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Gnero Clostridium spp

FAVET-UFRGS
Prof. Marcos JP Gomes
2013

Gnero Clostridium spp


Prof. Marcos JP Gomes
Clostridioses.
Carbnculo.
Gangrena.

Hepatite necrtica.
Hemoglobinria Bacilar
ATUALIDADE
Atualmente (2013), na List of Prokaryotic names with Standing in Nomenclature
do pesquisador J.P. Euzby h citao de 203 espcies e 5 subespcies no gnero
Clostridium spp, conforme o site www.bacterio.cict.fr/c/clostridium.html

INTRODUO
So bastonetes; medem 0,3-2,0 m de dimetro e 1,5-20 m de comprimento;
arranjos aos pares ou em cadeias curtas com as extremidades arredondadas ou pontiagudas;
pleomrficos; geralmente Gram positivos no cultivo jovem; geralmente mveis por flagelos
peritrquios; formam esporos ovais ou esfricos que deformam a parede celular. A maioria
das espcies quimiorganotrfica; alguns so quimioautotrficos e quimiolitotrfico.
Podem ser sacarolticos, proteolticos, nenhum ou ambos. Geralmente produzem uma
mistura de cidos orgnicos e lcoois de carboidratos e peptonas. No realizam uma
reduo dos sulfatos. Geralmente catalase negativos e anaerbios obrigatrios; se houver
crescimento em ar, ele pequeno e a esporulao inibida. Metabolicamente so muito
diversos com temperatura tima entre 10 C e 65 C. Esto distribudos no ambiente.
Muitas espcies produzem potentes exotoxinas, sendo que algumas espcies so
patognicas para os animais, tanto pela infeco de ferimentos quanto pela absoro de
toxinas.
Espcie Tipo: Clostridium butyricum
A diferenciao deve ser realizada em laboratrios especializados, pois as
necessidades de crescimento e os testes a serem aplicados so diversos. Recentemente,
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novas espcies tm sido descritas. Microrganismos deste gnero so bastonetes Gram +,
anaerbios, esporulados que foram agrupados no gnero Clostridium por suas semelhanas
morfolgicas e tintoriais. So mveis, exceto do C. perfringens. So fermentadores e
catalase negativos. So bastonetes retos com exceo do C. spiroforme. Esto distribudos
no solo e trato gastrintestinal dos animais e do homem, onde podem sobreviver e
multiplicar-se. Podem formar esporos que asseguram sua sobrevivncia em condies
adversas, durante longos perodos de tempo. Podem tornar-se contaminantes de amostras
clnicas por ter capacidade de esporular.

PATOGENICIDADE:
As principais doenas causadas pelos clostrdios nos animais so:
1-Clostridium perfringens (C. welchii) tipo A - Infeces de ferimentos, mastite gangrenosa,
enterotoxemia do cordeiro e suno, yellow lamb. Seu papel em outras enterotoxemias
controverso e seu isolamento no prova de doena.
2-Clostridium perfringens (C. welchii) tipo B - Disenteria dos cordeiros, enterotoxemia dos
bezerros, ovinos, caprinos e potros.
3-Clostridium perfringens (C. welchii) tipo C - Enterotoxemia dos ovinos, bezerros, cordeiros e
leites.
4-Clostridium perfringens (C. welchii) tipo D - Enterotoxemia em ovinos, cordeiros e caprinos.
5-Clostridium novyi (C. oedematiens) tipo A - Gangrena gasosa dos bovinos, ovinos, Big head
dos carneiros e do Homem.
6-Clostridium novyi (C. oedematiens, C. gigas) tipo B Black disease (hepatite necrtica
infecciosa dos ovinos e bovinos) e morte sbita em bovinos e sunos.
7-Clostridium novyi (C. oedematiens/C. bubulorum) tipo C - Osteomielite em bfalos (Indonsia).
8-Clostridium novyi (C. oedematiens/C. haemolyticum) tipo D - Hemoglobinria bacilar dos
bovinos e doena do fgado necrtico dos ovinos.
9-Clostridium septicum - Edema maligno nos eqinos, bovinos, ovinos e sunos. Gangrena gasosa,
braxy nos ovinos, navel-ill dos cordeiros, carbnculo sintomtico nos sunos e dermatite
gangrenosa nas aves.

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10-Clostridium chauvoei (C. feseri) - Carbnculo sintomtico dos ovinos, bovinos e,
ocasionalmente nos sunos.
11-Clostridium tetani - Ttano em todas as espcies animais.
12-Clostridium botulinum tipo C e D - Botulismo em ovinos, bovinos, martas, ces, macacos,
fures e diversas espcies de aves tais como ave domstica e patos.
13-Clostridium colinum - Enterite ulcerativa Quail disease em codornas, perus e galinhas.
14-Clostridium spiroforme - Enterotoxemia espontnea ou induzida por antimicrobianos em
coelhos.
15-Clostridium villosum - Abscessos espontneos em gatos.
16-Clostridium difficile - Enterocolite induzida por antimicrobianos no hamster, coelhos e cobaias.
Causa tambm enterocolite natural em sunos, potros e, no homem.

CLASSIFICAO
O gnero Clostridium spp pode ser didaticamente classificado em dois grupos, tendo
como base, o mecanismo produtor de doena.
O primeiro grupo consiste dos clostrdios que tem pouca ou nenhuma capacidade de
invadir e multiplicar-se nos tecidos. Tais organismos concentram sua patogenicidade na
produo de poderosas toxinas (neurotoxinas) longe do corpo do hospedeiro ou em reas
restritas. As leses so causadas por toxina ou toxinas. Os dois representantes deste grupo
so: Clostridium tetani e o Clostridium botulinum.
O segundo grupo numeroso, sendo representado por espcies que invadem e
multiplicam nos intestinos e tecidos do hospedeiro. Esses organismos produzem toxinas
bem menos potentes do que as do primeiro grupo. Clostrdios deste grupo elaboram toxinas
no intestino, causando doenas denominadas enterotoxemias. A toxina age na mucosa
intestinal ou em outro lugar, aps a distribuio pela corrente circulatria. Feridas e pontos
de inoculaes podem tornar-se infectado com clostrdios invasivos, produtores de
gangrena gasosa, edema e necrose.

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Quadro 1. Etiologia e Diagnstico das Principais Clostridioses Animais.
Entrada Local
Replic. Bacteriana
Ingesto/ Msculo

Sndrome
ou Doena
CS

Espcies
susceptveis
bovinos, ovinos

Etiologia
C. chauvoei

Critrio para Diagnstico


ou produo de toxina(s)
Isolamento / IF

Isol. agente feridas infectadas

caprinos
Feridas

Edema maligno

bovinos, ovinos

C. septicum

Gangrena gasosa

caprinos

C. chauvoei
C. sordellii
C. perfringens
C. novyi

Fgado

IDelg.

HB

bovinos, ovinos

C. haemolyticum

Isol. agente em leses caract. fgado

HN

ovino, bovinos

C. novyi B

Isol. agente em leses caract. fgado

EHemorrgica

ovinos, caprinos

C. perfringens

Letalidade do contedo intestinal

aguda

bovinos

tipos A,B,C

em Cd e neutralizao antissoro

Enterotoxemia

ovinos, caprinos

C. perfringens

Deteco toxinas tipo C e D

bovinos

tipo C, D

Ossos,

Botulismo

bovinos, ovinos

C. botulinum

Letalidade cont intest ruminal, soro e

Carcaas

Botulismo

caprinos, aves

tipos C, D

fgado para Cd imunizados antissoros

guas paradas e

Botulismo

Todas spp

C. tetani

Sinais clnicos da doena

Alimentos cont

Feridas

Ttano

de mamferos

Gl. Mamria Mastite gangr.

bovinos

C. perfringens

Isolamento do agente
do leite/ tecido mamrio

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Clostridium tetani
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Ttano

HISTRICO
Etimologicamente, a palavra ttano origem da palavra grega tenein que
significa esticar, distender. Em latim, o termo tetanus significa rigidez de um membro em
contrao espasmdica muscular. A descrio revela, os sinais clnicos da contrao
muscular (sobretudo no pescoo e tronco) causada pelo C. tetani, responsvel pela doena.
Hipcrates registrou um caso de ttano, cujas descries clnicas da doena eram
conhecidas. Hipcrates viveu no sculo V AC, na Grcia, e conhecia a gravidade do ttano,
descreveu-a como todo espasmo que se segue a um ferimento, mortal.
Uma pintura realizada por Sir Charles Bell, em 1809, retratou um exemplo
conhecido desses sinais.
O ttano permaneceu de difcil diagnstico por sculos, pois no era possvel
detectar a causa, encoberta em mistrio at o sculo XIX.
A etiologia da doena foi descoberta pelos italianos Antonio Carle e Giorgio
Rattone, em 1884, atravs da inoculao de pus de ferimento humano fatal (ttano) no
nervo citico de coelhos.
Em 1885, Nicolaier reproduziu e confirmou as pesquisas de Rattone e Carle,
observando a presena do bacilo na terra.
Em 1889, Kitasato Shibasaburo isolou, pela primeira vez, o C. tetani de um paciente
com ttano. Mais tarde, reproduziu a doena inoculando em animais e que a toxina poderia
ser inativada por anticorpos especficos.
Ainda em 1889, Tizzoni e Catani isolaram o C. tetani em cultivo puro. Neste
mesmo ano, houve o descobrimento da toxina tetnica por Knud Faber feito considerado
importante para o desenvolvimento do toxide.

