Family IV. Enterococcaceae fam. nov.

WOLFGANG LUDWIG, KARL-HEINZ SCHLEIFER AND WILLIAM B. WHITMAN

En.te.ro.coc.cace.ae. N.L. masc. n. Enterococcus type genus of the family; suff.
-aceae ending
denoting family; N.L. fem. pl. n. Enterococcaceae the Enterococcus family.

La familia Enterococcaceae est circunscrito para este volumen sobre la base de

los anlisis filogenticos de las secuencias de 16S rRNA y incluye el gnero
Enterococcus, Melissococcus, Tetragenococcus, y Vagococcus (Figura 3). Se
compone de cocos ovoide que contienen una pared celular Gram-manchapositivo. Las endosporas no se forman. anaerobio facultativo, anaerbica o
crecimiento microaeroflico quimio-organotrfico. La catalasa-negativa. Algunas
especies son carboxlico o halfilas. Pueden ser resistentes a la bilis.
Tipo de gnero: Enterococcus (ex Thiercelin y Jouhaud 1903) Schleifer y KilpperBlz 1984, 32.
Gram positivas. Las clulas son ovoides, se producen individualmente, en pares
o en cadenas cortas, y son alargados con frecuencia en la direccin de la cadena.
Esporulantes. Las cepas de algunas especies pueden ser mviles por flagelos
escasa. Algunas especies son de color amarillo pigmentado. anaerobios
facultativos. Ciertas especies son carboxlico (CO2-dependiente). Catalasanegativa, pero algunas cepas revelan la actividad pseudocatalasa cuando se
cultiva en un medio de agar que contenga sangre. Actividad hemoltica es variable
y en gran medida dependiente de la especie.
El crecimiento ptimo de la mayora de las especies a 35-37 C. Muchos, pero no
todas, las especies son capaces de crecer a 42 e incluso a 45 C, y (lentamente) a
10 C. Muy resistente al secado.
quimioorganotrficas crecimiento. Generalmente las necesidades de nutrientes
complejos. Metabolismo fermentativo. Fermentacin lctica homofermentativa.
Producto final predominante de la fermentacin de glucosa es L (+) - cido lctico.
Ciertas caractersticas son comunes a todas las especies descritas, aunque raras
excepciones pueden ocurrir y ciertos resultados de las pruebas an no se han
reportado en las especies menos conocidas: la resistencia al 40% (v / v) de bilis, la
produccin de b-glucosidasa, arilamidasa leucina, la hidrlisis de esculina, la
produccin de cido a partir de N-acetilglucosamina, amigdalina, arbutina,
celobiosa, D-fructosa, galactosa, b-gentiobiosa, glucosa, lactosa, maltosa, Dmanosa, metilo bd-glucsido, ribosa, salicina y trehalosa. Las siguientes pruebas

son en su mayora negativo: ureasa, la produccin de cido a partir de Darabinosa, eritritol, D- y L-fucosa, metilo d-xilosa y L-xilosa. Cabe sealar que
ciertas caractersticas tradicionalmente se considera que es tpico para el gnero
no se aplican a varias de las especies descritas ms recientemente: antgeno del
grupo Lancefield D, resistencia a la azida de sodio al 0,4% o 6,5% de NaCl, el
crecimiento a 10 C y 45 C, la produccin de arilamidasa pirrolidonil y acetona.
La mayora de las especies son parte de la flora intestinal de los mamferos y las
aves, y (mucho menos conocidos) otros animales tambin. Otras especies se
asocian con las plantas, o se han aislado a partir de agua.
El contenido de ADN de G + C (% molar): 35,1 a 44,9. Especie tipo: Enterococcus
faecalis (Andrews y Horder 1906) y Schleifer Kilpper-Blz 1984, 33 VP
(Streptococcus faecalis Andrewes y Horder 1906, 713.).
Ms informacin descriptiva
El gnero Enterococcus ha sido separado del gnero Streptococcus sobre la base
de los resultados de ADN-ADN y estudios de hibridacin ADN-rADN (Schleifer y
Kilpper-Balz, 1984). Posteriores estudios de 16S ADNr (Ludwig et al, 1985;
Schleifer y Kilpper-Balz, 1987) no slo confirm esta separacin, pero tambin
demostraron que los enterococos tambin difera del gnero Lactococcus y ciertos
otros cocos Gram-positivos. Los gneros Streptococcus y Lactococcus son ms
lejanamente relacionados con el gnero Enterococcus que son las bacterias
coccus- o en forma de bastoncillos de los gneros Vagococcus, Carnobacterium,
Tetragenococcus, Aerococcus, Alloiococcus, Dolosigranulum, Facklamia,
Globicatella, Granulicatella, Melissococcus, Enterococcus, Ignavigranum, y
Abiotrophia. De hecho, de acuerdo con el anlisis filogentico 16S rRNA en la hoja
de ruta revisada al Volumen 3 (Figura 1 y la Figura 3;. Ludwig et al, este volumen),
Enterococcus, Melissococcus, Tetragenococcus, y Vagococcus estn en una
nueva familia, Enterococcaceae, dentro de la ordenar Lactobacillales.
El tipo de peptidoglicano de la pared celular es-lisina D-asparagina (con
asparagina d-iso como de los puentes cruzados) como se describe para avium
Enterococcus, Enterococcus casseliflavus, Enterococcus dispar, durans
Enterococcus, Enterococcus faecium, Enterococcus gallinarum, Enterococcus
hirae, Enterococcus malodoratus, mundtii Enterococcus, Pseudomonas y
Enterococcus raffinosus Enterococcus, excepto Enterococcus faecalis, que tiene
un peptidoglicano de tipo alanine2-3 lisina (Collins et al, 1989b, 1986, 1984,
1991a;. Farrow y Collins, 1985; Schleifer y Kilpper-Balz, 1984). Posicin 2 de las
molculas de glicerol que constituyen la columna vertebral de los cidos teicoicos
se esterifica o bien con el kojibiosa disacrido de glucosa (como en Enterococcus
faecalis) o la kojitriose trisacrido de glucosa (como en Enterococcus faecium).

