Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es

observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el

laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio
de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado
ms de 10.000 medios de cultivo diferentes.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin
de oxgeno adecuadas, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio
de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe
estar exento de todo microorganismo contaminante.
La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en
composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos
medios de cultivo es una infusin de extractos de carne y Peptona a la que se aadirn
otros ingredientes.
El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparacin de medios de
cultivo. Se lica completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al
enfriarse a 40 grados. Con mnimas excepciones no tiene efecto sobre
el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen
en l.
La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos
ya que bastantes bacterias provocan su licuacin.
En los diferentes medios de

cultivo se

encuentran numerosos

materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero,

sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por
dos motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y para
detectar

reacciones

de

fermentacin

de

los

microorganismos

que

ayuden

identificarlos. El suero y la sangre completa se aaden para promover el crecimiento

de los microorganismos menos resistentes.
Tambin se aaden colorantes que actan como indicadores para detectar, por
ejemplo, la formacin de cido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y
no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH bsico y amarillo
en pH cido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el
crecimiento de la mayoria de las bacterias Gram-positivas).

MEDIOS DE CULTIVO
Los microorganismos en general pueden vivir y multiplicarse sobre substratos nutritivos
preparados en el laboratorio, denominados medios de cultivo. Los Medios de Cultivo son
preparados estriles que contienen sustancias necesarias para el desarrollo de los
microorganismos.
Todos los microorganismos requieren agua, carbono, nitrgeno, hidrgeno, calcio, fsforo y
hierro como elementos vitales. Los microorganismos exigentes requieren adems factores de
crecimiento como aminocidos, vitaminas, purinas y otras sustancias que no son capaces de
sintetizar.
1. Aislamiento de bacterias desde una muestra o material patgeno (secrecin purulenta,
orina, rgano, fecas, etc.) o de un alimento (leche, carne, etc.)
2. Estudio morfolgico de las colonias. 3. Conservacin de cepas identificadas (coleccin de
cepas microbianas o cepario).
4. Clasificacin y tipificacin de bacterias por estudio de sus propiedades bioqumicas en
medios diferenciales.
5. Obtencin de toxinas o investigacin de sus caractersticas.
6. Cultivo y cosecha de bacterias para la elaboracin de productos biolgicos (vacunas,
antgenos, bacterinas, toxoides, etc.).

CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO:

SEGN SU ESTADO FISICO
1. Medios Lquidos: se utilizan preferentemente para favorecer el desarrollo bacteriano de
clulas estresadas. En determinadas ocasiones no se pueden sustituir por los medios slidos,
por ejemplo en la sntesis de exotoxinas, pigmentos, enzimas, etc. - Ejemplo: Agua peptonada,
Caldo comn, Caldo Cerebro Corazn, Caldo Saboureaud, etc.

2. Medios Slidos: se utilizan para obtener bacterias aisladas por la formacin de colonias
sobre la superficie del medio de cultivo y para el estudio de la morfologa de las colonias, lo
que no permiten los medios lquidos. Se diferencian porque tienen una sustancia de sostn,
que puede ser agar-agar. - Ejemplo: Agar Comn, Agar SS, Agar Cerebro Corazn, Agar
Saboureaud, etc.
3. Medios Semislidos: se utilizan para estudiar la motilidad de las bacterias. Tienen un menor
porcentaje de agar, por lo que no solidifican totalmente a la temperatura ambiente. - Ejemplo:
Agar MIO, Agar SIM.
Los medios slidos tienen generalmente agaragar como agente solidificante, espesante o
gelificante. El agar-agar es una sustancia hidroflica de carcter coloidal procedente de
diversas especies de algas marinas, especialmente del gneroGelidium, que tiene la
propiedad de formar un gel. Qumicamente el agar-agar es un polisacrido de cadena larga,
dependiendo de su tamao el poder gelificante.
El agar-agar se expende en forma granulada o en polvo, es insoluble en agua fra, se disuelve
solamente a temperatura de ebullicin, se mantiene en forma viscosa a 6080 C y solidifica
en forma de un gel estable a 4045 C. Resiste perfectamente la esterilizacin a 121 C y por
su capacidad de retener agua no se deshidrata fcilmente, lo que permite almacenar los
medios por un largo perodo de tiempo a 5 C.
La gelatina no puede reemplazar al agar en la preparacin de medios slidos, ya que
descompuesta por muchos tipos de bacterias. Se aade a los medios de cultivo para estudiar
si las bacterias son capaces de degradarla (presencia de enzimas gelatinasas).

