes catinicos unidos ao NH4+.
2. Ao romper as membranas plasmticas, eles permitem o vazamento dos constituintes
citoplasmticos para fora da clula.
3. Os quarts so mais efetivos contra as bactrias gram-positivas.
Conservantes Qumicos de Alimentos
1. O SO, o cido benzoico e o cido propinico inibem o metabolismo fngico e so usados
como conservantes de alimentos.
2. Os sais de nitrato e nitrito impedem a germinao de endsporos de Clostridium botulinum
na carne.

105

Antibiticos
1. A nisina e a natamicina so antibiticos usados para conservar alimentos, especialmente
no queijo.
Aldedos
1. Os aldedos como o formaldedo e o glurataldedo exercem seu efeito antimicrobiano
tornando as protenas inativas.
2. Eles esto entre os mais efetivos desinfetantes qumicos.
Quimioesterilizantes Gasosos
1. O xido de etileno o gs mais frequentemente usado para a esterilizao.
2. Ele penetra na maioria dos materiais e mata todos os microrganismos por desnaturao
protenas.
Peroxignios (Agentes Oxidantes)
1. O oznio, o perxido e o cido peractico so usados como agentes antimicrobianos.
2. Eles exercem seu efeito oxidando as molculas dentro das clulas.
CARACTERSTICAS E CONTROLE MICROBIANO
1. As bactrias gram-negativas geralmente so mais resistentes que as bactrias grampositivas aos desinfetantes e anti-spticos.
2. As microbactrias, os endsporos e os cistos e oocistos dos protozorios so muito
resistentes aos desinfetantes a aos anti-spticos.
3. Os vrus no0envelopados geralmente so mais resistentes que os vrus envelopados aos
desinfetantes e anti-spticos.
4. Os prons so resistentes desinfeco e autoclave.
Exerccios
1) Defina os seguintes termos:
a) esterilizao:
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
b) esterilizao:
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
c) desinfeco:
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
d) antissepsia:
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
e) degerminao:
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
f) sanitizao:
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
g) sepse:
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________

106

h) assepsia:
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
i) assptico:
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
2) Os alimentos enlatados venda em supermercados so completamente estreis? Justifique sua
resposta.
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
3) Qual a diferena entre tratamentos com sufixo -cida e os tratamentos com sufixo -sttico (ou
-stase)?
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________

107

Roteiros de
aulas prticas de
Microbiologia
Geral
(MIG)

108

Laboratrio de Microbiologia
A unidade curricular Microbiologia Geral (MIG) tem como principal objetivo o aprendizado
de tcnicas, representadas por uma srie de operaes executadas segundo normas
padronizadas, possibilitando o conhecimento e a manipulao de microrganismos.
As tcnicas microbiolgicas bsicas e essenciais podem ser resumidas em:
a) observao microscpica: observao de microrganismos em condies adequadas
visualizao em microscpio;
b) cultivo artificial: multiplicao dos microrganismos fora do seu habitat natural, utilizando meios
de cultura;
c) esterilizao: eliminao das formas vivas nos meios de cultura, utenslios e instrumentos;
d) prtica assptica: preveno do contato do material em estudo com formas microbianas
indesejveis.
Laboratrios de microbiologia so locais onde se manipulam os microrganismos com os
mais variados objetivos, tais como:
a) identificar os microrganismos responsveis por doenas em animais e vegetais;
b) avaliar a microbiota do ar, do solo, da gua, dos alimentos, entre outros;
c) identificar a presena de microrganismos indesejveis nos alimentos ou produtos
industrializados;
d) usar os microrganismos como modelos de estudo para a compreenso dos processos vitais;
e) descobrir substncias (remdios, vacinas, antibiticos, vitaminas, hormnios, ) que
combatam microrganismos patognicos ou favoream o crescimento e desenvolvimento de
plantas e animais.
Como no laboratrio de microbiologia trabalha-se com organismos que na sua grande
maioria so invisveis a olho nu, deve-se tomar o mximo cuidado para no contaminar:
a) o manipulante;
b) o ambiente;
c) o material em estudo.
Para isso necessrio que algumas medidas sejam tomadas e que regras de trabalho
sejam estabelecidas.
Normas de biossegurana no Laboratrio de Microbiologia
O sucesso de uma experincia no laboratrio depende da observao das regras
estabelecidas para a segurana pessoal e ambiental. No primeiro caso, as regras dizem respeito a
sua segurana pessoal de modo a evitar acidentes de laboratrio. No segundo, referem-se
manuteno de um laboratrio rigorosamente limpo para impedir a contaminao dos dispositivos
experimentais por microrganismos estranhos ao estudo. Desse modo, um dos procedimentos
mais comuns no laboratrio de microbiologia a aplicao de tcnicas asspticas.
Embora a virulncia dos microrganismos usados nas aula prticas seja mnima e ainda
diminua ao longo do tempo devido ao longo perodo de cultivo artificial, todos os microrganismos
devem ser tratados como potencialmente patognicos. Assim, os estudantes de microbiologia
devem executar tcnicas asspticas na preparao e manipulao de qualquer material.
Para reduzir a microbiota presente naturalmente no laboratrio e evitar acidentes e
infeco de pessoas, as seguintes regras devem ser sempre observadas:
1)
tratar todas as culturas de microrganismos como potencialmente patognicas;
2)
deixar materiais como bolsas, pastas, livros e cadernos na estante, na entrada do
laboratrio, e nunca sobre as bancadas do laboratrio;
3)
manter as portas e janelas fechadas durante as aulas prticas para evitar contaminao
com correntes de ar;
4)
lavar cuidadosamente as mos e o antebrao com detergente, certificar-se que todo o
sabo foi retirado, secar com papel toalha antes e depois da aula prtica;
5)
desinfetar mos e antebraos cuidadosamente, antes e aps os trabalhos no laboratrio
com lcool iodado. ATENO: O LCOOL 96 o GL NO BACTERICIDA e o lcool 70% ou lcool
iodado s completa sua ao ao secar e no deve ser jogado sobre mos ainda midas;

109

6)
se tiver algum ferimento nas mos, avise o professor e procure no tocar no material;
7)
prender cabelos longos para evitar exposio ao fogo da chama do bico de Bunsen;
8)
usar equipamento de proteo individual (EPI) adequado: guarda-p ou jaleco de mangas
longas, limpo e fechado durante toda a aula, para proteger as roupas de contaminao e manchas
ou descoloraes com solues; luvas cirrgicas descartveis; mscara, touca e culos de
proteo (estes quando necessrio);
9)
retirar joias, anis, relgios e pulseiras;
10)
usar calas compridas e sapatos fechados;
11)
usar culos de segurana nas tarefas que apresentarem riscos;
12)
nunca aplicar maquilagem / cosmticos ou colocar / retirar lentes de contato no laboratrio;
13)
expressamente proibido fumar, comer (nem balas e chicletes) ou beber no laboratrio;
14)
nunca colocar as mos na boca, olhos, ouvidos e cabelos durante a aula e, caso ocorra,
adotar os procedimentos de higienizao adequados;
15)
manter a caneta longe da boca;
16)
limpar com soluo desinfetante, no incio e no final de cada aula, a bancada onde voc
trabalhou e lavar as mos aps desinfetar a bancada ;
17)
nunca colocar instrumentos contaminados, como alas de platina, agulhas, pinas e
pipetas ou ponteiras sobre a bancada. Alas, agulhas e pinas devem ser esterilizadas na chama
(flambadas); pipetas, ponteiras e lminas usadas devem ser colocadas em recipientes contendo
desinfetante, especialmente designados pelo professor, NUNCA devem ser deixados sobre a
bancada ou a pia;
18)
alas, agulhas e pinas devem ser esterilizadas na chama (flambadas = aquecidas ao
rubro) antes e depois de serem usadas e, antes de tocar o material de cultura, deve-se esperar
que a ala esfrie prximo chama;
19)
deve-se trabalhar na zona de segurana do bico de Bunsen,
que compreende a rea mais prxima possvel do bico de Bunsen
onde o ar livre de microrganismos;
A utilizao do Bico de Bunsen essencial pois visa a diminuio de
microrganismos no campo de trabalho atravs do calor. Para isso ele
apresenta uma regulagem que torna possvel selecionar o tipo de
chama ideal para o trabalho. No caso da Microbiologia deve ser
utilizada a chama azul porque esta atinge maior temperatura e no
forma fuligem. importante ressaltar que a chama apresenta
diferentes zonas, e tal fato importante para que o processo de
Flambagem seja executado adequadamente, j que certas zonas da
chama devem ser evitadas. As zonas da chama so: Zona Neutra (
uma zona fria e, portanto, no deve ser utilizada para Flambagem), Zona Redutora e Zona
Oxidante (so zonas onde j ocorre a combusto e, portanto, j podem ser usadas para a
Flambagem).
20)
ao acender o Bico de Bunsen, verificar se no h vazamento de gs ou substncias
inflamveis (lcool, ter, acetona, ) por perto;
21)
tubos de ensaio e placas de Petri com meios de cultura, inclusive aqueles com crescimento
de microrganismos s podero ser abertos nas proximidades da chama para evitar contaminao;
22)
tubos de ensaio e placas de Petri devem ser manipulados adequadamente e NUNCA se
deve colocar o tampo de algodo sobre a bancada;
23)
transportar e manter os tubos de cultura (tubos de ensaio) em uma estante apropriada para
evitar acidentes e contaminaes de pessoas e ambiente, NUNCA colocar os tubos no bolso do
jaleco ou deitados sobre a bancada;
24)
manipular culturas de bactrias e fungos com muito cuidado;
25)
manipular as culturas de fungo rapidamente para evitar a disseminao de suas estruturas
reprodutivas (esporos) no ambiente do laboratrio;
26)
identificar de maneira clara e completa os materiais particulares (por exemplo: tipo de
amostra, data, nome da equipe, turma, mtodo, meio de cultivo, microrganismo inoculado, entre
outras informaes pertinentes);
27)
todo material contaminado deve ser obrigatoriamente esterilizado antes do descarte;

