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Fortalecimiento de la Educacin
UNIVERSIDAD CIENTIFICA DEL SUR
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA DE MEDICINA HUMANA
20
15
INTRODUCCIN
El ADN que constituye el material genetico de los seres
vivos y que ha sido punto de investigacin desde hace ya
tiempo, ahora es posible ser observada y anlizada atraves de
distintos procesos.
En este presente informe explicaremos los procesos
realizados en el laboratorio que sirvieron para poder
observar las bandas finales del ADN (muestra). Para poder
hacer esto posible se debe llevar a cabo tres procedimientos
fundamentales, que son:
Extraccin de ADN (muestra).
Proceso de PCR.
Electroforesis.
La extraccin de ADN es una metodologia mediante la
cual podemos obtener material genetico que nos permite la
manipulacin del producto obtenido. Es un metodo por el
cual podemos estudiar mutaciones que esten involucradas
con diferentes potologias humanas, mapeos y secuenciacin
de genes con fines terapeuticos.
El proceso de PCR (reaccion en cadena de la polimerasa)
es una tecnica utilizada para obtener un gran numero de
copias de un fragmento de ADN en una amplificacin in vitro,
ademas de ser una amplificacin selectiva la cual se basa en
una capacidad de la enzima ADN polimerasa para fabricar
una cadena ADN complementaria a la existente.
La electroforesis es una tecnica utilizada para observar la
concentracin e integridad del ADN, proteinas y otras
biomoleculas. Ya que permite las separacin de las proteinas
y acidos nucleicos a traves de una matriz tamponada de pH
8.
Estos procedimientos hacen posible una amplificacin del
ADN para asi poder detectar o determinar ciertas patologias
como errores geneticos, adems de la determinacin de
paternidad; esto nos permite tener un mejor conocimiento
acerca de la aplicacin de estos metodos en el campo de la
medicina y asi poder ponerlos en practica en el momento
adecuado.
1.MARCO TEORICO
La extraccin de DNA a partir de muestras de distinta
naturaleza, constituye la etapa previa de todo anlisis
gentico. En general; los mtodos de extraccin de DNA
tienen una serie de pasos bsicos, que se cumplen
independientemente del origen de la muestra. Estos son,
a saber: disrupcin celular (ruptura de la bicapa lipdica
de las membranas celulares por tratamiento con
detergentes, agentes quelantes que secuestran cationes
estabilizantes de la membrana, etc.), eliminacin de las
protenas (que constituyen los principales contaminantes
del extracto), concentracin del DNA (por precipitacin
con alcoholes), lavado (para eliminar restos de reactivos y
solventes que puedan inhibir la Taq polimerasa) y
resuspensin.
El PCR (Reaccin en la cadena de la polimerasa) es una
tcnica "in vitro" que imita la habilidad natural de la
clula de duplicar el ADN.
Tcnica usada para crear un gran nmero de copias de un
segmento de ADN, que utiliza ciclos de desnaturalizacin,
apareamiento con cebadores y extensin por una ADN
polimerasa termoresistente.
Es una tcnica que permite duplicar un nmero ilimitado
de veces un fragmento de ADN en un tubo de ensayo,
pueden generarse millones de molculas idnticas, a
partir de una molcula de ADN. Esto se puede conseguir
en unas horas. La reaccin es muy sencilla, necesita
cantidades de ADN muy pequeas y slo se precisa un
tubo de ensayo, algunos reactivos, una fuente de calor y
unas pequeas cadena de nucletidos que actan como
cebadores.
La electroforesis es una tcnica de laboratorio utilizada
para separar molculas cargadas colocadas en un campo
elctrico. Las molculas cargadas positivamente se
desplazarn hacia el polo negativo y las cargadas
negativamente hacia el polo positivo. Uno de los factores
que afecta la separacin de las molculas en una
electroforesis es su carga. Para el caso del DNA, los
grupos fosfato le dan la carga a la molcula. Los grupos
2.OBJETIVOS
1. Extraccin ADN a partir de muestras biolgicas.
2. Realizacin de una comparacin entre dos tcnicas de
aislamiento de DNA.
3. Conocimiento los fundamentos en lo que se basa la
tcnica de PCR.
4. Conocemos la importancia del uso de la tcnica de
PCR para el diagnstico de enfermedades en los seres
humanos.
5. Amplificamos una secuencias especifica del ADN
genmico humano utilizando la tcnica de PCR.
6. Describimos las funciones de las enzimas de
restriccin.
7. Conocimos cmo las enzimas de restriccin cortan el
ADN.
8. Observacin el ADN cortado con diferentes enzimas
de restriccin como EcoRI.
9. Familiarizacin con la tcnica de electroforesis en gel.
10.
Comprensin de los conceptos que estn
involucrados en la separacin de cidos nucleicos en
una corrida electrofortica.
11.
Visualizacin la muestra de ADN aislada de la
prctica anterior.
3.MATERIALES
MATERIALES DEL LABORATORIO PARA LA
EXTRACCIN DE ADN
Kit de extraccin de ADN
Micropipetas de 20 100, 100 -1000 l.
Puntas de 10 -100 l y de 100 -1 000 l
Microcentrfuga16000 rpm
Tubos ependorf
Termociclador
Agua estril
Muestras de ADN
Mix de PCR (taq polimerasa, dNTPs, primer,
Mg, agua)
Primers Alfa tubiluna y Beta actina.
MATERIALES DEL LABORATORIO PARA LA
ELECTROFORESIS
Muestra de ADN obtenida de la prctica
anterior.
Marcador de peso molecular.
Cmara de electroforesis y accesorios
(peines, soporte, tabla niveladora, etc).
Fuente de poder.
Micropipetas para volmenes de 0,5 - 20 l.
Guantes.
Gradilla para tubos de 1,5 mL.
Puntas para volmenes de 0,5 - 20 l.
Agarosa al 2 %.
Buffer Tris borato EDTA 1X (TBE) pH 88.3.
Buffer carga para ADN.
Colorante Sybr green
Transiluminador de luz UV.
4. PROCEDIMIENTO
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
5.
ANLISIS
RESULTADOS
DISCUSIN
DE
LOS
tetraactico. En sus
formas desprotonadas (2 y 4), es un conocido agente
quelante de cationes divalentes, en especial Ca 2+ y
Mg2+. Dado que el Mg2+ es un cofactor requerido por la
mayora de nucleasas, su secuestro por el EDTA evita
la degradacin del DNA durante la preparacin y la
electroforesis.
1
8
2
9
3
10
1= Marker
(marcador)
Grupo 1
3= Grupo 2
4= Grupo 3
5= Grupo 4
6=
7=
8= Marcador
9=
10=
2=
EXTRACCION
ADN
La
Resultado
Tubo 1
6.58ng/ml
Tubo 2
13.3ng/ml
Tubo 3
10.8ng/ml
Tubo 4
6.84ng/ ml
DEL
6.CONCLUSIONES
La extraccin del ADN es una etapa muy
importante ya que en esta vamos a buscar
extraer el ADN puro para luego dar secuencia a
las otras etapas.