cidos grasos de cadena larga son predominantemente de los tipos de cadena

lineal saturados o monoinsaturados. Varios especies producen cidos anillo de
ciclopropano (Collins et al, 1989b, 1986;. Schleifer y Kilpper-Balz, 1984). El
antgeno de grupo tipo D se encuentra entre la pared celular y la membrana
celular (Smith y Shattock, 1964). Es un polmero de cido teicoico de glicerol
fosfato que contiene una alta proporcin de glucosa (Wicken et al., 1963). Su
componente lipdico es un diglicrido 1-kojibiosyl, con los azcares ligados a la
diglicrido por un sustituyente fosfatidil (Mostrar et al., 1972). Este antgeno ha
sido considerado tradicionalmente como un rasgo tpico del gnero Enterococcus,
pero no todas las especies posesin de ella y su produccin no fue determinada
para unas pocas especies recientemente descritas. Por otro lado se puede
encontrar en varios estreptococos tales como Streptococcus bovis, Streptococcus
suis y alactolyticus Streptococcus, ciertos leuconostocs y pediococos (Devriese et
al., 1993b).
Aunque los enterococos tienen requerimientos nutricionales complejos, su
crecimiento en medios bacteriolgicos comnmente utilizado es generalmente
profuso. Se requieren varios aminocidos, vitaminas del complejo B y bases de
purina y pirimidina (Garg y Mital, 1991). Las colonias son siempre regulares y
circulares con una superficie lisa, de hasta 5 mm de dimetro. Ciertas especies
producen un pigmento carotenoide de color amarillo en medio de agar. Un
aldehdo inusual carotenoide C32 se ha detectado en el pigmento casseliflavus
Enterococcus por Taylor et al. (1971).
Los enterococos son facultativamente anaerbica con una preferencia por
condiciones anaerbicas. No son capaces de sintetizar porfirinas y por lo tanto
carecen de pigmentos citocromo, pero pueden tener peroxidasas NADH contiene
flavina (Miller et al., 1990). La superxido dismutasa inducida por el oxgeno
molecular permite la supervivencia de Enterococcus faecalis en condiciones
aerbicas (Gregory y Fridovich, 1973). Demethyl menaquinona con nueve
subunidades isoprenoides puede funcionar como noncytochrome transportadores
de electrones en Enterococcus faecalis, mientras menaquinonas con ocho
subunidades isoprenoides se han detectado en Enterococcus casseliflavus
(Collins y Jones, 1979). menaquinonas demetilo asociadas a la membrana de
Enterococcus faecalis estn involucrados en la produccin de superxido
sustancial celular (O2-) y compuestos de oxgeno reactivo (H2O2, radical
hidroxilo). Esta reaccin se inhibe por fumarato exgeno y hematina (Huycke et
al., 2001). Los enterococos pueden fermentar una amplia variedad de sustratos.
La principal va de produccin de energa es la formacin de homofermentativo
principalmente cido L-lctico a partir de glucosa a travs de la va de EmbdenMeyerhof- Parnas. En las condiciones aerbicas glucosa se metaboliza a cido

