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GUA DE PRCTICAS
BIOQUMICA CLNICA
III-CICLO ( CDIGO 09402)
SEMESTRE ACADMICO: 2012II
AUTOR:
Q.F. CISNEROS HILARIO CSAR BRAULIO
CHIMBOTE-PER
2012
INDICE
GUA DESEMINARIOS. 35
INSTRUCCIONES GENERALES............................................................. 36
SEMINARIO N 1: Enfermedades nutricionales.... 37
SEMINARIO N 2: Bioqumica de la diabetes mellitus. 37
SEMINARIO N 3: Enfermedades del metabolismo de protenas. 37
SEMINARIO N 4: Metabolismo de Xenobiticos. 37
SEMINARIO N 5: Metabolismo hidromineral 37
SEMINARIO N 6: Metabolismo de vitaminas 37
SEMINARIO N 7: Metabolismo de Hormonas.. 37
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GUA DE
PRCTICAS DE
LABORATORIO
PRCTICA N 01
REQUERIMIENTO ENERGTICO Y DIETA BALANCEADA
Gua de Prcticas de Bioqumica Clnica
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3.2. MTODO.
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V.
DISCUSIN
VI.
CONCLUSIN
VII.
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
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PRCTICA N 02
IDENTIFICACIN DE HIDRATOS DE CARBONO
I.
MARCO TERICO:
Los hidratos de carbono son la ms importante fuente de energa en el
mundo. Representan el 40-80% del total de la energa ingerida,
dependiendo, claro est, del pas, la cultura y el nivel socioeconmico. Son
compuestos orgnicos compuestos por carbono, hidrgeno y oxgeno .Su
frmula qumica es (CH2O)n, donde la n indica el nmero de veces que se
repite la relacin para formar una molcula de hidrato de carbono ms o
menos compleja.
Aunque todos ellos comparten la misma estructura bsica, existen
diferentes tipos de hidratos de carbono que se clasifican en funcin de la
complejidad de su estructura qumica
Monosacridos: Son los carbohidratos de estructura ms simple.
Destacan:
-Glucosa: Se encuentra en las frutas o en la miel. Es el principal producto
final del metabolismo de otros carbohidratos ms complejos. En
condiciones normales es la fuente exclusiva de energa del sistema
nervioso, se almacena en el hgado y en el msculo en forma de
glucgeno.
-Fructosa: Se encuentra en la fruta y la miel. Es el ms dulce de los
azcares. Despus de ser absorbida en el intestino, pasa al hgado donde
es rpidamente metabolizada a glucosa.
-Galactosa: No se encuentra libre en la naturaleza, es producida por la
hidrlisis de la lactosa o azcar de la leche.
Disacridos: Son la unin de dos monosacridos, uno de los cuales es la
glucosa.
Sacarosa (glucosa + fructosa): Es el azcar comn, obtenido de la
remolacha y del azcar de caa.
-Maltosa (glucosa + glucosa): Raramente se encuentra libre en la
naturaleza.
-Lactosa (glucosa + galactosa): Es el azcar de la leche.
Al conjunto de monosacridos y disacridos se les llaman azcares.
Polisacridos: La mayora de los polisacridos son el resultado de la
unin de unidades de monosacridos (principalmente glucosa). Algunos
tienen ms de 3.000 unidades. Son menos solubles que los azcares
simples y su digestin es ms compleja.
II.
COMPETENCIAS:
II.1 Reconocer la presencia de hidratos de carbono en una muestra dada
por sus propiedades fsicas y qumicas.
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III.
MATERIAL Y MTODO:
3.1. MATERIAL
Tubos de ensayo
cido sulfrico.
Muestras de carbohidratos.
Solucin yodo.
Bao mara.