SEGN SU UTILIDAD PRACTICA

1. Medios corrientes, comunes o bsicos
2. Medios especiales - Medios mejorados - Medios selectivos o de diagnstico - Medios
diferenciales o indicadores

1. MEDIOS CORRIENTES: son aquellos medios apropiados para el cultivo y mantencin de la

mayora de las bacterias. Sirven de base para la preparacin de los medios especiales. Ejemplo: Caldo comn, Agua peptonada, Agar nutritivo, etc.

2. MEDIOS ESPECIALES: son aquellos medios de cultivo que por su riqueza nutritiva, sirven
para el cultivo de bacterias muy exigentes. Contienen en su formulacin sustancias inhibidoras
para ciertas bacterias, que permiten el aislamiento y diagnstico precoz de aquellas bacterias
que nos interesan por ser los agentes etiolgicos de las enfermedades infecciosas. Tambin
pertenecen a este grupo aquellos medios que por adiccin de sustancias qumicas
determinadas, facilitan el diagnstico por caractersticas bioqumicas de algunas especies
microbianas.

Los medios especiales se clasifican en:

2.1. Medios Mejorados: se obtienen aadiendo a los medios corrientes sustancias de mayor
valor nutritivo, que tienen el efecto de proporcionar condiciones favorables para el cultivo de
bacterias exigentes (Ej. Estreptococos, Corynebacterium).
Las sustancias aadidas pueden ser: sangre desfibrinada (conejo, cordero o caballo), suero
sanguneo (equino), suero fetal bovino, huevo, cerebro, corazn, trozos o extracto de hgado,
carne o levadura, etc.
La mayora de estas sustancias por ser proteicas coagulan con el calor, lo cual impide que
sean esterilizadas en autoclave. Deben por lo tanto ser esterilizadas por filtracin o ser
agregadas a los medios previamente esterilizados, en condiciones de rigurosa asepsia.
Ejemplo: Agar Sangre, Agar Cerebro Corazn, etc.
2.2 Medios Selectivos: generalmente el microorganismo patgeno causante del cuadro
infeccioso que se desea aislar a partir de la muestra, no se encuentra puro sino que convive
con otras especies sin inters diagnstico. As por ejemplo es frecuente que las fecas, orina,
exudados, alimentos, agua, etc. estn altamente contaminadas con bacterias saprfitas que
por su desarrollo exuberante en los medios de cultivo corrientes, inhiben el crecimiento o
enmascaran la presencia del agente patgeno buscado.
Los medios selectivos se caracterizan por estimular el desarrollo de ciertas especies
bacterianas y a la vez inhibir el desarrollo de otras especies, lo que permite es aislamiento y
diagnstico de las bacterias con facilidad y rapidez. Estas caractersticas se obtienen por la
adicin de sustancias tales como colorantes de anilinas, sales biliares, antibiticos, etc.
Ejemplo: Agar Brucella, Caldo Selenito Cistina, etc.

2.3 Medios Indicadores o Diferenciales: son medios comunes o mejorados, con adiccin de

ciertas sustancias que ponen de manifiesto determinadas propiedades bioqumicas,

inherentes a algunas especies bacterianas, como por ejemplo: produccin de gas, H2S, de
cidos, de sustancias alcalinas, accin proteoltica, accin lipoltica, etc.
Estas sustancias o indicadores permiten diferenciar rpidamente una especie microbiana de
otra semejante; por este motivo se denominan medios indicadores o diferenciales. Ejemplo:
Agar Baird Parker, Agar Rambach, etc.
a) El agar Mac Conckey se utiliza para el aislamiento e identificacin de Escherichiacoli. Es un
medio mejorado ya que tiene Cristal Violeta y Sales Biliares que inhiben el desarrollo bacterias
Gram positivas.
b) El Caldo Tripticasa Soya es un medio corriente, ya que permite el desarrollo de una amplia
variedad de bacterias. Puede hacerse ms selectivo para el desarrollo de
Staphylococcusaureus, si se le agrega un 10% de NaCl, lo que no permite el crecimiento de
otras bacterias saprfitas.
SEGN SU ORIGEN
1. Origen animal ( Caldo Cerebro Corazn)
2. Origen vegetal ( Caldo papa, Caldo Levadura ) 3. Sintticos ( Medios deshidratados )
Los medios de cultivo comerciales deshidratados son productos a los cuales se le ha
eliminado el agua y todas las interferencias de tipo qumico, con un pH ajustado, que se han
controlado fsica, qumica y bacteriolgicamente. Es decir es un producto estandarizado.

