Prctica #1

PREPARACIN Y CONTROL DE MEDIOS DE CULTIVO

i.

Fundamento Terico

El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables

para el crecimiento de los microorganismos. La composicin precisa
depender de la especie que se quiera cultivar, porque las
necesidades
nutricionales
varan
considerablemente. Hay
microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en medios de
laboratorio normales y microorganismos muy exigentes que
necesitan determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre
para crecer.
ii.

iii.

Objetivos
Preparar y controlar medios de cultivos comerciales que deben
ser constatados y verificados para su validacin y uso al objetivo
sealado.
Preparar medios de cultivo como soporte y fuente de nutrientes
para el desarrollo de los microorganismos in vitro.
Manejar los instrumentos de uso rutinario, que a la vez son
imprescindibles, en el laboratorio de microbiologa.
Hacer un primer acercamiento a la manipulacin de
microorganismos. Adquirir la idea de la importancia del trabajo en
condiciones de esterilidad y las tcnicas ms comunes para
realizarlo.
Materiales y Reactivos
Material

iv.

Matraz
Erlenmeyer
Probeta Esptula
Vidrio de reloj
Gasa
Algodn
Papel madera
Procedimiento

Reactivos

Medios de Cultivo
Agua destilada

Equipos

Autoclave
Mechero
Hornilla
Balanza
pHmetro

Dado la gran cantidad de medios de cultivo existente sera imposible

enumerarlos en la prctica presente. Por lo tanto los procedimientos
son los descritos en el vademcum respetando todos los conceptos
prcticos de un laboratorio de microbiologa ms de esta si es
aplicada.

Cada mesa de trabajo se encargar de la preparacin de una

cantidad suficiente de un determinado medio de cultivo, para ser
utilizado, en su momento, por todos los alumnos del grupo de
prcticas. Las instrucciones a seguir dependern del nmero de mesa
y el medio de cultivo asignado, pero en todos los casos, los pasos son
los siguientes:
1. Disolver los componentes del medio en agua destilada. En muchos
casos se parte de un preparado comercial con todos los componentes
deshidratados. Siguiendo las instrucciones del fabricante o del
profesor, aadir la cantidad de agua adecuada para conseguir la
concentracin deseada de los mismos. Si el medio contiene un agente
solidificante (agar-agar) hay que calentar el preparado hasta la
ebullicin del mismo agitando de vez en cuando, para asegurar una
completa disolucin del agar (medios slidos y semislidos); para
medios lquidos no es necesario calentar, nicamente se agita la
mezcla hasta la completa disolucin de la misma.
2. Esterilizar la disolucin.- Una vez disuelto el medio se debe
esterilizar para evitar el crecimiento de contaminantes. Dependiendo
de la forma en que vaya a utilizarse el medio, el procedimiento ser
diferente:
a) Medios slidos en placa.- Tapar el matraz con tapn de algodn y
cubrir con papel de aluminio. Llevar a esterilizar alautoclave (1210C)
durante 15-20 minutos. Una vez estril repartir en placas de Petri
estriles y dejar en reposo para que solidifique.
b) Medios lquidos.- Una vez disueltos los componentes repartir en
tubos a razn de unos 2-4 ml por tubo, tapar con tapn de aluminio y
llevar a esterilizar en autoclave.
Del control de pH: los medios de cultivo tamponados muy rara vez
varan de pH sobre todo en los cultivos slidos resulta poco prctico
tomar pH. A una temperatura cerca de su punto de solidificacin que
se realiza con un potencimetro de aguja. Los mtodos semislidos y
lquidos est claro que el electrodo mencionado cumple a cabalidad
su objeto, en la acidofilia, basofilia y sobre todo neutrofilia de los
microorganismos.
El control de esterilidad del medio: Se lo realiza de dos formas, al
momento de la esterilizacin previa y sin inoculo. Ambos se
incubaban de acuerdo a protocolo de la cepa control.
De la asimilacin y desasimilacin de sustratos: ser demarcado por
el desarrollo y crecimiento de microorganismo control.
v.

Trabajo practico

Investigar sobre 10 medios de cultivo, determinando los siguientes

aspectos:

Finalidad de empleo

Modo de actuar

Empleo

Interpretacin