DETERMINACIN DE

PROTENAS

PRESENTADO POR: JORGE A. RAMREZ T.

CDIGO:13172011
DIRIGIDO A: DRA. ANGELICA PADILLA
ASIGNATURA: BIOQUMICA BSICA

UNIVERSIDAD DE SANTANDER
PROGRAMA DE BACTERIOLOGA Y LAB.
CLNICO
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
SAN JOS DE CCUTA, NORTE DE
SANTANDER
MARZO 03 DE 2015

INTRODUCCIN
La determinacin de las protenas es uno de los labores en los que el
laboratorista clnico se va a enfrentar constantemente, debido a que las
protenas pueden definirse como las sustancias primordiales para las
condiciones de vida de un organismo, ya que ellas cumplen una gran
cantidad de funciones segn sea el tejido y la estructura donde se
encuentre y como se encuentre compuesta. Entonces, es all donde se
deben tener correctas tcnicas de venopuncin, de disolucin de reactivos y
de crear junto con la muestra a procesar un verdadero complejo muestrareactivo que ser utilizado para la determinacin de Albuminas y Globulinas,
que son la mayor parte de protenas dentro de protenas del cuerpo y ambas
en conjunto son las conocidas protenas totales.

Para el desarrollo y la determinacin, el profesional clnico debe conocer los

pasos esenciales y la metodologa, aunque en la actualidad estas formulas,
son realizas va sistemtica por el proceso de sistematizacin que se est
llevando a cabo da a da en las organizaciones de laboratorios.

Tras conocer estos pasos, y haber determinado aquello que sera los
procesos metodolgicos para determinar las protenas totales, el
laboratorista clnico estara cumpliendo con su funcin de ser pronstico y
diagnostico eficaz para que as el mdico logre observar que patologa
puede presentar el individuo que est consultando y poder determinar el
tratamiento contra esta patologa.

OBJETIVOS

Determinar los niveles de protenas totales, albumina y globulina en

suero mediante una tcnica colorimtrica.
Adquirir destreza en la interpretacin de reactivos, manejo de pipetas
y tcnicas de anlisis qumico.

MATERIALES Y PROCEDIMIENTO

MATERIALES:
ITEM
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14

TIPO
MAT
MAT
MAT
MAT
MAT
MAT
MAT
MAT
MAT
MAT
MAT
MAT
EQU
EQU

DESCRIPCIN
PAO ABSORBENTE
TUBOS DEVIDRIO 13X100
JERINGAS 5cc
ALGUODN Y ALCOHOL
TORNIQUETE
CUBETAS DE LECTURA
PIPETAS AUTOMTICAS DE 10u-50u
PIPETAS DE GRADUADAS DE 5 ML-10ML
GRADILLAS
PIPETEADORES
PUNTAS AZULES Y AMARILLAS
DESCARTE DE TUBOS Y DE PUNTAS
BAO DE MARA A 37C
ESPECTROFOTOMETRO.

PROCEDIMIENTO:
Como primera instancia, se procedi a una extraccin de muestra
sangunea por venopuncin por parte de los estudiantes de
Bacteriologa. Con todos los pasos de la fase pre-analtica, es decir, el
rotulado del tubo taparrosca.

Luego de esto, se procedi a centrifugar los tubos que contenan la

muestra sangunea por quince minutos en la centrifuga.
Mientras se estaban centrifugando los tubos con la muestra, se procedi
a marcar los tubos de ensayo que seran mesclados con los reactivos, a
estos tubos se les asign los nombres de (Blanco Protena, Estndar
Proenas y Muestra Protenas, al igual que Blanco Albumina,
Standard Albumina y Muestra Albumina) agregndosele el reactivo
de EDTA la cantidad de 3,500 uL con diferencia de los otros compuestos
tal y como lo indica la tabla. Esto se procede a incubar durante diez
minutos a 37C.

PROTENAS TOTALES
ADICIONADO
AGUA
DESTILADA
SUERO PATRN
MUESTRA
REACTIVO EDTA
A

BLANCO
50 uL

STANDARD
-

MUESTRA
-

3.500 uL

50 uL
3.500 uL

50 uL
3.500 uL

De esa misma manera, se procedi a marcar los tubos de Albumina.

ALBUMINA
ADICIONADO
SUERO PATRN
MUESTRA
REACTIVO B

BLANCO
3.500 uL

STANDARD
10 uL
3.500 uL

MUESTRA
10 uL
3.500 uL

Se procedi a hacer la lectura en 540 nm Protenas en el Fotmetro, y

a 620nm Albumina.

MARCO TERICO
QU SON LAS PROTENAS?
La palabra protena que proviene del griego proteios, que quiere decir lo
principal o lo ms importante. Se trata de las biomolculas ms
importantes, las cuales pueden desempear muchas funciones que
dependen sobre todo de la cadena de aminocidos que las compone. Las
protenas forman parte de sustancias funcionales y estructurales claves del
organismo, como las hormonas, la hemoglobina y las enzimas. Algunas se
encuentran libres en el plasma sanguneo contribuyendo a la accin
defensiva inmunitaria y al transporte de sustancias. Tambin es posible
detectarlas en otros lquidos biolgicos pero en menor cantidad y en
proporciones distintas a las del plasma.