http://web.udlap.mx/tsia/files/2015/05/TSIA-81-Reyes-Jurado-et-al-2014.pdf

http://es.scribd.com/doc/29302476/Medios-de-Cultivo#scribd

https://libroslaboratorio.files.wordpress.com/2012/09/medios-de-cultivo-en-unlaboratorio-de-microbiologc3ada.pdf

MEDIOS DE CULTIVO COMUNES.

Son los ms corrientemente utilizados, y aunque no vamos a enumerarlos todos,

s son los ms conocidos en un laboratorio de Microbiologa.
Agar nutritivo: Este medio es bastante bueno para el cultivo de grmenes que no
presentan exigencias particulares. No es diferencial.
Agar sangre: Es un medio enriquecido que se utiliza adems para la
investigacin de los diversos tipos de hemlisis(, gamma ). Se utiliza para el
crecimiento de estreptococos. Para la preparacin del agar sangre se puede
utilizar el agar nutritivo enriquecido con cloruro sdico o un preparado
enriquecido con otras sustancias como Columbia o el tripticase de soja. La
adicin de sangre a un medio de cultivo no proporciona las sustancias que estn
en el interior de los hemates, pero s puede aadir factores inhibidores del
crecimiento bacteriano presentes en el suero. Este es un inconveniente que puede
solucionarse calentando la sangre para romper los eritrocitos y para que se
destruyan las sustancias inhibidoras, que son termolbiles.La sangre utilizada
como aditivo a estos medios suele ser sangre de carnero diluida al 5%, pero en
algunas ocasiones es necesario utilizar sangre de otras especies (caballo, conejo,
humana), pues facilitan las reacciones hemolticas o contienen determinados
factores de enriquecimiento o no poseen sustancias inhibidoras del crecimiento
de determinados grmenes. Agar chocolate: El agar chocolate se obtiene
calentando la sangre antes de adicionarla al medio base. Por esta razn el agar
chocolate contiene hemoglobina, que aporta al medio un importante elemento
para el crecimiento: el factor X o hemina termoestable. El agar chocolate es un
medio destinado principalmente al aislamiento de Neisserias (gonococos
ymeningococos) y Haemophilus, pero en l pueden crecer muchos otros
microorganismos exigentes. El agar chocolate puede convertirse quizs en uno de
los medios ms enriquecidos si aadimos una mezcla de factores de crecimiento
no contenidas en la sangre. Estas mezclas, denominadas de forma diferente segn
las casas comerciales (Polivitex, Isovitalex, etc.) contienen ms de una docena de
compuestos que confieren a este medio unas cualidades nutritivas
extraordinarias. Por adicin de uno o varios antibiticos pueden lograrse medios
inhibidores o selectivos para el crecimiento de determinados microorganismos.
Un ejemplo clsico es el Thayer-Martin, utilizado para el aislamiento del
gonococo y que no es otra cosa que un agar chocolate enriquecido al cual se ha
aadido unamezcla de tres antibiticos especficos que impedirn el crecimiento
del resto de la flora acompaante. Agar MacConkey: Es un medio utilizado para
el aislamiento e identificacin de enterobacterias. Es un medio inhibidor de los
grmenes Gram positivos por su contenido en cristal violeta y selectivo para
enterobacterias por su contenido en sales biliares. En su composicin lleva un
azcar (lactosa) y un indicador (rojo de metilo) que lo convierten en un medio
diferencial. Los grmenes que fermenten la lactosa producen una acidificacin

