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UNIVERSIDAD SAN PEDRO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD


ESCUELA DE ENFERMERA

GUA DE PRCTICAS
BIOQUMICA CLNICA
III-CICLO ( CDIGO 09402)
SEMESTRE ACADMICO: 2012II

AUTOR:
Q.F. CISNEROS HILARIO CSAR BRAULIO
CHIMBOTE-PER
2012

INDICE

GUIA DE PRCTICAS DE LABORATORIO.. 03


Prctica N 1: Requerimiento energtico y dieta balanceada.. 04
Prctica N 2: Identificacin de Hidratos de carbono.... 07
Prctica N 3: Identificacin de Lpidos.... 12
Prctica N 4: Identificacin de Protenas. 19
Prctica N 5: Hidratos de carbono en orina................... 24
Prctica N 6: Demostracin de la actividad enzimtica.. 28
Prctica N 7: Determinacin del punto isoelctrico de las protenas 32

GUA DESEMINARIOS. 35
INSTRUCCIONES GENERALES............................................................. 36
SEMINARIO N 1: Enfermedades nutricionales.... 37
SEMINARIO N 2: Bioqumica de la diabetes mellitus. 37
SEMINARIO N 3: Enfermedades del metabolismo de protenas. 37
SEMINARIO N 4: Metabolismo de Xenobiticos. 37
SEMINARIO N 5: Metabolismo hidromineral 37
SEMINARIO N 6: Metabolismo de vitaminas 37
SEMINARIO N 7: Metabolismo de Hormonas.. 37

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GUA DE
PRCTICAS DE
LABORATORIO

PRCTICA N 01
REQUERIMIENTO ENERGTICO Y DIETA BALANCEADA
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I.- MARCO TERICO.


La ciencia de la nutricin estudia los requerimientos energticos de una dieta
necesaria para conservar la salud. Todos los componentes de la alimentacin
requeridos para conservar la vida se conocen, dado que es posible sustentar a
seres humanaos con dietas qumicas definidas. Existe una considerable discusin
respecto a los requerimientos energticos de cada componente de la dieta en
particular, debido a que estos varan respecto ala edad, el sexo y modo de vida de
las personas.
El cuerpo de los mamferos requiere de mucha energa para poder realizar
mltiples actividades. Los nutrientes aportan energa a los seres vivos, tambin
son llamados combustibles, y entre ellos tenemos a los carbohidratos, lpidos y
protenas.
La energa de un individuo depende de algunos factores como:
ndice de metabolismo basal: es el estado energtico necesario para
mantener las funciones fisiolgicas bsicas bajo condiciones estndares.
El efecto termgeno: es la accin dinmica especfica de alimento equivale
aproximadamente de 5 a 10% del gasto total de energa y se atribuye al
gasto energtico adicional.
La actividad fsica: es la variable mayor que afecta al gasto de energa.
La temperatura ambiental. Cuando est baja, el gasto energtico es mayor
debido a la accin que posee la grasa.
Se sabe que todo requerimiento energtico, va acompaado de una dieta
balanceada nutricionalmente; se llama as aquella mezcla de alimentos que
proporciona cantidades y cualidades apropiadas de: Carbohidratos, lpidos y
protenas, vitaminas y minerales, para mantener al organismo trabajando
adecuadamente acorde con el tipo de actividad que realiza la persona.
II.- COMPETENCIAS.
1. Determinar el ndice de masa corporal de cada alumno y asociarlo a las
complicaciones de salud que presentara, establecer medidas a tomar para
revertir dicho estado.
2. Determinar el ndice de masa corporal del grupo de prctica o todo el aula
y asociarlo a las complicaciones de salud que presentara, establecer
medidas a tomar para revertir dicho estado.
3. Determinar los requerimientos energticos y dieta balanceada para lo cual
es necesario:
III.- MATERIALES Y MTODO
3.1. MATERIALES
Balanza
Tallmetro
Calculadora

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3.2. MTODO.

Pesar y tallar a todos los alumnos correspondientes al curso de bioqumica


Clnica, e inmediatamente hallar el ndice de masa corporal, segn la
frmula que se indica a continuacin:
IMC = Peso (Kg) / (Estatura m) 2

Clasificar los ndices segn la tabla que se indica a continuacin y proceder


a tabular sus resultados utilizando el sistema informtico EXCEL, indicando
la mayor y menor frecuencia, adems de relacionndolo con las probables
patologas asociadas.
Sugerir medidas adecuadas que debern tomar los evaluados para mejorar
su calidad de vida.
Tabla de referencia e implicaciones del ndice de masa corporal

IV. RESULTADOS, CLCULOS Y/O ESQUEMAS

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V.

DISCUSIN

VI.

CONCLUSIN

VII.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

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PRCTICA N 02
IDENTIFICACIN DE HIDRATOS DE CARBONO
I.

