ANTIBIOGRAMA

Exame diagnostica que consegue identificar qual a bactria que est causando a infeco no ser, e
identifica qual o antibitico mais indicar para banir a bactria para assim tratar com o antibitico
capaz de eliminar essas bactrias, algumas infeces nem sempre causam o adoecimento.
TSA o teste de sensibilidade com antibitico, MIC a concentrao inibitria mnima Poe teste
Eteste quantitativo em fita com antibiticos de doses diferentes.
O PROCEDIMENTO DO ANTIBIOGRAMA?
Consiste em coletar amostras, ter o incuo, obter cultura, repicar, obter cultura pura, material
biolgico coletado do nosso corpo. Encaminha amostras para o laboratrio de micro para analisas o
material, por meio de laminas via microscopia, cultivos de bactrias com o fim de buscar
diagnsticas, o meio para esse exame tem liquido e slido este usa gar para ficar slido, meios de
cultura solido com a infuso do disco impregnado de antibitico.
FORMAS DE FAZER O ANTIBIOGRAMA?
DIFUSO EM GAR Coloca-se pequenos discos de papel filtro com diferentes antibiticos
conhecidos suas concentraes, em placa a cultura j pura, horas depois obs. se teve crescimento
bacteriano em volta do disco, na ausncia de crescimento no ter halo de crescimento.
BASEADO EM DILUIO
O recipientes, vrios tubos, em todas as doses diferentes de antibitico diludos, coloca a bactria
nesse meio e analisa se ir turvar, deve ter um tubo teste som bactria, um deles combate a bactria.
O QUE ANTIBIOGRAMA?
o teste para descobrir a sensibilidade das bactrias frente aos antibiticos.
Toda final de uma cultura se encerra com o antibiograma, diagnstico microbiolgico est incluso, a
no ser que seja uma bactria de sensibilidades conhecida. O Streptococcus pyogenes a penicilina
til. Este serve para avaliar a interao da droga e a bactria, descobrindo seu MIC. Fao o
MPI para saber qual a dose ideal para no usar irracional o antibitico, a dose certa, evitando a
resistncia da bactria frente ao antibitico.
INFORMATIZAR PADRONIZAR.
Pois cada observador pode achar diagnstico diferente, no olho nada se ver, tem padres que se
segue, por isso o mtodo infelizmente quantitativo menos usado o Eteste, usa mais o qualitativo
com disco impregnado.
EM QUE CONSISTE A TCNICA QUALITATIVA?
Tcnica difuso em disco e gar, meio slido como o Miller Hinton, requer um excelente meio de
cultura, (ao fazer o semeio, incuba por 18 a 24 hrs, na estufa em tem de 35 a 36) impregna o disco
no antibitico, este pode ser bactericida ou bacteriosttico, inibindo ou no a bactria.
TCNICA QUANTITATIVA.
Posso fazer em caldo ou em gar slido, caldo difuso em macrodiluico e microdiluio que so
plaquetinhas parecido o de Elisa, A CNICA CONSISTE EM diluir o caldo nutritivo, incuo da
bactria pura e o antibitico diludo sucessivamente cada dose padronizada em todas as
quantidades para casa local, padronizado. Diluo o antibitico no caldo, pe a bactria nas
quantidades iguais em todos os furos, se turvar em alguns so eles que tm bactria e o antibitico
no o combateu. E alguns no cresceram como no furo com 250 mg de azitromicina, mas talvez o
MIC seria um pouco menos ou mais que isso, ento pode ser um antes deste, ou um depois, pois
posso achar no estar turvo e me enganar, ento devo fazer um gram do antes, do que achei, e do
aps, essa uma prova para certificar, e para o gram devo ter um cultura no mesmo. Tudo isso
padronizado as quantidades de tudo nesse teste (antibitico, caldo, quantidade de bactrias). Se
forem 10 tubos tudo igual p tds. Estou a procura do CIM.
COMO FAZER O ETEK.