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Em 1892, Behring e Kitasato propuseram um mtodo de imunizao eficaz com
base na toxina envelhecida. A primeira imunizao passiva do ttano ocorreu durante a
Primeira Guerra Mundial (1914-1918).
Em 1897, Edmond Nocard, mostrou que a antitoxina do ttano poderia induzir a
imunidade passiva no homem e que poderia ser utilizada na profilaxia e tratamento.
Em 1924, P. Descombey desenvolveu o toxide tetnico que foi amplamente
utilizado na preveno do ttano induzido por ferimentos durante a II Grande Guerra.
Em 1925, o mtodo de Behring e Kitasato foi aperfeioado por Ramom e
Descombey, atravs da ao do formol que pde gerar a inativao da toxina ou anatoxina.
O soro antitetnico (SAT) era produzido pela inoculao da toxina em eqinos,
obtendo da anticorpos que seriam aplicados em pacientes com ttano. Esse processo, no
entanto, causava reaes adversas contra os anticorpos dos eqinos, problema conhecido
como doena do soro. Por isso, uma pessoa s podia receber os anticorpos somente uma
vez durante a vida, pois uma segunda aplicao do soro poderia ser fatal. Com o uso do
toxide, o ttano tornou-se menos comum. A doena permanece freqente em pases
africanos. No mundo, ocorrem cerca de um milho de casos anualmente.
No Brasil e nos pases desenvolvidos, o ttano uma doena infecciosa no
contagiosa que se encontra em fase de declnio.
Em 1979, Iizuka e colaboradores apontaram, no entanto, para a diferena desse
quadro no Brasil e em outros pases tropicais, nos quais o ttano era um problema de sade
pblica com taxa mdia de mortalidade de 12 para 100 mil habitantes contra 5 para 100 mil
em pases desenvolvidos. Os indivduos com mais anticorpos circulantes so os que foram
vacinados nos primeiros anos de vida, embora com o passar dos anos, o paciente nem
sempre consiga precisar seu histrico de vacinao anterior. Assim, parece que a
imunizao nos primeiros dias de vida foi importantssima para a preveno do ttano,
desencadeando o controle da doena nos primeiros meses de vida das crianas.
Antigamente, as populaes mais afetadas pelo ttano eram as de baixa renda e o
interesse em pesquisar mtodos preventivos sobre a doena era pequeno. Pesquisas
experimentais realizadas em cobaias estudaram a infeco por ferida umbilical, conhecida
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popularmente como mal de sete dias. Os pesquisadores apontaram a imunizao ativa das
gestantes com o toxide tetnico como preveno do problema. Para os pediatras, a criana
j deveria nascer protegida contra o ttano, independente do tratamento do cordo
umbilical.

CARACTERSTICAS BACTERIOLGICAS
O C. tetani uma bactria Gram positivas (quando jovem), possuindo uma
tendncia em tornar-se Gram varivel. um bastonete reto com dimetro entre 0,3 a 0,6
m X 3 a 12 m de comprimento. mvel graas aos clios peritrquios (mas certas
linhagens so desprovidas de flagelos e, portanto imveis), esporulados, anaerbios estritos,
no reduzem o nitrato; produzem uma DNAse, liquefazem a gelatina em 2 a 7 dias;
produzem H2S; produz indol; resposta negativa para lecitinase e de lipase, no hidrolisa a
esculina nem acidifica acares.

MORFOLOGIA
Apresentam-se sozinhos, tanto nos tecidos quanto em cultivo, mas tambm em
longos filamentos. Os esporos so terminais deformando a parede celular. Os esporos so
visualizados aps 24 a 48 horas de incubao. Os esporos possuem a aparncia de baquetas,
raquete de badminton ou de tnis.

HABITAT
O C. tetani uma bactria telrica de distribuio geogrfica mundial, mas rara nas
regies nrdicas e nas grandes altitudes. O bacilo do ttano est presente no solo,
especialmente nos: solos cultivados, depsitos fluviais e mares, transportado pelos ventos,
pelas guas ou pela poeira das ruas ou das casas. A sobrevivncia do bastonete tetnico
favorecida pelo pH neutro ou levemente alcalino, uma umidade de pelo menos 15% e uma
temperatura de 20 C.

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CARACTERSTICAS CULTURAIS E BIOQUMICAS
A temperatura tima de crescimento de 37 C; crescimento moderado a
temperatura de 30 C e nula a temperatura de 25 C ou a 45 C. O cultivo inibido por 20
% de bile e por 6,5 % de sal. Este microrganismo cresce em meios comuns se as condies
de anaerobiose forem mantidas.
A colnia hemoltica e se assemelha a esfera de algodo no meio de gelatina,
produzindo um aspecto semelhante a um guarda-chuva aberto. Este clostrdio no fermenta
carboidratos, mas a adio de glicose favorece o seu crescimento.

RESISTNCIA
A esporulao determinada por numerosos fatores. Ela pequena ou nula a uma
temperatura de 41 C ou por um pH inferior a 6; ela retardada a uma temperatura de 20 ou
25 C. O esporo resiste, geralmente 10 minutos a 75-80 C. So destrudos pelo calor de
100 C por uma hora
A sobrevivncia do esporo no meio ambiente depende das condies fsicoqumicas e a ao conjunta do ar e da luz que considerada nefasta. Os esporos conservam
sua vitalidade, durante muitos anos e por 18 anos no solo, mas abrigado da luz. Os esporos
do C. tetani so resistentes para a maioria dos agentes esporocidas, desde que sejam
protegidos da luz. Algumas amostras resistem fervura por 90 minutos. Desinfeco por
alguns compostos halognicos (3% de iodo) os destri. Fenol a 5% destri os esporos em
10 a 12 horas. A adio de 0,5% de cido clordrico pode reduzir o tempo para 2 horas. A
fervura destri os esporos por 15 minutos. A autoclavao a 121 C por 20 minutos.

PATOGENICIDADE
Os esporos ou as formas vegetativas introduzidas no intestino so inofensivos. Foi
demonstrado que os esporos inoculados esto viveis, mas incapazes de germinar dentro do
tubo digestivo e a toxina administrada por via oral ou retal foi inofensiva. Esse fato explica
o porqu do ttano no ser adquirido via oral nem pelo tubo digestivo intacto. A doena
ocorre aps uma ferida contaminada por esporos do C. tetani. Nos animais, especialmente
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nos eqdeos pelos ferimentos nas extremidades, fraturas abertas, feridas umbilicais, feridas
obsttricas, reteno da placenta, feridas de castrao ou, de uma maneira geral, as feridas
cirrgicas contaminadas so a origem do ttano.