actico, acetona y CO2. El piruvato se convierte en lactato estequiomtricamente

por Enterococcus faecalis a pH 5,0 a 6,0, pero a pH neutro o ligeramente alcalino
se convierte en formiato, etanol y acetato en una proporcin 2: 1: 1 (Gunsalus et
al, 1955). En la deficiencia de nutrientes, el piruvato se convierte en etanol y
acetato de (Garg y Mital, 1991). Enterococcus faecalis metaboliza malato por una
enzima mlico-NAD especfica inducible y malato permeasa se forma en presencia
de sustrato (Londres y Meyer, 1970). Gluconato se fosforila a 6-fosfogluconato
seguido de su dissimilation a lactato y CO2 como se describe para Enterococcus
faecalis (Garg y Mital, 1991). En los medios de glicerol aireado Enterococcus
faecalis produce principalmente cido actico y CO2 con trazas de
acetilmetilcarbinol. Enterococcus faecium puede oxidar glicerol a cido actico,
CO2 y bajas cantidades de perxido de hidrgeno (Londres y Appleman, 1962).
Hipurato se hidroliza a la glicina y el cido benzoico. La energa puede ser
obtenido por la degradacin de algunos aminocidos, como lo son la arginina,
tirosina, serina, agmatina, fenilalanina, y canavanina (Deibel, 1964).
El cromosoma enterococos representa una sola circular
ADN de un tamao comprendido entre 3000-3250 kb para Enterococcus faecalis,
2550-2995 kb de Enterococcus faecium, 3445 kb para Enterococcus avium y 3070
kb para durans Enterococcus segn lo revelado por la cartografa fsica.
Enterococcus faecium, Enterococcus avium, y Enterococcus durans contiene seis
operones rrn; Enterococcus faecalis cuatro operones rrn (Oana et al., 2002). La
secuencia del genoma completo de Enterococcus faecalis V583 est disponible
(Paulsen et al., 2003) y la secuenciacin del genoma de Enterococcus faecium
ATCC BAA-472 est en el progreso (informacin disponible en
http://hgsc.bcm.tmc.edu/microbiana
/
efaecium
/
y
http://genome.ornl.gov/microbial/EFAE /). El cromosoma Enterococcus faecalis
V583 contiene 3.218.031 pb que consiste en las secuencias de codificacin
87,9%. Se detectaron un total de 3182 genes que codifican protenas con un
tamao medio de 889 pb. Entre estos, 1760 eran similares a conocidos genes
proteincoding. Por otra parte, 495 mostraron similitud con las funciones hipotticas
conservadas, 221 eran de funcin desconocida y 706 genes que codifican
protenas no coincide con ninguna protena conocida. Se detectaron doce rRNA- y
68 genes ARNt codificantes. Se encontr un total de 35 transportadores de azcar
de tipo PTS probables implicados en la adquisicin y la fermentacin de sustratos.
Se encontr un total de 519 protenas que se conserva en bajo G + C bacterias
grampositivas y se sabe que estn implicados en la transcripcin, traduccin, y la
sntesis de protenas. Las protenas de las grandes familias paralogous como el
PTS y las familias de ABC transportador tambin se detectaron (Paulsen et al.,
2003; Tendolkar et al., 2003).

Los enterococos albergar una amplia variedad de plsmidos y transposones que

estn involucrados en la transferencia de la resistencia y el factor de virulencia
determinantes antibiticos. plsmidos de feromonas-respuesta (por ejemplo,
pAD1, PAM 322, pCF10 o PPD1) son las tpicas de Enterococcus faecalis. Ellos
codifican una adhesina superficie llamada "sustancia agregacin" que se une de
donantes, as como clulas receptoras. Esto conduce a la formacin de agregados
celulares, lo que permite el contacto directo de clulas y la transferencia de
plsmido eficiente. genes de resistencia a los antibiticos o UV o genes que
codifican citolisina puedan ser realizadas por estos plsmidos. Inc18 son
plsmidos-copia-nmero bajo (menos de 10 copias por clula) de tamao de 2530 kb. Replicar crculo rodante (RCR) son plsmidos-copia-alto nmero de
plsmidos menor de 10 kb que se replican por un mecanismo de crculo rodante.
Inc18 y RCR plsmidos pueden replicarse en muchas otras bacterias Grampositivas (Devriese et al, 1992a;. Weaver, 2000, 2002).
Adems de los plsmidos, una amplia variedad de transposones se han aislado en
los enterococos. transposones tn3-familiares, transposones compuestos y clases
de conjugacin transposones son generalmente reconocidos. Tn917 y Tn1546
transposones representan tpicos miembros del grupo Tn3. Tn917 lleva genes de
resistencia a macrlidos-estreptogramina lincosamide- y Tn1546 codifica los
genes vanA resistencia a la vancomicina. transposones de conjugacin que
codifican la resistencia al menos a un antibitico revelan una amplia gama de
huspedes. Se integran en el ADN del husped, por transposicin, pero su
transferencia a otras clulas est activada por conjugacin. Este grupo comn de
transposones contiene, por ejemplo, Tn916-, Tn918- o Tn1549 codifica VanB
fenotipo genes resistencia a la vancomicina. transposones compuestos son
secuencias de ADN movilizados por las secuencias de insercin de terminales.
Ellos pueden codificar secuencias implicadas en la resistencia a los antibiticos
(aminoglucsidos, vancomicina) o de resistencia al mercurio o pueden tener partes
de plsmidos u otros transposones (Devriese et al, 1992a;. Tendolkar et al, 2003;
Weaver, 2000;. Weaver et al, 2002). Aproximadamente una cuarta parte del
genoma secuenciado en su totalidad de Enterococcus faecalis V583 consta de
ADN exgeno que incluye mvil y transposones de conjugacin y compuestos,
una isla de patogenicidad, regiones de fagos, los restos de plsmidos integrados y
38 elementos de la secuencia de insercin. Este elevado nmero de elementos
mviles de ADN contribuye probablemente de manera significativa a la adquisicin
y acumulacin de virulencia y resistencia factores (Paulsen et al., 2003).
Los enterococos producen bacteriocinas llamados "enterocinas" que son activos
contra otra enterococos, as como otros grupos de bacterias, incluyendo Listeria
spp. Los genes responsables de su produccin se encuentran tanto en el