QU SON LAS PROTENAS TOTALES?

El examen de protena total mide la cantidad de dos clases de protenas
encontradas en la porcin lquida de la sangre: albmina y globulina. Las
protenas son partes importantes de todas las clulas y tejidos. La albmina
ayuda a impedir que se escape lquido fuera de los vasos sanguneos. Las
globulinas son una parte importante del sistema inmunitario.

EN QUE SITUACIONES O PATOLOGAS SE PUEDE PRESENTAR

ALTERACIONES DE PROTEINAS TOTALES Y DIFERENCIALES
(HIPERPROTEINEMIA E HIPOPROTEINEMIA).
HIPERPROTEINEMIA
Se ven afectadas la Albumina y la Globulina, en patologas como:
-

Infecciones
Deshidratacin
Enteropatas con prdida proteica (Diarreas)
Neoplasia
Sndrome de Guillain Barder.

HIPOPROTEINEMIA
Hemorragias digestivo
Problemas digestivo
Nefropatas con proteinuria crnica.

CUNDO SE PUEDE PRESENTAR UNA FALSA

HIPERPROTEINEMIA?
Se considera falsa cuando es producida por hemoconcentracin y/o
deshidrataciones.

QU SON SUEROS DE CONTROL NORMAL Y PATLOGICO?

Son sueros de control liofilizados a partir del suero
concentracin de sus componentes se ajusta por adicin.

humano,

la

CUL ES LA IMPORTANCIA DEL USO DE ESTOS SUEROS EN EL

LABORATORIO?

Son diseados para brindar un fundamento apropiado para el control de

calidad (impresin, inexactitud) en el laboratorio de qumica clnica, para
determinar la exactitud y precisin de las tcnicas analticas tanto manuales
como automticas, se aconseja utilizar un suero de control.

A QUE SE LE DENOMINA PROTEINURIA BENIGNA? EN QUE

CASOS SE PRESENTA?
Es aquella que aparece solo despus de una actividad fsica intensa y se
relaciona habitualmente con la aparicin de fiebre, exposicin al fro y la
presencia de insuficiencia cardaca. Carece de relaciones clnicas y no
precisa de estudios adicionales. Est asociada a uno cuadro a partir de
anemia grave alterada de la Tiroides.

QU ES UN PROTEINOGRAMA?
Tcnica de laboratorio que permite la separacin de las protenas en funcin
de su desplazamiento sobre un soporte slido cuando son sometidas a un
campo elctrico. La migracin depender del peso de la protena as como
de su carga elctrica. En el soporte slido de electroforesis podrn
visualizarse bandas o fracciones correspondientes a los diferentes tipos de
protenas.

FUNDAMENTO DEL INSERTO PROTI2

*Determinacin de protenas totales:
Los enlaces peptidicos de las protenas reaccionan con el in cprico, en
medio alcalino, para dar un complejo color violeta con mximo de absorcin
a 540 nm, cuya intensidad es proporcional a la concentracin de protenas
totales en la muestra.

*DETERMINACIN DE ALBMINA:
La albumina reacciona especficamente sin separacin previa con la forma
anionica de la 3.3,5,5-tetrabromo creosolsulfon italeina (BCF). En presencia
de un exceso de colorante, en medio tamponado a PH 3,8. El aumento de
absorbancia a 625nm respecto del blanco de reactivo es proporcional a la
cantidad de albumina presente en la muestra.

TIPOS DE MUESTRA A USAR

MUESTRA EN TTULO
Suero:
A)
B)
C)
-

Recoleccin: Debe obtenerse suero libre de hemolisis.

Aditivos: No se requiere.
Sustancias interferentes conocidas:
En la determinacin de Protenas Totales no se observan
interferencias por bilirrubina hasta 100mg/dL, ni hemolisis ligera, ni
en ningn caso se presenta turbidad por kilomicrones (uK).
- En la determinacin de Albumina, no se observan interferencias por
hemolisis moderada, bilirrubina hasta 200mg/dL, ni lipemia hasta
20g/L. Debido a que no intervienen las globulinas, en esta
determinacin no se requieren desproteinizacin previa.
D) Estabilidad e Instrucciones de almacenamiento: Si no se
procesa inmediatamente el suero puede conservarse hasta tres das
refrigerados (de 2 a 10C) o una semana en congelador.