110

28)
todo material deve ser pipetado com cuidado, lentamente e com peras especficas;
29)
nunca pipetar com a boca qualquer que seja a natureza da soluo (mesmo que seja
gua);
30)
em caso de quebra ou derramamento de culturas, cobrir toda a rea com toalhas de papel
e derramar sobre elas o lquido desinfetante disponvel no laboratrio. Aps 15 minutos, remover
as toalhas e descart-las de forma indicada pelo professor;
31)
relatar imediatamente ao professor todo e qualquer acidente, ferimento, cortes, ocorridos
durante a aula;
32)
colocar, ao final de cada aula, todas as culturas e materiais no local indicado pelo
professor;
33)
falar claramente, manter ateno constante nas aes executadas, evitando
movimentao e conversas desnecessrias que possam causar distraes e provocar acidentes;
34)
ao sair do laboratrio fechar os registros de gs e as torneiras, desligar as luzes e
equipamentos (devidamente limpos), limpar todo o material e organiz-lo para equipes de trabalho
posteriores;
35)
trabalhar atentamente e com responsabilidade!!!

111

Materiais usados nos Laboratrios de Microbiologia

Os materiais utilizados nos Laboratrios de Microbiologia podem ser classificados da
seguinte forma:
- Conjunto de uso do aluno
- Vidrarias
- Acessrios
- Equipamentos
Faz-se necessrio conhecer suas utilidades, caractersticas especficas e seu manuseio,
para utiliz-los de maneira correta no controle microbiolgico.
1. CONJUNTO DE USO DO ALUNO (Material bsico):
Cada aluno deve portar um jaleco (avental), uma caneta marcadora para vidraria (caneta
para retroprojetor pode substituir), e um caderno de laboratrio para anotaes dos experimentos.
O jaleco no deve ser de material semi-sinttico (bastante inflamvel) e sim de algodo.
2. VIDRARIAS:
2.1 Tubo de cultura ou de ensaio:
So tubos de vidro, sem borda ou com tampa de plstico rosquevel. Seu tamanho pode variar de
acordo com o trabalho a ser realizado. So utilizados no cultivo de microrganismos em pequeno
volume de meio de cultura, trazendo a vantagem de economizar meio e espao fsico.
2.2 Placas de Petri
So recipientes redondos, de vidro ou plstico, com tampa rasa. Geralmente recomendado
determinar-se o seu dimetro e altura, de acordo com o tipo de trabalho a ser realizado. As mais
usadas medem cerca de 100 mm de dimetro por 10 mm de altura. Servem para conter meio de
cultura slido; Sua superfcie extensa facilita o isolamento de espcies microbianas distintas.
2.3 Pipetas graduadas (sorolgicas):
So utilizadas para diluies, inoculaes, distribuies de meio, etc. Em microbiologia estas
pipetas devem ser esterilizadas com uma poro de algodo hidrfobo na parte superior. As
pipetas para uso com substncias qumicas devem ser separadas das microbiolgicas. As pipetas
microbiolgicas so usadas preferencialmente com dispensadores automticos.
2.4- Pipetas de Pasteur:
So tubos de vidro ou polipropileno, no graduados, estirados em capilar. Servem para
transferncia de pequenos volumes de lquidos. Podem ser usadas com uma pequena pera de
borracha na extremidade superior (tetina).
2.5- Ala de Drigalsky:
obtido pela manipulao de uma vareta de vidro chama do maarico. Serve para espalhar
suspenses de microrganismos na Placa de Petri contendo meio de cultura slido. Deve ser
flambada chama antes e aps o uso.
2.6- Lminas de vidro:
So de vidro claro e transparente, com formato retangular. So utilizadas para exame dos
microrganismos em microscpio ptico.
2.7- Lminas escavadas:
uma lmina especfica, usada no ensaio em gota pendente, onde o material observado
suspenso em uma gota de lquido. Utilizada na observao da mobilidade dos microrganismos.
2.8- Lamnulas:
So pequenas lminas de vidro transparente, quadradas, finas, destinadas a cobrir as
preparaes contidas nas lminas, nos ensaios a fresco. Tambm so usadas para o preparo de
lminas fixadas para uso por longos perodos.
2.9- Hematocitmetro de Newbauer:
Lmina de contagem ou cmara de Newbauer. So escavadas, milimetradas e permitem contar o
nmero de clulas contidas em um volume determinado de suspenso microbiana.
2.10- Frascos de Cultivo Microbiano:
De vidro borossilicato e tampa rosqueada de polipropileno, autoclavvel. So vidrarias utilizadas
para anlises de gua e alimentos.

112

2.11- Erlenmeyer:
um frasco em balo, usado como recipiente no laboratrio. Feito de material de vidro, plstico,
policarbonato transparente ou polipropileno transparente, ideal para armazenar e misturar
produtos e solues, cultivo de organismos e tecidos e em titulaes.
2.12- Garrafa de Roux:
Garrafas achatadas usadas para multiplicao de clulas (cultivo) e de esporos fngicos.
2.13-Bquer
Recipiente usado para experimentos ou misturas. Pode ser feito de vidro, plstico, policarbonato
transparente ou polipropileno transparente. Pode ser usado, de modo grosseiro, para realizar
medidas, pois impreciso.
2.14- Tubos de Durham:
So tubos de vidro pequenos e cilndricos. Servem para captar o gs formado em uma
fermentao.
2.15-Termmetros:
So utilizados em estufas microbiolgicas, de secagem e esterilizao, banhos de gua (banhosmaria), etc. Deve-se dar preferncia a termmetros de lcool (bulbo vermelho).
2.16 Basto de vidro
Utilizado para auxiliar na dissoluo de sal, agitaes e na transferncia de um lquido de um
recipiente para outro, evitando perdas.
2.17 Tubos Capilares
um tubo de vidro de dimenses muitssimo mais pequenas. Tem esta designao uma vez que
s se podem introduzir no seu interior substncias que ocupem muito pouco volume semelhante
ao de um capilar. So usados em experincias que envolvam uma grande preciso e rigor e usam
quantidades microscpicas de substncias.
3. ACESSRIOS:
3.1 Bico de Bnsen:
um aquecedor a gs com chama, cuja temperatura varia de acordo com a regulagem. suprido
com gs liquefeito de petrleo (GLP) e proporciona uma chama que permite a realizao da
manipulao das anlises microbianas. Deve-se verificar com freqncia se no h vazamentos
de gs nas conexes.
3.2 Cabo de Kolle:
um cilindro metlico, contendo um material isolante trmico na extremidade, usado para
manipulao microbiana da ala de platina (ou nquel-cromo). Na outra extremidade metlica h
um orifcio onde colocada a ala ou agulha que so fixadas mediante encaixe rosquevel,
utilizado como suporte para este fim.
3.3 Ala de Platina e agulhas:
um fio de platina ou outra liga metlica, medindo aproximadamente cinco centmetros,
recurvado em uma de suas extremidades. adaptado ao cabo de Kolle. Este material utilizado
para transferir inculos slidos ou em suspenso. A agulha um fio de platina ou de outra liga,
que fixado ao cabo de Kolle, utilizada para semear meio slido em profundidade.
3.4 Esptulas e pinas:
Estes utenslios so normalmente produzidos em ao inoxidvel. A esptula utilizada para
pesagem de pequenas massas, enquanto a pina para manipulao de lminas, lamnulas, etc...
3.5 Grampo de madeira:
Utilizado para segurar e prender tubos de ensaio.
3.6 Lamparina:
Utilizada para aquecer pequenas coisas em laboratrio, que no exijam temperaturas muito altas,
por meio da combusto do lcool.
3.7 Pera de suco:
usada para auxiliar nos procedimentos de pipetagem ao ser acoplada as pipetas.
3.8 Tetina:
Instrumentos de borracha para retirar lquidos do interior de frascos com pipetas Pasteur.
3.9 Pisseta (Pissete ou Frasco Lavador):
Com jatos de lquido dirigido, utilizado para lavagem de precipitado, cristais, recipientes e para

113

completar e aferir volumes.