MARCO TERICO:
Los hidratos de carbono son la ms importante fuente de energa en el
mundo. Representan el 40-80% del total de la energa ingerida,
dependiendo, claro est, del pas, la cultura y el nivel socioeconmico. Son
compuestos orgnicos compuestos por carbono, hidrgeno y oxgeno .Su
frmula qumica es (CH2O)n, donde la n indica el nmero de veces que se
repite la relacin para formar una molcula de hidrato de carbono ms o
menos compleja.
Aunque todos ellos comparten la misma estructura bsica, existen
diferentes tipos de hidratos de carbono que se clasifican en funcin de la
complejidad de su estructura qumica
Monosacridos: Son los carbohidratos de estructura ms simple.
Destacan:
-Glucosa: Se encuentra en las frutas o en la miel. Es el principal producto
final del metabolismo de otros carbohidratos ms complejos. En
condiciones normales es la fuente exclusiva de energa del sistema
nervioso, se almacena en el hgado y en el msculo en forma de
glucgeno.
-Fructosa: Se encuentra en la fruta y la miel. Es el ms dulce de los
azcares. Despus de ser absorbida en el intestino, pasa al hgado donde
es rpidamente metabolizada a glucosa.
-Galactosa: No se encuentra libre en la naturaleza, es producida por la
hidrlisis de la lactosa o azcar de la leche.
Disacridos: Son la unin de dos monosacridos, uno de los cuales es la
glucosa.
Sacarosa (glucosa + fructosa): Es el azcar comn, obtenido de la
remolacha y del azcar de caa.
-Maltosa (glucosa + glucosa): Raramente se encuentra libre en la
naturaleza.
-Lactosa (glucosa + galactosa): Es el azcar de la leche.
Al conjunto de monosacridos y disacridos se les llaman azcares.
Polisacridos: La mayora de los polisacridos son el resultado de la
unin de unidades de monosacridos (principalmente glucosa). Algunos
tienen ms de 3.000 unidades. Son menos solubles que los azcares
simples y su digestin es ms compleja.

II.

COMPETENCIAS:
II.1 Reconocer la presencia de hidratos de carbono en una muestra dada
por sus propiedades fsicas y qumicas.

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III.

MATERIAL Y MTODO:
3.1. MATERIAL

Tubos de ensayo
cido sulfrico.
Muestras de carbohidratos.
Solucin yodo.
Bao mara.

3.2 PROCEDIMIENTOS:
a) REACCION GENERAL DE LOS GLUCIDOS Y GLUCOSIDOS:
En esta experiencia se apreciara solamente una reaccin de coloracin
que experimentan los glcidos y glucsidos frente al cido sulfrico en
frio. Emplee 2 tubos de ensayo de tal manera que en el 1 agregue 2 ml
de glucosa, al 2 agregue unos 2 ml de sacarosa
A cada uno de los tubos agregue por las paredes de los mismos, 2
ml de
(cido sulfrico) concentrado, de tal manera que forme
una capa de separacin con los azucares, dejar en reposo y anotar
los colores.
b) REACCION DE MOLISCH:
Esta reaccin es de una sensibilidad extraordinaria, basta tan solo la
presencia de una fibrilla de papel para que de positiva la reaccin.
Debe tenerse en cuenta que muchas otras sustancias tambin dan
reaccin positiva la reaccin de Molisch, pero, no dan el color violeta
que es caracterstica en los carbohidratos.
Emplee 3 tubos de ensayo de manera que en 1 agregue 2ml de agua
destilada ms tres gotas de glucosa , al 2 agregue 2 ml de agua
destilada ms 3 gotas de lactosa y al 3 unos 2 ml de agua destilada
ms tres gotas de sacarosa.
A cada tubo agregue 2 gotas de una solucin de alfa-naftol alcohlica
al 20% y sobre la mezcla de cada tubo aada 2 ml de cido sulfrico
concentrado, de manera que el cido quede formando una capa con la
mezcla anterior.
Luego que se ha formado un anillo entre las dos capas agitar
cuidadosamente la mezcla y agregar agua aproximadamente 5 ml y
dejar en reposo 2 minutos .Anota los resultados de cada tubo.
c) REACCION DE TAUBER:
E n un tubo de ensayo 1 ml de glucosa
Agregue 1 ml de una solucin de bencidina actica al 4%
calentar hasta ebullicin y dejar en reposo para enfriar. (La
solucin de bencidina se separa mezclando 4 g de bencidina en
100 ml de cido actico glacial, esta solucin debe ser
recientemente preparada)
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d) DETERMINACION DEL PODER REDUCTOR DE LOS AZUCARES:


A: ALDOSA QUE PRESENTA FORMACION DEL ESPEJO DE PLATA
Agregar en un tubo de ensayo 1 ml de una solucin de
aldosa(Glucosa)
Agregar unas 5 gotas de Nitrato de plata amoniacal.
Colocar en bao mara unos 3 a 5 minutos .( Hasta aprox. 90-96
C)
B: REACCION DE FEHLING
Emplee 4 tubos de ensayo , en el 1 mida 1 ml de glucosa , en l 2
1 ml de sacarosa, en el 3 1 ml de levulosa y en el 4 1 ml de
lactosa
A cada uno de los tubos agregue 1 ml de solucin de Fehling A
(Azul , cprica, se obtiene al disolver 35g de sulfato de cobre en
500 ml de agua destilada), y 1ml de la solucin de Fehling B
( Alcalina , incolora, se obtiene al disolver 173 g de Tartrato de sodio
y potasio , 50 g de OH en 500 ml de agua destilada) ; y llevarlos a
bao maria por 3 a 5 minutos ( Hasta aprox. 96-98 C) . Anote los
resultados de cada tubo
e) DIFERENCIACIONDE POLISACARIDOS : REACCION CON YODO:
En un tubo de ensayo , mida 2 ml de una solucin de almidn
Agregue 2 gotas de una solucin diluida de Lugol.
Resultados: La reaccin se torna azul violeta
Diluir con agua destilada hasta el doble de su volumen
Observaciones: La reaccin se torna azul violeta, despus es llevado a
bao mara por 3 minutos aprox. Al sacarlo la solucin se torn
transparente y a medida que se iba enfriando iba regresando a su color
inicial poco a poco (azul violeta)
IV.