3.2 PROCEDIMIENTOS:
a) REACCION GENERAL DE LOS GLUCIDOS Y GLUCOSIDOS:
En esta experiencia se apreciara solamente una reaccin de coloracin
que experimentan los glcidos y glucsidos frente al cido sulfrico en
frio. Emplee 2 tubos de ensayo de tal manera que en el 1 agregue 2 ml
de glucosa, al 2 agregue unos 2 ml de sacarosa
A cada uno de los tubos agregue por las paredes de los mismos, 2
ml de
(cido sulfrico) concentrado, de tal manera que forme
una capa de separacin con los azucares, dejar en reposo y anotar
los colores.
b) REACCION DE MOLISCH:
Esta reaccin es de una sensibilidad extraordinaria, basta tan solo la
presencia de una fibrilla de papel para que de positiva la reaccin.
Debe tenerse en cuenta que muchas otras sustancias tambin dan
reaccin positiva la reaccin de Molisch, pero, no dan el color violeta
que es caracterstica en los carbohidratos.
Emplee 3 tubos de ensayo de manera que en 1 agregue 2ml de agua
destilada ms tres gotas de glucosa , al 2 agregue 2 ml de agua
destilada ms 3 gotas de lactosa y al 3 unos 2 ml de agua destilada
ms tres gotas de sacarosa.
A cada tubo agregue 2 gotas de una solucin de alfa-naftol alcohlica
al 20% y sobre la mezcla de cada tubo aada 2 ml de cido sulfrico
concentrado, de manera que el cido quede formando una capa con la
mezcla anterior.
Luego que se ha formado un anillo entre las dos capas agitar
cuidadosamente la mezcla y agregar agua aproximadamente 5 ml y
dejar en reposo 2 minutos .Anota los resultados de cada tubo.
c) REACCION DE TAUBER:
E n un tubo de ensayo 1 ml de glucosa
Agregue 1 ml de una solucin de bencidina actica al 4%
calentar hasta ebullicin y dejar en reposo para enfriar. (La
solucin de bencidina se separa mezclando 4 g de bencidina en
100 ml de cido actico glacial, esta solucin debe ser
recientemente preparada)
Gua de Prcticas de Bioqumica Clnica
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CUESTIONARIO:
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V.
RESULTADOS
VI.
DISCUSIN
VII.
CONCLUSIN
VIII.
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
PRCTICA N 03
IDENTIFICACIN DE LPIDOS
I.
MARCO TERICO
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Fosfolpidos
Fosfoglicridos
Fosfoesfingolpidos
Glucolpidos
Cerebrsidos
Ganglisidos
Lpidos insaponificables
Terpenoides
Esteroides
Eicosanoides
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Lpidos saponificables
cidos grasos
Son las unidades bsicas de los lpidos saponificables, y consisten en
molculas formadas por una larga cadena hidrocarbonada con un nmero
par de tomos de carbono (12-24) y un grupo carboxilo terminal. La
presencia de dobles enlaces en el cido graso reduce el punto de fusin.
Los cidos grasos se dividen en saturados e insaturados.
Saturados. Sin dobles enlaces entre tomos de carbono; por
ejemplo, cido lurico, cido mirstico, cido palmtico, cido
margrico, cido esterico, cido araqudico y cido lignogrico.
Insaturados. Los cidos grasos insaturados se caracterizan por
poseer dobles enlaces en su configuracin molecular. stas son
fcilmente identificables, ya que estos dobles enlaces hacen que su
punto de fusin sea menor que en el resto. Se presentan ante
nosotros como lquidos, como aquellos que llamamos aceites. Este
tipo de alimentos disminuyen el colesterol en sangre y tambin son
llamados cidos grasos esenciales. Los animales no son capaces de
sintetizarlos, pero los necesitan para desarrollar ciertas funciones
fisiolgicas, por lo que deben aportarlos en la dieta. La mejor forma y
la ms sencilla para poder enriquecer nuestra dieta con estos
alimentos, es aumentar su ingestin, es decir, aumentar su
proporcin respecto los alimentos que consumimos de forma
habitual. Con uno o ms dobles enlaces entre tomos de carbono;
por ejemplo, cido palmitoleico, cido oleico, cido eladico, cido
linoleico, cido linolnico y cido araquidnico y cido nervnico.
