16.

REGULACION DE LA EXPRESION
GENICA EN EUCARIONTES (IV)

Vernica Gonzlez Nez

Universidad de Salamanca

ESQUEMA. Regulacin de la expresion gnica en eucariontes (IV)

Otros Mecanismos de Control de la Transcripcin
1. Amplificacin gnica
2. miRNAs como reguladores de la expresin gnica
3. Sitios alternativos del inicio de la transcripcin de un gen
4. Otros mecanismos de regulacin no transcripcional
- Splicing alternativo
- Control del transporte del mRNA
- Control de la traduccin del mRNA
- Control de la degradacin del mRNA
- Control de la velocidad del inicio de la traduccin
- Procesamientos postraduccionales alternativos
- Control de la degradacin de la protena
5. Represin gnica

AMPLIFICACION GENICA
Aparicin de copias mltiples de un gen con alta actividad transcripcional
Ejemplo
Gen de la DHFR (DHF reductasa) duplicacin espontnea cuando las clulas
estn sometidas a la inhibicin por metotrexato (mecanismo de resistencia)

La amplificacin gnica produce un aumento en el nmero de copias

de la protena codificada por dicho gen

miRNAs COMO REGULADORES DE LA EXPRESIN GNICA (I)

microRNAs
- pequeas molculas de ssRNA de 22 bp
- total o parcialmente complementarios a su secuencia diana
- forman un dsRNA con su diana
Regulacion postranscripcional
1. El dsRNA impide la funcionalidad de la diana
= Secuestro de un sitio especfico: el ribosoma no se puede unir al mRNA
(e.g. miRNA complementario a la secuencia de Shine-Dalgarno)
miRNA
Ribosoma

mRNA
Launin demiRNA impide elensamblaje
delribosoma sobre elmRNA

miRNAs como reguladores de la expresin gnica (II)

2. Control de la estabilidad del mRNA
El dsRNA es reconocido como forneo por las endonucleasas y es degradado
Importancia de la region 3-UTR del mRNA
miRNA
EldsRNA es degradado
Ladiana nosetraduce
mRNA

3. Bloqueo del splicing y/o del transporte del mRNA al citosol

Proceso especifico de eucariontes

miRNAs como reguladores de la expresin gnica (III)

4. Alteracin de la conformacin de la molcula diana
Control de la terminacin de la transcripcin, ya que el dsRNA mimetiza la
estructura del terminador
Transcripcin deunmRNA

RNApolimerasa

mRNA

Launin deunmiRNA provoca la

terminacin delatranscripcin

miRNA

miRNAs como reguladores de la expresin gnica (IV)

5. Control pretranscripcional
Papel en la remodelacin de la cromatina: el complejo miRNA # RISC
migra al ncleo y se une a su secuencia DNA diana, recluta el complejo
remodelador de cromatina
los miRNAS pueden activar o reprimir la expresin gnica
estimulando la metilacin / desmetilacin de histonas y/o del DNA

miRNAs como reguladores de la expresin gnica (V)

PremiRNA
Infeccin vrica

RNAi

miRNA

Silenciamiento gnico
Degradacin delmRNA
Inhibicin delatraduccin

miRNAs y control de la expresin gnica (VI)

Los miRNAs no tienen propiedades alostricas, ya que no

pueden responder a otros pequeos agentes

2 puntos de control en la accin de los miRNAs

Control transcripcional
Activando o reprimiendo la expresin del gen que codifica el
precursor del miRNA
Inactivacin del miRNA o del dsRNA degradacin por RNAsas

Generacin de miRNAs (I)

1.Transcripcin delgenparaunmiRNA porlaRNApolimerasa II
ElprimiRNA presentaunaestructurasecundariacondsRNA (hairpins)
2.Procesamiento delprimiRNA porelMicroprocessor complex Drosha (Rnasa III)
yPasha FormacindelpremiRNA de70nt
3.Transporte alcitosol porlaexportina5
4. premiRNA (osiRNA)esreconocidoporDICER =ribonucleasa queactacomo
dmero
EldsRNA esprocesadoamiRNA (dsRNA de2025nt),conextremos3 cohesivos
5.ElmiRNA seuneaRISC =RNAInduced Silencing Complex,queseactivaal
desenrollareldsRNA congastodeATP
RISCempleaalmiRNA ( siRNA),yassRNA,parareconoceraunmRNA diana

Generacin de miRNAs (II)

1.Transcripcin delgenparaunmiRNA
yformacindeunprimiRNA
2.Procesamiento delprimiRNA porDrosha
yPasha.FormacindelpremiRNA (70nt)
3.Transporte alcitosol porlaexportina5

4. Procesamiento delpremiRNA por

DICER yformacindeunmiRNA maduro

5.UnindelmiRNA aRISC

Imagen modificada a partir de:

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Resumen: control de la expresin genica por miRNAs y RNAi