ETIOPATOGENIA
O perodo de incubao para o ttano de 1-3 semanas, mas em mdia de 10-14
dias. Raramente este perodo mais longo. Nos ovinos, o comeo dos sinais clnicos pode
ser de 3-10 dias aps a castrao ou descola. A infeco do cordo umbilical pode tornar-se
evidentes logo apos s 48 horas do nascimento. Os sinais clnicos so semelhantes entre as
diferentes espcies. Inicialmente, os animais tornam-se relutantes ao mover-se, apresentam
rigidez muscular; tremores, rigidez do pescoo e membros traseiros. Um a trs dias depois,
aparecem contraes musculares generalizadas. A cabea e pescoo ficam estendidos, a
cauda levantada, os membros assumem uma posio de cavalete e os msculos tm uma
tenso semelhante madeira.
Bater palmas, exposio luz ou mesmo o toque no animal pode causar reao com
aumento das contraes tnicas. Inicialmente, os espasmos duram segundos ou minutos,
mas depois se tornam permanentes. Os animais caem e so incapazes de levantar-se. A
alimentao tornar-se difcil, podendo haver dificuldades na mastigao, na deglutio e
salivao aumentada. Os animais desenvolvem trismo (lockjaw) com a progresso da
doena. H projeo da terceira plpebra em ces e cavalos, as narinas aumentadas e
arregalamento dos olhos. Espasmos faciais dando a expresso clssica do (risus
sardonicus) no cavalo, no co e homem. Os animais doentes transpiram e h dificuldades
com a respirao, mico e defecao. Curtos espasmos podem ser localizados em um
membro ou regio do corpo prximo ao local da leso em casos leves. A mortalidade de
at 80% dos animais no imunizados.
O ttano humano uma doena severa e sistmica, afetando os msculos, os nervos
autnomos, o sistema endcrino, o sistema cardiovascular, os pulmes, os rins e trato
gastrintestinal.
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A tetanoespasmina bloqueia a sinapse inibitria, levando a espasmos em msculos
supercontrados. As sinapses excitatrias podem ser bloqueadas mais tarde, levando a
paralisia flcida em animais sobreviventes aos efeitos agudos iniciais.
O C. tetani est presente no tubo digestivo dos animais (macacos, cavalos, vacas,
ovelhas, cabras, porcos, ces, gatos, ratos, cobaias, coelhos, aves etc.) ou no homem,
particularmente indivduos que possuem contato permanente com cavalos.
Os herbvoros e mais especificamente, o cavalo possuem um papel importante na
disseminao dos esporos. H possibilidade de disseminao, atravs de solo, da poeira ou
das fezes. O C. tetani pode contaminar os objetos inanimados (material mdico ou cirrgico
insuficientemente esterilizado) ou a pele e mucosas dos vertebrados.
A infeco dos animais e do homem pode ocorrer como resultado da contaminao
de feridas, umbigo, aplicao de ferradura, cirurgia em baias, aplicao de borracha para
castrao de ovinos, aplicao de brincos, injees infeces uterinas no ps-parto,
infeces de umbigo, brigas de animais de pequeno porte, feridas causada por armadilhas,
feridas profundas e penetrantes. Nestes locais, formam-se as condies de necrose ideais
(baixa tenso de oxignio e potencial de oxi-reduo), permitindo a multiplicao do C.
tetani e, posteriormente produo de toxinas. Aps a germinao dos esporos, o bastonete
se multiplica, produzindo uma potente neurotoxina que inibe a fuso das vesculas
sinpticas com a membrana plasmtica, fazendo a liberao de neuro mediadores no espao
intersinptico.
Os alvos da neurotoxina tetnica so os reguladores interneuronais situados na
medula espinhal e crebro, inibindo a glicina e o cido gama-amino-butrico (GABA),
resultando em hiperexcitabilidade dos neurnios motores e contraturas localizadas; depois
generalizadas, permanentes, dolorosas e paroxsticas dos msculos esquelticos.
O C. tetani produz duas exoprotenas; uma neurotoxina ou tetanoespasmina e uma
hemolisina ou tetanolisina.
A tetanoespasmina responsvel pelos sinais clnicos da doena e os anticorpos
para a toxina so protetores. A tetanoespasmina uma exotoxina, uma neurotoxina
codificada por um plasmdio. Ela age na pr-sinapse nos neurnios motores, bloqueando a
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liberao de neurotransmissores pela hidrlise de protenas docking. Ela produzida,
inicialmente, como uma cadeia de polipeptdio com peso molecular 150.000 Da. A cadeia
pesada e a cadeia leve no so txicas quando separadas. A toxina destruda pelo suco
gstrico. termostvel e, dificilmente absorvida, atravs das mucosas. Ela extremamente
potente. 1DL50 com 50% de sobreviventes para o camundongo equivale a (= 2 X 10-8 mg).
A tetanoespasmina liga-se especificamente aos gangliosdios das clulas nervosas.
Gangliosdios so mucolipdios solveis em gua e clorofrmio, contendo cido silico,
esterico, esfingosina, galactose, acetilgalactosamina e glicose. Os gangliosdios esto
ligados ao cerebrosdios insolveis em gua, no tecido nervoso. Duas molculas de
gangliosdio se ligam a uma molcula da toxina. A reao extremamente difcil de
reverter e o anticorpo neutralizante ineficaz quando a ligao j ocorreu. A toxina circula
ao longo do tronco nervoso e coluna vertebral pelo transporte axonal retrgrado, aps a
ligao ao gangliosdio. A ao especfica da tetanoespasmina evitar a liberao da
glicina, substncia necessria para inibio da cadeia nervosa da medula espinhal. Esta
cadeia impede a contrao de um msculo quando o seu oposto se contrai. A toxina causa
contnua estimulao com espasmos tetnicos de um grupo de msculos. Outros efeitos
incluem a ao paraltica nos nervos perifricos, assim como, o efeito inativante na cadeia
inibitria, do SNC. Existe tambm um efeito na sntese protica do crebro. A atividade
neuromuscular favorece a migrao da toxina a qual migra, atravs dos axnios motores e
nervos sensitivos. H um consumo preferencial da toxina via razes ventrais do SNC. A
toxina acumula-se seletivamente na regio da medula cervical, lombar e substncia cinzenta
do encfalo. O ttano se desenvolve, primeiramente nos msculos daquele membro e em
seguida, se difunde ascendentemente atingindo o membro oposto e subseqentemente, na
musculatura do tronco, quando a toxina atinge o nervo motor do membro anterior. Este fato
conhecido como ttano ascendente. A toxina pode circular no sangue e linfonodos,
produzindo ttano nos msculos da cabea e pescoo por meio dos centros nervosos
motores. Esta forma chamada de ttano descendente e observada em eqinos e no
homem. No ttano descendente, o primeiro sinal clnico o relaxamento da membrana
nictitante, trismo e ao riso sardnico.
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A hemolisina causa necrose tissular local e favorece a multiplicao do C. tetani. A
ao da toxina no espasmognica pouco definida.
Os sinais de ttano so semelhantes nos animais, sendo resultado de castraes,
descolas infeces umbilicais, ferimentos profundos e leses produzidas por pregos quando
da colocao de ferraduras. Nos ces e gatos geralmente uma complicao de ferimentos.

DIAGNSTICO
Os sinais clnicos do ttano so caractersticos que raramente so necessrios
exames laboratoriais. O microrganismo facilmente identificvel por seu esporo.
Contaminantes podem ser removidos pelo tratamento com etanol a 50%, durante 1 hora.
O reconhecimento dos sinais clnicos simples, mas os sinais cerebrais no
especficos vistos no comeo do ttano podem sugerir raiva. A tetanoespasmina no
detectada pelos testes laboratoriais quando a toxina est se movimentando em seu alvo via
neural. Em alguns casos, a tetanoespasmina pode ser detectada na circulao, mas o ttano
no uma verdadeira intoxicao (Johnson 2006). O exame post-mortem e a confirmao
laboratorial no so necessrios. Entretanto quando o diagnstico no claro, amostras
devem ser colhidas e preservadas antes do tratamento com ATMs. A tetanoespasmina pode
ser detectada, atravs do bioensaio em camundongos, com ou sem a neutralizao com
antissoro especfico. Amostras de ferimentos podem ser submetidas ao isolamento
bacteriolgico (Akbulut et al. 2005).
Sinais cerebrais ou do SNC podem ser vistas na intoxicao por estricnina,
especialmente em ces. Curso prolongado acompanhado de histrico ligado ao uso desse
veneno nas vizinhanas associado a temperatura normal ou baixa dos afetados pode indicar
o uso de estricnina.
Doena de Borna e outras encefalomielites podem confundir com ttano em
cavalos.
Encefalite espongiforme bovina (doena da vaca louca) deve ser considerada em
bovinos. Paralisia flcida pode ser vista e parecer botulismo.
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TRATAMENTO
O C. tetani sensvel s penicilinas, s tetraciclinas e ao cloranfenicol, mas
resistentes aos aminoglicosdeos. Desinfeco de feridas. Abrir o ferimento e oxigenar.

IMUNIDADE
As aves so naturalmente resistentes e no possuem anticorpos nos seus tecidos. A
antitoxina tetnica preparada com o soro de eqinos imunizados.
A antitoxina pode ser utilizada na proteo passiva de animais contra o ttano.
Geralmente, 1.500 unidades protegem um animal por duas a trs semanas.
A imunizao (toxide) contra o ttano produzida pela incubao da toxina,
altamente potente com uma soluo de formalina a 0,4% at sua toxicidade ter sido
completamente destruda. O toxide precipitado pelo sulfato de alumnio e potssio
(alum); lavado e suspenso em salina.

TSA
Os clostrdios so resistentes aos aztreonam, aos aminosdeos, trimetoprima, s
sulfonamidas, s quinolonas, colistina e fosfomicina.
So sensveis s penicilinas (menos as cepas produtoras de beta-lactamases, mas
no descritas para C. tetani), aos glicopeptdeos e ao metronidazole. A sensibilidade
clindamicina e ao cloranfenicol varivel e dependente da linhagem.
Em veterinria, as penicilinas e tetraciclinas so as mais utilizadas na profilaxia e
tratamento do ttano.
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PREVENO
As feridas devem ser propriamente limpas e desinfetadas. Cirurgias, especialmente aquelas
realizadas em larga escala devem ser realizadas com precaues de higiene. Eqinos devem
ser imunizados antes de procedimentos cirrgicos ou aplicados antitoxina logo aps
cirurgias ou medicado com penicilina de depsito (penicilina benzatnica).

VACINAO E CONTROLE
Uma nica dose de toxide produz aprecivel grau de imunidade. A imunizao
ativa emprega toxide; ela deve ser aplicada duas vezes com intervalo de 1-2 meses de
intervalo e aps isso repetir anualmente.

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Clostridium botulinum
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Botulismo nos diferentes Hospedeiros