3.10 Tampo de algodo e gaze (chuchu):
Tampes de diversos tamanhos que so utilizados para fechar vidrarias como erlenmeyers e
tubos de ensaio para proceder a autoclavagem e/ou evitar o contato com outros meios de
contaminao (como o ar, por exemplo).
3.11 Barra magntica (peixinho):
Utilizada dentro de recipientes de vidro (erlenmeyers, bales e bqueres) que so colocados em
agitadores magnticos. Por meio da sua agitao, lquidos e slidos podem ser misturados de
modo mais homogneo.
3.12 Swab:
um primo do cotonete, s que feito com uma haste de madeira com uma das pontas envoltas
em algodo estril. O "swab" inteiro esterilizado em autoclave e usado para coletar amostras de
material para culturas de fungos e bactrias.
3.13 Estilete:
Formado por um cabo e uma lmina. Utilizado para realizar pequenos cortes em estruturas e
facilitar a visualizao em lupas e microscpios.
3.14 Escovas:
Usadas para limpeza de tubos de ensaios e outros recipientes de vidro.
4 EQUIPAMENTOS UTILIZADOS:
4.1- Agitador do tipo rotatrio (Shaker):
munido de uma plataforma onde os recipientes contendo o meio lquido so fixados O mesmo
gira de modo circular, agitando o meio continuamente durante a incubao e tambm expondo
maior superfcie do meio fase gasosa.
4.2- Contador de colnias:
utilizado para contagem de colnias em Placa de Petri. constitudo de um suporte onde
colocada a placa e acima desta, em distncia definida, situa-se uma lente (lupa) que possibilita o
aumento de 1,5 vezes. Pode acompanhar uma caneta para contagem. Quando o equipamento
est funcionando, a placa iluminada, permitindo assim maior nitidez e realce das linhas que
subdividem o suporte.
4.3 Estufa incubadora (Microbiolgica):
um tipo especfico de estufa que apresenta alm da porta metlica, uma porta de vidro.
Apresenta um sistema de aquecimento controlado por resistncia eltrica. O aquecimento
controlado atravs de um termostato e a temperatura acompanhada com termmetro analgico ou
digital. A temperatura no deve ter uma variao superior 0,5C. Para determinar a
temperatura, coloca-se um termmetro com o bulbo submerso em lquido (glicerina, gua, etc.)
para maior homogeneidade da medida. Esse equipamento utilizado como auxiliar no
crescimento e reproduo dos microrganismos, uma vez que fornece a temperatura adequada a
cada espcie microbiana.
4.4- Incubadora de banho de gua (banho-maria):
um equipamento indispensvel para realizaes dos ensaios de coliformes termotolerantes
(44,5C 0,2C). O mesmo dotado de um termmetro, termostato e tampa para o controle de
temperatura do banho.
4.5- Estufa de Esterilizao:
um tipo especfico de estufa que apresenta um sistema de aquecimento controlado por
resistncia eltrica, munida de termostato e termmetro para o controle de temperatura. Em
geral este equipamento utilizado para esterilizar vidrarias.
4.6- Potencimetro;
um equipamento muito utilizado no laboratrio de Microbiologia para se determinar o pH dos
diferentes tipos de meios de culturas e solues tampo. constitudo por eletrodos, botes de
ajuste e dotado de um sistema eletrnico capaz de fornecer leituras diretas com exatido de
0,1 unidades de pH.
4.7- Balanas:
So destinadas a pesagens das diferentes substncias usadas no preparo dos vrios tipos de
meios de cultura, solues e corantes. Podem ser analgicas ou digitais. As balanas devem ser

114

mantidas sobre uma base slida protegidas de vibraes, e tambm de umidade e mudanas
bruscas de temperatura.
4.8- Autoclave:
um equipamento destinado esterilizao pelo calor mido (vapor dgua sob presso).
Normalmente, so utilizados para esterilizar guas de diluies, meios de cultura que suportem
temperaturas elevadas (115-120C), materiais contaminados que vo ser descartados e outros. O
autoclave de laboratrio pode ser do tipo horizontal ou vertical, contendo os seguintes acessrios:
caldeira cilndrica hermeticamente fechada por uma tampa de bronze ou cobre, dotada de
manmetro, vlvula de escape de ar e de segurana. Em seu interior existe uma cesta metlica
(mvel) onde so colocados todos os materiais a serem esterilizados. empregado o uso de
bioindicadores ou fitas de controle para se testar a eficincia deste equipamento.
4.9 Geladeiras e Congeladores (Freezers):
As geladeiras so utilizadas para a conservao de meios de cultura estreis, solues e
amostras de contra-prova. As culturas microbianas e solues no devem ser colocados no
mesmo equipamentos que as amostras. Jamais poder guardar refeies, lanches, bebidas ou
qualquer outro alimento que ir ser consumido. Se contiver material com risco biolgico dever ser
identificada com o pictograma adequado. Culturas vivas no devem ser congeladas. A verificao
diria da temperatura regra geral de controle destes equipamentos.
4.10 Agitador Magntico:
munido de uma plataforma metlica onde o recipiente contendo o meio lquido e uma barra
magntica revestida de material inerte colocado. O mesmo gira barra magntica de modo
circular, agitando o meio continuamente durante a incubao e tambm expondo maior superfcie
do meio fase gasosa,
4.11 Microscpio tico:
Equipamento utilizado para o estudo dos microrganismos. Os equipamentos mais usados
permitem o aumento de at 1.250 vezes e podem ser monocular ou binocular. Deve-se ter
cuidado para no utilizar preparaes a fresco com a objetiva de imerso.
4.12 Auxiliar de Pipetagem (pipeting aide):
Equipamento utilizado para pipetar lquidos viscosos tais como meios de cultura e culturas
microbianas. As pipetas devem ter uma proteo de algodo hidrfobo para proteger o auxiliar de
possveis contaminaes.
4.13 Cabines de Fluxo Laminar Horizontal (A) e Vertical (B):
As cabines de fluxo laminar podem ser horizontais ou verticais. So usadas para a manipulao
de materiais estreis como meios de cultura esterilizados, amostras de materiais estreis
(solues injetveis, nutrio parenteral, etc), culturas puras de microrganismos,.... As cabines de
fluxo laminar horizontais no devem ser usadas para materiais muito contaminados ou culturas
puras de microrganismos, pois o fluxo de ar direcionado no sentido do operador.
4.14 Lupa:
Instrumento ptico munido de uma lente com capacidade de criar imagens virtuais ampliadas.
utilizada para observar com mais detalhe pequenos objetos ou superfcies.
4.15 Espectrofotmetro:
Determinar a concentrao de uma espcie em soluo a partir do grfico da variao de
absorvncia (ou transmitncia) em funo da concentrao de vrias solues-padro.
4.16 Destilador
equipamento utilizado para a destilao de gua
4.17 Agitador mecnico
Promove agitao mecnica em fluido, lquidos semi-viscosos e material em suspenso atravs
de movimento circular de hlices.
4.18 Micro-ondas:
Utilizado para aquecer solues.
4.19 Meios de cultura
Utilizados para o crescimento e manuteno de microrganismos.
4.20 Corantes
As solues corantes so utilizadas para preparao de microrganismos para a observao
microscpica.

115

4.21 Solues Desinfetantes:

As solues desinfetantes so utilizadas para antissepsia das mos (lcool 70% m/m), ou
desinfeco das bancadas (hipoclorito de sdio 2,5%, lcool 70% m/m ou lcool 70% m/m+ Iodo
0,1-0,5% m/v), ou ainda para descarte de resduos lquidos e de pipetas contaminadas (no usar
soluo inflamvel com lcool 70%). Antes de iniciar qualquer atividade as bancadas devem ser
desinfetadas e providenciado recipiente com soluo de hipoclorito de sdio para descarte das
pipetas. As solues podem ser armazenadas em pissetas plsticas.
Exerccios -Qual o nome dos materiais e equipamentos das figuras?