Control de la expresin gnica cuando un miRNA se une a RISC
1. Degradacin del mRNA
2. Inhibicin de la traduccin
3. Remodelacin de la cromatina
El complejo miRNA # RISC migra al ncleo, se une a su secuencia DNA
diana, recluta el complejo remodelador de cromatina
metilacin / desmetilacin de histonas y/o DNA
acetilacin / desacetilacin de histonas
Aplicacin de los RNAs antisentido para la generacin del knock-downs
(e.g. C. elegans, ZF etc)
Generacin de genes de miRNAs bajo el control de promotores inducibles

OTROS PUNTOS DE CONTROL NO TRANSCRIPCIONAL

Distintos al control transcripcional

1. Sitios alternativos del inicio de la transcripcin

2. Empleo de promotores alternativos (distinta regulacin)
3.Control del procesamiento de los mRNAs
4. Control del transporte y de la localizacin de los mRNAs
5. Control de la degradacin del mRNA
6. Control de la traduccin del mRNA

SITIOS ALTERNATIVOS DEL INICIO DE LA TRANSCRIPCIN

Generalmente se encuentran en distintos exones, y tambin se
suele producir un splicing alternativo del mRNA
Efectos: diferentes velocidades de iniciacin de la transcripcin
regulacin diferente
Sitio 1

Sitio 2

Producto 1=mRNA
Producto 2=mRNA

Protena

SPLICING ALTERNATIVO (I)

A partir de un mismo gen se producen diferentes protenas con funcionalidad
diferente.Ejemplo:gendelacalcitonina
procesamientoeneltiroides pptidocalcitonina
procesamientoenelhipotlamo pptidoCGRP(pptidorelacionadoconelgen
delacalcitonina)
PremRNA
5CAP

Ex1

Ex2

Splicing eneltiroides

Ex3

Ex4

Ex5

Ex6

Splicingenelhipotlamo

mRNAmaduro
Ex1 Ex2 Ex3 Ex4

calcitonina

coladepoliA

mRNAmaduro
Ex1 Ex2 Ex3 Ex5 Ex6

CGRP

Splicing alternativo (II)

AntgenoTdelSV40
Elantgenolargoyelcortoprovienendeunmismogen:estasdosprotenaspresentan
elmismoextremoNterminal,perodistintoextremoCterminal
(apareceuncambioenlapautadelectura=frameshift yuncodon deSTOPprematuro)
tropomiosina
Presentan comunesatodaslasvariantesyotrosespecficosdetejido
Ig yreceptoresdemembrana
ASF1=Alternative Splicing Factor1
Factorescelularesqueregulanlaseleccindelsitiodesplicing
FenmenodeedicindelmRNA
Duranteelsplicing
Especficodetejido
Ejemplo.Apolipoprotena B

CONTROL DEL TRANSPORTE DEL mRNA

Punto clave de control
Aproximadamente el 5% de los mRNAs sintetizados se traslocan desde el
ncleo al citoplasma
El transporte del mRNA es un punto clave de control
Se ha comprobado que las protenas asociadas con el mRNA en el ncleo
son distintas de las que se asocian con el mRNA en el citoplasma
Intercambio del mRNA entre riboprotenas del ncleo y del citoplasma
cuando ste se trasloca a travs de los complejos de poro nuclear

CONTROL DE LA TRADUCCION DEL mRNA

LosmRNAs sepuedenacumularysutraduccinsloseactivaantedeterminadasseales
Generalmente,losmRNAs almacenadospresentancolasdepoliAcortas
Laactivacindelatraduccintienelugarporlapoliadenilacin citoslica deestos
mRNAs
EstosprocesosestnreguladosporlasprotenasqueseasocianconlosmRNAs
LasprotenasenmascaranlosmRNAs eimpidensutraduccin

Ejemplos
DepsitosdemRNAs maternosenlosovocitos,queestnenmascaradosporprotenas
fosforiladas
Traslafertilizacin,seproduceladesfosforilacin dedichasprotenas,seseparande
losmRNAS ystossetraducen
Embrion deDrosophila: losmRNAs maternosestndepositadosen
localizacionesmuyconcretas,ydeterminanlaorganizacingeneraldelembrin

CONTROL DE LA DEGRADACION DEL mRNA

Existen mRNAs de vida muy corta (30 min) y de vida muy larga (h das)
Un mismo mRNA puede presentar degradacin diferencial en respuesta
a cambios, por ejemplo a hormonas (estrgenos y vitelogenina)

Papel de la cola de poli-A

La presencia de la cola de poli-A y de las protenas que se asocian con ella
(PBP = Poly-A Binding Protein) ralentiza la degradacin del mRNA

Poli-adenilacin alternativa
Adicin de la cola de poli-A en sitios alternativos
- una secuencia 3-UTR distinta puede alterar la interaccin del mRNA con
miRNAs
- 3-UTR rica en AU: disminuye la vida media de un mRNA

CONTROL DE LA VELOCIDAD DEL INICIO DE LA TRADUCCION

Control de la sntesis de globina por

el grupo hemo
 hemo  sntesis de globina

HCR = Heme-Controlled Represor

Mecanismo presente en reticulocitos

Ausenciadelgrupohemo

ActivacindeHCR

FosforilacindeeIF2

eIF2PsecuestraeIF2B

- en ausencia del grupo hemo, se activa

HCR, que fosforila eIF2
- eIF2-P secuestra eIF2B, bloqueando la
regeneracin de eIF2yGTP
Bloqueo de la traduccin