Pego uma placa pela tcnica de esgotamento espalho a bactria, pego uma fita vendida no comercio,
essa tem vrios antibiticos em doses diferentes, ela pode ou no crescer, se eu achar que o MIC
250 mg eu fao um caldo com essa dose, se turvar no era essa dose, ,e ao achar que a dose que
no turve, eu fao um gram.
MICRODILUIAO DO ANTIBIOGRAMA?
A microdiluio em caldo corresponde miniatura da tcnica de diluio. Ao contrrio da anterior,
a microdiluio em caldo utiliza placas de Elisa estreis, com 96 poos, com o fundo em formato de
U, para permitir a melhor visualizao do crescimento bacteriano.
A vantagem deste mtodo, em relao ao da diluio em tubo, que em uma placa podemos testar
uma bactria utilizando um nmero varivel de antimicrobianos, em torno de 12 drogas, com
distintas concentraes (4 a 8 diluies logartmicas).
As placas de microdiluio podem conter o antimicrobiano liofilizado ou congelado e so
inoculadas com o auxlio de um dispositivo plstico, para obter uma concentrao bacteriana final
de aproximadamente 5 x 104 a 105 UFC/mL em cada poo da placa de microdiluio.
Nome do exame: ANTIBIOGRAMA QUANTITATIVO (MIC)
Sinonmia: Concentrao inibitria mnima. MIC, concentrao bactericida mnima (MBC).
Material: Cultura positiva ou germe isolado. Especificar a(s) droga(s) a ser (em) testada(s).
Colheita, conservao:
Preparo do paciente:
Mtodo: Diluio do antibitico em meio lquido ou em placa (meio slido).
Interferentes:
Interpretao: O teste til no acompanhamento da teraputica de infeces bacterianas, como nas
endocardites, septicemias, meningites, osteomielite e outras infeces, pois fornece a menor
concentrao de antibitico que inibe (MIC) ou mata (MBC) o microrganismo (99,9% do inoculo).
Exames relacionados: Poder bactericida do soro.
DEFINIO - Antibiogramas so provas in vitro para a determinao da sensibilidade dos agentes
microbianos aos antibiticos, ou seja, a medida da concentrao (ou mdia de concentrao) que
capaz de provocar alguma inibio no crescimento do microrganismo em prova.
MTODOS - Os mtodos mais utilizados podem-se esquematizar:
Mtodos de diluio

Lquido
Slido

Mtodos de difuso em Agar

Mtodo da placa escavada em goteira

Mtodo dos cilindros
Mtodo dos discos

Mtodo das ranhuras radiadas

Mtodos de diluio - Baseiam-se na obteno de solues cada vez mais concentradas de
antibitico, onde se lana um determinado nmero de bactrias da estirpe em estudo.

A concentrao do antibitico feita em progresso geomtrica crescente de razo 2.

Em diferentes tubos de ensaio (p.ex. 8) lana-se a mesma quantidade de caldo nutritivo j sujeito a
incubao (portanto iguais nmeros de bactrias) e quantidades crescentes de antibitico, excepto
no primeiro - TUBO TESTEMUNHA.
Aps 24 horas de incubao a 37C observa-se.
- Nota-se que a cultura se desenvolveu no tubo testemunha, e em tubos sucessivos, at que num
deles j no se observa desenvolvimento cultural. A concentrao desse tubo ser a
CONCENTRAO MNIMA INIBIDORA [C.M.I.] (tambm conhecida como taxa inibidora ou
taxa de sensibilidade a espcie estudada).
Se as solues de antibitico se juntar Agar, obtm-se o mtodo de diluio slido.
Estes mtodos no so prticos em clnica, pois, para um determinado agente isolado, e necessrio
fazerem-se tantos ensaios quantos os antibiticos a utilizar, o que resulta moroso e onoroso.
Mtodos de difuso em Agar - Estes mtodos consistem em dispor, superfcie de gelose contida
numa caixa de Petri, diferentes tipos de antibiticos, que se vo difundindo, determinando
concentraes inversamente proporcionais distncia.
A deposio dos antibiticos pode ser feita segundo diferentes tcnicas:
a) Mtodo da placa escavada - so feitas pequenas escavaes na placa contendo o meio, onde se
colocam as agentes antimicrobianas.

b) Mtodo dos cilindros - as solues de antibiticos so colocadas em pequenos cilindros que se

depositam superfcie do Agar semeado.

c) Mtodo das ranhuras radiadas - praticam-se ranhuras a partir do centro da placa, onde se
depositam os antibiticos.

d) Mtodo dos discos - este mtodo, hoje em dia o mais utilizado, e baseia-se no depsito de
discos de papel de filtro impregnados de antibitico que se depositam superfcie das placas de
Petri.

Em qualquer destes mtodos, as placas de Petri so levadas a incubar 24 horas a 37 C.