cromosoma, as como en plsmidos. Unos enterocinas de Enterococcus faecalis

(AS-48, citolisinas CylLL y CylLS) y Enterococcus faecium (bacteriocina 31 y
enterocinas A, B, P, y 50) han sido estudiados en detalle. Por lo general,
pertenecen a la clase II bacteriocinas caracterizadas como protenas pequeas,
resistentes al calor, que son sintetizadas en los ribosomas, pero no se someten a
modificaciones posteriores a la traduccin. Enterocina productoras de enterococos
se han aislado de productos lcteos, carne fermentada, as como hortalizas y
plantas (Franz et al., 1999). Ott et al. (2001) encontraron actividad antagonista en
Enterococcus faecalis, Enterococcus mundtii, Enterococcus casseliflavus, y
Enterococcus faecium aislados de hierbas. enterocinas parcialmente purificadas
de estas cepas asociadas a plantas fueron activos contra una amplia gama de
bacterias de cido lctico, clostridia, y cepas de Listeria. Pompei et al. (1992b) y
Berlutti et al. (1993) detectaron la actividad bacterioltica en la mayora de las
cepas clnicas humanas ensayadas. Las diferentes cepas producen enzimas
bacteriolgicas de las diferentes propiedades que permiten, junto con las pruebas
bioqumicas, la identificacin a nivel de especie.
Bacterifagos enterococos aisladas de intestino delgado de ratas blancas se
caracterizaron por Rogers y Sarles (1963). Bachrach et al. (2003) aislaron
bacterifagos enterococos de la saliva humana y todas las cepas de enterococos
probados por Tzannetis et al. (1970) fueron lisognico. Una enzima ltica obtenido
de un cultivo de Enterococcus faecalis infectadas por fagos se ha usado para
inducir la formacin de protoplastos Enterococcus faecalis (Bleiweis y Zimmerman,
1961). tipificacin de fagos se ha utilizado para la caracterizacin y tipificacin de
enterococos (por ejemplo, Smyth et al., 1987) pero su aplicacin como se describe
en la literatura es escasa.
Los enterococos son intrnsecamente resistentes a muchos b-lactmicos,
fluoroquinolonas,
lincosamidas,
trimetoprima-sulfametoxazol
y
bajas
concentraciones de los aminoglucsidos. la resistencia adquirida a los antibiticos
mediada por elementos extracromosmicos de ADN (plsmidos, transposones)
incluye la resistencia a cloranfenicol, tetraciclinas, macrlidos, lincosamidas,
estreptograminas y quinolonas, as como resistencia de alto nivel a los
aminoglucsidos, b-lactmicos y glicopptidos (Cetinkaya y col., 2000; Devriese et
al., 1992a; Teixeira y Facklam, 2003). cepas resistentes a la vancomicina son un
problema grave. Seis fenotipos de resistencia a la vancomicina se han descrito y
caracterizado como VanA, VanB, Vand, Vane, y Vang. Estn determinados por
elementos transponibles o pueden ser codificados cromosmicamente y no
transferibles como en el caso del fenotipo VanC. Los VanA fenotipo pantallas de
alto nivel de resistencia inducible a la vancomicina y teicoplanina; VanB se
caracteriza por la resistencia inducible a la vancomicina moderada. Se presentan

