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Agrupamento Vertical de So Joo da Pesqueira Escola E.B.

2,3 / Secundria de So Joo da


Pesqueira
Biologia
Fundamentos de Engenharia Gentica
Elaborado por: Ana Vieira Andreia Peneda Paula Pereira
n17 n22 n23 12A
2006/2007

ndice
Pg. 3 7 10 15 18 22 24 26

Introduo . Enzimas de restrio .. Tcnica do DNA recomb


a ... Concluso . Bibliografia

Fundamentos de Engenharia Gentica


Introduo
A descoberta, em meados do sculo passado, da estrutura das molculas que contm a inf
ormao gentica abriu caminho para uma nova rea do conhecimento. Um dos passos mais ma
rcantes ocorreu em 1953, quando Watson e Crick apresentaram o modelo de dupla hli
ce para a molcula de DNA. Segundo este modelo, a molcula de DNA composta por duas
cadeias polinucleotdicas que se dispem em sentidos inversos, designando-se, por is
so, antiparalelas. Cada nucletido formado por uma base azotada, (glcido uma com pe
ntose cinco
Fig.1 Watson e Crick
carbonos) e um grupo fosfto (cido fosfrico). Os nucletidos uma que cadeia
Fig.2 Nucletido
formam
polinucleotdica ligam-se
entre si atravs de ligaes covalentes. A ligao entre as duas cadeias feita por complem
entaridade entre as bases azotadas, verificando-se que a adenina s emparelha com
a timina (atravs do estabelecimento de duas pontes de hidrognio), enquanto que a g
uanina s se liga citosina (atravs do estabelecimento de trs pontes de hidrognio).
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Fig.3 Estrutura e composio qumica do DNA
O outro cido nucleico o RNA formado por uma cadeia simples de de nucletidos, Contu
do, em apresentando determinadas dimenses muito inferiores s da molcula DNA. regies,
a molcula de RNA pode dobrarse devido ao estabelecimento de pontes de hidrognio e
ntre as bases
Fig.4 Nucletido
complementares (a adenina emparelha com o uracilo e a guanina com a citosina).
Para que a informao contida no DNA seja expressa necessrio que, em primeiro lugar,
a informao seja passada ao RNA, que se forma por complementaridade com o DNA, e qu
e, posteriormente, essa informao, agora veiculada pelo RNA, seja traduzida sob a f
orma de protenas. Este fluxo unidireccional de informao entre os cidos nucleicos e a
s protenas ficou conhecido como dogma central da Bioqumica. DNA RNA Protena
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Fig.5 Dogma central da Bioqumica.
A partir da dcada de 70 do sculo XX, porm, ocorreu uma verdadeira revoluo ligadas bio
tecnolgica. e Cincia e tm Tecnologia, fornecido profundamente interdependentes,
importantes conhecimentos sobre a vida e, simultaneamente, comearam a manipula-la
. Abriram a molcula de DNA, extraram genes, transplantaram-nos para outras clulas,
multiplicaram alguns desse genes milhes e milhes de vezes e criaram, em tubo de ens
aio, seres que no surgiram como resultado de milhes de anos de evoluo. a engenharia g
entica que permite conhecer melhor algumas das doenas humanas, oferece produtos se
ctores indstria e quer libertar a agricultura das suas dependncias em relao aos adub
os e aos pesticidas.
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A
engenharia
gentica
precisa de tcnicas de elevada preciso, ao mesmo tempo que os comits de biotica vo ana
lisando e reflectindo sobre os avanos e as controvrsias.
Fig.6

Um dos grandes problemas com que se depararam os investigadores que tentavam man
ipular o DNA era o isolamento dos genes. Ao longo da dcada de 60 do mesmo sculo, d
iversas investigaes com microrganismos tinham permitido descobrir enzimas capazes
de seleccionar o DNA em locais especficos. Estas enzimas denominadas enzimas de r
estrio, comearam, ento, a ser utilizadas em tcnicas de manipulao in vitro. Podemos afi
mar que as enzimas de restrio esto na base da engenharia gentica, cujo objectivo a m
anipulao directa de genes com um fim prtico.
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Enzimas de restrio
As enzimas de restrio fragmentam o DNA por hidrlise em locais especficos. A especifi
cidade dada pela sequncia de nucletidos que a enzima reconhece, fragmentando o DNA
sempre que encontra essa sequncia.
Fig.7 Reconhecimento da sequncia 5` GAA TTC 3` pela enzima EcoRI
Como funcionam as enzimas de restrio? Os vrus invadem frequentemente as bactrias e a
fectam o seu DNA. Algumas bactrias possuem um mecanismo de defesa contra os vrus q
ue consiste na produo de enzimas de restrio. Estas enzimas actuam em pontos especfico
s, as chamadas zonas de restrio, catalisando o desdobramento da DNA em fragmentos
menores. Estes fragmentos contm nas suas extremidades a sequncia que foi reconheci
da pela enzima de restrio. Estas pores terminais designam-se por extremidades coesiv
as.
Fig.8 Ferramentas da engenharia gentica 7