del medio que hacen aparecer de color rojo fuerte a las colonias resultantes. Las
colonias lactosa negativas sern incoloras, apareciendo del mismo color que el
medio subyacente (naranja).
Agar C.L.E.D.: El medio C.L.E.D. (Cistina Lactosa Electrlito Deficiente) est
recomendado para el recuento e identificacin presuntiva de los microorganismos
de las vas urinarias. Su bajo contenido en electrolitos evita la invasin de los
cultivos por Proteus.La presencia de lactosa en su composicin le confiere el
carcter de medio diferencial, aunque la interpretacin sea diferente al anterior
medio por la incorporacin de otro indicador: el azul de bromotimol. Las
colonias lactosa positivas aparecern de color amarillo y las lactosa negativas lo
harn con un color verdoso, blanco o azulado.
Agar S.S.:El agar SS es un medio selectivo empleado para el aislamiento de
Salmonella y Shigella a partir demuestras fecales. El medio contiene sales
biliares y verde brillante para impedir el crecimiento de coliformes y grmenes
Gram positivos. La presencia de lactosa y rojo de metilo nos permiten diferenciar
las colonias que fermentan la lactosa (rosas o rojas) de las que no lo hacen
(incoloras).Las especies de Salmonella y Shigella no fermentan nunca la lactosa
por lo que este medio es excelente para descartar todas las colonias que no
cumplan este requisito. El agar SS es doblemente diferencial, porque adems de
indicarnos el comportamiento de los grmenes con relacin a la lactosa, nos
muestra los grmenes que son capaces de producir cido sulfhdrico, que se
manifiesta como un precipitado de color negro en el centro de la colonia. As, una
colonia incolora y con un punto negro central es sospechosa de Salmonella, y
ser exclusivamente a estas colonias a quienes se hagan las pruebas bioqumicas
confirmatorias de esta especie. El agar SS es un medio muy inhibidor que a veces
impide incluso el crecimiento de ciertas especies de Salmonella y sobre todo de
Shigella. Por esta razn debe utilizarse siempre junto con otro medio menos
inhibidor como el Hektoen.
Agar Hektoen :Es un medio ms diferencial y menos selectivo que el agar SS.
Se utiliza para facilitar el aislamiento de las enterobacterias. La presencia de tres
azcares (lactosa, sacarosa y salicilina ) permiten ampliar el poder diferencial de
este medio. Este medio es capaz de detectar los grmenes formadores de SH2,
igual que el SS. Las cualidades del agar Hektoen se deben a su riqueza en
peptonas y azcares, que neutralizan el efecto inhibidor de las sales biliares
respecto a ciertos grmenes de cultivo delicado (Shigella en particular).El
crecimiento de Salmonella es excelente, igual que el de Shigella, obtenindose
colonias ms numerosas y voluminosas que en los medios selectivos usuales. La
inhibicin tiene lugar, esencialmente, sobre E. coli y en menor medida sobre

Proteus y Citrobacter. Hay que sealar que el vibrin colrico crece bien en este
medio.
C.P.S. ID3. :Medio cromognico desarrollado por Biomerieux, que permite la
identificacin de E. coli, P. mirabilisy E. faecalis, con la simple visualizacin del
cambio de color de la colonia sobre el medio (rojo burdeos, azulo marrn). La
identificacin solo requiere la adicin de un reactivo para confirmar o descartar
la especie sospechada. Otros microorganismos diferentes requieren los sistemas
de identificacin habituales (API, p. ej) Granada, Islam o New GBS: Medios
utilizados para deteccin de Streptococcus agalactiae, mediante la utilizacin de
un sustrato cromognico especfico de este microorganismo.
Agar Mueller-Hinton: Es el medio universalmente aceptado para la realizacin
de los antibiogramas o pruebas de sensibilidada los antimicrobianos. A l nos
referiremos ms ampliamente en el captulo correspondiente
Agar Tripticase de soja: Es un medio utilizado para el crecimiento de grmenes
exigentes, como Brucella, Neisseria o Streptococcus. Es un medio muy
enriquecido, pero no es diferencial. Caldo tioglicolato con resazurina: Es un
medio recomendado para controles de esterilidad. Permite el cultivo de aerobios,
anaerobiosy microaerfilos. Tiene un bajo potencial redox que, al aumentar, se
manifiesta por un color rosa del medio.
Agar Chapman: Es un medio selectivo para el aislamiento de estafilococos. Su
elevado contenido en cloruro sdico permite la inhibicin de la mayora de los
otros grmenes. La presencia de manitol y rojo fenol convierten a este medio en
diferencial: as se puede identificar presuntivamente el Staphylococcus aureus, ya
que estegrmen crece bien en medios salados y fermenta el manitol (colonias
amarillas).
Agar Baird-Parker: Permite el crecimiento de estafilococos coagulasa
positivos, a la vez que los diferencia del resto.
Medio de Loeffler: Es un medio especfico para el cultivo de Corynebacterium
difteriae.
Agar Desoxicolato Citrato Lactosa Sucrosa (DCLS):Similar al agar SS. Es un
medio diferencial e inhibidor a la vez.
Agar Kligler: Medio especfico para pruebas de identificacin de
enterobacterias. Aunque de l hablaremos conms detenimiento en el captulo de
pruebas de identificacin bacteriana, podemos ir adelantando que se tratade un