con mayor frecuencia en Enterococcus faecalis y Enterococcus faecium. Los

genes que codifican fenotipo VANC intrnseca de bajo nivel de resistencia a la
vancomicina Enterococcus gallinarum tpico de casseliflavus y Enterococcus. El
fenotipo VAND caracterizado por niveles moderados de resistencia a la
vancomicina y resistencia de bajo nivel a la teicoplanina se ha encontrado en
Enterococcus faecium. Vane y Vang fenotipos exhibir de bajo nivel y nivel de
resistencia moderada a la vancomicina, respectivamente, pero estos dos fenotipos
caracterizado Enterococcus faecalis revelan la sensibilidad completa a la
teicoplanina (Cetinkaya et al, 2000;.. McKessar et al, 2000; Tendolkar et al., 2003).
La resistencia a los antibiticos b-lactmicos se encuentran en Enterococcus
faecalis y Enterococcus faecium cepas clnicas est mediada principalmente por la
produccin de la protena de unin a penicilina (PBP5). La produccin de blactamasa por estas dos especies es muy raro resistencia a aminoglucsidos de
alto nivel est mediada por una sola mutacin dentro de la protena de la
subunidad ribosomal 30S como en el caso de la estreptomicina o a travs de la
produccin de enzimas aminoglycosidemodifying (Shepard y Gilmore, 2002). En
general, Enterococcus faecium muestra una mayor prevalencia de la resistencia
de Enterococcus faecalis y otras especies de Enterococcus.
A pesar de que los enterococos son habitantes comensales de los humanos, que
son cada vez ms aislado a partir de una variedad de infecciones nosocomiales y
otros. Enterococcus faecalis representa las especies de enterococos ms
comnmente aisladas de material clnico humano (80-90%), seguido de
Enterococcus faecium (8-16%). avium Enterococcus, Enterococcus casseliflavus,
Enterococcus cecorum, Enterococcus dispar, Enterococcus durans, Enterococcus
gallinarum, Enterococcus gilvus, Enterococcus hirae, Enterococcus mundtii,
Enterococcus pallens, y raffinosus Enterococcus estn aislados raramente
(Teixeira y Facklam, 2003). Los enterococos se encuentran principalmente en el
tracto urinario e infecciones de heridas, bacteriemia y endocarditis. Ellos menor
frecuencia estn involucrados en las vas respiratorias, del tracto biliar, e
infecciones del sistema nervioso central, otitis, sinusitis, artritis sptica,
endoftalmitis y queman las heridas (Jett et al, 1994;. Teixeira y Facklam, 2003). La
adherencia de las clulas de enterococos a clulas humanas y la posterior
invasin de los tejidos del husped con el soporte de sustancia agregacin, los
hidratos de carbono de la superficie, citolisinas, proteasa, hialuronidasa, lipasa,
gelatinasa, y la produccin de superxido (Elsner et al, 2000;. Jett et al., 1994;
Mundy et al., 2000). Todos estos rasgos se han caracterizado ampliamente en
Enterococcus faecalis pero son menos bien conocido en Enterococcus faecium o
de otras especies.

Los enterococos son importantes en la septicemia, osteomielitis, endocarditis y en

aves de corral y los patos y pueden causar infecciones espordicas en otras
especies animales (Devriese et al, 1992a;.. Vancanneyt et al, 2001;. Wood et al,
2002).
Enterococcus faecalis representa la enterococos predominante especies
colonizadoras el tracto digestivo humano, aunque Enterococcus faecium puede
prevalecer en algunas personas o localidades dependiendo probablemente de la
edad, la dieta, o condiciones fisiolgicas de organismos (Devriese et al, 1992a;..
Devriese et al, 1995). Un gramo de heces humanas contiene aproximadamente
105 a 107 clulas de enterococos (Murray y Weinstock, 1999). Enterococcus
gallinarum, Enterococcus casseliflavus, Enterococcus mundtii y se han encontrado
en las muestras de heces de Van Horn y Rodney (1998). Los enterococos son
menos comnmente aislados de la vagina y de la cavidad oral (<biblio>). Ms
especies se encuentran en los animales. Las aves de corral est habitado
comnmente por Enterococcus faecium, Enterococcus cecorum, Enterococcus
faecalis, Enterococcus hirae, y Enterococcus durans; a diferencia de gallinarum
Enterococcus avium y Enterococcus son raros (Devriese et al., 1991, 1987).
Enterococcus faecalis es una especie que prevalecen en el recto y las amgdalas
de perros y gatos (Devriese et al., 1992b). Baele et al. (2002) encontraron
Enterococcus columbae ser un habitante comn de los intestinos de paloma
seguido de Enterococcus cecorum. Mundt (1963a) y Mallon et al. (2002)
encontraron enterococos en las heces de mamferos salvajes, reptiles y aves.
casseliflavus Enterococcus se ha encontrado que es un habitante comn del
intestino de caracoles de jardn (Charrier et al, 1998;. vec et al., 2002). Los
enterococos son a menudo aislados de los insectos se alimentan de nctar (Martin
y Mundt, 1972) y se han encontrado en el intestino de las termitas (Bauer et al,
2000;. Brune y Friedrich, 2000; vec et al., 2006). La reciente descripcin
Enterococcus canis (De Graef et al., 2003) y Enterococcus hermanniensis (Koort
et al., 2004) han sido aislados de amgdalas caninos, Enterococcus canintestini de
heces de perro (Naser et al., 2005c), Enterococcus phoeniculicola de una
phoeniculidae de pico rojo (Ley-Brown y Meyers, 2003) y Enterococcus devriesei a
partir de materiales de las especies bovina y desde el aire de una planta de
procesamiento de subproductos de aves de corral masacre (vec et al., 2005b).
Los enterococos tambin puede ser aislado de alimentos, plantas, el suelo y agua.
Aunque estas bacterias se considera que son slo una parte temporal de la
microflora de las plantas, en buenas condiciones en las que se pueden propagar
en su superficie (Mundt, 1961; Stirling y Whittenbury, 1963). Enterococcus faecalis,
Enterococcus faecium, Enterococcus hirae, Enterococcus mundtii, Enterococcus
casseliflavus, Enterococcus sulfureus y se aislaron a partir de plantas (Mller et al,