Los denominados cidos grasos esenciales no pueden ser sintetizados por
el organismo humano y son el cido linoleico, el cido linolnico y el cido
araquidnico, que deben ingerirse en la dieta.
Propiedades fisicoqumicas
Carcter antiptico. Ya que el cido graso est formado por un
grupo carboxilo y una cadena hidrocarbonada, esta ltima es la que
posee la caracterstica hidrfoba; por lo cual es responsable de su
insolubilidad en agua.
Punto de fusin: Depende de la longitud de la cadena y de su
nmero de insaturaciones, siendo los cidos grasos insaturados los
que requieren menor energa para fundirse.
Esterificacin. Los cidos grasos pueden formar steres con
grupos alcohol de otras molculas.
Saponificacin. Por hidrlisis alcalina los steres formados
anteriormente dan lugar a jabones (sal del cido graso)
Autooxidacin. Los cidos grasos insaturados pueden oxidarse
espontneamente, dando como resultado aldehdos donde existan
los dobles enlaces covalentes.
Acilglicridos
Los acilglicridos o acilgliceroles son steres de cidos grasos con glicerol
(glicerina), formados mediante una reaccin de condensacin llamada
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COMPETENCIAS
Determinar las propiedades fsicas y qumicas de los lpidos y su
importancia en los organismos vivos.
III.
MATERIAL Y MTODO
1.1. MATERIAL
ter
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Cerebro De Cerdo
NAOH
Bao Mara
Molibdato De Amonio
KOH
Lugol
H2SO4
Anhdrido Actico
3.2
MTODO
b) RECONOCIMIENTO DE LA COLINA
Mida 1 ml de la solucin B en un tubo de ensayo y aadir 3 ml de
Lugol.
Al mismo tubo agregue gota a gota KOH al 20% hasta cambio de
color de la solucin.
A la solucin anterior agregarle 10 gotas de piridina y llevarlo a Bao
Mara por 3 minutos.
Los resultados obtenidos son: De un olor amarillo transparente se
volvi a un color blanco transparente en esta muestra o
procedimiento realizado.
c) RECONOCIMIENTO DE COLESTEROL
REACCIN DE SALKOUSKY
Mida 2 ml de aceite cocinero en un tubo de ensayo y agregarle 2 ml
de H2SO4 concentrado por las paredes cuidando formando dos
capas.
Los resultados obtenidos son: La formacin de un color amarillo
violasio que nos indica la presencia de colesterol en este primer
tubo.
Mida 2 ml de aceite colesterol en un tubo de ensayo y agregarle 2 ml
de H2SO4 concentrado por las paredes cuidando formando dos
capas.
Gua de Prcticas de Bioqumica Clnica
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15
CUESTIONARIO
1. Qu lpidos ha extrado en la maceracin etrea?
2. Cules son los lpidos que poseen el grupo colina, y que Ud. esta
identificando en la prctica?
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V.
RESULTADOS
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17
VI.
DISCUSIN
VII.
CONCLUSIN
VIII.
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
PRCTICA N 04
IDENTIFICACIN DE PROTENAS
I.
MARCO TERICO:
Los aminocidos son los monmeros de las protenas. Slo 20
aminocidos constituyen las unidades monomricas a partir de las cuales
se sintetizan las cadenas polipeptdicas. Por lo tanto, todas las protenas
contienen diversas proporciones de estos 20 aminocidos.
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MATERIAL Y MTODO:
3.1. MATERIAL
Tubos de ensayo
cido fosfotungstico
cido fosfomolibdico
HNO3
NaOH
Fenol
Reactivo de Milln
CuSO4
Ninnhidrina
Solucin alcohlica de timol
Acetato de plomo
HCl
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cido ntrico
Muestras de aminocidos y protenas
3.2. MTODOS
Empleando tres tubos de ensayo mida exactamente en cada uno de
ellos 2ml de una solucin de protenas
Al primer tubo agregue 15 gotas de HCl concentrado , al 2 15 gotas de
HNO3
Observe los resultados en los tubos:
I.