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As
extremidades
coesivas
podem
ento
ligar-se,
por
complementaridade, a outro DNA. Neste processo intervm outras enzimas, chamadas l
igases do DNA, que catalisam o processo que permite que fragmentos de DNA se vol
tem a ligar.
Fig.9 Aco das enzimas de restrio e da DNA ligase
A descoberta das enzimas de restrio e das ligases do DNA fornecem aos investigador
es a oportunidade de manipular e transferir genes de uma molcula de DNA para outr
a, isto , de um organismo para outro. Nesta transferncia de genes tambm necessria a
existncia de um vector, isto , uma molcula capaz de transportar o fragmento de DNA
para uma clula. Os bacterifagos (vrus que atacam bactrias) e os plasmdeos (pequenos f
ragmentos livres de DNA com forma circular que esto presente em bactrias) so dois e
xemplos de vectores.
Fig.10 Vector
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Fig.11 Vrus bacterifago
Fig.12 Plasmdeos
As enzimas de restrio permitiram desenvolver umas das metodologias mais utilizadas
pela engenharia gentica a tecnologia do DNA recombinante (rDNA) isto , produzir m
olculas de DNA a partir da combinao de genes com provenincias diferentes.
Fig.13 DNA recombinante
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Tcnica do DNA recombinante (rDNA)
Na tcnica do DNA recombinante, recorrendo a enzimas de restrio para cortar o DNA em
pontos especficos e a ligases do DNA para reconstruir a molcula, uma poro de DNA, n
atural ou sinttico, inserido noutro DNA estranho.
O processo bsico da tcnica do rDNA consiste em: 1Abertura da molcula de DNA do plasmde
o, num ponto especfico, pela enzima se restrio; 2- Isolamento de genes de interesse
noutras molculas de DNA doadoras recorrendo a enzimas de restrio do mesmo tipo; 3Juno do gene a inserir do plasmdeo e de ligases do DNA; 4- Ligao do gene ao plasmdeo f
ormandose o DNA recombinante; 5- Introduo do plasmdeo recombinante em bactrias, que
funcionam como clulas hospedeiras do novo gene; 6- Produo da protena desejada a part
ir do DNA recombinante.
Fig.14 Tcnica do DNA recombinante
Esta tcnica permite, por exemplo, introduzir pores de DNA de uma determinada espcie
num microrganismo, que, em condies adequadas, se divide, permitindo a criao de inmera
s cpias do gene (ou do produto do gene) a inserido. Trata-se de uma clonagem do se
gmento de DNA manipulado.
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A
nova
molcula
de
DNA
presente
nos
clones
do
microorganismo onde foi inserido o DNA recombinante permitir a produo de uma nova p
rotena, de acordo com a nova informao gentica que possui. Desta forma, possvel, por e
xemplo, introduzir um gene humano em bactrias para que estas produzam, em larga e
scala, uma determinada protena humana.
Fig.15 Produo de insulina humana utilizando a tcnica do DNA recombinante 11

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A insulina uma hormona produzida pelo pncreas e controla a entrada de glicose nas
clulas. A sua falta provoca uma doena conhecida por diabetes. Durante anos, a nica
forma de obter insulina era extraindo-a do pncreas de porco. Contudo, este proce
dimento era bastante dispendioso e alm disso ocorriam, frequentemente, reaces alrgic
as nos indivduos que recebiam esta insulina. A tcnica do DNA recombinante permitiu
baixar o custo de produo de insulina e, sobretudo, torn-la mais segura. Evitandose
as reaces alrgicas. Para tal, os investigadores procederam ao isolamento do gene r
esponsvel pela produo desta hormonas, atravs da utilizao de enzimas de restrio e su
ero em bactrias, tendo, para Dado esse que efeito, como as utilizando vectores. bac
trias plasmdeos
utilizadas se reproduzem muito rapidamente, ao fim de um curto intervalo de temp
o, possvel obter um elevado
Fig.16 Vectores utilizados na tcnica do DNA recombinante
nmero destes microrganismos capazes de produzir insulina humana em larga escala.
De seguida, a insulina isolada do meio que contm diversos nutrientes e produtos d
o metabolismo bacteriano, sendo purificada de forma a poder ser utilizada no tra
tamento de diabetes. Actualmente, alm da insulina, muitas outras substancias so pr
oduzidas custa da tcnica do DNA recombinante.
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Substncia obtida pela tcnica do rDNA Hormona de crescimento
Aplicao Disfuno de hipofisria
Factor de crescimento da Processos de cicatrizao epiderme de feridas Interfero Fact
ores de VII, VIII, IX Cancro coagulao Hemofilia Hepatite B Despiste da SIDA Evita
e extenso de danos aps do miocrdio Anemia
Vacina para hepatite Teste da SIDA Superxido dismutase Eritropoetina