116

117

Microscopia
1. Introduo
Os microrganismos so seres vivos muito pequenos. O olho humano incapaz de v-los
de forma clara e individualizados. Para observ-los, preciso aument-los, o que se consegue
com o uso de um microscpio ptico composto.
O microscpio ptico composto ou microscpio de luz um instrumento de preciso que
permite a visualizao de microrganismos. Ele se constitui, basicamente, de uma parte mecnica
e de uma parte ptica.
1.1 Parte mecnica
A parte mecnica de um microscpio ptico composto representada pelo corpo ou brao
do microscpio, que se encontra apoiado pela extremidade inferior em uma base metlica de
tamanho e peso suficientes para assegurar o equilbrio do aparelho.
A extremidade superior do brao
articula-se com um tubo metlico conhecido
como canho que suporta as lentes. O
parafuso
macromtrico
possibilita
deslocamentos rpidos e de grande
amplitude, enquanto que o micromtrico se
restringe a pequenos movimentos.
Na parte inferior do tubo do
microscpio, so colocadas as objetivas.
De nmero varivel, elas so rosqueadas
em um dispositivo mvel especial
denominado revlver que permite o
intercmbio das objetivas. Entre o canho e
a base do microscpio, existe uma
plataforma metlica chamada mesa ou
platina do microscpio.
Sobre a platina colocada a lmina com a preparao a ser examinada, que ser fixada
por meio de presilhas, para que permanea imvel. Para correr todo o campo do microscpio,
existe um dispositivo especial denominado charriot que, por intermdio de dois parafusos, permite
o deslocamento da preparao.
1.2 Parte ptica
A parte ptica de um microscpio de luz constitui-se nas lentes e no sistema de iluminao.
As lentes so separadas da seguinte forma:
- lentes oculares: so adaptadas na extremidade superior do tubo do microscpio. atravs
delas que o observador olha. A ocular geralmente produz aumentos de 10x. H oculares que
produzem aumentos de 5x, 15x e 20x.
- lentes objetivas: so constitudas por um conjunto de lentes que se acham dispostas na
extremidade inferior do tubo do microscpio. A maioria dos microscpios possui trs objetivas
(pequena, com aumento de 4x; mdia, com aumento de 10x; e grande, com aumento de 40x) e
uma objetiva de imerso de 100x;
* objetiva de imerso: d maior aumento e permite ver o objeto com mais nitidez ao se
colocar uma gota de leo de cedro sobre a preparao e baixar a objetiva sobre a lmina, de
forma que esse lquido denso se interponha entre a objetiva e o objeto a ser examinado. Nesse
caso, os raios luminosos no sofrem desvio, pois o ndice de refrao do leo igual ou muito
prximo ao do vidro.
O aumento final da preparao dado pelo produto entre o valor da objetiva e o
valor da ocular.
Chama-se poder de resoluo de uma objetiva a capacidade de ver nitidamente o menor
espao compreendido entre dois pontos. O olho humano por exemplo, geralmente no consegue
distinguir por dois pontos que estejam separados por uma distncia menor que 0,1 mm (100 m).

118

Os bons microscpios pticos podem superar bastante esse limite, distinguindo em at 0,2 m.
O sistema de iluminao representado pelo condensador, que dirige os raios de luz para
o objeto, e por uma fonte de luz que pode ser direta ou refletida por um espelho. O condensador
possui um diafragma com a finalidade de controlar a quantidade de luz desejada. A refrao o
desvio da luz quando ela passa de um meio para outro de densidades diferentes.
1.3 Unidades de medida
Como a estrutura dos microrganismos muito pequena, ns necessitamos de medidas
especiais para elas:
- Micrmetro (m): que equivale milsima parte do milmetro. 1 m = 10-3 mm
- Nanmetro (nm): que equivale milsima parte do micrmetro. 1 nm = 10-3 m
- Angstron (A): que equivale dcima milsima parte do micrmetro. 1 A = 10-4 m
O micrmetro mais utilizado em microscopia ptica (m.o.), enquanto que o nanmetro e o
angstron so mais utilizados em microscopia eletrnica (m.e.)
2. Como usar o microscpio
Posio de descanso
Ao iniciar o trabalho o aparelho deve ser encontrado na sua posio de descanso: coberto
com a capa protetora, platina totalmente abaixada, lente objetiva 4x (a menor) apontada, boto
liga-desliga desligado, tomada sem conexo com a luz.
Incio do trabalho
1)
retirar a capa protetora do aparelho
2)
ligar o microscpio tomada
3)
ligar o boto liga-desliga
4)
regular a intensidade luminosa
5)
abrir o grampo
6)
colocar a lmina
7)
fechar o grampo
8)
erguer a platina at o ponto mximo usando o boto (ou parafuso) macromtrico
9)
regular a abertura interpupilar
10)
abaixar a platina, usando o macromtrico at ver o objeto da lmina em foco
11)
ajustar a focalizao com o boto micromtrico
12)
trocar para a lente objetiva de aumento imediatamente superior (10x)
13)
ajustar a focalizao somente com o boto micromtrico
14)
trocar para a lente objetiva de aumento imediatamente superior (40x)
15)
ajustar a focalizao somente com o boto micromtrico
16)
se necessrio, colocar uma gota de leo de imerso e trocar para a lente objetiva de
aumento imediatamente superior (100x)
17)
ajustar a focalizao somente com o boto micromtrico
Vale ressaltar que o aumento total dado pela multiplicao dos valores da objetiva e da
ocular. Os itens compreendidos entre 12 e 17 s devero ser feitos de necessrio.
3. Objetivos
- Reconhecer as partes e aprender a manusear o microscpio ptico;
- Aprender a focalizar preparados no microscpio;
- Observar atentamente os cuidados a serem tomados com o microscpio de luz;
- Observar e reproduzir na forma de desenhos a morfologia dos objetos examinados durante a
aula.
4. Materiais
Lminas; microscpio ptico composto; leo de cedro (leo de imerso); papel absorvente.
5. Mtodos
- Reconhecer as partes do microscpio;
- Focalizar as lminas, repetindo a focalizao tantas vezes quantas forem necessrias;
- Observar a morfologia dos objetos examinados.

119

6. Cuidados com o microscpio aps o uso

- Distanciar a objetiva da lmina;
- Retirar a lmina da platina;
- Limpar todas as lentes com papel absorvente macio;
- Caso tenha sido utilizado leo de imerso, limpar a objetiva de imerso com papel absorvente;
- Colocar a platina na posio totalmente abaixada;
- Colocar a menor lente objetiva apontada;
- Desligar o sistema de iluminao;
- Retirar o aparelho da tomada;
- Recobrir o aparelho com a respectiva capa protetora.
7. Aula prtica
Focalize as estruturas em cada lmina e esquematize a morfologia observada no espao
correspondente.

Objeto:_________________________
Aumento final:___________________

Objeto:_________________________
Aumento final:___________________

Objeto:_________________________
Aumento final:___________________

Objeto:_________________________
Aumento final:___________________

120

PARA CASA
1) Descreva o procedimento de focalizar com leo de imerso.
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
2) Qual a finalidade do leo de cedro na focalizao em imerso?
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
3) Como se calcula o aumento final do objeto aps a focalizao?
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
4) Qual o aumento final obtido quando:
a) so utilizadas: uma objetiva de 100x e uma ocular de 10x?
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
b) so utilizadas: uma objetiva de 10x e uma ocular de 10x?
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
c) so utilizadas: uma objetiva de 40x e uma ocular de 10x?
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
5) O que poder de resoluo de uma objetiva?
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
6) Qual a finalidade do condensador?
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
7) Qual a finalidade do diafragma?
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________

121

Averiguao da presena de microrganismos no ambiente e experimento de Price

1. Introduo
O meio aqutico foi, provavelmente, o ambiente de origem dos microrganismos que,
posteriormente, se especializaram e colonizaram o ambiente terrestre. Hoje, eles so encontrados
em toda parte, em suspenso ou assentados com poeira em vrias superfcies. Como os
microrganismos esto presentes nas partculas de poeira, so passveis de entrar no organismo
do indivduo cada vez que se respira. O ar deposita-se nos cabelos, nas roupas, na pele e nas
mucosas. Do ar passam para o alimento e para a bebida. Felizmente, na sua maioria, os
microrganismos so incuos ou benficos. So relativamente poucos os que causam prejuzos ao
homem. funo do microbiologista estimular e otimizar o desenvolvimento de microrganismos
benficos e inibir aqueles que causam doenas ou deterioram os alimentos e o ambiente.
As mos, por outro lado, constituem um dos elos mais importantes na cadeia da infeco
cruzada. A quantidade de microrganismos constituintes da microbiota normal da pele deve ser
reduzida, de modo a eliminar possveis microrganismos patognicos a presentes.
A desinfeco definida como a eliminao parcial dos microrganismos presentes em um
determinado ambiente. Os mtodos de desinfeco visam, principalmente, destruir as formas
microbianas patognicas ao homem, atravs da utilizao de um agente desinfetante ou agente
microbiano. Os diversos tipos de agentes antimicrobianos poderiam ser divididos em trs grupos:
agentes fsicos, agentes qumicos e agentes quimioterpicos. O grau de eficincia de cada agente
dependente da concentrao, das condies do ambiente e do estado das clulas.
2. Objetivos
Reconhecer materiais, equipamentos e normas do laboratrio de microbiologia;
Averiguar a presena de microrganismos no ambiente;
Averiguar a presena de microrganismos na pele humana e as alteraes no seu nmero e na sua
diversidade com as prticas de higienizao das mos.
3. Materiais
3.1 Meios de cultura e solues
gar batata dextrosado (BDA batata dextrose gar)
lcool 70%
Sabonete lquido
3.2 Equipamentos e utenslios
Placas de Petri
Canetinha
Filme transparente de PVC (plstico filme)
Lamparina
Papel toalha

Fsforo
Estufa bacteriolgica
Cronmetro
Rgua

4. Procedimento
4.1 Verificao de contaminao ambiental
Pegar duas placas de Petri com meio de cultivo e identific-las com nome do grupo, data e
nmero da placa (1 ou 2 que identificar a condio de inoculao) na parte de trs da placa
com canetinha, de modo que no comprometa a visualizao dos resultados (seguindo a
circunferncia da placa);
Remover o filme transparente de PVC ao redor de uma placa de Petri com BDA e exp-la em uma
determinada condio preestabelecida:

122

GRUPO 1:
placa 1: ar deixar a placa com meio de cultura exposta ao ar por 15 minutos no (a) __________
(escolher um local no Instituto)
placa 2: pele passar os dedos em vrios pontos da superfcie do meio de cultivo.
GRUPO 2:
placa 1: ar deixar a placa com meio de cultura exposta ao ar por 15 minutos no (a) __________
(escolher um local no Instituto)
placa 2: cabelo agitar vigorosamente os cabelos em direo superfcie da placa.
GRUPO 3:
placa 1: ar deixar a placa com meio de cultura exposta ao ar por 15 minutos no (a) __________
(escolher um local no Instituto)
placa 2: respirao inocular na placa, tossindo ou espirrando, diretamente sobre a superfcie do
meio de cultivo.
GRUPO 4:
placa 1: ar deixar a placa com meio de cultura exposta ao ar por 15 minutos no (a) __________
(escolher um local no Instituto)
placa 2: cabelo inocular na placa falando diretamente sobre a superfcie do meio de cultivo.
Colocar filme transparente de PVC ao redor das placa de Petri;
Utilizar como controle para o experimento uma placa com meio de cultivo estril fechada;
Fazer a incubao das placas a 35 oC, por 7 dias. As placas devem ser incubadas invertidas, para
evitar que o meio se desidrate e que a gua de condensao caia sobre a superfcie do meio;
Aps o perodo de incubao, anotar a presena e a diversidade morfolgica das colnias
microbianas que cresceram sobre a superfcie do meio de cultivo.
4.2 Experimento de Price
Pegar uma placa de Petri com meio de cultivo (BDA);
Dividir a parte inferior da placa de Petri em quatro partes (A, B, C e D) e identificar a placa,
anotando na tampa a data, o grupo e as iniciais do nome de quem vai fazer o teste;
Escolher um dedo da mo e, sem lavar, coloc-lo em contato com a superfcie do meio de cultivo
na rea da placa assinalada com A;
Lavar as mos com sabonete, vigorosamente, secar ao ar e, em seguida, colocar o mesmo dedo
em contato com a rea B;
Desinfetar as mos pr-lavadas com lcool 70%, secar ao ar e colocar o dedo em contato com a
rea C;
Manter a rea D como controle (testemunha), no inoculada;
Incubar a placa a 35oC, por 48 horas;
Avaliar os resultados, observando os tipos e a abundncia de colnias em cada parte.

Testemunha

Dedo sem lavar

Dedo desinfetado

Dedo lavado

123

RELATRIO:
1) Em relao s placas com meio de cultivo BDA inoculadas de diferentes formas pelos 4 grupos,
enumere e caracterize as colnias que cresceram na superfcie das placas, quanto a tamanho, cor
e forma, nos esquemas a seguir:
GRUPO 1 PLACA 1
GRUPO 1 PLACA 2

GRUPO 2 PLACA 1

GRUPO 2 PLACA 2

GRUPO 3 PLACA 1

GRUPO 3 PLACA 2

GRUPO 4 PLACA 1

GRUPO 4 PLACA 2

124

2) Em relao s placas de Petri do experimento de Price, esquematize o resultado obtido:

Grupo / nome
do aluno

Tratamentos
Avaliaes

A
T

Grupo 1

No de colnias

Grupo 2

No de colnias

Grupo 3

No de colnias

B
B

C
B

D
B

Grupo 4
No de colnias
T = total, F = fungos, B = bactrias
3) Interprete o resultado do experimento de Price do seu grupo.
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
4) O que ocorreu com a rea de controle da placa de Petri usada no Experimento de Price
(onde o dedo no foi colocado)? Justifique seus resultados.
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______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
5) O que ocorreu com a placa de Petri usada como controle no experimento Verificao de
contaminao ambiental? Justifique seus resultados.
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
6) Qual a utilidade do bico de Bunsen ou da lamparina no laboratrio de Microbiologia?
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________
______________________________________________________________________________

125

Preparo de materiais e vidrarias para esterilizao em autoclave

1. Introduo
O acondicionamento correto de materiais e de vidrarias de vital importncia para a
esterilizao eficiente em autoclave. O sucesso das anlises depende da obteno de materiais
livres de contaminao iniciais, a fim de que se possa determinar apenas o microrganismo
presente em determinada amostra. Assim, pipetas, placas de Petri, tubos de cultura e demais
instrumentos usados em microbiologia devem estar corretamente embalados, para que, depois de
esterilizados, possam ser guardados sem que sofram nenhum tipo de contaminao subsequente.
Placas e pipetas devem ser acondicionadas em papel de embrulho, ou em papel kraft, e
identificadas antes da esterilizao (Fig. 1 e 2). Tubos de ensaio e erlenmeyers (bales de fundo
chato) com meio de cultura devem possuir tampo de algodo e gaze (boneca / chuchu) obtido
por meio da tcnica de embuchamento (Fig. 3 e 4). Em seguida, as bonecas de gaze devem ser
cobertas por uma coifa, feita com um pedao de papel kraft, que ser amarrada com um fio ou
elstico (Fig. 4).
Para testar a eficincia da esterilizao, pode ser realizado um processo qumico com uma
fita prpria para autoclave (fita adesiva; Fig. 5) ou um processo biolgico, com uma ampola
contendo Bacillus stearothermophillus (um bastonete esporulado muito resistente ao calor; Fig. 6).
Aps a esterilizao, a ampola com o microrganismo incubada em estufa regulada a 37 oC, por
24 horas. Se no houver mudana na cor inicial (rosa) da ampola, a esterilizao foi eficiente.
Caso ocorra mudana da cor inicial, de rosa para amarelo, a esterilizao no foi eficiente (Fig. 6).
A mudana da cor inicial rosa para amarelo indicar ocorrncia de fermentao de carboidratos
existentes no lquido da ampola, demonstrando, portanto, que o microrganismo continua vivo.
Compreende-se por esterilizao a completa destruio de qualquer organismo vivo. Essa
destruio pode ser realizada pelo chamado controle de microrganismos, sendo que o mais
frequentemente usado o que utiliza o calor como agente. O emprego de calor se faz por meio de
flambagem e estufa (calor seco) e de gua fervente, autoclavagem e tindalizao (calor mido). O
calor seco provavelmente exerce a maioria de seus danos pela oxidao das molculas. O calor
mido destri os microrganismos principalmente pela desnaturao proteica, pela presena de
molculas de gua, que ajudam a romper as pontes de hidrognio, outras interaes fracas que
mantm as protenas em suas conformaes tridimensionais, alm de romperem membranas
lipdicas.
1.1 Calor seco
O calor seco (como forno ou estufa) penetra nas substncias mais lentamente que o calor
mido (vapor). , geralmente, usado para esterilizar objetos de metal e vidro, e o nico meio
satisfatrio para esterilizar leos e ps. Os objetos so esterilizados por calor seco quando
submetidos a 171 oC por 1 hora, a 160 oC por 2 horas ou mais, ou a 121 oC por 16 horas ou mais,
dependendo do volume.
Uma chama aberta (flambagem) a forma de calor seco usada para esterilizar, pela
incinerao, alas de inoculao, bocas de tubos de ensaio e para secar o interior de pipetas.
Quando os objetos forem flambados no laboratrio, deve-se evitar a formao de cinzas flutuantes
e aerosis (gotculas liberadas no ar). Essas substncias podem se constituir em um meio de
espalhar agentes infecciosos, se os organismos presentes no forem mortos pela incinerao
como pretendido. Por essa razo, incineradores de ala especialmente desenhados, com
gargantas fundas, so frequentemente usados para esterilizar alas de inoculao.
1.2 Calor mido
O calor mido um agente fsico amplamente usado. A gua fervente destri clulas
vegetativas da maioria das bactrias e dos fungos e inativa alguns vrus. Entretanto, no
eficiente na destruio de todos os tipos de esporos.
O processo de autoclavagem utiliza gua aquecida sob presso. Seu ponto de ebulio
elevado e, assim, temperaturas acima de 100 oC podem ser alcanadas. Isso normalmente
obtido por meio de uma autoclave com presso de 15 lb/pol 2 mantida por 15 a 20 minutos,
dependendo do volume da carga. Nessa presso, maior do que a atmosfrica, a temperatura

126

alcana 121 oC, que alta o suficiente para matar os esporos, como tambm organismos
vegetativos, e para romper a estrutura dos cidos nucleicos nos vrus.
Na tindalizao, o material submetido a trs sesses de exposio a vapor de gua a
100 oC, durante 20 a 45 minutos; durante 45 minutos; e durante 20 a 45 minutos, com um tempo
de repouso entre elas de 24 horas. Consegue-se a esterilizao visto que os esporos germinam
entre duas sesses e depois so destrudos. Essa tcnica usada para solues aucaradas ou
que contenham gelatina.
2. Objetivo
- Aprender a preparar materiais de forma correta para esterilizao;
- Observar o funcionamento de uma autoclave.
3. Materiais
1) placas de Petri
2) pipetas
3) erlenmeyer
4) bquer
5) tubos de ensaio