II.
III.
IV.
REACCION DE BIURET:
Esta reaccin la desarrolla cualquier tipo de protena, es decir, es
una reaccin de coloracin general. Caracterizacin de tripptidos
en adelante
En un tubo de ensayo mida 2ml de una solucin de protena y
agregue 2 ml de NaOH al 10%, Mezclar bien
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REACCION DE NINHIDRINA
Esta reaccin es general para todo tipo de protena, es decir, para
todos los compuestos que contengan por lo menos un grupo
amino y carboxilo libres.
En un tubo de ensayo medir 2ml de una solucin de protena y
agregar 10 gotas
Llevar la mezcla anterior a bao mara por 5 minutos
Anotar los resultados.
VI.
VII.
4. CUESTIONARIO:
1. Por qu se produce la precipitacin de las protenas frente a los cidos
fuertes?
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21
V.
RESULTADOS
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22
VI.
DISCUSIN
VII.
CONCLUSIN
VIII.
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
PRCTICA N 05
HIDRATOS DE CARBONO EN ORINA
I.
MARCOTERICO
Los carbohidratos estn presentes fundamentalmente en los vegetales (frutas y
hortalizas). En este grupo de alimentos, los carbohidratos son el grupo mayoritario
despus del agua. Pueden suponer entre un 2-20% de la composicin total de los
vegetales. El pepino, por ejemplo, tiene pocos carbohidratos, y los que ms tienen
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son los vegetales amilceos que son los que tienen una gran cantidad de
concentracin de almidn.
Los carbohidratos pueden ser diferentes en cuanto a su peso molecular, los hay
simples y complejos. Los azcares simples ms importantes son la glucosa, la
fructosa o la sacarosa. La importancia que tienen es por el sabor dulce que
confiere a los alimentos lo que les hace mucho ms atractivos.
Otro azcar importante pero este ya complejo es el almidn. Es la forma en la que
el tejido vegetal reserva energa. El ser humano lo digiere y a veces lo almacena
para energa.
La mayor parte de los azcares que se obtienen en nuestra dieta provienen de los
aadidos a los productos elaborados que tienen ms que los naturales.
La sacarosa que se obtienen de la caa de azcar o de la remolacha es la que
ms se utiliza. La lactosa es el ms importante de origen animal.
Los carbohidratos se clasifican en: monosacridos, oligosacridos (2-20
monosacridos unidos) y polisacridos (ms de 20 monosacridos unidos).
Valores normales de azcar en la sangre
Los valores normales son entre 70 y 110 mg/dL. En los nios pequeos se
aceptan valores de 40 a 100 mg/dL.
Los valores ms bajos de 40-50 mg/dL se consideran bajos (hipoglucemia).
Los valores mayores a 140 mg/dL se consideran (hiperglucemia).
Pueden modificar los valores de glucemia y no ser por una diabetes ciertas
situaciones:
1. Estrs por enfermedades agudas (infarto cerebral, cardiaco, anestesia
general)
2. Los tratamientos con sueros en vena, ya que contienen dextrosa (azcar)
3. Embarazo
4. Medicamentos (antidepresivos, antihipertensivos, hormonas femeninas,
etc).
5. El alcohol y analgsicos pueden disminuirla.
Rango normal de glucosa en la orina: 0 - 0,8 mmol / L (0 - 15 mg / dL).
II.
III.
COMPETENCIAS:
Reconocer la presencia de hidratos de carbono en orina normal y orina patolgica
(Paciente Diabtico).
MATERIALES Y METODOS:
III.1. MATERIALES.
A)
MUESTRA:
Tiras reactivas.
Glucosa AL 5%
Orina Normal
Orina Patolgica (Paciente diabtico).