Dois fenmenos se podem observar:
- Se as bactrias so sensveis aos antibiticos, forma-se um halo volta do local onde depositado o
antibitico. O ponto a partir do qual no houve crescimento o local onde C.M.I. Existe.
- Se as bactrias so resistentes, crescem mesmo no local de deposio do antibitico.

A distncia do centro do halo at a periferia inversamente proporcional concentrao de

antibitico. Quanto maior for essa distncia menor a C.M.I.

Crticas aos Antibiogramas Estas provas so muito relativas, pois esto dependentes de muitos
fatores:
a) O fato de determinada estripe ser sensvel a um antibitico "in vitro", no significa que "in vivo"
o mesmo se passe;
b) A concentrao de antibitico no sangue pode no atingir a C.M.I.
c) O germe isolado pode no ser o responsvel pela infeco;
d) Na observao "in vitro", o PH; a qualidade do papel; a quantidade de antibitico realmente
difundido, a espessura da camada de Agar, o meio de cultura, a concentrao da sementeira, a
rapidez do desenvolvimento, a velocidade de difuso, a estabilidade do antibitico, a durao da
incubao, etc, so fatores que influem nas observaes;
e) "in vitro", a resposta imunolgica do hospedeiro, a natureza e localizao da leso, a extenso e
grau da reao inflamatria, o nmero de micro-organismos na leso, a quantidade de tecido fibroso
e de granulao existentes; a capacidade do antibitico de penetrar e de se difundir no foco
infeccioso, so fatores capazes de alterar a capacidade bactericida (ou bacteriosttica) do
antibitico.
1 - ANTIBITICOS DE BOA DIFUSO PULMONAR

2 - ANTIBITICOS DE BOA DIFUSO SSEA

3

ANTIBITICOS

DE

BOA PENETRAO

INTRACELULAR
4 - ANTIBITICOS NO ABSORVIDOS PELA
MUCOSA INTESTINAL NEM DESTRUIDOS PELOS
SUCOS GSTRICOS
5 - ANTIBITICOS ELIMINADOS SOB FORMA
ACTIVA NAS URINAS

Penicilina G. Ampilicina; Tetraciclinas; Eritromicina Espiramicina.

Oxacilina

Ampicilina;

Eritromicina;

Pristinamicina;

Rifamicina, Lincomicina - Clidermicina.

Tetraciclinas, Cloranfenicol, Rifamicina.
Aminosidos (Ramamicina, Neomicina, Pararomomicina),
Celestina, Polimixina B.
Ampicilina; Cefalosporina, Aminosidos, Polimixina B,
Tetraciclinas (excepto a Clortetraciclina e a Doxociclina),
Sulfamidas de eliminao rpida, cido nalidixico.

IDENTIFICAO DO AGENTE
a) Por ISOLAMENTO
b) Por deduo
ESCOLHA DO AGENTE ANTI-MICROBIANO
a) Por Antibiograma
b) Por tabelas de sensibilidade
PARA
DETERMINAO
DE
CIM
DE
ANTIBITICOS
SEU
USO
Etest uma tcnica quantitativa para determinao de sensibilidade antimicrobiana tanto de
bactrias no exigentes Gram negativas e Gram positivas aerbias (como Enterobacteriaceae,
Pseudomonas, Staphylococcus e Enterococcus) como bactrias exigentes (Pneumococos e

Haemophilus spp) e anaerbias. O sistema compreende um gradiente de antibitico pr-definido