INTRODUO
O reagrupamento das espcies C. argentinense, C. baratii, C. botulinum e C.
butyricum foi justificado, pois elas produzem ou podem produzir toxinas proticas. Essas
toxinas, em nmero de sete, designadas por letras de A - G diferem de suas propriedades
antignicas, mas suas atividades so idnticas. Essas toxinas so responsveis no homem e
nos animais de uma enfermidade conhecida como botulismo e, caracterizada por paralisia
flcida.
Em condies naturais, o botulismo resulta na ingesto de toxina pr-formada nos
alimentos contaminados (intoxicao) ou na multiplicao intestinal (bebes) ou em feridas
infectadas (potros) por linhagens produtoras de toxinas (toxinfeco).
As neurotoxinas botulnicas so as toxinas mais potentes conhecidas e, aps a
ingesto, a dose letal para o homem estimada em 0,1-1 g para a toxina botulnica A. Um
exemplo terico mostra que somente um grama da toxina disseminada ou inalada poderia
matar mais de um milho de pessoas. As toxinas podem se tornar armas biolgicas
(disperso das toxinas por aerossis ou contaminao de um reservatrio de gua potvel).
A utilizao potencial das toxinas botulnicas em atos de terrorismo desencadeou de
maneira paradoxal, o interesse e a pesquisa em direo ao tratamento de doenas
caracterizadas por hiperatividade muscular (Botox, Dysport, Neurobloc) (ou para suprimir
as rugas Vistabel).
O C. argentinense uma espcie proteoltica, no sacaroltica, desprovida de lipase
(contrariamente do C. botulinum); crescimento timo a 37 C; possui esporo
moderadamente termorresistente (D104 de 0,8 - 1,12 min.); pode produzir toxina do Tipo G.
So bastonetes com 0,5 a 2,0 m de dimetro e 1,6 - 9,4 m de comprimento; mveis com
clios peritrquios; podem ou no esporular; hidrolisam a gelatina; digerem lentamente o
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leite e a carne; produzem amonaco e gs sulfdrico (H2S). Crescimento inibido por 6,5 %
de NaCl ou 20% de bile. Aps 48 h de incubao a 37 C, as colnias so lisas brilhantes
com um dimetro de 1-4 mm, beta-hemoltica. hemoltico no AS com hemcias de
carneiro. As colnias velhas tornam-se rugosas, podendo ter um aspecto de ovo sobre o
prato (achatadas). No caldo PYG, o crescimento forma um sedimento liso e esbranquiado
com pH de 6,2-6,3 aps cinco dias de incubao. H produo de cido actico, cido isobutrico, cido butrico, cido iso-valrico e cido fenil-actico.
O C. baratii no proteoltico (carne ou leite), no hidrolisa a gelatina; no produz
lipase; a temperatura tima de crescimento est entre 30 e 45 C e, algumas linhagens,
dessa espcie produzem toxina do tipo F. No cultivo em caldo PYG, o C. baratii so
bacilos retos, de 0,5 a 1,9 m de dimetro e 1,6 a 10,2 m de comprimento; imveis. Os
esporos so redondos ou ovais subterminais ou terminais, deformando a parede celular. O
crescimento inibido por 6,5 % de NaCl ou 20% de bile. No AS, as colnias so circulares
ou apresentam contornos irregulares; so chatas ou ligeiramente convexas, translcidas ou
opacas lisas, brilhantes e seu dimetro de 0,5 a 2 mm. Certas linhagens so betahemolticas, outras com hemlise alfa e outras sem hemlise. No caldo PYG, o crescimento
forma um sedimento abundante depois de cinco dias, em um pH de 4,5 a 4,8. Aps o
cultivo no caldo PYG, os principais produtos terminais do metabolismo so cido butrico,
cido actico e cido ltico. Todas as linhagens produzem quantidades pequenas de cido
frmico propinico e cido succnico.
O C. butyricum no proteoltico (carne ou leite), no hidrolisa a gelatina no
produz lipase; degrada a pectina; sua temperatura tima de crescimento est entre 30 e 37
C e certas linhagens produzem toxina Tipo E. As bactrias se apresentam como bastonetes
retos com extremidades arredondadas no crescimento no caldo PYG; com 0,5 a 1,7 m de
dimetro e 2,4 a 7,6 m de comprimento; agrupados em cadeias curtas; mveis por clios
peritrquios. Os esporos so ovais; geralmente no deformam a parede celular, ocupando a
posio central ou subterminal. O crescimento estimulado pela adio de acar, mas
inibido por 6,5 % de NaCl. No AS, as colnias possuem um dimetro de 1 a 6 mm; so
circulares ou com contornos irregulares, geralmente convexas; translcidas; lisas;
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brilhantes; de colorao esbranquiada ou cinzenta. No caldo h formao de sedimento,
apos 5 dias de incubao; o pH fica entre 4,6 5,0. Os principais produtos do metabolismo
produzidos em caldo PYG so cido butrico, cido actico e cido frmico. Pode haver
formao de cido ltico, cido succnico, etanol e butanol.

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BOTULISMO
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INTRODUO
Botulismo uma afeco nervosa, apirtica causado por neurotoxinas; possui
distribuio mundial e descrita no homem e nos animais (Tabela 1). Em todas as espcies
se observa paralisia flcida, mas sem problemas de conscincia e sem sinais sensitivos.
Tabela 1. Neurotoxinas e os hospedeiros preferenciais
___________________________________________________________________________
Neurotoxinas
Hospedeiros Preferenciais afetados
___________________________________________________________________________
BoNT/A

Galinhas, homem

BoNT/B

Equinos, bovinos, homem

BoNT/C

Aves, bovinos, caninos, martas, ferrets, raposas, equinos, sunos

BoNT/D

Bovinos

BoNT/E

Peixes, aves, homem

BoNT/F

Homem

BoNT/G

Homens?

______________________________________________________________________________________

BoNT botulinum neurotoxin.

No homem, as toxinas associadas com a intoxicao so principalmente as toxinas


A, B, E e excepcionalmente as toxinas C e F.
Nos animais, o botulismo essencialmente causado pelas toxinas C e D e mais
raramente, as toxinas A, B e E. uma doena grave caracterizada por paralisia flcida e
alteraes respiratrias importantes causadas pela ao das diferentes neurotoxinas
produzidas, principalmente pelo C. botulinum.

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HABITAT
O C. botulinum e o seu esporo esto distribudos em todos os lugares. freqente
nos solos e sedimento marinho de todo o mundo. O esporo freqentemente detectado na
superfcie de frutas, vegetais e frutos do mar.

MORFOLOGIA E COLORAO
O C. botulinum possui sete diferentes neurotoxinas que no podem ser
diferenciadas, tendo com base a morfologia. So bastonetes grandes que aparecem em
cadeias curtas ou em unidades individuais. Possuem 0,5-0,8 m de dimetro e 3-6 m de
comprimento; mveis quando jovens com flagelos peritrquios. Os esporos so ovais,
cntricos ou excntricos; Gram positivos, mas em cultivos velhos mostram-se Gram
negativos.

CARACTERIZAO CULTURAL E BIOQUMICA


As colnias crescem na profundidade do Agar e esto cobertas por uma penugem.
As colnias superficiais so grandes, semitransparentes com bordos irregulares. Meios
preparados com fgado promovem melhor crescimento do que msculo. O C. botulinum
liquefaz a gelatina, produz cido e gs da glicose, levulose e maltose. O cido actico o
principal produto metablico produzido por todas as amostras. Conforme a amostra produz
outros cidos graxos, como: cido propinico, butrico, isovalrico, valrico e iso-caprico.
So anaerbios estritos, mas no so difceis nas exigncias culturais. Cresce melhor em
torno dos 30C.

RESISTNCIA
Os esporos so muito resistentes, podendo resistir fervura por 30 minutos por
vrias horas. Resistem a autoclavao a 120 C por 20 minutos.

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INATIVAO DAS TOXINAS
As toxinas podem ser inativadas pelo calor (30 min a 80 C, por qualquer tempo a
100 C) e pelo hipoclorito de sdio (NaOCl a 0,1 %, durante 30 min). Os raios solares
inativam as toxinas em 1 a 3 horas. As toxinas so inativadas em 12 horas quando em
aerobiose e na escurido. A clorao clssica utilizada para o tratamento das guas potveis
destri 84% das toxinas em 20 minutos.

SOROLOGIA E TIPOS TOXIGNICOS


As toxinas botulnicas produzidas pelo C. botulinum so classificadas de acordo
com o tipo. H 8 tipos de exotoxinas produzidas das quais 7 so neurotoxinas. As toxinas
A, B e E so, freqentemente relacionadas doena no homem. A neurotoxina C1 e D so
mais freqentes nos animais domsticos e aves. A neurotoxina do tipo B tem sido
observada em bovinos e eqinos. O tipo C1 mais freqente em ces. O tipo C2 no
considerado uma neurotoxina, mas causa alterao da permeabilidade vascular nos tecidos
e diarria em casos de botulismo das aves. As neurotoxinas so produtos antigenicamente
distintos, entretanto os efeitos neurolgicos so similares. As toxinas interferem com a
liberao de acetilcolina dos neurnios colinrgicos da juno neuro-muscular e sinapses
autnomas, provocando uma paralisia flcida e alteraes no sistema nervoso autnomo.

TOXICIDADE E PATOGNESE
A toxigenicidade da amostra do tipo D necessita da presena do bacterifago. Os
tipos A, B, E e F so provavelmente saprfitos do solo e ambientes aquticos. As do tipo C
e D so parasitos obrigatrios do trato digestivo dos mamferos e aves.
A toxina existe como um complexo de molculas de toxina e uma hemaglutinina de
500.000 (peso molecular). As toxinas das cepas no proteolticas, incluindo os tipos C, D, E
e G e poucas cepas do tipo B requerem exposio enzimas proteolticas (tripsina) para a
expresso da atividade txica.
A toxina ativada pode ter mais que 2,6 X 108 LD50 por miligrama de nitrognio. As
toxinas botulnicas podem ser produzidas em temperaturas abaixo de 30 C. Somente um
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tipo de toxina normalmente produzido por uma cepa, muito embora os tipos C e D
possam produzir mltiplas toxinas.
As toxinas botulnicas so sintetizadas como uma nica cadeia polipeptdica inativa
com 150 kDa que liberada pela lise bacteriana. As proteases bacterianas e tissulares
clivam a toxina para uma molcula ativa composta de uma cadeia pesada e outra leve
conectada por uma nica ponte dissulfeto.
A toxina absorvida pelo trato gastrintestinal desloca-se ate a corrente circulatria
at as sinapses no SN perifrico.