medio diferencial que permite conocer el comportamiento del microorganismo

ante dos azcares (glucosa y lactosa), investigar la formacin de gas y comprobar
si el microorganismo puede producir sulfatoferroso a partir del tiosulfato sdico.
Agar Levine EMB (Eosina azul de metileno):Se utiliza para aislamiento de
enterobacterias, pues impide el crecimiento de Gram positivos y diferencia muy
bien a E. coli, cuyas colonias adquieren un color negruzco con un brillo metlico
caracterstico. Caldo selenito-F: Se utiliza exclusivamente para enriquecimiento
de Salmonellas.
Agar Cetrimida. Agar King: Permiten el crecimiento de Pseudomonas,
inhibiendo Gram positivos y la mayora de enterobacterias.El segundo pone
adems de manifiesto la pigmentacin fluorescente de Pseudomonas bajo luz UV.
Agar Schaedler: Es un medio con sangre y vitamina K muy adaptado para el
cultivo de anaerobios.
Agar Gardnerella:Agar con sangre humana ms una mezcla de antibiticos que
permiten la observacin de colonias betahemolticas caractersticas de
Gardnerella vaginalis
Campylosel: Se utiliza para el aislamiento de Campylobacter intestinales
creciendo a 42 C en microaerofilia.
Agar BCYE (Buffer Charcoal Yeast Extract):Se utiliza para el aislamiento de
bacterias del gnero Legionella
Lwenstein-Jensen:Este medio se utiliza para el cultivo de Mycobacterium
tuberculosis. Contiene verde malaquita parainhibir parcialmente el crecimiento
de otras bacterias. El huevo se utiliza como sustancia de enriquecimiento.

Los medios lquidos se preparan en tubos o matraces que se cubren con tapones
de algodn o tapones especiales. Un cultivo lquido puede ser transferido mediante un
asa microbiolgica, un hisopo, pipeta o pipeta pasteur; el inculo se deposita dentro
del caldo o medio lquido. En este tipo de cultivos los microorganismos presentan un
desarrollo particular que se manifiesta en la superficie o a travs de todo el lquido.
Una de las ventajas que presenta este tipo de cultivo se refiere a laposibilidad de

agitarlos acelerando la velocidad de microorganismos anaerobios, por otra parte, en