CUESTIONARIO:

1. Mediante ecuaciones qumicas explique la reduccin del reactivo de


Fehling frente a los carbohidratos
2. Completar y responder en forma precisa segn corresponda:
a) El almidn est formado por los compuestos
b) La sacarosa est compuesta por
c) El hombre no metaboliza la celulosa porque:

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d) Cul es la diferencia qumica entre la galactosa y fructuosa?


e) Cules son los azcares pentanoaldosas?
f) Cul es la diferencia entre la maltosa y la celobiosa
g) La estructura qumica de la lactosa es:
h) Cules son los carbohidratos ms importantes que consume el
hombre?
i) Los disacridos estn formados por:
j) Los disacridos ms consumidos por el hombre son:
k) Cul es la diferencia qumica entre el almidn, el glucgeno y la
celulosa?
l) Por qu se considera al almidn como fuente de energa para el
hombre?
m) Qu son las isomaltosa y la maltosa?
n) Mencione y describa brevemente los monosacridos simples de
inters biolgico

o) Mencione y describa brevemente cuatro disacridos de importancia


biolgica

p) Mencione y describa brevemente cuatro polisacridos de


importancia

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V.

RESULTADOS

VI.

DISCUSIN

VII.

CONCLUSIN

VIII.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

PRCTICA N 03
IDENTIFICACIN DE LPIDOS
I.

MARCO TERICO

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Los lpidos son un conjunto de molculas orgnicas, la mayora


biomolecular, compuestas principalmente por carbono e hidrgeno y en
menor medida oxgeno, aunque tambin pueden contener fsforo, azufre y
nitrgeno, que tienen como caracterstica principal el ser hidrofbicas o
insolubles en agua y s en solventes orgnicos como la bencina, el alcohol,
el benceno y el cloroformo. En el uso coloquial, a los lpidos se les llama
incorrectamente grasas, ya que las grasas son slo un tipo de lpidos
procedentes de animales. Los lpidos cumplen funciones diversas en los
organismos vivientes, entre ellas la de reserva energtica (triglicridos), la
estructural (fosfolpidos de las bicapas) y la reguladora (esteroides).
Los Lpidos tambin funcionan para el desarrollo del cerebro, el
metabolismo y el crecimiento.
Clasificacin bioqumica
Los lpidos son un grupo muy heterogneo que usualmente se
clasifican en dos grupos, atendiendo a que posean en su composicin
cidos grasos (lpidos saponificables) o no lo posean (lpidos
insaponificables).
Lpidos saponificables
Simples. Lpidos que slo contienen carbono, hidrgeno y oxgeno.
Acilglicridos. Son steres de cidos grasos con glicerol. Cuando
son slidos se les llama grasas y cuando son lquidos a temperatura
ambiente se llaman aceites.
Cridos (ceras).
Complejos. Son los lpidos que adems de contener en su molcula
carbono, hidrgeno y oxgeno, tambin contienen otros elementos
como nitrgeno, fsforo, azufre u otra biomolcula como un glcido.
A los lpidos complejos tambin se les llama lpidos de membrana
pues son las principales molculas que forman las membranas
celulares.

Fosfolpidos
Fosfoglicridos
Fosfoesfingolpidos
Glucolpidos
Cerebrsidos
Ganglisidos

Lpidos insaponificables
Terpenoides
Esteroides
Eicosanoides

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Lpidos saponificables
cidos grasos
Son las unidades bsicas de los lpidos saponificables, y consisten en
molculas formadas por una larga cadena hidrocarbonada con un nmero
par de tomos de carbono (12-24) y un grupo carboxilo terminal. La
presencia de dobles enlaces en el cido graso reduce el punto de fusin.
Los cidos grasos se dividen en saturados e insaturados.
Saturados. Sin dobles enlaces entre tomos de carbono; por
ejemplo, cido lurico, cido mirstico, cido palmtico, cido
margrico, cido esterico, cido araqudico y cido lignogrico.
Insaturados. Los cidos grasos insaturados se caracterizan por
poseer dobles enlaces en su configuracin molecular. stas son
fcilmente identificables, ya que estos dobles enlaces hacen que su
punto de fusin sea menor que en el resto. Se presentan ante
nosotros como lquidos, como aquellos que llamamos aceites. Este
tipo de alimentos disminuyen el colesterol en sangre y tambin son
llamados cidos grasos esenciales. Los animales no son capaces de
sintetizarlos, pero los necesitan para desarrollar ciertas funciones
fisiolgicas, por lo que deben aportarlos en la dieta. La mejor forma y
la ms sencilla para poder enriquecer nuestra dieta con estos
alimentos, es aumentar su ingestin, es decir, aumentar su
proporcin respecto los alimentos que consumimos de forma
habitual. Con uno o ms dobles enlaces entre tomos de carbono;
por ejemplo, cido palmitoleico, cido oleico, cido eladico, cido
linoleico, cido linolnico y cido araquidnico y cido nervnico.
Los denominados cidos grasos esenciales no pueden ser sintetizados por
el organismo humano y son el cido linoleico, el cido linolnico y el cido
araquidnico, que deben ingerirse en la dieta.
Propiedades fisicoqumicas
Carcter antiptico. Ya que el cido graso est formado por un
grupo carboxilo y una cadena hidrocarbonada, esta ltima es la que
posee la caracterstica hidrfoba; por lo cual es responsable de su
insolubilidad en agua.
Punto de fusin: Depende de la longitud de la cadena y de su
nmero de insaturaciones, siendo los cidos grasos insaturados los
que requieren menor energa para fundirse.
Esterificacin. Los cidos grasos pueden formar steres con
grupos alcohol de otras molculas.
Saponificacin. Por hidrlisis alcalina los steres formados
anteriormente dan lugar a jabones (sal del cido graso)
Autooxidacin. Los cidos grasos insaturados pueden oxidarse
espontneamente, dando como resultado aldehdos donde existan
los dobles enlaces covalentes.
Acilglicridos
Los acilglicridos o acilgliceroles son steres de cidos grasos con glicerol
(glicerina), formados mediante una reaccin de condensacin llamada

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esterificacin. Una molcula de glicerol puede reaccionar con hasta tres


molculas de cidos grasos, puesto que tiene tres grupos hidroxilo.
Segn el nmero de cidos grasos que se unan a la molcula de glicerina,
existen tres tipos de acilgliceroles:

Monoglicridos. Slo existe un cido graso unido a la molcula de


glicerina.
Diacilglicridos. La molcula de glicerina se une a dos cidos
grasos.
Triacilglicridos. Llamados comnmente triglicridos, puesto que la
glicerina est unida a tres cidos grasos; son los ms importantes y
extendidos de los tres.