MECANISMO DE AO
A toxina liga-se; internalizada na juno nervosa e altera a liberao de
neurotransmissores. H tecnicamente trs regies funcionais para a toxina:
1) A poro carboxi-terminal da cadeia pesada orienta a ligao neuroespecfica.
2) A poro amino-terminal da cadeia pesada orienta a penetrao celular e a
translocao de membranas.
3) A cadeia leve responsvel pelo bloqueio da liberao do neuro-transmissor.
A toxina liga-se grande molcula carregada negativamente nas terminaes
nervosas que consiste de poli-sialo-gangliosdios e outros lipossomas cidos. Ento, ela
move-se, lateralmente para ligar-se ao receptor protico especfico que internalizada a
toxina. A toxina internalizada na terminao nervosa que no mais acessvel
neutralizao pela antitoxina. A toxina botulnica permanece no local da juno neuromuscular onde passa a interferir com a liberao de acetilcolina.
O botulismo normalmente decorrente da ingesto de alimento contaminado com a
toxina pr-formada. A toxina pode ser elaborada na carcaa ingerida ou que contaminou
indiretamente outro alimento. As larvas de insetos que se desenvolvem em carcaas onde a
toxina foi elaborada podem carrear suficiente toxina para atingir as aves quando estas se
alimentam desses insetos. Outra possibilidade a decomposio da vegetao que ocorre
prximo a margens de lagos e rios os quais propiciam um ambiente favorvel para sntese
da toxina. Aves aquticas que se alimentam nestas reas podem desenvolver botulismo.
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Restos de alimentos e farinha de carne so origens bem conhecidas da toxina botulnica
para raposas e martas.
Afosforose em bovinos e ovinos produzem uma alterao do apetite chamada de
"pica" a qual provoca a ingesto de ossos, ou de carcaas em decomposio. Esta
depravao do apetite pode levar ocorrncia de botulismo. A doena chamada, na frica
do Sul, de lamsiekte (lame sickness), pois nesta enfermidade h claudicao devido
hipofosforose ou osteomalcia. A doena existe onde h deficincia de fsforo no solo,
bem como, a ingesto de ossos (pica). Na Holanda, o botulismo em bovinos foi relacionado
com os resduos de gros de cervejaria contaminados com o C. botulinum tipo C.
O botulismo toxinfeccioso uma forma da doena observada, inicialmente nos
Estados Unidos, (Kentucky) onde o C. botulinum produziu toxina em reas necrticas do
corpo. Potros de 2 a 8 semanas foram afetados aps a absoro da toxina. Evidenciaram
leses tpicas da sndrome dos potros: disfagia aguda, tremores, fraqueza, prostrao e
morte. reas de necrose localizadas no estmago, umbigo, abscessos pulmonares e feridas
estavam colonizadas pelo C. botulinum.
Os esporos responsveis pelo botulismo esto difundidos no ambiente. Este fato
necessita de pr-requisitos incluindo:
a) Contaminao de um substrato importante pelo organismo.
b) Multiplicao dos organismos e produo da toxina.
c) Sobrevivncia da toxina aos processos lticos que a degrade.
d) Ingesto da toxina pelo hospedeiro suscetvel.
Aps a ingesto da toxina, ela atravessa a parede intestinal em direo corrente
sangnea e linftica. A hemaglutinina a protege contra a digesto fisiolgica.
As bactrias no rmen dos bovinos e ovinos inativam uma quantidade substancial
da toxina ingerida, fazendo com que a dose letal (oral) para estes dois animais sejam bem
maiores que para as outras vias. Esta observao importante em relao ao manuseio de
amostras (contedo ruminal) para pesquisa da toxina. As amostras devem ser congeladas
at a realizao dos testes laboratoriais. Na corrente sangnea, a toxina carreada ao
sistema nervoso perifrico onde se liga aos gangliosdios na juno neuromuscular. A
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toxina penetra na clula nervosa, ligando-se a superfcie interna da membrana nervosa,
impedindo a liberao de acetilcolina. A toxina botulnica age somente nos nervos
colinrgicos do sistema nervoso perifrico. A barreira hemato-enceflica protege os nervos
colinrgicos do crebro da ao da toxina.
O sinal clnico no animal intoxicado a paralisia flcida que progride, envolvendo a
musculatura respiratria resultando em morte. H alteraes na viso, na locomoo e na
deglutio. A lngua geralmente permanece paralisada e a deglutio torna-se difcil pela
paralisia faringeana, levando a uma paralisia respiratria e morte.
Nas aves, h paralisia nas asas, pernas, pescoo. As aves no conseguem retrair a
membrana nictitante. Os sunos e os animais carnvoros so normalmente resistentes a
toxina botulnica. A doena do tipo C1 tem sido registrada em ces.

DIAGNSTICO (Clnico e Laboratorial)


O diagnstico do botulismo, assim como no ttano, est baseado na histria e sinais
clnicos. Numerosos animais podem estar envolvidos, sugerindo uma fonte comum de
toxina. O exame rotineiro de sangue normal, exceto quando h infeco bacteriana
secundria. Amostra de lquido cefalorraquidiano normal
O diagnstico definitivo est baseado na deteco da toxina em aproximadamente
10 ml de soro (colhido no incio do quadro clnico) ou em 50 gramas de fezes, vomito
amostras de alimento ingerido. A prova diagnstica laboratorial do botulismo nos animais
a demonstrao da toxina no soro, no vomito, no contedo ruminal, no contedo intestinal e
no alimento. O soro, o filtrado intestinal e o filtrado alimentar devem ser inoculados em
camundongos. A proteo passiva uma prova indireta da presena da toxina. O nvel de
toxina nos animais afetados de cerca de 20 LD50 em camundongo. As amostras de
alimentos suspeitos e contedo intestinal devem ser tripsinizadas antes da inoculao, para
ativar a toxina precursora.
A prova de ELISA est indicada na deteco de toxinas dos tipos A, B, E e G,
entretanto no so aplicveis na rotina laboratorial. A presena de esporos do C. botulinum
est disseminada em amostras ou materiais suspeitos o seu valor fica limitado.
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TRATAMENTO
A terapia do botulismo centrada no tratamento de suporte. Monitorar a hidratao.
Assistncia quanto gua e alimentos. Megaesfago e diminuio no reflexo de deglutio
podem levar a pneumonia por aspirao (falsa via). Antimicrobianos so indicados no caso
de complicaes secundrias.
Aminoglicosdeos devem ser evitados, pois eles interferem com a transmisso
neuromuscular e piora o quadro paraltico. Monitoramento da excreta (urina e fezes) pela
reteno. Abrigo e rotao do animal para o seu conforto.
O uso de antitoxina pode no ser disponvel, mas controverso. A antitoxina s
eficiente quando a toxina ainda no foi absorvida pelo sistema nervoso. Antitoxinas
potentes contendo o tipo C1 esto indicadas nos ces severamente acometidos quando
administrado o mais rpido possvel, isto , nos primeiros 5 dias. Animais com sinais
clnicos leves recuperam-se espontaneamente.
A administrao de antimicrobianos controversa, pois poderiam piorar os sinais
clnicos pela liberao de mais toxina pela lise bacteriana ou poderiam promover a
colonizao intestinal do organismo do botulismo.

IMUNIZAO E CONTROLE
Antitoxinas homlogas protegem os animais contra o botulismo. A vacinao nas
aves no est aplicada rotina visto que a ocorrncia da doena espordica.
A vacinao indicada nas regies de alto risco como frica do Sul e Austrlia,
assim como, em certas populaes (animais de zoolgico). Em algumas reas so utilizadas
toxides polivalentes.
Na Austrlia, os ovinos e bovinos so imunizados duas vezes e, posteriormente
revacinao anual.
No Brasil e frica do Sul, toxides C e D so efetivos no programa de vacinao.
As duas primeiras com adjuvante oleoso e a vacinao de manuteno em soluo aquosa.
A toxina livre pode ser inativada pela administrao de antitoxina polivalente. A resposta
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dependente da quantidade de toxina ligada e ao tipo de toxina. A antitoxina ineficaz se a
toxina estiver ligada membrana da clula nervosa. Esforos devem ser feitos para esvaziar
o trato gastrintestinal com a aplicao de purgativos. Correo do solo e pastagens com
clcio e fsforo diminui acentuadamente os casos da doena.
Tabela 1. Distribuio, Hospedeiros e Enfermidades associadas aos Tipos do C. botulinum
Amostra Distribuio

Hospedeiro(s)

Homem

Amrica do Norte

Bov., eqinos

C1

Doena(s)
Botulismo
I

ntoxicao pela forragem

Aves

Limberneck

Martas

Botulismo

Amrica do Norte

Homem

Botulismo

Europa

Bov. eqinos (potros)

Intoxicao pela forragem

Aves

Limberneck

Martas

Botulismo

Potros

Shaker foal syndrome

Amrica do Norte

Patos

Limberneck

Austrlia

Aves silvestres.

Western Duck disease

Canad

Homem

Botulismo

Europa

Martas

Botulismo

Aves

Diarria

C2

No neurotoxina

frica do Sul

Bovinos

Lamzieekte

Unio Sovitica

Homem

Botulismo

Amrica do Norte (Grandes Lagos)

Amrica do Norte

Homem

Botulismo

Homem ?

Botulismo ?

Dinamarca

Argentina
Sua

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Clostrdios Invasivos
Clostridium perfringens
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Enterotoxemias
Enterites agudas
Doena do rim pulposo

INTRODUO
O Clostridium perfringens foi isolado, pela primeira vez, por Welch e Nuttall, em
1892, de um cadver (homem) em adiantado estado de decomposio.
Em 1900, Migula props a denominao de Bacillus welchii em homenagem ao
pesquisador americano.

HABITAT
O agente est amplamente distribudo nos solos e trato alimentar de quase todos os
animais de sangue quente. geralmente encontrado como invasor do trato alimentar aps a
morte. necessrio cuidado no isolamento deste clostrdio aps a morte. Este agente
encontrado, na gangrena gasosa do homem, dos animais, ou associado aos outros
anaerbios, neste processo.

ENFERMIDADES
Est associado s leses semelhantes ao edema maligno, especialmente nos ovinos.
Existe variao toxignica desses microrganismos responsveis por toxemias fatais em
ovinos, bezerros, leites e no homem. Essas variaes podem ser divididas em cinco tipos:
A, B, C, D e E, tendo como base a produo de quatro principais toxinas letais.