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B)
MATERIAL DE LABORATORIO:
Mecheros
Tubos de ensayo
Gradillas
Pinza de madera
Vasos de precipitacin
Pipetas
Frascos goteros
C)
REACTIVOS:
Azul de metileno
Amoniaco al 30%
Nitrato de plata amoniacal Ag(NH3)2NO3
NaOH 10%
Lugol
Reactivos de fehling A y fehling B
3.2. PROCEDIMIENTOS:
Confirmar mediante tiras reactivas la presencia de glucosa en las muestras de
orina normal y orina patolgica, luego deberemos trabajar cada muestra, todas las
reacciones qumicas siguientes:
A) DETERMINACION DE AZUCARES REDUCTORES:
Mezclar en un tubo de ensayo Fehling A y Fehling B. (Fehling A (CuSO4) 1
mL -Fehling B (Tartrato/NaOH) 1 mL).
Aadir 1 mL de muestra de orina.
Agitar y calentar a ebullicin durante un minuto.
Nota: Si se reduce el cobre se forma un precipitado de CuSO 4 de color
rojizo. La reaccin ser positiva si la muestra se vuelve de color rojizo y
ser negativa si queda azul o cambia a un tono azul-verdoso.
B) IDENTIFICACIN DE MONOSACRIDOS REACCIN DEL AZUL DE
METILENO:
Colocar 1mL de orina en un tubo de ensayo.
Agregar 1mL de NaOH al 5%.
Luego aadir III gotas de azul de metileno y agitar y calentar a ebullicin
durante un minuto.
Nota: La reaccin ser positiva si la muestra despus de calentarla pierde
su color y luego regresa a una tonalidad azul, ser negativa si despus de
calentarla retorna al color normal de la orina.
C) PRUEBA DEL ESPEJO DE PLATA:
Aadir en un tubo de ensayo 1mL de Nitrato de plata amoniacal
Ag(NH3)2NO3
Luego agregar la muestra de orina 1mL.
Mezclar bien y se calentar con agitacin durante 2 minutos.
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D)
DETERMINACIN DE POLISACRIDOS:
Colocar en un tubo de ensayo 3 mL de muestra de orina.
Aadir III gotas de solucin de Lugol.
Observar y anotar los resultados.
Nota: Es positivo para polisacridos dando lugar a la aparicin de una
coloracin azul violceo, es negativo si mantiene el color ligeramente ms
amarillento que la muestra de orina.
IV. CUESTIONARIO:
1. Cules son los valores normales de glucosa en orina?
2. Cules son los valores normales de glucosa en sangre?
3. qu patologas estn asociadas al incremento de glucosa en el
Organismo?
6. Cules son los sntomas que presenta un paciente con diabetes mellitus?
IX.
RESULTADOS
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X.
DISCUSIN
XI.
CONCLUSIN
XII.
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
PRCTICA N 06
DEMOSTRACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
I.- MARCO TERICO.
Las enzimas son catalizadores complejo de origen biolgico que tienen grado de
especificidad y eficiencia, esto permite que las reacciones qumicas celulares se
desarrollen a mayor velocidad, mediante vas metablicas bien definidas, las
cuales son protenas especializadas para la vida, sin cuales los seres vivos no
podran existir.
Gua de Prcticas de Bioqumica Clnica
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II.- COMPETENCIAS.
1. Determinar la afinidad y especificidad de la amilasa salival.
2. Evaluar los factores que alteran la funcin enzimtica.
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3.2. MTODO:
3.2.1. EVALUACIN DE LA REACCIN DEL YODO FRENTE AL
ALMIDN
a) Colocar en un primer tubo de ensayo 2mL de solucin de almidn y
coloque III gotas de la solucin de almidn, anote la coloracin
obtenida.
b) Coloque en un segundo tubo 2 mL de solucin de lactosa y coloque III
gotas de la solucin de almidn, anote la coloracin obtenida.
