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PHYSIOLOGIE BACTRIENNE

Pr. D. TIOUIT
2011/2012

INTRODUCTION
-Physiologie bactrienne : tudie la nutrition, le mtabolisme et la
croissance des bactries en fonction des variations (naturelles ou
contrles) du milieu dans lequel elles vivent.
-Nutrition : cest les besoins lmentaires et nergtiques ncessaires
la croissance de la bactrie, ainsi que des facteurs physico-chimiques
susceptibles dinfluencer cette croissance.
La cellule bactrienne, grce son systme enzymatique trs
dvelopp, va donner naissance en peu de temps (20 mn en moy pour la
majorit des bactries de l'environnement), 2 bactries filles: on parle
de croissance bactrienne. (Diffrence avec les organismes suprieurs :
homme, animal, plante).
Une bactrie se forme, se dveloppe, vit et se reproduit puis dprit et
meurt:
(Nutrition , Mtabolisme, Croissance bactrienne, Applications.)

I- NUTRITION:
Les besoins alimentaires ou nutriments :
1. Les besoins lmentaires : ce sont les lments
ncessaires la bactrie pour fabriquer ses constituants :

C,H,O,N,P,S en quantit importante


Fe ,Ca ,Mg et K en quantit moindre.
et d'autres mtaux l'tat de trace (oligo-lments): Co,
Cu, Zn, Mn.

2- Besoins nergtiques
Couvrent les dpenses engages dans les processus de biosynthses.
Source d'nergie:
soit l'nergie lumineuse (bact Phototrophes),

soit l'nergie fournie par les processus d'oxydorduction (bactries


Chimiotrophes).

Les bactries Phototrophes font appel des composs minraux ou


organiques comme sources d'lectrons. Si le substrat oxydable est minral,
la bactrie est dite Photolithotrophe : elle est capable de se dvelopper
dans un milieu purement minral
Si le substrat oxydable est organique, la bactrie est dite
Photoorganotrophe
Les bactries Chimiotrophes utilisent des composs minraux ou
organiques comme "donneurs dhydrogne ou dlectrons" ou "accepteurs
d'lectrons". Si le donneur dlectron est un corps minral
Chimiolithotrophe . Si le compos est organique, la bactrie est dite
Chimioorganotrophe.
Bactries pathognes dintrt mdical, de contamination alimentaire,
d'usage industriel pour la synthse d'antibiotique de vitamines...

3- Les besoins spcifiques :


L'apport de composs appels "facteurs de croissance" dans les milieux de
culture est indispensable la croissance des bactries "auxotrophes".
Les bactries "prototrophes" par contre sont capables de synthtiser tous
les constituants sans apport extrieur en "facteurs de croissance".
Les "facteurs de croissance" varient Selon les espces bactriennes; il peut
s'agir d'ac.amins, de bases puriques ou pyrimidiques, de vitamines.
Les facteurs de croissance prsentent des caractres communs:
- Ils sont actifs concentration infime
- Ils sont troitement spcifiques
Exemples: E.coli : bactrie prototrophe : n'exigeant aucun facteur de
croissance, elle se multiplie sur milieu minimum.
-Haemophilus influenzae: bactrie auxotrophe. Elle ne peut cultiver
dans un milieu minimum car il lui manque dans son systme enzymatique
les enzymes ncessaires la synthse du facteur V (coenzyme I et II) et du
facteur X (Hmine) qu'il faudra donc lui fournir dans le milieu de culture.

II- Conditions physico-chimiques de la croissance.


1- La temprature:
distingue:

Selon leur comportement vis vis de la temprature, on

- Les bactries msophiles dont la temprature optimale de


croissance se situe entre 20C et 40C. On retrouve dans ce groupe la
majorit des bactries de l'environnement et d'intrt mdical (ex:
Entrobactries) .
- Les bactries thermophiles : la temprature optimale est ici de
40C. Ce sont les bactries des sources thermales, (ex.: Pseudomonas)
- Les bactries psychrophiles : temprature optimale situe
entre 4C et 20C: Ces bactries peuvent contaminer les produits
alimentaires conservs au rfrigrateur (ex: Listeria).
- Les bactries cryophiles: vivent moins de 4C, ce sont les
bactries des eaux de mer et des glaces.
Les tempratures trop leves sont nuisibles pour les bactries. Ainsi, la
strilisation par la chaleur se fait une temprature de 180C au poupinel
(chaleur sche) pendant 30 minutes ou 120C l'autoclave (chaleur
humide ) pendant 20 minutes.

2- Le pH:
La plupart des bactries se dveloppent de prfrence dans
des milieux neutres ou lgrement alcalins.
Nanmoins, certaines espces pathognes, tel Vibrio
cholerae, cultivent mieux en milieu nettement alcalin
(pH:8,5).
A l'oppos, les Lactobacilles (flore vaginale de Doderlein)
se dveloppent pH acide ( 6,3 6,5).