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MORFOLOGIA E COLORAO
O C. perfringens um bastonete reto e grosso; possui apresentao individual, aos
pares ou raramente, em cadeias; possui 1,0 m de e 4 - 8 m de comprimento; esporos
ovais e pequenos, geralmente no deformando a parede celular do bastonete; no so
formados em meio muito cido; amostras com capacidade varivel de esporular. Algumas
vezes, difcil encontrar esporos, independentemente do meio de cultura; esporulao nos
tecidos incomum; nos cultivos velhos torna-se pleomrfico, aparecendo como clavas,
como clulas gordas ou filamentos; cpsula formada nos tecidos e meios de cultura; no
possui flagelos; Gram positivos, mas tornam-se Gram variveis com os subcultivos.

CARACTERSTICAS CULTURAIS E BIOQUMICAS


As colnias do C. perfringens no AS so circundadas por dois tipos de hemlise;
uma estreita com hemlise completa e outra externa com hemlise incompleta. No meio de
gema de ovo forma-se um precipitado esbranquiado no meio como resultado da atividade
da lecitinase (da fosfolipase C). As colnias so pequenas e biconvexas no agar profundo.
O cultivo desse agente em meio contendo glicose ou outro substrato fermentvel produz
uma grande quantidade de gs que causa rompimento do selo de parafina com facilidade. O
C. perfringens liquefaz a gelatina rapidamente, mas no o meio de ovo coagulado ou o
meio soro de Loeffler. Cresce bem em meio de carne cozida ou Tarozzi, produzindo uma
quantidade enorme de gs. Fragmentos de carne ou fgado tornam-se rseos, no digerveis
e com um odor desagradvel que chamado de stormy fermentation ocorre no litmus
milk.
C. perfringens produz cido e gs da glicose, levulose, galactose, manose, maltose,
lactose, sacarose, xilose, trealose, rafinose, amido, glicognio e inositol. Os produtos de
fermentao incluem: cido actico e cido butrico.

ANTGENOS E TOXINAS
A base de classificao dos C. perfringens est na produo de quatro toxinas
principais (alfa, beta, psilon e iota). Estas toxinas so protenas com atividade enzimtica;
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lbeis ao calor e antignicas, podendo ser utilizadas como toxides pela ao de qumicos
que a inativam sua toxigenicidade sem perder sua antigenicidade.
A alfa toxina uma fosfolipase C que foi a primeira toxina bacteriana com o
mecanismo de ao bioqumico elucidado.
As principais toxinas produzidas pelo C. perfringens e suas doenas associadas
esto mostradas nos quadros 2 e 3 abaixo.
Outras toxinas menos importantes incluem: a hialuronidase, desoxirribonuclease,
colagenase e proteinases.
ETIOPATOGENIA
O C. perfringens distribudo na natureza, fazendo parte da flora intestinal dos
animais hgidos. Dieta rica em protena faz aumentar a populao desses microrganismos
nos intestinos.

Tipo A
Amostras do tipo A esto bem adaptadas em sobreviver no solo enquanto que as do
tipo B, C, D e E esto mais adaptadas ao intestino. O C. perfringens a causa mais comum
de miosite necrotizante em eqinos como seqela de ferimentos ou injees.
O C. perfringens tipo A causa uma doena chamada yellow lamb disease que
ocorre na Califrnia e no Oregon, durante a primavera. Os animais apresentam: depresso,
anemia, ictercia e hemoglobinria, morrendo em 6 a 12 horas, aps os primeiros sinais
clnicos. A toxina alfa produzida no intestino delgado; absorvida pela circulao,
causando hemlise intravascular macia e leso vascular.
Nos leites ela se apresenta como uma diarria aquosa e amarelada em animais
abaixo de cinco dias, geralmente aos trs dias e com alta morbidade e baixa mortalidade.

Tipo B
O C. perfringens tipo B est relacionado com a disenteria dos cordeiros. A doena
ocorre na Inglaterra, Esccia, Pas de Gales, frica do Sul e Oriente Mdio. O cordeiro
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infecta-se com a me ou ambiente, durante os primeiros dias de vida. A populao de
organismos aumenta naqueles animais que ingerem grandes quantidades de leite. A toxina
beta causa leses hemorrgicas e necrose da mucosa intestinal (intestino delgado). Os
animais acometidos morrem em poucas horas, aps os primeiros sinais de dor abdominal,
desinteresse pelo mamar e sangramento contnuo. O agente causa enterite hemorrgica em
cordeiros, cabritinhos, terneiros e potros.

Tipo C
O C. perfringens tipo C est associado enterotoxemia em muitas espcies animais.
Enterite necrtica e hemorrgica em terneiros e cordeiros. Nos cordeiros, a doena
assemelha-se disenteria dos cordeiros. A doena nos bezerros geralmente observada em
animais vigorosos, saudveis e com menos de uma semana de vida. A enterite hemorrgica
causada pela beta toxina, podendo ser demonstrada no contedo intestinal fresco. Ela
muito lbil e, facilmente desnaturada pela ao enzimtica no intestino, sendo de pouco
valor a sua ausncia como prova diagnstica. Leites com uma semana de idade podem
exibir enterite hemorrgica com grande mortalidade. Na necropsia so observadas leses de
enterite grave, mostrando reas de necrose na mucosa do jejuno. A doena freqente no
Reino Unido, Estados Unidos e Dinamarca e, uma vez estabelecida na propriedade, tornase enzotica. A beta toxina aparentemente responsvel por leses intestinais de aves que
apresentam fraqueza e disenteria.
A doena dos ovinos adultos chamada de Struck ou doena do Romney Marsh
causada pelo C. perfringens tipo C. O organismo est no solo em reas de criao de da
raa Romney March na Inglaterra. A doena vista no incio da primavera. Por razes
desconhecidas, o microrganismo multiplica-se no abomaso e intestino delgado, produzindo
a toxina beta. A toxina beta causa necrose da mucosa intestinal. Disenteria ou diarria
raramente so observadas. Em alguns casos, h evidncia de toxemia pelo acmulo de
fluido na cavidade peritoneal e torcica, sem leses visveis no trato intestinal.

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Tipo D
Em reas endmicas, muitos animais albergam o C. perfringens tipo D em vrias
partes do trato digestivo. Essas amostras podem prover a origem para a infeco fatal se as
condies so favorveis para o rpido e profuso crescimento do microrganismo no
intestino. Essa condio est associada sbita mudana de uma dieta pobre para uma dieta
rica ou excessiva ingesto de alimentos palatveis; da o termo doena da
superalimentao. A flora ruminal normal composta de organismos digestores da
celulose, mas na mudana brusca da dieta h um desequilbrio dessa flora e parte desse
alimento passa indigervel para o intestino delgado. A presena do amido no digerido, no
intestino favorece o profuso crescimento do organismo e conseqentemente produo da
toxina. No se sabe como o tipo D supera o crescimento do tipo A, pois o tipo D est
inicialmente, em desvantagem pelo tipo A.
A prototoxina psilon possui baixa toxicidade; liberada pela multiplicao de
bactrias na luz do intestino delgado e ativada por enzimas digestivas como a tripsina. A
ativao mxima em toxina psilon alcanada pela combinao da tripsina e
quimiotripsina, aumentando a toxicidade em pelo menos 1.000 vezes. A toxina psilon
purificada possui um peso molecular de aproximadamente 32 Da e toxicidade por volta de
3,2 X 106 DML / mg quando testada intravenosa em camundongos.
A estrutura funcional molecular da toxina no conhecida, mas alguns resduos
importantes de aminocidos para a sua funo foram identificados. A converso da
prototoxina em toxina psilon totalmente ativa ocorre pela remoo de um peptdeo Nterminal.
A produo da toxina psilon pela bactria codificada pelo gene contido em um
grande plasmdio presente somente no C. perfringens tipo D ou B.
A toxina psilon no atua ou age diretamente sobre a mucosa intestinal e pequenas
quantidades da toxina psilon na luz intestinal so incuas, mas quando altas concentraes
persistem no intestino por muitas horas, h um aumento da permeabilidade intestinal
levando a absoro de mais toxina na circulao sistmica. A toxina tem um efeito de
permease sobre a mucosa intestinal, aumentando sua prpria absoro. A toxina ativada
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seletivamente afeta o crebro e, em certo grau, os rins e outros tecidos. O efeito no crebro
manifesto por alteraes dos capilares cerebrais tornando-os permeveis s protenas
plasmticas e gua, resultando num rpido extravasamento de fluidos no crebro e aumento
da presso intracerebral. O aumento de presso favorece o aparecimento dos sinais do SNC,
tais como incoordenao e convulses. Edemas e efuses tambm ocorrem em diversos
graus no pulmo, pericrdio e outras cavidades serosas.
O C. perfringens tipo D responsvel pela enterotoxemia dos ovinos (doena do
rim pulposo ou doena da superalimentao), ocorrendo em reas de criao de ovinos no
mundo inteiro. O agente encontrado no solo e trato digestivo dos ovinos saudveis. O
sistema intensivo de criao, confinamentos ou a preparao para exposies so fatores
estressantes e predisponentes da doena.
A toxina psilon se liga aos receptores na superfcie do endotlio vascular
particularmente do crebro e as clulas renais da ala de Henle, tbulos contorcidos distais
e sinusides hepticos. O local de grande afinidade para a toxina psilon pode ser uma
sialoprotena localizada nas membranas sinpticossomais. A degenerao das clulas do
endotlio vascular permite alteraes na dinmica dos fluidos e perda das protenas
plasmticas. Estudos ultraestruturais do crebro evidenciaram que as junes prximas ao
endotlio vascular so rompidas, causando processos de astrcitos perivasculares indo
desde inchao at ruptura que causam edema intercelular e perivascular seguido de
degenerao e necrose, tanto focal quanto difusa.
Macroscopicamente, so observados focos de encefalomalcia simtrica bilateral no
corpo estriado, rea talmica, mesencfalo, hipocampo, e pednculos cerebrais. A extenso
das leses varia com o quanto a doena aguda.
Na doena da superalimentao h sinais patognomnicos de hiperglicemia e
glicosria. Trabalhos experimentais em ovinos e em animais de laboratrio demonstraram
que a hiperglicemia o resultado da glicogenlise das reservas de glicognio heptico.
A toxina ligada ao hepatcito estimula a produo de AMP cclico que por sua vez
causa transforma glicognio em glicose. A explicao mais plausvel parece ser que o
edema cerebral seria a leso primria agindo na diviso simptica do sistema nervoso
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autnomo estimularia a liberao de catecolaminas (epinefrina, norepinefrina, dopamina)
via medular da suprarenal a qual ativa a adenilatociclase impulsionando a produo de
AMP cclico que por sua vez glicogenlise e hiperglicemia. Hiperglicemia junto com leso
renal leva a glicosria. Esta seqncia de eventos provavelmente ocorre em menos de 1
hora aps a toxina psilon entrar na circulao sistmica. A doena do rim pulposo um
tipo de autlise post mortem que ocorre rapidamente nos tecidos lesionados.
A toxina psilon antignica, estimulando a produo de anticorpos especficos
mesmo quando a infeco do tipo D subclnica. Trabalho experimental com anticorpo
monoclonal mostrou que a resposta imune a um nico eptopo da toxina psilon suficiente
para proteger contra a toxina e a doena.
Nos caprinos, a doena clnica pode ter a forma superaguda at crnica,
evidenciadas pela diarria sanguinolenta, associadas enterocolite hemorrgica ou
necrtica. A imunidade nos caprinos frgil ou pequena. A suscetibilidade do trato
intestinal dos caprinos ao C. perfringens tipo D considerada responsvel por esta
diferena na patognese entre ovinos e caprinos.