Los triglicridos constituyen la principal reserva energtica de los animales,


en los que constituyen las grasas; en los vegetales constituyen los aceites.
El exceso de lpidos es almacenado en grandes depsitos en el tejido
adiposo de los animales.
Fosfolpidos
Los fosfolpidos se caracterizan por poseer un grupo fosfato que les otorga
una marcada polaridad. Se clasifican en dos grupos, segn posean glicerol
o esfingosina.
Fosfoglicridos
Los fosfoglicridos estn compuestos por cido fosfatdico, una molcula
compleja compuesta por glicerol, al que se unen dos cidos grasos (uno
saturado y otro insaturado) y un grupo fosfato; el grupo fosfato posee un
alcohol o un aminoalcohol, y el conjunto posee una marcada polaridad y
forma lo que se denomina la "cabeza" polar del fosfoglicrido; los dos
cidos grasos forman las dos "colas" hidrfobas; por tanto, los
fosfoglicridos son molculas con un fuerte carcter anfiptico que les
permite formar bicapas, que son la arquitectura bsica de todas las
membranas biolgicas.
Los principales alcoholes y aminos de los fosfoglicridos que se encuentran
en las membranas biolgicas son la colina (para formar la fosfatidilcolina o
lecitina), la etanolamina (fosfatidiletanolamina o cefalina), serina
(fosfatidilserina) y el inositol (fosfatidilinositol).
II.

COMPETENCIAS
Determinar las propiedades fsicas y qumicas de los lpidos y su
importancia en los organismos vivos.

III.

MATERIAL Y MTODO
1.1. MATERIAL
ter

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Cerebro De Cerdo
NAOH
Bao Mara
Molibdato De Amonio
KOH
Lugol
H2SO4
Anhdrido Actico

3.2

MTODO

a) RECONOCIMIENTO DEL CIDO ORTOFOSFRICO

Tomar 1 ml de la solucin A y colocarlo en un tubo de ensayo y


agregarle 5 gotas de HNO3, concentrado y calentar hasta ebullicin.
Agregue a la solucin anterior 8 gotas de molibdato de amonio
(NH4)2MOO4 siga calentando la solucin y agitar constantemente
con un agitador raspando las paredes del tubo
Los resultados obtenidos son: La Aparicin de un color amarillo
patito.

b) RECONOCIMIENTO DE LA COLINA
Mida 1 ml de la solucin B en un tubo de ensayo y aadir 3 ml de
Lugol.
Al mismo tubo agregue gota a gota KOH al 20% hasta cambio de
color de la solucin.
A la solucin anterior agregarle 10 gotas de piridina y llevarlo a Bao
Mara por 3 minutos.
Los resultados obtenidos son: De un olor amarillo transparente se
volvi a un color blanco transparente en esta muestra o
procedimiento realizado.
c) RECONOCIMIENTO DE COLESTEROL
REACCIN DE SALKOUSKY
Mida 2 ml de aceite cocinero en un tubo de ensayo y agregarle 2 ml
de H2SO4 concentrado por las paredes cuidando formando dos
capas.
Los resultados obtenidos son: La formacin de un color amarillo
violasio que nos indica la presencia de colesterol en este primer
tubo.
Mida 2 ml de aceite colesterol en un tubo de ensayo y agregarle 2 ml
de H2SO4 concentrado por las paredes cuidando formando dos
capas.
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Los resultados obtenidos son: La formacin de un color amarillo


violasio que nos indica la presencia de colesterol en este segundo
tubo.
REACCIN DE LIBERMAN-BUCHARD
En un tubo de ensayo medir 2 ml de aceite de oliva y agregarle 5
gotas de anhdrido actico y por las paredes del tubo agregarle al
tubo 2 ml de H2SO4 concentrado de manera que se forme dos
capas.
Los resultados obtenidos son: La formacin de un color amarillo
violasio que nos indica la presencia de colesterol en este primer tubo
de ensayo.
En un tubo de ensayo medir 2 ml de aceite colesterol y agregarle 5
gotas de anhdrido actico y por las paredes del tubo agregarle al
tubo 2 ml de H2SO4 concentrado de manera que se forme dos
capas.
Los resultados obtenidos son: La formacin de un color amarillo
violasio que nos indica la presencia de colesterol en este segundo
tubo de ensayo.
IV.

CUESTIONARIO
1. Qu lpidos ha extrado en la maceracin etrea?
2. Cules son los lpidos que poseen el grupo colina, y que Ud. esta
identificando en la prctica?

3. Por qu se usa la piridina en el reconocimiento de la colina?

4. Completa o responder brevemente y en forma precisa segn


corresponda:
a. Los cidos grasos esenciales son:

b. Cul es la funcin de las lipoprotenas en la sangre?

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c. La estructura qumica del jabn oleato de potasio es:


d. La estructura qumica del monopalmitato de glicerilo es:

e. Esquematice los fosfolpidos presentes en una membrana celular.


Recuerde que el medio externo y el citoplasma contienen un gran
porcentaje de agua.

f. Los lpidos presentes en las clulas y los tejidos se extraen con


solventes porque:
g. Los esfingolpidos estn formados qumicamente por:

h. Estructura qumica del estearato de Sodio.


i. Las insaturaciones del cido linolnico son:

j. Las insaturaciones del cido linoleico son:

k. El cido octadecanoico se conoce como:

V.