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29
calentada
temperaturas
de
50C
anote
las
y anote las
y anote las
N tubo
Tubo 1
Tubo 2
Almidn
5%
2 mL
2 mL
sol yodo
III gotas
III gotas
Coloracin 0
min
Coloracin 5
min
Almidn
5%
2 mL
sol yodo
III gotas
Amilasa
10%
1 mL
Coloracin 0
min
Coloracin 5
min
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30
Tubo 2
Tubo 3
Tubo 4
Tubo 5
2 mL
2 mL
2 mL
2 mL
III gotas
III gotas
III gotas
III gotas
1 mL
1 mL
1 mL
1 mL
V. DISCUSIN:
V. CONCLUSIN:
PRCTICA N 07
DETERMINACIN DEL PUNTO ISOELCTRICO DE LAS
PROTENAS
I.
MARCO TERICO
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31
II. COMPETENCIAS:
Determinar el punto isoelctrico de la protena de la leche (casena)
y comprender el significado y aplicacin de la obtencin del punto
isoelctrico de una protena.
III.MATERIALES Y METODOS:
MUESTRA:
MATERIAL DE LABORATORIO:
Mecheros
Tubos de ensayo
Gradillas
Pinza de madera
Vasos de precipitacin
Pipetas
Frascos goteros
REACTIVOS:
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32
Fenolftalena
NaOH 10%
Alcohol
Buffer Acetato pH= 2.0
Buffer Acetato pH= 4.8
Buffer Acetato pH= 10
PROCEDIMIENTOS:
a) Implementar el siguiente sistema, luego de someter a bao mara u
soluciones buffer.
b)
Sustancias
Tubo I
leche
5 mL
Buffer Acetato pH=2.0
5 mL
Buffer Acetato pH=4.8
Buffer Acetato pH=10
Tubo I
5 mL
Tubo I
5 mL
5 mL
Mezclar y
observar el
grado de precipitacin en cada tubo usando cruces (+) de acuerdo a la
intensidad.
c) Valorar el pH de cada tubo.
d) Agregar IV gotas de fenolftalena a cada tubo y alcalinizar con solucin de
NaOH 10%.
5 mL
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V. DISCUSIN:
VI. CONCLUSIN:
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34
GUA DE
SEMINARIOS
GUA DE SEMINARIOS
INSTRUCCIONES GENERALES
Los Seminarios de bioqumica Clnica son actividades dirigidas a la ampliacin y
reforzamiento de algunos temas considerados especialmente importantes en la
prctica mdica. El seminario se basa en la asignacin de temas de exposicin
para grupos formados por cuatro estudiante segn rol previamente establecido
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por sorteo. Es importante que todos los alumnos revisen los temas de seminario
previamente.
Las sumillas que se presentan delinean los temas a ser expuestos por los
estudiantes en cada seminario. Cada exposicin tendr un tiempo de duracin de
30 minutos. Por eso se recomienda que el alumno se prepare adecuadamente
con material grfico y esquemas con el fin de optimizar su exposicin. Es
fundamental que el estudiante muestre capacidad de sntesis y juicio crtico,
haciendo nfasis en los aspectos ms importantes del tema, permitiendo que en
el tiempo restante el profesor y sus compaeros hagan preguntas y aportes
aclaratorios.
La bibliografa que se presenta es referencial. Con seguridad estn disponibles
otras referencias de muy buena calidad, entre ellas las reseadas en el Syllabus.
Realice la correspondiente bsqueda y ampliacin del tema.
Recuerde que se tomar una prueba de entrada que evaluar el nivel de
preparacin que el alumno ha realizado por esta actividad lectiva. Asimismo, al
inicio de cada seminario se solicitar que el alumno entregue el Cuestionario
desarrollado presentado en la Gua, el cual deber ser revisado inmediatamente
por Profesor.
En tal sentido, los alumnos del grupo responsable de un tema, debern presentar
Su informacin en formato digital (CD) e impreso.
Power point.
Informe.
SEMINARIO N 1
SEMINARIO N 2
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36
SEMINARIO N 3
SEMINARIO N 4
Metabolismo de Xenobiticos.
SEMINARIO N 5
Metabolismo hidromineral.
SEMINARIO N 6
Metabolismo de vitaminas
SEMINARIO N 7
Metabolismo de Hormonas
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