este tipo de cultivos, las poblaciones se encuentran suspendidas y e fcil
homogenizarlas, lo que permite estandarizar laconcentracin del inculo. La
desventaja que presentan, es que en ellos e difcil detectar contaminacin a simple
vista.
Los medios slidos se preparan en tubos o matraces dependiendo de la cantidad
o de las necesidades, despusde esterilizarlos, estos se inclinan o vierten en cajas de
petri. La siembra se realiza con el asa, inoculando lasuperficie del agar con mucha
suavidad; en estos medios, los microorganismos al multiplicarse forman agregados
que se hacen visibles a simple vista; a estos agregados se les denominan colonias,
las que presentancaractersticas que varan con el tipo de microorganismo cultivado y
el medio de cultivo empleado. En cualquier medio de cultivo es de primordial
importancia ajustar el pH, ya que an cuando la mayora de losmicroorganismos
crecen mejor en pH neutro, algunos requieren de pH alcalino o cido, por lo que al
proporcionar un pH adecuado se favorecer el crecimiento del microorganismo de
inters y la obtencin del cultivo. Con este mismo propsito durante la incubacin se
deben proporcionar las condiciones adecuadas para el microorganismoen estudio. El
crecimiento ptimo de los microorganismos se presenta a temperaturas que la
mayora de las veces estn relacionadas con la de su hbitat natural. Algunos
microorganismos crecen por debajo de 15C, otros requieren temperaturas ms
elevadas (30 a 45C) y algunos hasta 80C. Para alcanzar y mantener estas
temperaturas se puede usar una incubadora microbiolgica o un bao de agua a
temperatura constante, en tanto que para lo microorganismos que presentan su
crecimiento ptimo a temperaturas entre 20 y 25C se pueden incubar en la gaveta o
cajn del laboratorio, a temperatura ambiente. En general las incubadoras
microbiolgicas satisfacen las necesidades en cuanto a los rangos de temperatura
requeridas por los microorganismos. La desventaja que tienen es que estos aparatos
funcionan con are seco, lo que determina la deshidratacin de los medios de cultivo.
Por lo tanto, el crecimiento de cualquier cultivo experimental que se realice en
incubadora no debe prolongare por ms de nueve das.
Tcnicas de siembra
Mtodo de siembra por estra en placa
Es el mtodo ms fcil y el ms usado para obtener cultivos axnicos. Para ello, con
un asa de siembra se tomauna muestra de la poblacin mixta y a continuacin se
hacen estras sobre la superficie de un medio slidopreparado en una placa Petri (a

las placas Petri tambin se les denomina simplemente placas). Conforme se van
haciendo estras en zigzag con el asa, cada vez se van depositando en la superficie
del medio menosmicroorganismos. A continuacin, se flamea el asa, se toca en la
regin donde se han realizado las ltimasestras y se contina la siembra con la
misma tcnica, en la superficie de medio sin sembrar an. Repitiendo esteproceso
varias veces se logra separar clulas individuales. A continuacin, las placas se
incuban en un lugar adecuado, permitiendo que las clulas aisladas experimenten un
nmero suficiente de divisiones para formar colonias visibles. Aunque cada colonia
posiblemente representa un clon derivado de una sola clula, no podemos asegurarlo.
Quizs, dos clulas quedaron depositadas tan juntas que han originado una nica
colonia mixta. Por tanto, para asegurarnos de que hemos obtenido un cultivo axnico,
conviene repetir el procedimiento a partir deuna colonia bien aislada en la primera
placa. Las colonias que se desarrollen la segunda vez, sern, casi con todaseguridad,
cultivos axnicos.

Cultivo y Crecimiento de Microorganismos

Una caracterstica de los microorganismos es que pueden cultivarse en un medio puro, y
cultivarse en el laboratorio. Para ello necesitamos saber los nutrientes necesarios para dicho
micoorganismos, as como las condiciones fsicas en que se desarrollan.
Los nutrientes necesarios son:
1.- Fuente de energa, pudiendo ser:
- luz solar=auttrofos
- compuestos qumicos=hetertrofos
2.- Fuente de carbono, pudiendo ser:
- inorgnica=auttrofos
- orgnica=hetertrofos
3.- Fuente de nitrgeno
- inorgnica - (las plantas) KNO3
- orgnica (protenas y aminocidos)
4.- Sales