que usado para determinar a concentrao inibitria mnima (CIM) em mcg/ml de antibiticos
contra bactrias.
SUMRIO E EXPLICAES
Mtodos habituais de Testes de Sensibilidade Antimicrobiana (TSA) so baseados tanto em tcnicas
de diluio como difuso. Testes de diluio baseados em diluies seriadas de antibiticos em
caldo ou Agar fornecem uma estimativa de CIM. O valor da CIM a concentrao mnima
inibitria de um dado antimicrobiano que, sob condies experimentais definidas, inibe o
crescimento de uma bactria. O valor da CIM o critrio de referncia para definir a sensibilidade
de determinado microrganismo.
Princpios
Etest baseado numa combinao dos conceitos de testes de diluio e difuso. Como os mtodos
de CIM, o Etest quantifica diretamente a sensibilidade antimicrobiana. Mesmo sendo processado
como teste de difuso em disco, o Etest difere do mtodo disco convencional pelo uso de uma
gradiente pr-formado e estvel de antimicrobiano.
O Etest consiste numa fita plstica fina, inerte e no porosa de 5 mm largura e 50mm de
comprimento. Um lado da fita marcado com uma escala de leitura de CIM em mcg/ml. Um
cdigo de 2 letras designa a identidade do antibitico. Um gradiente exponencial pr-definido do
antibitico seco e estabilizado mobilizado no outro lado da fita, com uma concentrao mxima e
mnima.
A gradiente reflete uma faixa contnua de concentrao, que varia de 0.016 a 256 mcg/ml ou 0.002 a
32 mcg/ml, dependendo do antibitico. Esta faixa corresponde a 15 diluies num mtodo
convencional de CIM. Quando uma fita de Etest aplicada numa placa de Agar inoculado, h uma
liberao imediata do antibitico da fita para o Agar. Aps incubao, quando o crescimento
bacteriano se torna visvel, uma elipse de inibio simtrica ao redor da fita visualizada.
REAGENTES
As fitas de Etest vem em embalagens com 10 compartimentos selados individualmente, contendo
10 unidades em cada um; cada conjunto contm 100 fitas de um antibitico. A embalagem externa
mede 140x90x7 cm e o peso total de 35 gramas.
CONSERVAO
Todas as fitas Etest devem ser conservadas em freezer a -20C.
A validade de todos os antibiticos de 2 a 5 anos da data de fabricao. A data de expirao e as
recomendaes de estocagem so fornecidos em cada embalagem. Todas as embalagens fechadas,
incluindo os compartimentos individualmente selados (blister), devem ser mantidos a -20 C at a
data de expirao.
As fitas de um blister aberto devem ser estocadas a -20C em tubos selados contendo slica gel. A
slica gel dever estar sempre azul durante a estocagem e antes do uso. O nmero do lote e a data de
validade devem ser marcados no tubo de estocagem. Estocar somente um antibitico por tubo.
PRECAUES
Etest deve ser utilizado s para diagnstico "in vitro".
Embora o procedimento do Etest seja simples de realizar, a interpretao do teste deve ser
supervisionada por pessoal treinado.
Tcnicas asspticas devem ser observadas sempre que se manipularem espcimes, alm de
esterilizar
placas
aps
o
uso,
antes
de
descartar.
Quando no estiverem sendo utilizadas, as fitas devem ser protegidas da umidade e luz forte.
No tocar ou raspar a superfcie da fita que contm a gradiente do antibitico.
Observar que as fitas devem ter a sua gradiente colocada em contato com o Agar.
As fitas so extremamente finas e leves. Observar que estejam separadas quando usar.
Devido liberao imediata do antibitico em contato com o Agar, a fita no deve ser movida aps
a aplicao.
As placas utilizadas devem ter uma espessura de 4.0 0.5 mm e a superfcie completamente seca
antes da colocao da fita.

No colocar muitas fitas em cada placa; no mximo 4-5 fitas / placa de 150 mm, e 1-2 fitas/ placa
de 90 mm.
Utilizar meio padronizado e tcnicas adequadas para preparo do incuo.
Ler as referncias de Etest antes de utiliz-lo pela primeira vez.
PROCEDIMENTO
MEIO
Deve ser utilizada placa com Agar de 4.0 0.5mm de profundidade. O meio e os suplementos
dependem da espcie bacteriana a ser testada. O meio mais utilizado o meio de Mueller-Hinton
para as bactrias de crescimento rpido. O mesmo meio suplementado com sangue utilizado para
bactrias exigentes como estreptococos.
Como em todos os testes de sensibilidade, a escolha do meio pode afetar as CIMs. Os meios
recomendados pelo NCCLS permitem um bom crescimento bacteriano e geralmente um ponto de
interseco distinto. Meios com alto nvel de substncias antagonistas como timidina e timina
afetam resultados com sulfonamidas e trimetoprim. Variaes significativas na osmolaridade e no
nvel de ction influenciam valores de CIM de beta-lactmicos, aminoglicosdeos e tetraciclinas,
enquanto mudanas de PH podem afetar a atividade de lincosamidas, streptograminas, macrolideos,
aminoglicosdeos e quinolonas. Alteraes de PH podem ocorrer como resultado de:
.Variao da capacidade tampo de diferentes marcas e lotes de Agar.
.Incubao em CO2 diminui o PH do meio. Para drogas sensveis ao PH, os valores de CIM sob
incubao
em
CO2
pode
diferir
daqueles
em
condies
normais.
Use sempre um meio bem definido e padronizado para o teste de sensibilidade para obter valores de
CIMs precisos e reprodutveis.