Tipo E
O C. perfringens tipo E est associado enterite hemorrgica e necrtica em
terneiros na Austrlia. Sua patogenicidade em ovinos e bovinos no est bem esclarecida. O
agente e a toxina esto presentes ao mesmo tempo no intestino de ovinos e bovinos durante
o exame post-mortem, mesmo sem sinais de enterotoxemia por clostrdios.

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Quadro 1. Caractersticas das principais Toxinas do C. perfringens
Toxina Propriedades
Mecanismo de ao
Efeito no organismo
________________________________________________________________________________________
alfa

Fosfolipase C
(lecitinase)

Hidrolisa lecitina na
mitocndria
membrana celular
fosfolipdios sanguneos
e endotlio capilar.

Hemolt, leucocida; permeab capilar.


pela leso endotelial; degenerao
membrana plasmtica muscular

beta

Necrotizante
tripsina lbil

Desconhecida

Necrose da mucosa intestinal.

psilon Necrotizante e
neurotxica

Leso clula endotelial


do crebro

Necrose liquefativa do tec. cerebral;


Necrose crtex renal;
Edema perivascular
Produzido no crebro e meninges.
permeabilidade da mucosa intestinal

iota

Desconhecida

Necrose da mucosa intestinal.

Necrotizante, letal;
ativ. enzim. prototoxina

Quadro 2. Principais Doenas e Toxinas do C. perfringens A, B, C , D e E

__________________________________________________________________________
Tipo

Doena (s)

Distribuio

____________________________________________
A

Yellow lamb disease

Disenteria cordeiros
Enterite hemor.(ov.,cap.)

Enterite necrtica cordeiros


leites, terneiros e aves
Struck (ovinos)

Enterotoxemia
Doena superalimentao
Doena do rim pulposo.
Enterotoxemia
Cordeiros e bezerros

California
Europa, frica Sul
Oriente mdio, Ir
Mundial

T
o
x
i
n
a
s
alfa
beta psilon iota
_______________________
+*

+*

+*

+*

Inglaterra

Mundial

Amrica do Norte
Inglaterra.
Austrlia

+*

__________________________________________________________________________
*= A toxina mais importante na doena.

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DIAGNSTICO
Na enterotoxemia, o contedo do intestino delgado, corado pelo mtodo de Gram,
com freqncia, contm elevado nmero de bacilos Gram positivos, semelhantes os C.
perfringens. Esta prova possui valor limitado pela rpida multiplicao bacteriana que tem
lugar, aps a morte em todas as pores intestinais.
importante a identificao da toxina no contedo intestinal (delgado). Inocula-se
pequena quantidade de (< 0,5 ml) do lquido clarificado na veia caudal de ratos. A morte
acontece em minutos, constituindo em prova presuntiva da enterotoxemia. Noutro
procedimento, se inocula uma mistura de trs partes do lquido problema a uma parte de
diferentes antitoxinas do C. perfringens. A interpretao dos resultados se realiza segundo o
quadro abaixo.
Quadro 4. Prova biolgica entre as diferentes toxinas do C. perfringens em ratos.

A prova intradrmica evidencia atividade necrosante em cobaia, utilizando o


procedimento parecido sendo mais especfica. Utiliza o cultivo em caldo. Os ensaios
utilizam tanto sobrenadante tripsinizados como sobrenadante no tripsinizados, j que
algumas toxinas so destrudas (B, C) e, outras sejam ativadas pela tripsina. As amostras
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devem ser colhidas recentemente ou mantidas congeladas at o momento da realizao da
prova.
A invaso dos tecidos antes da morte ocorre quando se trata de Struck, nos demais
tipos de enterotoxemia, o isolamento e tipificao da toxina podem proporcionar uma prova
confirmatria, visto que raramente so decisivas.
Os cordeiros afetados com enterotoxemia causado pelo C. perfringens tipo D podem
evidenciar presena de glicose na urina.

TRATAMENTO
A maioria dos casos, a doena aguda e exige procedimento teraputico rpido. O
C. perfringens sensvel : penicilina G, s tetraciclinas, ao cloranfenicol, furazolidona,
bacitracina, eritromicina, lincomicina. resistente aos aminoglicosdios.

CONTROLE E PREVENO
O Toxide tipo-especfico tratado pelo formol e precipitados pelo hidrxido de
alumnio (alum) so imunobiolgicos eficientes contra as enterotoxemias causadas pelo C.
perfringens. Vacinas para o tipo B e C ou antissoro tem proteo cruzada para a beta toxina
que uma toxina importante para os dois tipos. Os antissoros B e C podem ser usados na
proteo da disenteria dos cordeiros. Leites podem ser protegidos contra a enterite
necrtica do tipo C, pela imunizao de porcas com o toxide do tipo B ou C. Ovelhas
devem ser vacinadas, tanto com o tipo B ou C, no vero e, poucas semanas antes do
nascimento. Assim os cordeiros seriam protegidos passivamente pelo colostro da me. A
vacinao contra o C. perfringens tipo D deve ser efetuada na me e, 10 dias aps o
nascimento e, novamente 2 a 6 semanas. Durante o surto da doena pode ser administrado
soro hiperimune e toxide ao mesmo tempo, seguido da aplicao de toxide quatro
semanas mais tarde.
A administrao de antimicrobianos na rao reduz a mortalidade de galinhas
devida enterite necrosante produzida pelo C. perfringens Tipo A.
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Clostridium novyi
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Hepatite Necrtica (HN);
Bighead;
Gangrena Gasosa (GG).

