EPIGENTICA

Fernanda Molognoni
fernandamolo@gmail.com

Laboratrio de Ontogenia e Epigentica

Departamento de Farmacologia - UNIFESP

Especial
Gentica no espelho

Definio de Epigentica
Epigentica consiste no estudo das mudanas hereditrias na
expresso gnica que independem de mudanas na sequncia
primria do DNA.
Informao
armazenada

Cromatina

Informao
organizada

EXPRESSO GNICA
http://www3.ie-freiburg.mpg.de/research-groups/epigenetics/laboratory-thomasjenuwein/epigenetic-control-by-histone-methylation/

Mecanismos epigenticos

* Metilao de DNA
* Modificaes ps-traducionais em histonas
* Posicionamento de nucleossomos
* MicroRNAs

EPIGENOMA

Importncia Fisiolgica

Regulao gnica
Desenvolvimento
Expresso tecido-especfica
Inativao do cromossomo X
Imprinting genmico
Manuteno da integridade

Feinberg & Tycho,

2004

Metilao de DNA

Citosina

SAM
SAH

5- metilcitosina

***Em mamferos acontece no contexto CpG

CpG metilado

INIBIO DA TRANSCRIO

TF

Ilha de CpG: regio do genoma com pelo menos 200pb que contm mais
de 50% de CpGs.
Desmetiladas em clulas normais e localizadas em promotores e ou
primeiros exons de genes ativamente transcritos.

PROMOTOR

Annu. Rev. Med 59:267-80

Cromatina

http://www.mikeblaber.org/oldwine/BCH4053/Lecture21/Lecture21.htm

Modificaes ps-traducionais em histonas

MARCAS DE ATIVAO
H3K4trimetilada (me3)
Acetilao

MARCAS DE INIBIO
H3K9trimetilada (me3)
H3K27trimetilada

Molecular biology of the cell. 4 Ed. Alberts, B. et al

Acetilao de histonas

J. bras. pneumol. vol.35 no.12 So Paulo Dec. 2009

H3K4trimetilada tb pode ser

representada pelo sinal verde!!!

H3K9trimetilada
H3K27trimetilada

Adaptado de Anton Eberharter & Peter B. Becker, 2002

Grupo Polycomb (PcG)

Reguladores de cromatina que esto associados com represso
gnica e so importantes durante o desenvolvimento .
Divididos em 2 Grupo;
Os que colocam as marcas - PRC2 metiltransferases de histona
Ex.EZH2 que trimetila a lisina 27 da H3 e SUZ12 que metila a lisina 9
da histona H3
Os que interpretam as marcas PRC1
Ex.CBX2/HPC1 que possui cromodomnio e liga-se a lisinas metiladas.

http://www.rikenresearch.riken.jp/eng/frontline/5514

Sparmann & van Lohuizen, 2006

Grupo Trithorax (TrxG)

Enzimas que promovem a ativao da expresso gnica e tb so
importante durante o desenvolvimento.
Ex. MLL (trimetila a lisina 4 da H3)

ATIVAO DA TRANSCRIO

Alea A. Mills 2010

Posicionamento de nucleossomos

NFR

NFR nucleossome free region

NDR- nucleossome depleted regions

NFR

NFR

NFR

NFR

Adaptado de Jones &

Baylin, 2011

SWI/SNF

Scherem et al., 2002

MicroRNAs

Pequenos RNAs (~22nt) no codificantes que regulam a expresso

gnica atravs do silenciamento dos genes alvo.
So expressos de maneira tecido especfica e controlam importantes
processos biolgicos incluindo; proliferao, apoptose e diferenciao.
Como outros genes a expresso dos micro RNAs pode ser regulada por
mecanismos epigenticos.

Esquela-Kerscher & Slack 2006

MicroRNAs

Importncia Fisiolgica

Desenvolvimento
Inativao do cromossomo X

Imprinting genmico
Manuteno da integridade

Feinberg & Tycho,

2004

Embrio e clulas somticas

Reik 2007

Clulas germinativas

Importncia Fisiolgica

Desenvolvimento
Inativao do cromossomo X

Imprinting genmico
Manuteno da integridade

Feinberg & Tycho, 2004

Inativao do cromossomo X
Em mamferos , um dos cromossomos X da fmeas inativado de maneira
aleatria durante a embriognese.

Centro de inativao do Cromossomo X -XIC

Xist Transcrito especfico de inativao do cromossomo X
Este RNA no codificante expresso apenas no X inativo (Xi)

XIC

Participao do grupo PRC2 na inativao do cromossomo X

2 X ativos (blastocisto, epiblasto)

Xi

Modificado de Jeannie T
Lee 2011

Importncia Fisiolgica

Desenvolvimento
Inativao do cromossomo X

Imprinting genmico
Manuteno da integridade

Feinberg & Tycho,

2004

Imprinting genmico
uma forma de regulao epigentica que resulta na expresso de
apenas um dos alelos dependendo de sua origem (materna ou paterna).
A expresso dos genes que sofrem imprinting tecido ou estgio
especfica.
Possvel funo e origem:
Evitar a partenognese???
Hiptese do conflito (seleo natural agiu diferentemente nos alelos
paternos e maternos).

Genes alelos

meiose
metilao de DNA

Clulas somticas
dos filhotes

Alberts et al, Molecular Biology of the Cell, 4th edition

**Alelo vindo da me
expresso

Wolf Reik & Jrn Walter 2001

ICR

ICR Centro de controle de imprinting

CTCF- Insulator protein (protena de
isolamento)
Ideraabdullah et al., 2008

Participao em Doenas
Cncer
Doenas auto-imunes
Desordens psiquitricas (ex. Esquizofrenia, Autismo)
Sndromes (ex. Sndrome de Rett, Prader Willi)

Genes supressores
de tumor

NORMAL

CNCER
CpG island
shore

Ilha de CpG

Corpo gnico

NORMAL

CNCER
Seqs repetitivas

Elementos
transponveis

Rodrquez-Paredes & Esteller, 2011

Esteller

Sparmann & van Lohuizen, 2006

Drogas epigenticas

Rodrquez-Paredes & Esteller, 2011

Tcnicas para a anlise

da metilao de DNA

Anlise da metilao de DNA Sequncia- especfica

MSP

COBRA

Ms-SNuPE

Sequenciamento

Pirosequenciamento

Plataforma
Illumina

HRM

Infiniu
m

GoldenGate

Tratamento do DNA com bissulfito de Sdio

Citosina no metilada

Sequenciamento do DNA
tratado com bissulfito de
sdio

Chan et al. Oncogenomics

2003

Methylation Sensitive High Resolution Melting (Ms-HRM)

Tcnica baseada no comportamento de dissociao do
dsDNA em ssDNA com o aumento da temperatura
DNA
Bissulfito

Amplificao da
sequencia alvo

HRM

Equipamento de PCR
em tempo real

Plataforma Illumina Infinium Anlise em larga escala

Cobre 27.578 CpGs e 14.495 genes

Anlise das modificaes em

histonas

Imunoprecipitao de cromatina - ChIP

Ex.Anti- H3K4me3

ChIP on chip Imunoprecipitao da cromatina

seguida de microarray

Schones and Zhao Nature Reviews Genetics

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cuidadoras

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nos filhotes de mes cuidadoras

Especial
Gentica no espelho

Diferenas na metilao de DNA e acetilao de histonas

aumentam ou aparecem com a idade

Obrigada pela ateno!!!!!!

OBS. Precisa-se de algum que entenda de bioinformtica

no lab de Ontogenia e Epigentica da UNIFESP