2001;. Ott et al., 2001). Por lo general, se aslan ms a menudo de flores que a
partir de yemas y hojas. Esto indica que los insectos son probablemente
involucrados en la difusin de los enterococos. El suelo puede estar contaminado
por enterococos de animales y / o plantas gracias al viento o la lluvia (Mundt,
1961). No es, naturalmente, habitada por enterococos como se muestra por
Medrek y Lidsky (1960) que aisl enterococos en slo 8 de 369 muestras de
suelos que no se vieron afectados por la actividad humana. La aparicin de
enterococos en aguas se considera generalmente que es el resultado de la
contaminacin fecal. Tpicamente, Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium,
Enterococcus durans, y Enterococcus hirae se pueden encontrar comnmente en
aguas contaminadas; con menos frecuencia avium Enterococcus, Enterococcus
gallinarum, Enterococcus estn aislados cecorum, Enterococcus columbae y
(Godfree et al, 1997;. Pourcher et al., 1991). aguas prstinas en Finlandia
contenan principalmente Enterococcus casseliflavus (Niemi et al., 1993). Debido a
sus capacidades de supervivencia de largo, los enterococos se utilizan como
indicadores de contaminacin distante en el suministro de agua. Cepas
Environmentassociated a menudo son bioqumicamente diferente de las cepas
aisladas de animales y muchas cepas no se pueden asignar de manera
inequvoca a las especies conocidas (Devriese et al, 1992a;. Martin y Mundt, 1972;
Mller et al, 2001;. Mundt, 1961, 1963b; Niemi et al, 1993;. Ulrich y Mller, 1998).
Los enterococos son una parte comn de muchos tipos de alimentos especialmente los de origen animal, como la leche y los productos lcteos, la
carne y los embutidos fermentados. Por lo general, se considera que son
contaminantes secundarios de alimentos a menudo juega un papel en su
deterioro, a pesar de ciertas cepas influyen positivamente en la maduracin y el
desarrollo del aroma de algunos tipos de quesos. Incluso se utilizan como cultivos
probiticos en algunos productos (Franz et al., 1999; Giraffa, 2002). Por otro lado,
la presencia de factores de virulencia en cepas de arranque y alimentos
enterococos, as como la transferencia de determinantes de virulencia de cepas
iniciadoras se ha demostrado (Eaton y Gasson, 2001). Devriese et al. (1995)
encontraron Enterococcus faecium que prevalezca en el queso y el queso de
carne alimentos combinados. Enterococcus faecalis era comn en los crustceos.
productos crnicos contenidos en su mayora Enterococcus faecium seguido de
Enterococcus faecalis y Enterococcus durans / Enterococcus hirae. Los productos
que contienen carne de pavo contenan Enterococcus gallinarum. hermanniensis
Enterococcus ha sido aislado de carne de pollo (Koort et al., 2004) y Enterococcus
devriesei de la lamprea de ro a la parrilla de carbn-envasados al vaco (vec et
al., 2005b). Kirk et al. (1997) aislados de Enterococcus faecium y Enterococcus
faecalis como especies predominantes de las canales de pollo congelados. Los
enterococos puede contaminar la leche y los productos lcteos durante las

diversas etapas de procesamiento, donde Enterococcus faecalis y Enterococcus

faecium prevalecen (Garg y Mital, 1991; Mannu et al., 1999).
PROCEDIMIENTOS DE ENRIQUECIMIENTO Y AISLAMIENTO
Como enterococos tienen requerimientos nutricionales complejos que no es
posible cultivar en medios definidos, pero crecen bien en uso comn rico complejo
de medios bacteriolgicos (por ejemplo, Todd-Hewitt, tripticasa de soja, la infusin
de cerebro y corazn, almidn agar, agar que contenga sangre). Algunas especies
crecen muy mal en caldo MRS y agar utilizado comnmente para el cultivo de
cido lctico bacterias de cido. Ms de 60 diferentes medios selectivos se han
descrito para el aislamiento de enterococos. Desafortunadamente, todos ellos
permiten el crecimiento de algunas otras bacterias mientras que muchas especies
de Enterococcus se inhiben por completo o parcialmente. Los medios de
comunicacin ms frecuentemente utilizados para el aislamiento y enumeracin
de enterococos de varias muestras contienen azida de sodio como un agente
selectivo.
LOS PROCEDIMIENTOS DE MANTENIMIENTO
La liofilizacin, recubrimiento de perlas de vidrio en -70C, o el almacenamiento en
nitrgeno lquido se puede utilizar para la preservacin a largo plazo de los
enterococos. Tambin se pueden mantener durante 1-2 aos a -20C en medio de
liofilizacin o tubos de agar-pualada inoculado (YGLP, BHI) almacenados a 4C.
Mantenimiento de tornasol Leche adems tiza a 4 C es generalmente adecuado
para la conservacin a corto plazo (3 meses), aunque algunas cepas pueden
sobrevivir en estas condiciones durante un mximo de 5 aos.