RESULTADOS

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17

VI.

DISCUSIN

VII.

CONCLUSIN

VIII.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

PRCTICA N 04
IDENTIFICACIN DE PROTENAS
I.

MARCO TERICO:
Los aminocidos son los monmeros de las protenas. Slo 20
aminocidos constituyen las unidades monomricas a partir de las cuales
se sintetizan las cadenas polipeptdicas. Por lo tanto, todas las protenas
contienen diversas proporciones de estos 20 aminocidos.

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Cada aminocido contiene un grupo carboxilo, un grupo amino, y un


hidrgeno unido a un tomo de carbono central conocido como el carbono
. Son clasificados en base a su solubilidad en agua, que a su vez
depende de la cadena lateral (grupo R).
Los aminocidos esenciales no pueden ser sintetizados por el hombre.
Dichos aminocidos deben ser necesariamente suministrados con las
protenas de los alimentos. Si falta uno solo de ellos no ser posible
sintetizar ninguna de las protenas en la que sea requerido dicho
aminocido. Esto puede dar lugar a diferentes tipos de desnutricin, segn
cual sea el aminocido limitante.
Las protenas contienen C, H, O y N y casi todas poseen tambin S.
El contenido de nitrgeno representa, trmino medio, el 16 % de la masa
total de la molcula, lo cual permite calcular la cantidad de protena
existente en una muestra, por medicin del N de la misma. Son los
compuestos orgnicos ms abundantes, en animales superiores
representan alrededor del 50% del peso seco de los tejidos. No existe
proceso biolgico alguno que no dependa de la presencia y/o actividad de
stas molculas.
Las protenas son molculas polimricas de enorme tamao; estn
constituidas por gran nmero de unidades estructurales que forman largas
cadenas.
Cuando se dispersan en un solvente adecuado, forman
soluciones coloidales. Cada tipo celular posee una distribucin, cantidad y
especie de protenas que determina el funcionamiento y la apariencia de la
clula
2. COMPETENCIAS:
Determinar las propiedades fsicas y qumicas de los aminocidos y las
protenas por sus reacciones caractersticas.
3.

MATERIAL Y MTODO:
3.1. MATERIAL
Tubos de ensayo
cido fosfotungstico
cido fosfomolibdico
HNO3
NaOH
Fenol
Reactivo de Milln
CuSO4
Ninnhidrina
Solucin alcohlica de timol
Acetato de plomo
HCl

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cido ntrico
Muestras de aminocidos y protenas
3.2. MTODOS
Empleando tres tubos de ensayo mida exactamente en cada uno de
ellos 2ml de una solucin de protenas
Al primer tubo agregue 15 gotas de HCl concentrado , al 2 15 gotas de
HNO3
Observe los resultados en los tubos:
I.

ACCION DE LOS REACTIVOS ALCALOIDES:


Emplee 3 tubos de ensayo y mida a cada uno de ellos 2 ml de una
solucin de protena (albumina de huevo)
Agregue 15 gotas de: Acido pcrico al 1 tubo, acido fosfotungstico
al 2; y cido fosfomolibdico al 3 tubo.
Observe los resultados de la experiencia:

II.

REACCION XANTOPROTEICA (HELLER)


Emplee un tubo de ensayo y mida 2 ml de una solucin de
protena y sobre esta solucin agregue 15 gotas de HNO 3
concentrado y lleve a bao mara por 3 minutos.
Enfriar la mezcla y agregar NaOH al 25% unas gotas
Observe los resultados:

III.

REACCION DE MILLON: (HNO3 en Hg metlico)


Esta reaccin se debe a la presencia del grupo fenol presente en
los restos de tirosina en la molecular proteica, las protenas que
carecen de ella no dan positiva la reaccin
Emplee 2 tubos de ensayo y mida en cada uno de ellos 2 ml de
una solucin de protena en el 1 y una solucin de fenol en el 2
A cada uno de los tubos agregue 10 gotas del reactivo de milln y
llevar a bao mara por 3 minutos.
La solucin de fenol con el reactivo puede dar positiva aun sin
calentarla.
Anote los resultados de esta experiencia

IV.

REACCION DE BIURET:
Esta reaccin la desarrolla cualquier tipo de protena, es decir, es
una reaccin de coloracin general. Caracterizacin de tripptidos
en adelante
En un tubo de ensayo mida 2ml de una solucin de protena y
agregue 2 ml de NaOH al 10%, Mezclar bien

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A la mezcla anterior agregar una solucin de CuSO4 al 1% gota a


gota hasta la aparicin de un color caracterstico des esta
reaccin ( violeta, rosado o purpura)
Anote resultados:
V.

REACCION DE NINHIDRINA
Esta reaccin es general para todo tipo de protena, es decir, para
todos los compuestos que contengan por lo menos un grupo
amino y carboxilo libres.
En un tubo de ensayo medir 2ml de una solucin de protena y
agregar 10 gotas
Llevar la mezcla anterior a bao mara por 5 minutos
Anotar los resultados.

VI.

REACCION DE KOLISCK FOULGER


Esta reaccin lo dan positivo las protenas que contenga en su
estructura un carbohidrato , es decir, exista en la protena una
funcin glucosdica
En un tubo de ensayo mida 2 ml de una solucin de protena y
agregar 10 gotas de una solucin alcohlica de timol, por las
paredes del tubo agregar sobre la mezcla 2ml de H2SO4
concentrado de manera que se forme un anillo en las dos fases.
Anotar resultados

VII.

REACCION DE LOS TIOGRUPOS


Esta reaccin es positiva para aquellas protenas que contienen
en su estructura aminocidos azufrados
En un tubo de ensayo medir 2 ml de una solucin de protena
agregar 2 ml de NaOH al 40% y 1 ml de acetato de plomo.
Calentarlo suavemente hasta la ebullicin.
Anotar resultados:

4. CUESTIONARIO:
1. Por qu se produce la precipitacin de las protenas frente a los cidos
fuertes?

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21

2. cul es la semejanza y diferencia entre una estructura primaria y


secundaria en una protena?