6) papel kraft
7) canetinhas
8) fita crepe
9) tesoura
10) algodo

11) gaze
12) barbante
13) elstico
14) folha de papel A4
15) autoclave

4. Mtodos
4.1 Preparao da vidraria para esterilizao
Placas de Petri
- Separar as placas limpas e secas;
- Embalar as placas (mnimo 4 e mximo 10) para facilitar a estocagem);
- Colocar as placas no centro do papel e comear a embrulh-las firmemente, para evitar a
absoro de umidade em excesso; fechar com fita crepe (Fig. 7).
Pipetas
- Colocar um pedao pequeno de algodo no bocal de cada uma das pipetas;
- Embrulh-las uma a uma, identificando-as de acordo com as orientaes do professor (Fig. 8).
Tubos de ensaio e erlenmeyers
- Preparar os tampes de algodo e gaze de acordo com o tamanho da boca de cada vidraria;
- Colocar os tampes na boca dos tubos de ensaio e dos erlenmeyers de forma que fiquem firmes
mas no muito apertados;
- Colocar um pedao de papel kraft sobre o tampo em cada tubo de ensaio e em cada
erlenmeyer, prender com elstico ou barbante (Fig. 4).
Bqueres
- Colocar um pedao de papel kraft sobre a boca do bquer e prender com elstico ou barbante.
Levar todo o material preparado para o local da esterilizao.
4.2 Esterilizao em autoclave (Fig. 9)
- Observar o nvel da gua, que deve estar at 1 cm abaixo da cruzeta (Fig. 10);
- Colocar o cesto da autoclave;
- Colocar o material a ser esterilizado dentro da autoclave, de acordo com a capacidade do
equipamento;
- Fechar a tampa, apertando os manpulos em cruz;
- Ligar a autoclave na potncia mxima e abrir o registro (vlvula de escape);
- Aguardar a sada do vapor por 3 a 5 minutos, fechando o registro aps esse tempo;
- Alcanada a temperatura de trabalho (121 oC), colocar a chave na posio mdia, ajustando,
quando necessrio, os pesos que controlam a quantidade de vapor;
- Marcar o tempo, que dever ser de 15 a 30 minutos, dependendo do material;
- Terminado o tempo de esterilizao, desligar a autoclave e deixar que o ponteiro do manmetro
atinja a posio zero;
- Abrir o registro aos poucos e aguardar a sada do vapor da autoclave de maneira que ele seja
escoado completamente;

127

- Em seguida, abrir os manpulos em cruz e retirar os materiais, colocando-os em estufa de

secagem, e incubando-os a 100 oC por 30 minutos.
Observaes:

No abrir o registro antes que o manmetro atinja a posio zero, para evitar que o
material esterilizado fique muito molhado e que os papis que o envolvem se rasguem;

Nunca abandonar o local de esterilizao, conferindo sempre a temperatura da autoclave,

e evitando a quebra de materiais e o RISCO DE EXPLOSO.

Fig. 1 Pipetas acondicionadas com

papel kraft

Fig. 2 Placas acondicionadas com

papel kraft

Fig. 3 a) Tubo de ensaio; b) Tubo

de ensaio com boneca

Fig. 4 a) Erlenmeyer com boneca;

b) Erlenmeyer com meio de cultura e coifa

lquido
rosa

lquido
amarelo

Fig. 6 Ampolas de Bacillus stearothermophilus

Fig. 5 Fita crepe para autoclave

a)
Autoclavado;
b)
Noautoclavado

Fig. 7 Placas de Petri sendo embrulhadas com papel kraft

Fig. 10
vertical

Autoclave

Fig. 8 Pipetas sendo

embrulhadas com papel kraft

Fig. 11 Nvel da gua

em 1 cm abaixo da
cruzeta

128

EXERCCIOS TEXTO DA APOSTILA

1) O que esterilizao?
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
2) Por que devemos esterilizar os materiais em microbiologia?
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
3) Quais os dois mtodos para testar a eficincia da esterilizao?
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
4) O que indica a mudana de cor da ampola com Bacillus stearothermophillus?
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
5) Mtodos de esterilizao frequentemente usam o calor. Cite os meios que podem ser empregados.
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
6) Qual a principal diferena entre calor seco e calor mido?
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
7) Descreva o procedimento necessrio para preparar as vidrarias abaixo mencionadas para
esterilizao em autoclave.
- placa de Petri:
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
- pipeta:
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
- erlenmeyer:
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
- bquer:
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
8) Como so feitas e para que servem as bonecas?
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
9) Explique resumidamente o processo de autoclavagem.
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________

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__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
10) Por que se deve esperar sempre que a autoclave escoe todo o vapor (posio zero do manmetro)
antes de proceder a abertura da tampa?
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________

130

131

132

133

134

EXERCCIOS DO LIVRO
1) Qual o significado e a definio de:
- PMT:
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
- TMT:
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
- TRD ou valor D:
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
2) Para que servem o PMT e o TMT?
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
3) O tempo de morte trmica para uma suspenso de endosporos de Bacillus subtilis de 30 minutos
em calor seco e menos de 10 minutos em autoclave. Que tipo de calor mais efetivo? Por qu?
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
4) Se a pasteurizao no atinge a esterilizao, porque o alimento tratado por pasteurizao?
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
5) Preencha a seguinte tabela:
Mtodo de
Temperatura
esterilizao

Tempo

Tipo de calor

Uso
preferencial

Tipo de ao

Autoclave
Ar quente
Pasteurizao
6) Por que os tratamentos pasteurizao clssica, HTST e UHT so chamados de tratamentos
equivalentes?
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
__________________________________________________________________________________
7) Qual dos seguintes mtodos no mata endosporos?
a) autoclave
d) pasteurizao
b) incinerao
e) nenhuma das alternativas
c) esterilizao com ar quente

135

CURIOSIDADE SOBRE ESTERILIZAO COMERCIAL

A esterilizao comercial um mtodo utilizado para destruir endosporos da bactria
Clostridium botulinum e no to rigorosa como a esterilizao completa. A razo que se os
endosporos de C. botulinum so destrudos, ento qualquer outra bactria deteriorante significativa ou
patognica tambm ser destruda.
Para garantir a esterilizao comercial, aquecimento suficiente fornecido ao tratamento 12D
(12 redues decimais), pelo qual uma populao terica de endosporos de C. botulinum ir diminuir
em 12 ciclos logartmicos. Isso significa que se existem 10 12 (1.000.000.000.000) endosporos em uma
lata, aps o tratamento haveria somente 1 sobrevivente. Como 10 12 uma populao supostamente
grande, esse tratamento considerado quase seguro.
Algumas bactrias termoflicas que formam endosporos, possuem endosporos que so mais
resistentes ao aquecimento que os de C. botulinum. Entretanto essas bactrias so termfilos
obrigatrios e, geralmente, sem mantm dormentes em temperaturas abaixo de 45 oC. Logo, elas no
so um problema de deteriorao em temperaturas normais de armazenamento de alimentos
enlatados.

136

O mundo dos fungos

1. Introduo
Tambm conhecidos como bolores, mofos, leveduras, cogumelos, orelhas-de-pau, os
fungos contribuem de forma fundamental para o ciclo da matria nos ecossistemas, pois muitos
so decompositores de matria orgnica, o que gera a reciclagem dos nutrientes. Alguns so
causadores de doenas, outros so comestveis e outros usados na indstria para fabricao de
bebidas e do po. Alguns fungos so venenosos, como o cogumelo branco da espcie Amanita
muscuria, que pode matar uma pessoa, e espcies do gnero Psilocybe, que provocam efeitos
alucingenos semelhantes ao LSD, causando srios danos ao sistema nervoso. Algumas
espcies de fungos vivem em associaes mutualsticas com razes de plantas, formando as
micorrizas. Os fungos tambm podem se associar a algas verdes e a cianobactrias, formando os
liquens, que se instalam em troncos de rvores, rochas, muros, etc. Eles podem ser unicelulares,
como as leveduras, ou pluricelulares, como os fungos filamentosos. Nesta aula prtica, voc ter
oportunidade de observar algumas estruturas dos fungos.
2. Objetivos
- Entender a diversidade dos fungos;
- Observar macroscopicamente e microscopicamente a estrutura dos fungos.
3. Materiais
Exemplares de fungos
(mofos, cogumelos,orelhas de pau,...)
lmina
lamnula
pina

microscpio
lupa
estilete
durex

4. Procedimentos
4.1 Estrutura macroscpica e microscpica de fungos
- Selecione alguns tipos de fungos e observe sua estrutura macroscpica, faa pequenos cortes e
observe as estruturas em uma lupa.
- Para observao microscpica, faa lminas pela tcnica do Imprint e observe no microscpio.

137

5. Resultados e discusso
Estrutura macroscpica e microscpica de fungos
Desenhe os aspectos macroscpicos e as estruturas microscpicas dos fungos que voc
observou. Descreva as principais caractersticas observadas!