LA DIFERENCIACIN DEL GNERO ENTEROCOCCUS A PARTIR DE OTROS

GNEROS
Identificacin bioqumica clsica de cepas como pertenecientes al gnero
Enterococcus y su diferenciacin de otros gneros afines se logra principalmente a
travs de la identificacin de las especies. Para propsitos prcticos el siguiente
enfoque se puede utilizar: catalasa-negativa, cocos Gram positivos, mostrando un
buen crecimiento en medios de Enterococcus-selectivo que contiene azida de
sodio al 0,4%, y capaz de crecer en 6,5% (w / v) de caldo de NaCl, puede ser
identificado presuntamente como perteneciente al gnero Enterococcus.
Normalmente, slo las cepas de las caractersticas espectculo de colonias grupo
especies Streptococcus bovis similares a las de los enterococos "clsica" en estos
medios selectivos, pero estas cepas no crecen en caldo de NaCl 6,5%. Sin

embargo, se debe tener en cuenta que este procedimiento excluye varias especies
de Enterococcus. Mtodos de identificacin molecular generalmente obvian este
tipo de dificultades.

COMENTARIOS TAXONMICOS
Un fenmeno ms importante es la existencia de especies grupos dentro del
gnero Enterococcus (cuadro 116, figura 110). Ciertas especies parecen formar
linajes distintos, pero la mayora de los otros pueden ser asignados a estos grupos
(vec et al, 2001;.. Tyrrell et al, 2002a;. Vancanneyt et al, 2001;. Williams et al,
1991). Los miembros de tales grupos presentan caractersticas fenotpicas
similares, y la separacin de especies puede ser problemtico. 16S rRNA
similitudes de secuencia de genes entre especies pueden ser tan alta como 99,8%
dentro de algunos grupos. A pesar de estas estrechas relaciones y similitudes de
las especies estn bien separados por determinaciones de similitud de ADN-ADN
y ciertas tcnicas de identificacin molecular. El grupo de Enterococcus faecium
contiene Enterococcus faecium, Enterococcus durans, Enterococcus canis,
Enterococcus hirae, Enterococcus mundtii, Enterococcus Ratti, y villorum
Enterococcus. Estas especies muestran principalmente el crecimiento idnticos y
caractersticas fisiolgicas. La discriminacin de las especies individuales de este
grupo mediante pruebas bioqumicas es a menudo poco fiable. durans
Enterococcus, Enterococcus hirae, y villorum Enterococcus son especialmente
difciles de diferenciar, aunque pueden distinguirse claramente por el anlisis de
clulas enteras perfil de protenas mediante SDS-PAGE, tDNA-PCR y anlisis de
PCR arbitrariamente cebada (Devriese et al., 2002). El grupo avium Enterococcus
contiene Enterococcus avium, Enterococcus devriesei, Enterococcus gilvus,
malodoratus Enterococcus, Enterococcus avium seudo, y raffinosus Enterococcus.
Estas especies forman en su mayora pequeas colonias con fuerte hemlisis
ecolgica y que a menudo crecen pero slo dbilmente en el enterococo medios
selectivos. El crecimiento a 10C, 45C y en 6,5% de NaCl, as como la produccin
de antgeno D puede ser negativo. Miembros de este grupo son tpicamente
adonitol- y L-sorbosa-positivo. El grupo de Enterococcus faecalis contiene
Enterococcus faecalis, Enterococcus caccae, hemoperoxidus Enterococcus,
moraviensis Enterococcus, Enterococcus silesiacus y termitis Enterococcus.
Aunque distancias filogenticas son ms grandes en este grupo de las seis
especies comparten muchos rasgos fenotpicos. Forman colonias de color rojo
oscuro similares con un brillo metlico en agar-Slanetz Bartley. El crecimiento a 10
C, en 6,5% de NaCl, as como la produccin de antgeno D es positivo. Sin
embargo, estas especies pueden ser diferenciadas unos de otros por unas
pruebas bioqumicas. El grupo Enterococcus gallinarum consta de Enterococcus

gallinarum y casseliflavus Enterococcus. Intrnseca de bajo nivel de resistencia a