3. si Ud. Quisiera reconocer la presencia de cistena o de la fenilalanina en la


albumina de huevo cmo hara?

4. Explique la accin del calor sobre la albumina A qu nivel de la protena


acta el calor?
5. Por qu es importante la histidina para el nio y cul es su funcin
qumica en el organismo humano?

6. diga Ud. La importancia biolgica de los aminocidos.

7. Enumere los aminocidos esenciales y por qu se denominan as?

8. Cul es la importancia de la metionina y de la cistena en el organismo?

V.

RESULTADOS

Gua de Prcticas de Bioqumica Clnica

Pgina

22

VI.

DISCUSIN

VII.

CONCLUSIN

VIII.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

PRCTICA N 05
HIDRATOS DE CARBONO EN ORINA
I.

MARCOTERICO
Los carbohidratos estn presentes fundamentalmente en los vegetales (frutas y
hortalizas). En este grupo de alimentos, los carbohidratos son el grupo mayoritario
despus del agua. Pueden suponer entre un 2-20% de la composicin total de los
vegetales. El pepino, por ejemplo, tiene pocos carbohidratos, y los que ms tienen

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23

son los vegetales amilceos que son los que tienen una gran cantidad de
concentracin de almidn.
Los carbohidratos pueden ser diferentes en cuanto a su peso molecular, los hay
simples y complejos. Los azcares simples ms importantes son la glucosa, la
fructosa o la sacarosa. La importancia que tienen es por el sabor dulce que
confiere a los alimentos lo que les hace mucho ms atractivos.
Otro azcar importante pero este ya complejo es el almidn. Es la forma en la que
el tejido vegetal reserva energa. El ser humano lo digiere y a veces lo almacena
para energa.
La mayor parte de los azcares que se obtienen en nuestra dieta provienen de los
aadidos a los productos elaborados que tienen ms que los naturales.
La sacarosa que se obtienen de la caa de azcar o de la remolacha es la que
ms se utiliza. La lactosa es el ms importante de origen animal.
Los carbohidratos se clasifican en: monosacridos, oligosacridos (2-20
monosacridos unidos) y polisacridos (ms de 20 monosacridos unidos).
Valores normales de azcar en la sangre
Los valores normales son entre 70 y 110 mg/dL. En los nios pequeos se
aceptan valores de 40 a 100 mg/dL.
Los valores ms bajos de 40-50 mg/dL se consideran bajos (hipoglucemia).
Los valores mayores a 140 mg/dL se consideran (hiperglucemia).
Pueden modificar los valores de glucemia y no ser por una diabetes ciertas
situaciones:
1. Estrs por enfermedades agudas (infarto cerebral, cardiaco, anestesia
general)
2. Los tratamientos con sueros en vena, ya que contienen dextrosa (azcar)
3. Embarazo
4. Medicamentos (antidepresivos, antihipertensivos, hormonas femeninas,
etc).
5. El alcohol y analgsicos pueden disminuirla.
Rango normal de glucosa en la orina: 0 - 0,8 mmol / L (0 - 15 mg / dL).
II.

III.

COMPETENCIAS:
Reconocer la presencia de hidratos de carbono en orina normal y orina patolgica
(Paciente Diabtico).

MATERIALES Y METODOS:
III.1. MATERIALES.
A)

MUESTRA:
Tiras reactivas.
Glucosa AL 5%
Orina Normal
Orina Patolgica (Paciente diabtico).

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24

B)

MATERIAL DE LABORATORIO:
Mecheros
Tubos de ensayo
Gradillas
Pinza de madera
Vasos de precipitacin
Pipetas
Frascos goteros

C)

REACTIVOS:
Azul de metileno
Amoniaco al 30%
Nitrato de plata amoniacal Ag(NH3)2NO3
NaOH 10%
Lugol
Reactivos de fehling A y fehling B

3.2. PROCEDIMIENTOS:
Confirmar mediante tiras reactivas la presencia de glucosa en las muestras de
orina normal y orina patolgica, luego deberemos trabajar cada muestra, todas las
reacciones qumicas siguientes:
A) DETERMINACION DE AZUCARES REDUCTORES:
Mezclar en un tubo de ensayo Fehling A y Fehling B. (Fehling A (CuSO4) 1
mL -Fehling B (Tartrato/NaOH) 1 mL).
Aadir 1 mL de muestra de orina.
Agitar y calentar a ebullicin durante un minuto.
Nota: Si se reduce el cobre se forma un precipitado de CuSO 4 de color
rojizo. La reaccin ser positiva si la muestra se vuelve de color rojizo y
ser negativa si queda azul o cambia a un tono azul-verdoso.
B) IDENTIFICACIN DE MONOSACRIDOS REACCIN DEL AZUL DE
METILENO:
Colocar 1mL de orina en un tubo de ensayo.
Agregar 1mL de NaOH al 5%.
Luego aadir III gotas de azul de metileno y agitar y calentar a ebullicin
durante un minuto.
Nota: La reaccin ser positiva si la muestra despus de calentarla pierde
su color y luego regresa a una tonalidad azul, ser negativa si despus de
calentarla retorna al color normal de la orina.
C) PRUEBA DEL ESPEJO DE PLATA:
Aadir en un tubo de ensayo 1mL de Nitrato de plata amoniacal
Ag(NH3)2NO3
Luego agregar la muestra de orina 1mL.
Mezclar bien y se calentar con agitacin durante 2 minutos.

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25

Sacar y dejar reposar.