3- La pression osmotique:
D'une faon gnrale, les bactries sont assez tolrantes vis
vis des variations de concentrations ioniques.
La protection contre les chocs osmotiques est assure par la
paroi qui constitue un vritable mur bactrien.
Certaines espces bactriennes dites halophiles tolrent plus
que d'autres, de fortes concentrations salines. Ainsi, par
exemple, le Staphylocoque tolre une forte concentration de
chlorure de sodium. Ce caractre est utilis pour slectionner
cette bactrie sur un milieu slectif (Milieu de Chapman).

4- La pression partielle d'oxygne:


Selon leur comportement l'gard de l'oxygne, les bactries sont classes
en 4 catgories:
- Bactries arobies strictes : elles ne peuvent vivre qu'en prsence
d'O2 de l'air et tolrent des PO2 leves, exemple: Mycobacterium tuberculosis,
Pseudomonas aruginosa.
Sur un milieu de culture, elles se multiplieront uniquement la surface de
celui-ci.
- Bactries micro-arophiles: se dveloppent sous une PO2 rduite,
infrieure celle de l'air. Exemple: Campylobacter
- Bactries anarobies strictes: ne se dveloppent qu'en absence
d'oxygne. L'oxygne de l'air est toxique pour ces espces. Exemple: le
bacille ttanique.
- Bactries aro-anarobies facultatives : se dveloppent aussi bien en
absence qu'en prsence d'oxygne.
Leur richesse enzymatique leur permet d'utiliser l'oxygne de l'air comme
accepteur dlectrons quand il est prsent , ou d'utiliser la voie fermentaire
quand l'oxygne est absent. Exemple des Entrobactries (Salmonelles,
Shigelles).

5-Facteurs inhibant la croissance :


- Radiations: les bactries sont sensibles aux rayons X
et UV (soleil), rayons Gamma
- Substances antibactriennes:
Les ATS et les ATB s'opposent la croissance des
bactries et sont utiliss pour leur destruction .
Certaines substances sont des inhibiteurs slectifs de
certaines bactries. Elles sont ajoutes dans les milieux
pour favoriser slectivement la multiplication des
bactries rsistantes: c'est le principe des milieux
slectifs.

III- METABOLISME BACTERIEN:


Mtabolisme bactrien : ensemble des transformations chimiques
qui assurent l'laboration des constituants cellulaires et leur
fonctionnement.
Toutes les ractions chimiques ayant lieu dans les bactries sont
catalyses par des enzymes spcifiques Elles intressent la fois les
glucides, les lipides, et les protides.
L'exploration ou l'tude de certaines tapes de ce mtabolisme,
les caractres biochimiques d'une bactrie (identification de
l'espce bactrienne).
Dans ce processus, lnergie produite est libre par paliers
travers le cycle de Krebs et la chane respiratoire.

Le bilan nergtique du processus respiratoire (ou


oxydatif) est trs important.
Ltude au laboratoire du type de mtabolisme
nergtique quutilise la bactrie est une tape importante de
lidentification de cette bactrie.
Le test utilis est lpreuve de HUGH et LEIFSON et le
milieu servant ce test est le M.E.V.A.G (milieu dtude de la
voie dattaque des glucides).
Ce milieu se prsente sous forme dune glose molle,
additionne de glucose 1% et coule en tube.
On ensemence une suspension riche du germe tudier,
par piqre centrale de 02 tubes de M.E.V.A.G un tube est
ensuite additionn dune couche de vaseline, lautre est laiss
tel quel :

Aprs 18 H dincubation 37 , la lecture se fait comme suit:

Tube sans vaseline

Tube avec vaseline

Mtabolisme

jaune

jaune

Fermentation

jaune

Rouge

Respiration

Rouge violet

Rouge

inactif

IV- CROISSANCE BACTERIENNE:


1- Dfinitions:
La croissance bactrienne : le ddoublement intervalle
rgulier du nombre de cellules et de la masse cellulaire
d'une culture bactrienne.
Le temps requis pour un ddoublement (ou une division
cellulaire) est appel temps de gnration. Il varie d'une
espce l'autre (ex. 20 minutes pour Escherichia coli, 20
heures pour Mycobacterium tuberculosis , plusieurs jours
pour M . leprae).
Le Taux de croissance dsigne le nombre de divisions par
unit de temps (heure). Ainsi, E.coli se divise 3 fois en une
heure, son taux de croissance est de 3.

2- Moyens d'tude:
Plusieurs techniques permettent d'valuer la croissance.
Dtermination du poids sec: les bactries sont tues, laves, sches au
four 105C puis peses avec prcision.
valuation chimique : on dose les diffrents constituants chimiques des
bactries (protines, DNA, RNA etc.).
Evaluation de la densit optique: En utilisant la loi de BEERLAMBERT qui dfinit les relations existant entre l'intensit d'un faisceau
lumineux avant et aprs la traverse d'une culture bactrienne, on peut
valuer la croissance bactrienne en dterminant la Densit Optique
( DO)de la culture bactrienne entre un temps T0 et un temps Tx > T0.
La mesure de la DO. se fait une longueur d'onde allant de 450 550nm .
Les DO voluent linairement la concentration cellulaire.
Numration cellulaire Elle peut tre:

Totale, par comptage de toutes les bactries vivantes ou mortes prsentes dans la
culture bactrienne, en utilisant une cellule hmatimtrique;
Ne concerne que les cellules viables : on compte les bactries vivantes par le nombre
d'units formant colonies (U.F.C.) ayant cultiv au sein d'une glose dans laquelle a
t au pralable ajoute une dilution approprie de la culture bactrienne tudier.