O processo de multiplicao dos organismos que contm rDNA permite no s a produo da subst
ia codificada pelo gene inserido, como tambm a clonagem desses genes. Os investig
adores Esses genes conservam, armazenados assim, ficam, cpias assim, desses dispo
nveis genes, para constituindo bibliotecas genmicas ou bibliotecas de genes. poste
riores utilizaes.
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Fig.17 Biblioteca de genes
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DNA Complementar (cDNA)


Este DNA obtido a partir do mRNA por complementaridade de bases, um mRNA que j so
freu processamento (no contm intres). A produo de cDNA possvel por aco da enzima tr
iptase reversa o mRNA funciona como molde para a sntese de uma cadeia de DNA, um
processo inverso do que se passa habitualmente na transcrio. Aps a formao da primeira
cadeia de cDNA, a DNA polimerase forma a cadeia complementar, constituindo-se u
ma molcula estvel.
Fig.18 Produo de cDNA 15

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A comparao entre o cDNA (sem intres) e o DNA original permite localizar as regies co
dificantes (exes) e as no codificantes (intres) de um determinado gene.
Fig.19
O cDNA facilita a produo de protenas de seres eucariontes em bactrias uma vez que es
tas no possuem mecanismos de processamento do mRNA, isto , em presena de um DNA ori
ginal transcreviam toda o gene, incluindo os intres, obtendo-se protenas diferente
s das pretendidas. Ao ser inserido um clone de cDNA garante-se a produo da protena
normal. A manipulao do genoma foi iniciada em microrganismos, mas alargou-se a out
ros seres vivos; actualmente, praticada em plantas e animais. De forma genrica, d
esigna-se organismos geneticamente modificados (OGM) ou transgnicos aqueles cujo
genoma foi manipulado, apresentando diferenas relativamente sua constituio original
. A manipulao gentica permite obter, de forma rpida, organismos detentores de
Fig.20 Organismos geneticamente modificados
caractersticas vantajosas. Verifica-se que as plantas so mais facilmente manipulvei
s, do ponto de vista genrico, do que os animais. Actualmente, j existem diversas v
ariedades de plantas de cultivo geneticamente modificadas. A insero de determinado
s genes confere-lhes novas caractersticas, tais como: - maior resistncia a doenas,
a herbicidas, ao calor, seca, geada e reduo das necessidades em fertilizantes;
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- desenvolvimento de produtos com maior valor e qualidade alimentar (frutos de m
aior tamanho, tubrculos com maior valor nutritivo, etc.; - produo de frmacos (como,
por exemplo, vacinas) que sejam administrados nos seres humanos juntamente com o
alimento.
Fig.21 Produo de um organismo geneticamente modificado
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Impresses digitais genticas


Com excepo dos gmeos verdadeiros, cada indivduo possui o seu prprio DNA, que nico. Em
1984, com base nestes princpios, foi possvel desenvolver uma tcnica destinada a ide
ntificar pores de DNA. Esta tcnica designa-se por DNA fingerprint ou impresses digit
ais genticas. No seio do DNA encontram-se zonas de restrio sequncias repetitivas ao
longo da molcula cujo nmero, tamanho e localizao so variveis de indivduo para indiv
Este facto pode ser utilizado de diversos modos para identificar geneticamente o
s indivduos.
Fig.22 Zonas de restrio
A partir de uma pequena amostra de material biolgico que contenha material gentico
, como leuccitos, por exemplo, faz-se a extraco do DNA. Submetido aco de enzimas de r
estrio, o DNA fragmenta-se em pores de diferentes tamanhos e pesos moleculares.
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Estes pedaos de DNA, sujeitos a electroforese revelam um padro de fragmentos de re
strio que nico para cada indivduo, funcionando como um cdigo de barras gentico.
Fig.23 Cdigo de barras gentico
A electroforese consiste em colocar a amostra de uma determinada protena num gel
ao qual se aplica uma corrente elctrica no sentido de proceder separao de variantes
da protena, isto , a mesma protena pode diferir em alguns aminocidos, o que lhe con
fere propriedades elctricas diferentes.
Fig.24 Tcnica do DNA fingerprint 19