Sebloquealaregeneracin
deeIF2yGTP

Bloqueodelatraduccin

Regulacin de la traduccin por el interferon (I)

dsRNA: induce la sntesis del interferon

Los interferones estimulan

La sntesis de dsRNA-activated Inhibitor kinase
- fosforila eIF-2a ( HCR) Bloqueo de la traduccin
La (2,5)-oligo adenilato sintetasa
- sintetiza el oligonucletido pppA(2p5A)n (n = 110)
pppA(2p5A)n activa la RNasa L
Degradacin de los mRNAs
Consecuencia de la accin del interferon: inhibicin de la sntesis proteica

Regulacion de la traduccion por el interferon (II)

dsRNA

 IFN

IFN#IFNR

Induccin dela(2,5)
oligoadenilato sintasa

pppA(2p5A)n

 dsRNAactivated Inhibitor kinase

FosforilacindeeIF2a

Activacindelaribonucleasa L

DegradacindelosmRNA

Inhibicindelasntesisproteica

PROCESAMIENTOS POSTRADUCCIONALES ALTERNATIVOS (I)

Procesamiento postraduccional
Estudiado anteriormente en la parte de modificaciones postraduccionales
de las protenas
Importancia
Una misma protena puede sufrir distintos procesamientos
postraduccionales, de manera que se obtienen productos con
funcionalidad diferente
En el caso de muchos precursores de neuropptidos y neurohormonas,
stos son procesados por diferentes proteasas en funcin del tipo celular,
obtenindose diferentes productos finales (= pptidos)

PROCESAMIENTOS POSTRADUCCIONALES ALTERNATIVOS

Ejemplo: POMCseprocesademaneradiferencialendistintostejidos,dandolugara
diversospptidos confuncionalidaddistintaentres

PS

3 -MSH

-MSH CLIP

-MSH

-END

LPH

1 -MSH
ACTH

LPH

Adenohipfisis

Lbulo medio delahipfisis

Ncleo arcuato

ACTH(139)
LPH

ACTH(113)
MSH
endorfina (127)

endorfina (131)

CONTROL DE LA DEGRADACION DE LA PROTEINA

Visto anteriormente en la parte de procesamiento postraduccional

Los aminocidos N-terminales determinan la unin de ubiquitina

estabilizadores (vida media > 20h)

Met, Gly, Ala, Ser, Thr, Val
desestabilizadores (vida media < 20h)
Ile, Gln, Tyr, Glu, Pro, Leu, Phe, Asp, Lys, Arg

REPRESION GENICA
Enhancer
Protena de
unionalenhancer
TFIID

Esquema dela
activacin gnica

RNApol II
TATA Iniciador
Promotor

Sitio deunin
derepresores

Represor

Esquema dela
represin gnica
TFIID

RNApol II
TATA Iniciador
Promotor

Mecanismos de represin gnica (I)

Diversos mecanismos de represin
1. El represor impide la unin de TF activadores al DNA
Ejemplo. Antgeno T unido al promotor del SV40
Inhibe su propia transcripcin

Activador

Represor

DNA

Mecanismos de represin gnica (II)

2. Unin de TF represores
Inhibicin de la transcripcin de un gen
Ejemplo. la globina fetal est reprimida en adultos por la unin de NF-E,
que impide la interaccin de CP1 # CAAT
Ejemplo. Protena Gal80p en Saccharomyces
Represor

TATA Iniciador
Promotor

Mecanismos de represin gnica (III)

3. Formacin de heterodmeros activador # represor
El monmero represor secuestra a otro TF, impidiendo su interaccin
con otro TF distinto y la formacin de un heterodmero activador

Ejemplos
c-jun # b-jun, que impide la formacin de c-fos # c-jun
c-fos # c-jun Activacin gnica
c-jun # b-jun No hay activacin gnica
NF- # I-
NF- # I- No hay activacin gnica
Fosforilacin de I- Separacin de NF-
NF- se trasloca al ncleo y produce la activacin gnica

Mecanismos de represin gnica (IV)

4. Unin de TF a silenciadores
Los silenciadores trabajan de forma opuesta a los enhancers,
inhibiendo la transcripcin gnica

Enhancer

Silencer

5. Genes polycomb
Silenciamiento de genes que ya estn inactivados
Importancia durante el desarrollo

Mecanismos de represin gnica (V)

6. Los represores contrarrestan la accin de los activadores
Presentan un dominio de unin al DNA y un dominio represor
Se unen cerca del enhancer, interaccionando con el activador y bloqueando
su accin
El represor recluta a una HDAC, provocando la condensacin de la cromatina
(proceso de remodelacin de la cromatina)
HDAC

HAT
DNA
Enhancer

Silencer

El silenciador se solapa con el enhancer competicin por la unin

Silencer

Enhancer

DNA