la vancomicina y la motilidad son tpicos de este grupo, a pesar de las cepas no
mviles pueden raramente aislados (Clark et al, 1998;.. Patel et al, 1998;. Vincent
et al, 1991). cecorum Enterococcus y especies de Enterococcus Columbae estn
ms alejadas filogenticamente relacionadas, pero que muestran, sin embargo,
notables similitudes fenotpicas. Ellos crecen mal en medios selectivos de
Enterococcus y son carboxyphilic: su crecimiento est fuertemente reforzada por
el cultivo en una atmsfera de CO2. La fosfatasa alcalina que puede ser producido
por estas dos especies es un rasgo nico en el gnero Enterococcus. El grupo de
Enterococcus Itlico contiene Enterococcus Itlico y camelliae Enterococcus.
Estas dos especies recientemente descritas revelan una baja actividad bioqumica
en comparacin con las otras especies de enterococos Cinco especies han sido
reclasificadas de gnero Enterococcus desde que fue establecido por Schleifer y
Kilpper-Blz (1984). Enterococcus seriolicida (Kusuda et al., 1991) se encontr
que era sinnimo de Lactococcus garvieae y reclasificado por Teixeira et al.
(1996). La especie Enterococcus porcinus (Teixeira et al., 2001) se encontr que
era un sinnimo menor de Enterococcus villorum y calific vlidamente por De
Graef et al. (2003). Del mismo modo, Enterococcus solitarius (Collins et al., 1989b)
se reclasific al gnero Tetragenococcus como Tetragenococcus solitarius
(Ennahar y Cai, 2005). Recientemente, Naser et al. (2006) reclasific
Enterococcus flavescens (Pompei et al., 1992a) como Enterococcus casseliflavus
y saccharominimus Enterococcus (Vancanneyt et al., 2004) como Enterococcus
italicus.
VARIOS COMENTARIOS
Un nmero de esquemas basados en caractersticas bioqumicas y fisiolgicas se
han propuesto para la identificacin de enterococos (por ejemplo, Day et al,
2001;.. Devriese et al, 1993b; Facklam y Collins, 1989; Manero y Blanch, 1999).
Sin embargo, la identificacin de enterococos basado en pruebas bioqumicas
solamente es difcil y con frecuencia poco fiable. La situacin se complica por
diferentes enfoques metodolgicos que proporcionan resultados diferentes para la
misma prueba, y las discrepancias se puede encontrar entre los mtodos
convencionales y diversos kits comerciales (por ejemplo, Hudson et al, 2003;..
Bosshard et al, 2004; Winston et al ., 2004). Por otra parte, las cepas de la misma
especie aisladas de diferentes fuentes pueden revelar diferentes caractersticas
bioqumicas (Devriese et al, 1995;.. vec et al, 2002). En trminos generales, se
puede concluir que slo Enterococcus faecalis es relativamente fcil e
identificados de forma fiable utilizando caractersticas de crecimiento y pruebas
bioqumicas. En tipos de muestras en el que Enterococcus faecium es el nico
representante frecuente del grupo de especies de Enterococcus faecium, la

identificacin es posible de esta manera. Pero en todos los otros casos, es

aconsejable para confirmar la identificacin de esta importante especie por otros
medios.
Completo, as como la secuenciacin de genes 16S rRNA ha sido utilizado para la
identificacin de enterococos (Monstein et al., 2001; Patel et al., 1998). Este
mtodo es valioso para la identificacin en el nivel de gnero y especie-grupo,
pero se debe tener en cuenta que 16S rRNA genes similitudes de secuencia entre
especies pueden ser tan alta como 99,8% como en el caso de Enterococcus
gallinarum casseliflavus- Enterococcus o 99,7% para durans Enterococcus
faecium-Enterococcus (Williams et al., 1991). Sin embargo, los valores de similitud
de ADN-ADN de estas especies son bajos e indicar claramente su estado especie
separada. El mtodo de hibridacin DNA-DNA se puede considerar como un
estndar de oro para la descripcin de nuevas especies de Enterococcus, pero
esta tcnica requiere mucho tiempo sin embargo, no es aplicable para la
identificacin rutinaria. Los mtodos de PCR basados en la deteccin de D-Ala: D
Ala ligasa cebadores de genes como diana (ddlE.faecalis y ddlE.faecium) y vanA,
vanB, y los genes VANC se aplican para la diferenciacin de Enterococcus
faecalis, Enterococcus faecium, Enterococcus gallinarum, y casseliflavus
Enterococcus (Dudka-Malen et al., 1995). La diferenciacin de Durn y
Enterococcus hirae por el ddl-PCR fue descrita por Knijff et al. (2001). Otro mtodo
se basa en la secuenciacin parcial de la D-Ala: gen ligasa d-Ala (Ozawa et al.,
2000).
El anlisis de los perfiles de protenas de clulas enteras obtenidos por SDSPAGE es un mtodo adecuado que corresponde a la hibridacin DNA-DNA
resultados (De Graef et al., 2003; Devriese et al, 2002;.. Koort et al, 2004;
Merquior et al, 1994;.. Mller et al, 2001; Tyrrell et al, 2002a;.. Vancanneyt et al,
2001). Otros mtodos de identificacin bioqumicos y fsicos aplicados en la
identificacin de enterococos incluyen anlisis de cidos grasos de cadena larga
(Fortina et al, 2004;.. Tyrrell et al, 2002a) (. Lang et al, 2001), anlisis de ster
metlico de cido graso de la membrana celular, la temperatura electroforesis en
gel de -gradiente (DGGE) y la electroforesis en gel desnaturalizante en gradiente
(DGGE) de las regiones variables de 16S rDNA Ercolini et al., 2001; Monstein et
al., 2001) y la espectroscopia vibracional (Kirschner et al., 2001).
EXPRESIONES DE GRATITUD
Un agradecimiento especial a M. Vancanneyt de sus comentarios y sugerencias
durante la preparacin de este captulo. P. vec est en deuda con el Ministerio de
Educacin, Juventud y Deportes de la Repblica Checa (proyecto
MSM0021622416).