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_______________________________________ _______________________________________

_______________________________________ _______________________________________
_______________________________________ _______________________________________

_______________________________________ _______________________________________
_______________________________________ _______________________________________

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138

O mundo dos fungos fermentao

1. INTRODUO
A fermentao alcolica realizada por um fungo unicelular, tambm chamado de fungo da
cerveja ou fermento de padaria, cientificamente chamado de Saccharomyces cerevisiae. A S.
cerevisiae uma levedura que fermenta o acar, produzindo lcool etlico e gs carbnico.
Essa levedura utilizada na fabricao de bebidas alcolicas (vinhos, cervejas, aguardentes, etc.)
e na fabricao de pes - na qual o gs carbnico o responsvel pelas bolhas que tornam a
massa mais macia.
Reao: a levedura S. cerevisiae o agente biolgico da fermentao alcolica, na qual os
acares so transformados em etanol e dixido de carbono, segundo a reao qumica:
C6H12O6 2 C2H5OH + 2 CO2 + energia
Glicose
Etanol
Dixido de carbono
2. OBJETIVO
Observar a reao qumica na fermentao da levedura S. cerevisiae em diferentes propores de
acar (alimento) e de levedura.
3. MATERIAIS E MTODOS
3.1 MATERIAIS
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3.2 MTODOS
Montar o experimento como indicado na tabela a seguir:
Equipe

gua

Acar

S. cerevisiae

50mL

5g

2,5g

50mL

10g

2,5g

50mL

20g

2,5g

50mL

10g

10g

50mL

10g

50mL

2,5g

- Faa a pesagem em balana analtica do acar e da levedura, usando esptula e casinha de

papel alumnio
- Em um erlenmeyer (125 mL) adicione 50 mL de gua destilada e a quantidade de acar, agite
para misturar.
- Feche o erlenmeyer com tampo de algodo e gaze e aquea-o por 15 s no micro-ondas.
- Adicione o fermento biolgico a soluo de gua com acar do erlenmeyer.
- Feche a boca do erlenmeyer com um balo de ar bem ajustado (se necessrio reforce com um
pedao de barbante ou com um elstico).
- Deixe repousar sobre luz direta.

139

- Aguarde o incio do processo de fermentao.

- Agite o frasco e retire uma alquota de leveduras com auxlio de esptula e capilar.
- Faa o esfregao em uma lmina com essa alquota e cubra com lamnula.
- Observe no microscpio.
5. RESULTADOS E DISCUSSO
a) O que aconteceu com os bales de ar quando colocados na boca dos tubos? Por que?
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b) Foi possvel observar alguma alterao na soluo dentro da garrafa?
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c) Explique a importncia do acar colocado na soluo com o fermento biolgico.
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d) Que tipo de reproduo voc pode observar em Saccharomyces?
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e) Explique as diferenas observadas no experimento.
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f) O que aconteceu nos controles? Por que importante montar esses controles?
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g) Explique por que o fermento biolgico faz crescer as massas de pes.

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h) Desenhe a lmina observada e descreva as principais caractersticas.

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6. CONCLUSO
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141

Preparaes Microscpicas a Fresco e Fixadas Simples

Objetivos:
Preparar lminas para observao de microrganismos (bactrias e fungos);
Realizar tcnicas de esfregao, fixao e colorao simples;
Visualizar os microrganismos em microscpio.
Preparaes microscpicas
A perfeita visualizao dos microrganismos e/ou das suas estruturas s possvel se a
preparao estiver adequada. A escolha do tipo de preparao depende da informao desejada e do
microrganismo a ser avaliado. Duas tcnicas gerais so empregadas:
- A fresco
Preparaes deste tipo permitem o exame de organismos nas condies normais de vida e so
preferencialmente utilizados para verificar mobilidade, morfologia (quando a morfologia da clula
distorcida por processos de fixao/colorao), processos fisiolgicos (diviso celular, formao de
esporos). As preparaes a fresco podem ser realizadas com ou sem colorao. Geralmente so
utilizados corantes vitais que no comprometem a viabilidade celular. Ex.: azul de metileno.
- Fixados e corados
As preparaes fixadas e coradas so usadas para verificar as caractersticas morfolgicas dos
microrganismos. As etapas essenciais dessas preparaes so: preparo de esfregao, fixao e
colorao. O esfregao uma camada muito fina de material sobre a lmina que deve ser secada ao
ar. A fixao pode ser feita pela ao do calor e serve para imobilizar os constituintes celulares, ou
seja, para fixar o esfregao pela precipitao ou coagulao de protenas. A colorao pode ser
simples (1 corante, ex.: azul de metileno) ou diferenciais (mais de um corante, ex.: Gram)
Roteiro da aula prtica:
1) Levedura Saccharomyces cerevisae
- flambar rapidamente uma lmina de microscopia nos dois lados, cortando lentamente a chama da
lamparina;
- flambar a ala de platina ao rubro e deix-la esfriar perto da chama;
- tomar o tubo com a suspenso de leveduras, agitar levemente e remover o tampo;
- flambar o tubo de ensaio;
- introduzir a ala de platina no interior do tubo at tocar a suspenso;
- flambar novamente a boca do tubo;
- fechar o tubo com o tampo e colocar na estante;
- pegar a lmina e depositar em seu centro uma gotcula da suspenso;
- pingar uma gota de azul de metileno a pequena distncia da suspenso e, sobre a lmina, colocar
uma lamnula;
- observar ao microscpio na objetiva de 40x.
2) Bactria (material slido)
- flambar rapidamente uma lmina de microscopia nos dois lados, cortando lentamente a chama da
lamparina;
- flambar a ala de platina ao rubro e deix-la esfriar perto da chama;
- tomar a placa com as bactrias e abrir em frente lamparina;
- introduzir a ala de platina no interior da placa at tocar as colnias de bactria;
- fehar a placa de Petri e colocar ao lado;
- colocar no centro da lmina uma pequena gota de soluo fisiolgica com a ala de platina;
- transferir uma pequena alquota da cultura slida com a ala para a lmina e espalhar o material com
movimentos circulares (esfregao);
- cortar lentamente a lmina na chama da lamparina 3 vezes para que o material fique bem aderente
lmina (fixao). A fixao feita do lado contrrio ao esfregao bacteriano;
- cobrir a lmina com o esfregao fixado com o corante azul de metileno e deixar agir por 1 minuto;
- lavar rapidamente com gua;
- secar e colocar uma lamnula;
- observar ao microscpio na objetiva de 100x com leo de imerso.

142

3) Miclio fngico
- flambar rapidamente uma lmina de microscopia nos dois lados, cortando lentamente a chama da
lamparina;
- flambar a agulha de platina ao rubro e deix-la esfriar perto da chama;
- tomar a placa de Petri com o miclio e, com auxlio da agulha, retirar uma pequena poro de miclio;
- fechar a placa;
- pegar a lmina e depositar em seu centro uma poro do miclio;
- pingar uma gota de azul de metileno a pequena distncia da suspenso e, sobre a lmina, colocar
uma lamnula;
- observar ao microscpio na objetiva de 40x.

Resultados
Desenhar e descrever as estruturas observadas nas 5 lminas!
LMINA 1

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LMINA 2

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LMINA 3

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Tcnica de Colorao de Gram.

Objetivos

Preparar lminas para observao de microrganismos (bactrias);

Realizar tcnicas de esfregao, fixao e colorao diferencial de Gram;
Visualizar os microrganismos em microscpio;
Classificar as bactrias segundo o tipo de Gram.
Preparaes microscpicas

A perfeita visualizao dos microrganismos e/ou das suas estruturas s possvel se a

preparao estiver adequada. A escolha do tipo de preparao depende da informao desejada e
do microrganismo a ser avaliado. Duas tcnicas gerais so empregadas:
- A fresco
Preparaes deste tipo permitem o exame de organismos nas condies normais de vida e
so preferencialmente utilizados para verificar mobilidade, morfologia (quando a morfologia da
clula distorcida por processos de fixao/colorao), processos fisiolgicos (diviso celular,
formao de esporos). As preparaes a fresco podem ser realizadas com ou sem colorao.
Geralmente so utilizados corantes vitais que no comprometem a viabilidade celular. Ex.: azul de
metileno.
- Fixados e corados
As preparaes fixadas e coradas so usadas para verificar as caractersticas morfolgicas
dos microrganismos. As etapas essenciais dessas preparaes so: preparo de esfregao, fixao
e colorao. O esfregao uma camada muito fina de material sobre a lmina que deve ser
secada ao ar. A fixao pode ser feita pela ao do calor e serve para imobilizar os constituintes
celulares, ou seja, para fixar o esfregao pela precipitao ou coagulao de protenas. A
colorao pode ser simples (1 corante, ex.: azul de metileno) ou diferenciais (mais de um corante,
ex.: Gram).
Roteiro da aula prtica
1) Bactria (material slido placa de Petri)
- flambar rapidamente uma lmina de microscopia nos dois lados, cortando lentamente a chama da
lamparina;
- flambar a ala de platina ao rubro e deix-la esfriar perto da chama;
- tomar a placa com as bactrias e abrir em frente lamparina;
- introduzir a ala de platina na placa at tocar as colnias de bactria;
- fechar a placa e colocar ao lado;
- colocar no centro da lmina uma pequena gota de soluo fisiolgica com a ala de platina;
- transferir uma pequena alquota da cultura slida com a ala para a lmina e espalhar o material com
movimentos circulares (esfregao);
- secar ao ar;
- cortar lentamente a lmina na chama da lamparina 3 vezes para que o material fique bem aderente
lmina (fixao). A fixao feita do lado contrrio ao esfregao bacteriano;
- corar a lmina pela Tcnica de Gram:
a) na pia, segurar a lmina com uma pina e cobrir a lmina com cristal violeta, deixar agir por
1 minuto;
b) lavar rapidamente a lmina com gua;
c) cobrir a lmina com soluo de lugol e deixar agir por 1 minuto;
d) lavar rapidamente a lmina com gua;
e) lavar a lmina com lcool (etanol) at que no se desprenda mais corante da preparao
(aproximadamente 15 segundos);
f) lavar rapidamente a lmina com gua;
g) cobrir a lmina com soluo de safranina e deixar agir por 30 segundos;
h) lavar rapidamente a lmina com gua;
i) secar e colocar uma lamnula;
- observar ao microscpio na objetiva de 100x com leo de imerso.