INTERFERENTES:
DETERMINACIN DE PROTENAS TOTALES: Puede usarse plasma
como muestra, pero el resultado de la proteinemia estar incrementado
en 0,2 g/dL debido a la presencia de fibringeno que no est considerado
dentro de la definicin de protenas totales.
DETERMINACIN DE ALBUMINA: Mientras se realice la reaccin entre
15 y 18 C puede utilizarse factor para los clculos. Fuera de este rango,
cambia la cintica de la reaccin y no se completa el desarrollo del color

LINEALIDAD DEL MTODO

Para constatar que el colormetro tenga una respuesta lineal en las
longitudes de onda fijadas para las reacciones, puede prepararse una
curva de calibracin con cantidades recientes de estndar. (Ejemplo: 100
y 50 uL paras protenas totales: 10 y 20 para albuminas.) Con un
volumen de reactivo de 3,5 ml en todos los casos. Si los valores
obtenidos para el segundo tubo se apartan ms de un 5% de los clculos
de acuerdo a la lectura del primero, debe emplearse para los clculos la
Curva de Calibracin.

DETERMINACIN DE PROTENAS TOTALES.

1. Longitud de onda: 540 nm en el espectrofotmetro o fotocolormetro.

Con filtro verde(entre 520-560 nm).
2. Temperatura de reaccin: 37C.
3. Tiempo de reaccin: 15 minutos
4. Volumen de la muestra: 50uL
5. Volumen del reactivo A: 3,5mL
6. Volumen final de la reaccin: 3,55mL

DETERMINACIN DE ALBUMINA.
1. Longitud de onda: 625 nm en espectrofotmetro o fotocolormetro.
Con filtro rojo (620-650 nm).
2. Temperatura de reaccin: 15-28C
3. Tiempo de reaccin: 10 minutos
4. Volumen de la muestra: 10uL.
5. Volumen del reactivo B: 3,5 uL
6. Volumen final de la reaccin: 3,51Ml

FORMULA PARA REALIZAR LOS CLCULOS

[]mstra=Factor x|mstra|

Factor=

[]STD g/dl
|STD|

FORMULA PARA HALLAR LA RELACIN ALBUMINAGLOBULINA.

P. Totales= Albumina + Globulina

VALORES DE REFERENCIA
Protenas Totales

0,1 - 7,9 g/dl

Albmina

3,5 4,8 g/dl

RESULTADOS
Determinacin de protenas totales:
Absorbancia del estndar: 0,253

Absorbancia de la muestra: 0,322

Determinacin de Albmina:
Absorbancia de la muestra: 0,397
Absorbancia de la muestra: 0,216

Aplicacin de la respectiva formula:

[]mstra=Factor x|mstra|

Factor=

[]STD g/dl
|STD|

Determinacin de protenas totales:

Factor=

5,09 g /dl
=19,76 g /dl
0,253

[]mstra=19,76

g
g
x 0,322=6,36
dl
dl

Determinacin de Albmina

Factor=

2,7 g/dl
=12,5 g/dl
0,216

[]mstra=12,5

g
g
x 0,397=4,96
dl
dl

Valores Normales:
Protenas Totales

0,1 - 7,9 g/dl

 Albmina

3,5 4,8 g/dl

P. Totales= Albumina + Globulina

Globulina= P. totales Albumina
Globulina= 6,5 g/dl 5,0 g/dl
Globulina= 1,4 g/dl

ANLISIS DE RESULTADOS

En un principio, tras haber realizado la disolusin se observaron algunos

problemas como lo fue la coloracin del complejo reactivo-standard que no
era la apropiada y la indicada por el inserto, por ende, la pareja de
estudiantes tuvo que acceder a utilizar otro tubo de ensayo de sus
compaeros, claro est, que se emple de la misma muestra sangunea que
en un principio fue tomada.
Luego de esto, se obtuvieron los valores del paciente, observndose de esta
manera, un nivel de protenas considerado normal (de 6,5 g/dl) en cuestin
de la tabla para datos patolgicos y normales, sin embargo, la albumina de
la paciente Heidy Reyes, otorg un resultado un poco elevado debido a
que la paciente se encontraba con una situacin patolgica (crisis viral
infecciosa / gripe) y con condiciones de de moqueo en las fosas nasales y
toz, adems de una alimentacin no apropiada para el da en que se estaba
realizando esta determinacin. Siendo estas, quizs la causa por la que un
individuo que no tiene enfermedades de base, como es la compaera, logr
dar un resultado fuera de los parmetros considerados normales.

CONCLUSIONES
Se llego a comprobar que algunos errores en la fase analtica puede arrojar
resultados errneos, pero, si se logra tomar las medidas correctivas
apropiadas, como lo fueron en la prctica, se llega a obtener los resultados
eficaces que el usuario espera.

Por otro lado, se pudo observar que un individuo con una patologa clnica
como lo es la gripe y su mala alimentacin al momento de tomar la
muestra, llega a dar un resultado fuera del considerado normal.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS.
Ledesma Manuel, Laboratorio de anlisis clnico. [Consultado el: 02-032015]
Disponible
en:
http://www.laboratoriomledesma.com/2010/05/proteinograma.html
Munevar Juan Carlos, Proteinas. [Consultado el: 28-02-2015]. Disponible en:
http://es.slideshare.net/munevarjuan/biologa-molecular-de-la-clula-proteinas
David Carlos, Protena total. [Consultado el: 28-02-2015] Disponible en:
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003483.htm