Nota: Si el ensayo es positivo la plata metlica, que precipita, se va
depositando en la pared del tubo formando un espejo (espejo de plata), si
el ensayo es negativo no se forma ningn precipitado(espejo de plata) en la
pared del tubo.

D)

DETERMINACIN DE POLISACRIDOS:
Colocar en un tubo de ensayo 3 mL de muestra de orina.
Aadir III gotas de solucin de Lugol.
Observar y anotar los resultados.
Nota: Es positivo para polisacridos dando lugar a la aparicin de una
coloracin azul violceo, es negativo si mantiene el color ligeramente ms
amarillento que la muestra de orina.

IV. CUESTIONARIO:
1. Cules son los valores normales de glucosa en orina?
2. Cules son los valores normales de glucosa en sangre?
3. qu patologas estn asociadas al incremento de glucosa en el
Organismo?

4. Establezca la diferencia entre la diabetes mellitus y la inspida?


5. Establezca a diferencia entre la diabetes tipo I, tipo II y la gestacional?

6. Cules son los sntomas que presenta un paciente con diabetes mellitus?
IX.

RESULTADOS

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26

X.

DISCUSIN

XI.

CONCLUSIN

XII.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

PRCTICA N 06
DEMOSTRACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA
I.- MARCO TERICO.
Las enzimas son catalizadores complejo de origen biolgico que tienen grado de
especificidad y eficiencia, esto permite que las reacciones qumicas celulares se
desarrollen a mayor velocidad, mediante vas metablicas bien definidas, las
cuales son protenas especializadas para la vida, sin cuales los seres vivos no
podran existir.
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27

Las sustancias son sustancias relativamente frgiles con tendencia a sufrir


desnaturalizacin bajo condiciones apropiadas. En el manejo de las enzimas, la
primera consideracin debe ser siempre evitar la desnaturalizacin e inactivacin.
Los tratamientos comparativos violentos (cidos fuertes, altas temperaturas, etc.)
frecuentemente empleada en qumica orgnica, son rpidamente fatales para las
enzimas.
El xito en el manejo de las enzimas, est en que el uso debe hacerlo en
condiciones en las que ellas son estables. Estas condiciones varan para las
diferentes enzimas, pero en general deben evitarse altas temperaturas,
soluciones cidas y alcalinas fuertes. Es aconsejable no someterlas a
temperaturas que sobrepase lo corporal.
La actividad de las enzimas es evaluada controlando el sustrato no transformado
(sustrato-residual), o determinado el producto formado. Posterior a un tiempo de
incubacin del complejo enzima-sustrato en condiciones especficas de pH y
temperatura, concentracin de enzimas, concentracin de sustrato, concentracin
de iones inorgnicos y concentracin de coenzimas.

II.- COMPETENCIAS.
1. Determinar la afinidad y especificidad de la amilasa salival.
2. Evaluar los factores que alteran la funcin enzimtica.

III.- MATERIALES Y REACTIVOS:


3.1 M ATERIALES:
Vaso de Precipitacin
Bagueta
Gradilla.
Tubos de ensayo.

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28

Pipetas de 1mL, 3 mL y 5 mL.


Mechero.
Alcohol.
Pinza para tubos.
Cronmetro.
Frascos goteros.
Agua destilada.
Solucin de Almidn 5%.
Solucin de lactosa 5%.
Solucin de yodo.
Enzima: amilasa salival 10%.

3.2. MTODO:
3.2.1. EVALUACIN DE LA REACCIN DEL YODO FRENTE AL
ALMIDN
a) Colocar en un primer tubo de ensayo 2mL de solucin de almidn y
coloque III gotas de la solucin de almidn, anote la coloracin
obtenida.
b) Coloque en un segundo tubo 2 mL de solucin de lactosa y coloque III
gotas de la solucin de almidn, anote la coloracin obtenida.

3.2.2. EVALUACIN DE LOS PARMETROS QUE ALTERAL LA


FUNCIN
ENZIMTICA

a) Coloque en 5 tubos de ensayo 2 mL almidn luego III gotas de solucin


de yodo, observe y anote la coloracin formada.
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29

b) El primer tubo servir de control y slo se le agregar 1 mL de amilasa


salival, anote las observaciones al inicio y despus de 5 minutos.
c) Al segundo tubo se le agregar, 1 mL de amilasa salival que ha sido
previamente refrigerada, anote las observaciones al inicio y despus de
5 minutos.
d) Al tercer tubo se le agregar, 1 mL de amilasa salival que ha sido
previamente

calentada

temperaturas

de

50C

anote

las

observaciones al inicio y despus de 5 minutos.


e) Al cuarto tubo se le agregar, 1 mL de amilasa salival que ha sido
previamente tratada con hidrxido de sodio al 5%

y anote las

observaciones al inicio y despus de 5 minutos.


f) Al quinto tubo se le agregar, 1 mL de amilasa salival que ha sido
previamente tratada con cido clorhdrico al 5%

y anote las

observaciones al inicio y despus de 5 minutos.


IV. RESULTADOS:
EVALUACIN DE LA REACCIN DEL YODO FRENTE AL ALMIDN

N tubo
Tubo 1
Tubo 2

Almidn
5%
2 mL
2 mL

sol yodo
III gotas
III gotas

Coloracin 0
min

Coloracin 5
min

EVALUACIN DE LOS PARMETROS QUE ALTERAL LA FUNCIN


ENZIMTICA
N tubo
Tubo 1

Almidn
5%
2 mL

sol yodo
III gotas

Gua de Prcticas de Bioqumica Clnica

Amilasa
10%
1 mL

Coloracin 0
min

Coloracin 5
min

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30

Tubo 2
Tubo 3
Tubo 4
Tubo 5

2 mL
2 mL
2 mL
2 mL

III gotas
III gotas
III gotas
III gotas

1 mL
1 mL
1 mL
1 mL

V. DISCUSIN:

V. CONCLUSIN:

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS:

PRCTICA N 07
DETERMINACIN DEL PUNTO ISOELCTRICO DE LAS
PROTENAS
I.