144

2) Iogurte
- flambar rapidamente uma lmina de microscopia nos dois lados, cortando lentamente a chama
da lamparina;
- flambar a ala de platina ao rubro e deix-la esfriar perto da chama;
- tomar o bquer com iogurte e introduzir a ala de platina no interior dele at tocar o iogurte;
- transferir uma pequena alquota da cultura com a ala para a lmina e espalhar o material com
movimentos circulares (esfregao);
- secar ao ar;
- cortar lentamente a lmina na chama da lamparina 3 vezes para que o material fique bem
aderente lmina (fixao). A fixao feita do lado contrrio ao esfregao bacteriano;
- corar a lmina pela Tcnica de Gram (descrita anteriormente);
- observar ao microscpio na objetiva de 100x com leo de imerso.
3) Leite fermentado (tipo Yakult)
- flambar rapidamente uma lmina de microscopia nos dois lados, cortando lentamente a chama
da lamparina;
- flambar a ala de platina ao rubro e deix-la esfriar perto da chama;
- tomar o bquer com Leite fermentado (tipo Yakult) e introduzir a ala de platina no interior dele
at tocar o Leite fermentado (tipo Yakult);
- transferir uma pequena alquota da cultura com a ala para a lmina e espalhar o material com
movimentos circulares (esfregao);
- secar ao ar;
- cortar lentamente a lmina na chama da lamparina 3 vezes para que o material fique bem
aderente lmina (fixao). A fixao feita do lado contrrio ao esfregao bacteriano;
- corar a lmina pela Tcnica de Gram (descrita anteriormente);
- observar ao microscpio na objetiva de 100x com leo de imerso.

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Resultados
Desenhar e descrever as estruturas observadas nas 3 lminas!
LMINA 1

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LMINA 2

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LMINA 3

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Atividades extras
Microbiologia
Geral
(MIG)

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Resumo (individual e manuscrito) sobre o vdeo O mundo das bactrias

Globo Reprter - Edio do dia 18/02/2011
Parte 1 (9 min e 12 s):
1) Mulher limpa a casa trs vezes por dia e passa no teste de infectologistas
Parte 2 (10 min e 21 s):
1) Professora ensina forma de lavar as mos corretamente
Parte 3 (11 min e 14 s):
1) Cada um grama de terra possui 100 milhes de micro-organismos
2) Especialista explica a forma correta de guardar alimentos na geladeira
Parte 4 (6 min e 43 s):
1) Beijo pode transmitir doenas, mas jovens s querem aproveitar micareta
2) Ato de soprar papinha antes de dar para beb pode transmitir bactrias
Parte 5 (8 min e 37 s):
1) Bactrias do bem imunizam crianas
2) Piscino de Ramos recebe trs mil litros de cloro por dia para limpeza
TODAS AS MINIRREPORTAGENS DEVEM SER RELATADAS! PRESTE ATENO!

148

Anatomia Funcional das Clulas Procariticas e Eucariticas.

Apesar de sua complexidade e variedade, todas as clulas vivas podem ser classificadas
em dois grupos: procariticas e eucariticas, com base em sua ultraestrutura vista ao microscpio
eletrnico. Plantas e animais so inteiramente compostos de clulas eucariticas. No mundo
microbiano, as bactrias e as arquibactrias so procariotos. Outros microrganismos como fungos
(leveduras e bolores), protozorios e algas so eucariotos. Os vrus, como elementos acelulares,
no se encaixam em classificaes das clulas vivas.
Agora vamos estudar as clulas eucariticas e procariticas!
Atividade em grupo: ___ alunos em cada grupo.
Data de entrega: ___________
ATENO: O trabalho deve ser manuscrito!
Descrever resumidamente os principais componentes das clulas procariticas e das
clulas eucariticas.

Clulas procariticas:
* Glicoclice
* Flagelos
* Fmbrias
* Pili
* Parede Celular
* Membrana Plasmtica
* Citoplasma
* rea Nuclear
* Ribossomos
* Incluses
* Endosporos

Clulas eucariticas
* Flagelos
* Clios
* Parede Celular
* Glicoclice
* Membrana Plasmtica
* Citoplasma
* Ncleo
* Retculo endoplasmtico
* Ribossomos
* Complexo de Golgi
* Lisossomos
* Vacolos
* Mitocndrias
* Cloroplastos
* Peroxissomos
* Centrossomos

149

Microbiologia Geral (MIG)

Professora: Graciele Viccini Isaka
Assista ao Filme Osmosis Jones Uma aventura radical pelo corpo humano e responda as
perguntas. Manuscrito e individual entrega dia __________).
1) Identifiquem e caracterizem os seguintes personagens (quem so e qual a funo mnimo 3
linhas para cada um):
a) Frank:
b) Ozzy:
c) Drix:
d) Thrax:
e) Prefeito Catarroso:
2) Cite 3 erros e/ou maus hbitos de Frank referentes higiene pessoal e hbitos alimentares que
contriburam para que ele ficasse doente.
3) Explique como Frank poderia corrigir os erros que voc citou.
4) De que forma os mecanismos e recursos de que nosso corpo dotado, reagem a entrada de
microrganismos estranhos em nosso organismo?
5) De que forma os mecanismos e recursos de que nosso corpo dotado, reagem a medicamentos
que colocamos em nosso organismo?
6) Qual a relao entre o filme e a Unidade Curricular de Microbiologia Geral?
7) Que conhecimentos voc adquiriu assistindo ao filme que podem ser teis para a sua vida?

150

Microbiologia Geral (MIG) - LABORATRIO INFORMTICA

Aulas Interativas de Microbiologia Instituto Butantan
1) Acesse http://www.butantan.gov.br/home/museu_microbiologia.php#
Clique em Atividades Educativas. Clique em Aulas Interativas.
Assista as Aulas 1 e 2 e responda as questes referentes a cada uma delas em uma folha!
Atividade individual! Ao final da aula, entregue a folha ao professor (a) responsvel.
Links diretos para cada aula:
http://www.butantan.gov.br/home/micro_cd_aula1.php
http://www.butantan.gov.br/home/micro_cd_aula2.php
Questes sobre a Aula 1: Diversidade Microbiolgica.
a) O que a microbiologia estuda?
b) Alm de causar doenas, para que servem os microrganismos?
c) Quais so os microrganismos celulares?
d) Quais so os microrganismos acelulares?
e) Os microrganismos celulares podem ser divididos em 2 grupos. Quais o nome desses grupos? Que
microrganismos compem cada um deles?
f) Cite 3 diferenas entre clulas procariticas e clulas eucariticas.
g) Desenhe e nomeie os diferentes tipos morfolgicos de bactrias.
h) Quais tipos de reproduo as bactrias podem fazer?
i) Quais os 4 grupos de protozorios? Explique cada um deles!
j) Os fungos so conhecidos por diferentes nomes. Quais so esses nomes?
k) Como um fungo se reproduz e se alimenta?
l) O que so as hifas?
m) O que so as leveduras?
n) Como as leveduras se reproduzem?
o) O que so vrus?
p) Se os vrus so acelulares, como eles fazem para se reproduzir?
q) Qual a composio bsica de um vrus?
r) Quais so as duas maneiras principais de replicao viral?
Questes sobre a Aula 2: Como visualizar e medir os microrganismos?
a) Qual instrumento precisamos utilizar para visualizar os microrganismos?
b) Descreva a composio e o funcionamento do microscpio de luz.
c) Se o aumento mximo do microscpio de luz no for suficiente para ver um microrganismo, qual
alternativa podemos utilizar?
d) Qual a unidade mtrica utilizada para medir bactrias? E vrus?
Caso tenha tempo, assista a Aula 3: Vrus da AIDS e Vrus da Gripe, e a Aula 4: Vacinas e Soros: qual
a diferena?
http://www.butantan.gov.br/home/micro_cd_aula3.php
http://www.butantan.gov.br/home/micro_cd_aula4.php

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