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Ao longo do DNA h bases que se repetem e que variam de indivduo para indivduo, dete
rminando um polimorfismo. Comparando pores da molcula de DNA de diferentes indivduos
possvel investigar problemas relacionados com a filiao biolgica, mas sobretudo, em
cincia forense, na investigao criminal. Analisando pequenas pores de sangue, cabelo,
smen ou qualquer tecido encontrado nos vestgios do crime, possvel fazer o DNA finge
rprint que, depois de comparado com o dos indivduos suspeitos se podem identifica
r corpos irreconhecveis ou mesmo resolver problemas da histria.
Fig.25 Aplicao forense do DNA fingerprint
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Fig.26 Testes de paternidade
Um outro material gentico que pode ser utilizado em investigaes de natureza mdico-le
gal ou na pesquisa de ancestrais de determinado indivduo o genoma mitocondrial. T
rata-se de material gentico proveniente exclusivamente da me e organizado em molcul
as circulares da hlice dupla. A maioria das mitocndrias possui 5 a 10 cpias do DNA
mitocondrial que no est ligado a protenas.
Fig.27 Anlise do DNA fingerprint 21

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Reaces de polimerizao em cadeia
uma das tcnicas para clonar DNA de modo a obter grandes quantidades a partir de u
ma pequena amostra.
Fig.28 Reaco de polimerizao em cadeia (PCR)
Fases do processo de amplificao de uma determinada poro de DNA: Aquecimento do DNA p
ara separar as duas cadeias; Adio de nucletidos e da enzima DNA polimerase para que
a dupla hlice seja reconstruda a partir de uma das cadeias simples; Repetio do proc
edimento de modo a produzir cpias suficientes do DNA em estudo.
Fig.29 22

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Uma dificuldade que se levantou nesta tcnica foi a de conciliar um processo que d
ecorre a elevadas temperaturas com a fragilidade da enzima DNA polimerase. Recor
reu-se uma vez mais aos microrganismos, utilizando-se a DNA polimerase, extrada d
e bactrias que vivem em meios muito quentes. A terapia gnica somtica, isto , a subst
ituio de genes que provocam doenas hereditrias num indivduo adulto, foi j utilizada em
1999 em crianas com menos de 1 ano. A terapia gnica germinal, em embries, no tem ac
tualmente justificao e reprovada pelos comits de biotica. Considera-se prefervel sele
ccionar embries isentos de determinados genes na reproduo assistida.
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Concluso
A Engenharia Gentica tem desenvolvido tcnicas que so utilizadas, hoje, em diversas r
eas, como a Medicina, a Agricultura e a Indstria. Estes progressos tm tanto de notv
eis como de perturbadores. Questiona-se a sua segurana, bem como as suas implicaes t
icas, sociais e mesmo religiosos. Se no novidade que as novas tecnologias geram dv
idas e inquietaes na sociedade, certamente a primeira vez que o Homem interfere de
forma to drstica nos processos biolgicos, ultrapassando as barreiras reprodutivas
que existem entre as espcies e os mecanismos de seleco natural. A tecnologia do DNA
Recombinante permite produzir novas combinaes de genes que naturalmente nunca se
encontrariam. Que consequncias podero decorrer desta reunio? Que reaco dever ter a soc
iedade perante esta capacidade de manipulao do genoma dos seres vivos e particular
mente do ser humano? Sabe-se que a insero de genes em determinados locais do genom
a pode activar oncogenes; sero as manipulaes seguras a este nvel? No podero os vectore
s transportar outros genes para alm dos desejados? At que ponto os organismos gene
ticamente modificados, ao serem libertados no ambiente, no podero alterar o equilbr
io dos ecossistemas? No podero as novas tecnologias ser postas ao servio de polticas
discriminatrias e eugnicas? Que potencial esconde a Engenharia Gentica que possa s
er aplicado nas armas biolgicas e no terrorismo?
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Estas e outras questes inquietam, naturalmente, os mais diversos sectores da soci
edade. Contudo, no podemos esquecer que a Engenharia Gentica e a Biotecnologia em
geral, tm permitido proezas que se reflectem na melhoria da qualidade de vida da
sociedade. Julga-se, assim, ser fundamental que os cidados conheam e compreendam,
de forma rigorosa, o impacto que as novas tecnologias de manipulao dos seres vivos
e da vida produzem ou podem vir a produzir. A cincia deve avanar de forma cautelo
sa, pois os perigos e os benefcios desta rea do conhecimento esto, ainda, longe de
ser totalmente conhecidos.
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Fundamentos de Engenharia Gentica


Bibliografia
Silva, A. D.; Santos, M. E.; Mesquita, A. F.; Baldaia, L.; Flix, J. M. (2006). Te
rra, Universo de Vida Biologia 12 ano. Porto: Porto Editora. Matias, O.; Martins,
P. (2005). Biologia 12 Ano. Porto: Areal Editores.
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