- Azufre (S), las plantas usan compuestos inorgnicos y los animales usan compuestos
orgnicos azufrados (aminocidos). Las bacterias usan ambos tipos de compuestos.
- Fsforo (P), inorgnicos u orgnicos (fosfatos).
5.- Oligoelementos: Na, K, Mn, Mg, Fe, Zn, Cu, Co, Ca,...
Son necesarios para poder desarrollarnos, aunque aparecen en una pequea proporcin.
6.- Vitaminas
- animales: a travs de la dieta.
- microorganismos: o lo sintetizan o necesitan un aporte externo. Entre los que lo sintetizan,
una de ellas vive en nuestro intestino (E. Coli) y producen vitamina K.
7.- Agua
Para hacer crecer microorganismos en el laboratorio necesitamos un medio de cultivo, es
decir, una disolucin con todos los nutrientes.
Podemos diferenciar los medios de cultivo segn el estado fsico:
- Medios lquidos, en agua todos los nutrientes.
- Medios slidos, se aade un agente solidificante --> AGAR (15-20 g/l)
- Semislidos, con menos AGAR (+/- 5 g/l)
Hay que tener cuidado, un exceso en alguno de los componentes puede inhibir el crecimiento
de los microorganismos.
Tambin podemos clasificarlos segn su composicin:
- Medios sintticos, medios en que los nutrientes estn qumicamente diferenciados y en
unas condiciones determinadas.
- Medios complejos, aunque sepamos la composicin, no sabemos en que proporcin estn.
- Medios semisintticos, medios con un slo compuesto complejo, y los dems comp.
conocidos. El Agar nutritivo es de este tipo porque lleva carne.
- Medios enriquecidos, aquellos a los que aadimos una sustancia compleja, de gran aporte
de vitaminas, como puede ser sangre, suero, extracto de tejidos... esto se hace para soportar
el crecimiento de organismos ms complejos, nutritivamente hablando.
- Medios selectivos, algunos componentes van a hacer que se desarrolle ms un
determinado microorganismo que otro. Ejemplo: las sales biliares favorecen la formacin de
bacterias GRAM-.
- Medios diferenciales, algunos componentes del medio hacen que un tipo determinado de
microorganismos tengan aspecto diferente al resto de los microorganismos. El Agar Levine
inhibe el crec. de bacterias GRAM+. Las bacterias E. Coli, tienen un color caracterstico en
este medio, toman un color verde metlico.
Estos microorganismos podemos cultivarlos como un cultivo puro. Generalmente se realizan
en placas petri. Para obtener un cultivo puro podemos realizamos lo siguiente:

1. Siembra por extensin: la muestra con microorganismos se pipetea sobre la superficie del
agar (0,1ml o menos) y se extiende suavemente con un asa de vidrio. Se pone a una
temperatura adecuada y se deja un determinado tiempo hasta que aparecen diferentes
colonias.
2. Siembra por vertido en placa: la muestra con microorganismos se pipetea en una placa
estril y sobre ella se aade el medio de cultivo y se mezcla. Despus de incubar, sobre la
superficie del medio de cultivo aparecern colonias de los diferentes microorganismos.
Para asegurar que lo que hemos obtenido es puro, usamos el mtodo de AISLAMIENTO EN
ESTRA --> consiste en coger la muestra de la colonia con un asa de siembra, y haciendo
estras se coloca en otra placa petri. Al extender de esta forma, quedarn bacterias sueltas
que originarn colonias aisladas.
A partir de estas colonias que podemos apreciar que son idnticas, las pasamos a un tubo con
agar inclinado (para que tenga mayor superficie) y obtenemos as el cultivo puro

Mac Conkey Agar.

Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fcil
desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que
utilizan o no, lactosa en muestras clnicas, de agua y alimentos. Todas las
especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.
Fundamento
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el
desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la
mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que
inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva.
Por fermentacin de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto
produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorcin en
las colonias, y la precipitacin de las sales biliares.
Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.

Frmula (en gramos por litro)

Peptona

Pluripeptona

Instrucciones

17.0 Suspender 50 g del polvo por

litro de agua destilada. Reposar 5
minutos y mezclar hasta
3.0 uniformar. Calentar suavemente
y hervir 1 a 2 minutos hasta

Lactosa

10.0

Mezcla de sales biliares

1.5

Cloruro de sodio

5.0

Agar

13.5 disolver. Esterilizar en autoclave a

121C durante 15 minutos.

Rojo neutro

0.03

Cristal violeta

0.001

pH final: 7.1 0.2

Siembra
- Sembrar en superficie.
- Utilizando la tcnica de Pour Plate: sembrar 1 ml de muestra y agregar
aproximadamente 15 ml de medio de cultivo fundido y enfriado a 45-50 C.
Incubacin
Durante 18-48 horas, a 35-37 C, en atmsfera aerbica
Resultados

Microorganismos

Colonias

Escherichia coli ATCC 25922

Rojas con halo turbio

Klebsiella pneumoniae ATCC

700603

Rosadas mucosas

Salmonella typhimurium ATCC

Incoloras,

14028

transparentes

Shigella flexneri ATCC 12022

Incoloras,
transparentes

Proteus mirabilis ATCC 43071

Incoloras,
transparentes

Enterococcus faecalis ATCC 29212

Diminutas, incoloras,
opacas

Caractersticas del medio

Medio preparado: rojo prpura
Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

Presentacin

x 100g :Cdigo: B02114-05

x 500g :Cdigo: B02114-06