3- Cintique de la croissance :
L'tude de la croissance bactrienne dans le temps ou
cintique de la croissance peut tre reprsente sur un
graphique en portant
En ordonne, les valeurs des log de la D.O du milieu de
culture;
En abscisse, le temps.

La courbe de croissance obtenue montre alors 6 phases ( voir schma)


Phase A: Phase de latence :C'est la phase d'adaptation des bactries leur
milieu de culture, pas de multiplication bactrienne pendant cette phase
la mise en route des systmes enzymatiques de la bactrie.
Phase B : Phase d'acclration pendant laquelle le temps de gnration se
raccourcit pour atteindre la valeur caractristique de lespce bactrienne
tudie.
Phase C: Phase de croissance exponentielle : le taux de croissance atteint la
valeur maximale. Il y a ddoublement de la population des intervalles de
temps rguliers (toutes les 20 minutes / E.coli).
Phase D: Phase de ralentissement :le taux de croissance baisse
progressivement, le temps de gnration s'allonge.
Phase E: Phase stationnaire: la masse bactrienne est maximale.
Les nouvelles gnrations quilibrent les vieilles bactries qui se lysent.
Phase F: Phase de dclin: la masse bactrienne dcrot du fait de la lyse
acclre des bactries. Ceci est li un puisement des nutriments, une
rduction de l'oxygne, une accumulation des dchets. Le temps de
gnration est de plus en plus long, crant un dsquilibre entre les
nouvelles gnrations de bactries (de plus en plus rares) et les vieilles
bactries qui meurent en plus grand nombre.

N.B. Cette courbe est celle obtenue pour une culture bactrienne en milieu non renouvel.
On peut avec des artifices, obtenir une culture bactrienne maintenue pendant trs
longtemps en phase de croissance exponentielle croissance continue, obtenue par un
apport rgulier de milieu nutritif neuf et extraction d'une quantit quivalente de vieux
milieu.
Ces procds sont couramment utiliss dans l'industrie pour obtenir des corps bactriens
de mme ge (prparation de vaccins bactriens), ou des mtabolites bactriens
(vitamines), des toxines bactriennes (prparation d'anatoxines) en grande quantit.

V- APPLICATIONS:
Les domaines d'application intressent:
1-Le diagnostic bactriologique:
-Examen microscopique (exceptionnellement suffisant pour
identifier une espce bactrienne , tape d'orientation).

-Ncessit d'ensemencer le produit pathologique sur des milieux de


culture contenant des nutriments indispensables la croissance.
Les notions de physiologie bactrienne interviennent alors dans le
choix du (ou des) type(s) de milieux de culture pour les bactries que
l'on dsire isoler et identifier.

On peut distinguer :
- Des milieux d'isolement : Ce sont des milieux solides simples
ou complexes, sur lesquels de nombreuses espces bactriennes
peuvent se dvelopper selon une technique densemencement
qui permet d'obtenir des colonies spares facilement
identifiables.
- Des milieux d'identification : Solides ou liquides, ils servent
mettre en vidence un ou plusieurs caractres mtaboliques
d'une souche bactrienne pralablement isole et
purifie.(l'tude du mtabolisme bactrien ne peut et ne doit se
faire que sur une souche bactrienne pure).
- Des milieux slectifs : Solides, ils permettent l'isolement d'une
espce bactrienne tout en inhibant les autres espces
ventuellement prsentes dans un prlvement.
Ex:- Milieu Hektoen pour les Salmonelles et les Shigelles
- Des milieux d'enrichissement : Liquides, ils contiennent des
inhibiteurs spcifiques de certaines espces bactriennes donc
favorisent la multiplication d'espces donnes.
Ex: le bouillon Slnite pour les Salmonella.

2- L'antibiothrapie:
Les modifications de la courbe de croissance permettent de
mesurer l'activit antibactrienne d'un nouvel ATB sur une
bactrie donne.

3- Lefficacit de la strilisation:
L'tude de la courbe de croissance permet de vrifier la
vitesse de destruction des bactries par la chaleur, les UV, ou
d'autres agents physiques ou chimiques.

4- L'industrie:

Dosage microbiologique des vitamines et autres


substances qui sont des facteurs de croissance pour les
bactries,
Obtention de grandes quantits d'antibiotiques,
d'enzymes et de vitamines grce la croissance en
milieu de culture renouvel,
Obtention de grandes quantits de bactries destines
l'alimentation en particulier animale (gnie gntique).