MARCO TERICO

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31

Las protenas con compuestos orgnicos esenciales y constitutivos de todo


ser vivo, adems de cumplir una funcin estructural presenta actividad
biolgica participando en diferentes actividades metablicas celulares,
denominados enzimas. Cada especie animal y vegetal posee miles de
protenas diferentes, sin embargo todas las protenas son una secuencia de
20 aminocidos diferentes, que se enlazan por uniones pepiticas, con
liberacin de una molcula de agua; el orden y la secuencia como en
nmero de aminocidos que se repite, son caractersticos de cada
protena.
Es necesario recalcar que las protenas tienen una organizacin estructural
molecular: la estructura primaria, que es la ms simple y la que es
asimilable por las clulas en el proceso de la digestin, se forma a travs
de los enlaces covalentes pepiticos; la estructura secundaria se forma
gracias a los puentes de hidrgeno formados entre el oxgeno del grupo
carboxilo del enlace pepitico de un residuo de un aminocido localizado, a
4 residuos de el dndose as una formacin de un hlice, pero tambin se
forma la lamina beta que es la segunda estructura secundaria mediante
plegamiento o siguiendo un patrn zig-zag. Las estructuras terciaria y
cuaternaria se refieren a la conformacin tridimensional completa de un
polipptido, mediante el ensamble del dominio y sus relaciones con el
espacio, estos se forman por diferentes enlaces (electrostticos, disulfuro,
no polares, puente de hidrgeno). Los residuos o grupos laterales de los
aminocidos van ha ser responsables de la carga neta de las protenas,
cuando la carga neta es cero (neutro) se conoce como punto isoelctrico,
propiedad que permite separar las protenas de una mezcla.

II. COMPETENCIAS:
Determinar el punto isoelctrico de la protena de la leche (casena)
y comprender el significado y aplicacin de la obtencin del punto
isoelctrico de una protena.
III.MATERIALES Y METODOS:
MUESTRA:

Leche evaporada (casena).

MATERIAL DE LABORATORIO:
Mecheros
Tubos de ensayo
Gradillas
Pinza de madera
Vasos de precipitacin
Pipetas
Frascos goteros
REACTIVOS:

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Fenolftalena
NaOH 10%
Alcohol
Buffer Acetato pH= 2.0
Buffer Acetato pH= 4.8
Buffer Acetato pH= 10

PROCEDIMIENTOS:
a) Implementar el siguiente sistema, luego de someter a bao mara u
soluciones buffer.

b)

Sustancias
Tubo I
leche
5 mL
Buffer Acetato pH=2.0
5 mL
Buffer Acetato pH=4.8
Buffer Acetato pH=10

Tubo I
5 mL

Tubo I
5 mL

5 mL

Mezclar y
observar el
grado de precipitacin en cada tubo usando cruces (+) de acuerdo a la
intensidad.
c) Valorar el pH de cada tubo.
d) Agregar IV gotas de fenolftalena a cada tubo y alcalinizar con solucin de
NaOH 10%.
5 mL

Cmo fue la evolucin de la polaridad de la casena durante el proceso o


experimentacin?
IV. RESULTADOS:

Gua de Prcticas de Bioqumica Clnica

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33

V. DISCUSIN:

VI. CONCLUSIN:

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS:

Gua de Prcticas de Bioqumica Clnica

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34

GUA DE
SEMINARIOS

GUA DE SEMINARIOS
INSTRUCCIONES GENERALES
Los Seminarios de bioqumica Clnica son actividades dirigidas a la ampliacin y
reforzamiento de algunos temas considerados especialmente importantes en la
prctica mdica. El seminario se basa en la asignacin de temas de exposicin
para grupos formados por cuatro estudiante segn rol previamente establecido

Gua de Prcticas de Bioqumica Clnica

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35

por sorteo. Es importante que todos los alumnos revisen los temas de seminario
previamente.
Las sumillas que se presentan delinean los temas a ser expuestos por los
estudiantes en cada seminario. Cada exposicin tendr un tiempo de duracin de
30 minutos. Por eso se recomienda que el alumno se prepare adecuadamente
con material grfico y esquemas con el fin de optimizar su exposicin. Es
fundamental que el estudiante muestre capacidad de sntesis y juicio crtico,
haciendo nfasis en los aspectos ms importantes del tema, permitiendo que en
el tiempo restante el profesor y sus compaeros hagan preguntas y aportes
aclaratorios.
La bibliografa que se presenta es referencial. Con seguridad estn disponibles
otras referencias de muy buena calidad, entre ellas las reseadas en el Syllabus.
Realice la correspondiente bsqueda y ampliacin del tema.
Recuerde que se tomar una prueba de entrada que evaluar el nivel de
preparacin que el alumno ha realizado por esta actividad lectiva. Asimismo, al
inicio de cada seminario se solicitar que el alumno entregue el Cuestionario
desarrollado presentado en la Gua, el cual deber ser revisado inmediatamente
por Profesor.
En tal sentido, los alumnos del grupo responsable de un tema, debern presentar
Su informacin en formato digital (CD) e impreso.

Power point.

Informe.

SEMINARIO N 1

Enfermedades Relacionadas con problemas nutricionales.

SEMINARIO N 2

Bioqumica de la diabetes mellitus.

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SEMINARIO N 3

Enfermedades relacionadas con el metabolismo de protenas.

SEMINARIO N 4

Metabolismo de Xenobiticos.

SEMINARIO N 5

Metabolismo hidromineral.

SEMINARIO N 6

Metabolismo de vitaminas

SEMINARIO N 7

Metabolismo de Hormonas

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