INTRODUO
So microrganismos habitantes do solo. Tem distribuio mundial. causa da
hepatite necrtica dos ovinos e bovinos. Conhecidos como hepatite necrtica ou "Black
disease", causa de gangrena gasosa proveniente de ferimentos. Na Austrlia, esses
ferimentos (cabea e face) de ovinos so devido s lutas entre si, sendo conhecida como
"Bighead."
O C. novyi tipo A causa gangrena gasosa, no homem e nos animais pela infeco de
feridas. A leso tpica edema como acontece no quadro de bighead de carneiros jovens;
o edema da cabea, pescoo e a parte cranial do trax espalham-se rapidamente seguida da
invaso do tecido subcutneo lesionado pela luta.
A hepatite necrtica infecciosa ou black disease dos ovinos e bovinos resulta das
infeco do C. novyi tipo B. Os esporos em latncia germinam no fgado lesionado pela
migrao de fasciolas e os efeitos sistmicos resulta em morte (aguda ou superaguda)
seguida da disseminao da toxina alfa. Seus efeitos hepatotxicos histotxicos e
cardiotxicos produzem edema difuso nas serosas e necrose heptica focal (Elder and Miles
1957). O nome black disease deriva da caracterstica escurecida por baixo da pele devido
a congesto venosa. A morte sbita de porcas tornou-se um problema emergente que est
associado multiplicao de C. novyi tipo B no fgado ou no parto (Elder e Miles, 1957;
Friendship e Bilkei 2006).
Clostridium novyi tipo D normalmente chamado de C. haemolyticum causa
hemoglobinria bacilar do gado e outros ruminantes. A patogenia semelhante hepatite
necrtica ou black disease, especialmente na migrao das formas jovens da F. heptica e
causando leso heptica predispondo a ocorrncia da doena.
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Alem da gangrena gasosa causada pelo C. novyi tipo A, recentemente tem sido
reconhecida como causa de septicemia em dependentes de drogas, o Clostridium
botulinum, que fazem o uso de drogas por via intramuscular (Ryan et al. 2001; McGuigan
et al. 2002). A mdia de idade dentre os 60 casos foi de 30 anos e a maioria injetou herona
cida via extravenosa. Os casos fatais foram prximos a 90% (McGuigan et al. 2002).
A produo diferencial entre as toxinas e o principal fator fenotpico. O C.
novyi produtor de toxina pertence famlia das grandes citotoxinas que modificam as
pequenas protenas de ligao GTP as quais afetam o citoesqueleto (Just e Gerhard 2004;
Schirmer e Aktories 2004; Ziegler et al. 2008). A atividade enzimtica da toxina intacta tem
aproximadamente 550 fragmentos de aminocidos e a mutao no resduo do cido
asprtico dentro deste fragmento reduz dramaticamente a atividade da enzima (Busch et al.
2000). A alfa toxina especificamente modifica a subfamlia de protenas Rho (Rho, Rac,
Cdc42, e RhoG) pela N-acetil-glucosaminilao da Thr -37 (Selzer et al. 1996).
A toxina do C. novyi tipo D uma fosfolipase C (FLC) (Hauer et al. 2004 ).
uma protena de 42,869Da e mostra alto grau de homologia com as fosfolipases C. Sua
extremidade N terminal possui resduo de ligao ao Zn 2+ que so comuns para essas
enzimas. A extremidade C terminal altamente homloga a regio equivalente da
fosfolipase C do C. novyi tipo A, a toxina do C. perfringens e a fosfolipase C do
Clostridium bifermentans (Hauer et al. 2004).
Esporos mutantes no toxignicos obtidos por engenharia gentica do C. novyi
administrados endovenosamente germinam e produzem leso tecidual somente em
determinadas condies de reduo de oxignio aquelas encontradas em tumores slidos.
Esta abordagem agora aplicada em testes clnicos (Wei et al. 2008). No h tratamento
eficaz contra as infeces por C. novyi, mas a profilaxia com toxides eficaz. Uma
segunda gerao de imungenos veterinrios pode estar baseada no toxide , tanto natural
como recombinante (Amimoto et al. 1998).

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MORFOLOGIA & COLORAO


O Clostridium novyi um bastonete grande, medindo 5 a 10 m de comprimento e
1 a 1,5 m de dimetro; esporo oval central ou subterminal; deforma o corpo bacteriano;
acapsulado; possui flagelo peritrquios; mveis sob condies de anaerobiose; G positivo
quando jovens, mas tornam-se Gram variveis.
O C. novyi anaerbio estrito, sendo difcil cultiv-lo no isolamento primrio. O
crescimento pode ser melhorado com a adio de glicose, sangue ou crebro. As colnias
so chatas com bordos irregulares que se espalham na superfcie do Agar como um filme
de crescimento transparente. H hemlise, aps 48 a 72 de incubao. No meio de carne
cozida, o crescimento lento e a carne torna-se rsea. A gelatina liquefeita e o soro
coagulado, mas no digerido. As colnias quando crescidas em meio contendo gema de ovo
produzem uma zona de precipitao opalescente (Reao de Nagler), devido produo de
lecitinase (gama toxina) pelo C. novyi tipo A e devido beta toxina do tipo B e D. A
fermentao de carboidratos varivel. A grande maioria produz cido e gs da glicose,
mas no fermentam a lactose.

RESISTNCIA
Os esporos podem resistir a 95 C por 15 minutos, mas so destrudos a 120C
durante 5 min. Morrem rapidamente quando expostos aos hipocloritos. Resistem 1 hora
quando expostos a 10% de fenol, 10% de formalina ou 0,1% de mertiolato. Os esporos
podem permanecer viveis por muitos anos nos solos e em carcaas de animais mortos.

ANTGENOS E TOXINAS
O C. novyi est dividido em 4 tipos (A, B, C e D). Os mais importantes destes
componentes txicos em relao etiologia so: () alfa, () beta, () gama, delta () e
epsilon () toxinas e os quatro tipos de organismos, segundo evidencia o Quadro 1 abaixo.
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Quadro 1. Enfermidades Causadas pelas Toxinas do C. novyi (A,B,C e D).

Tipo

Espcie animal

Doena

alfa

beta

gama

delta

psilon

______ ______ ____

_________

Ovinos, bovinos

GG

*++

Ovinos, bovinos

HN

*++

Bfalos

Bovinos, ovinos

*+++

: letal

Osteomielite?
HB

: lecitinase

: fosfolipase D

: hemolisina

: lipoltica

ETIOPATOGENIA
O C. novyi est presente no solo e intestino dos herbvoros, podendo causar GG em:
eqinos, bovinos, ovinos, caprinos, sunos e animais de laboratrio. O organismo pode
contaminar a superfcie de feridas cutneas e, menos freqentemente, causar infeces
intestinais. Na ferida infectada, desenvolve-se leso de GG que se assemelha quela
causada pelo C. septicum e diferenciada em laboratrio.

Tipo A
Big head uma enfermidade comum na Austrlia, caracterizada por leses na
face e cabea de reprodutores ovinos belicosos. Na superfcie ferida h desenvolvimento do
C. novyi tipo A e produo de toxinas, causando edema gelatinoso grave com posterior
toxemia. A alfa toxina responsvel pelo edema gelatinoso e morte do animal.

Tipo B
Black disease ou Hepatite necrtica (HN) uma hepatite crnica, principalmente
de ovinos e bovinos, ocorrendo em regies infectadas pela F. hepatica. O clostrdio est
presente no solo, no intestino de herbvoros e sob a forma de esporo no fgado, em reas
endmicas de fasciolose. A patogenia da doena est relacionada com a migrao de formas
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imaturas no fgado, proporcionando as condies necessrias ao desenvolvimento do C.
novyi no fgado. Os esporos passam para a forma vegetativa; h multiplicao dos
microrganismos; produo de grandes quantidades de alfa toxina e a morte por toxemia.

DIAGNSTICO
As leses hepticas contm bacilos de grande tamanho, desde Gram positivos at
Gram variveis com esporo grande de forma ovalada que podemos identificar mediante o
conjugado fluorescente anti-C. novyi (Wellcome Diagnostics, Dartford, UK). A anamnese e
as leses indicam o diagnstico clnico, mas o diagnstico final deve ser confirmado, no
laboratrio, utilizando amostras de fgado e uso da imunofluorescncia (IF).

ENVIO DE AMOSTRAS
importante que o material suspeito seja enviado o mais rpido possvel, e que o
exame bacteriolgico seja realizado pouco tempo aps a morte. Aps a inoculao em meio
de carne cozida ou Tarozzi, a amostra deve ser submetida a 65 C por 15 minutos para
destruir as bactrias contaminantes, seguido da incubao anaerbia a 37C, durante 24 a 48
horas. importante lembrar que este clostrdio anaerbio estrito e de crescimento difcil.
Cobaias podem ser utilizadas como animais para a inoculao experimental,
causando edema subcutneo grave seguido de morte.

CONTROLE E PREVENO
Os animais so imunizados contra a doena com toxide concentrados pelo alum.
Duas doses de vacina imunizam bem os animais, conferindo um ano de proteo. No caso
de surtos da doena pode ser utilizado soro hiperimune.

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Clostridium haemolyticum
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Hemoglobinria Bacilar (HB)

INTRODUO
O Clostridium haemolyticum est intimamente relacionado com o Clostridium novyi
Tipo D sendo causa da Hemoglobinria Bacilar (HB) dos bovinos (Red Water Disease,
Doena Hemorrgica ou Icterohemoglobinria infecciosa) e ocasionalmente, em ovinos.

MORFOLOGIA E COLORAO
O C. haemolyticum maior que os outros clostrdios invasores; mede 1 a 1,3 m de
dimetro e 3 a 5,6 m de comprimento; apresentam-se sozinhos ou em cadeias curtas nos
tecidos e no cultivo; esporo oval e subterminal; causa aumento de volume na clula em que
se aloja; ativamente mveis quando jovens; Gram positivos quando jovens, mas perdem
rapidamente a capacidade de manter-se corado.

CARACTERSTICAS CULTURAIS E BIOQUMICAS


As colnias crescidas no AS so lenticulares e, mais tarde, tornam-se lanosas. A
formao de gs pequena ou nenhuma, exceto se acar for adicionado ao meio de
crescimento. So hemolticas. Liquefaz a gelatina em dois a quatro dias, mas no amolece
nem liquefaz o soro coagulado e o meio ovo. Os meios com carne cozida e o meio crebro
suportam bem o crescimento, entretanto no h digesto dos slidos ou enegrece o meio.
No ataca o leite. Glicose e levulose so os acares que so fermentados por este
clostrdio. Forma grande quantidade de H2S no meio de fgado ou meio com peptonaproteose. Forma grande quantidade de indol. negativo para a prova do VM / VP. O C.
haemolyticum muito exigente em suas necessidades de crescimento e multiplicao. Boas
condies de anaerobiose e meios, contendo triptofano para crescimento timo e formao
da toxina.
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ANTGENOS E TOXINAS
O C. haemolyticum / C. novyi tipo D possuem o mesmo padro protico no PAGE,
sendo desta maneira, indistinguveis. Este clostrdio produz toxina beta enquanto que o C.
novyi tipo B produz toxina alfa e beta. A toxina beta tem peso molecular de 32.000 D e
lbil tripsina.

ETIOPATOGENIA
Acreditou-se que o agente existisse somente na regio das Montanhas Rochosas,
nos Estados Unidos. Mais tarde, verificou-se que ela ocorria no Golfo do Mxico, Flrida,
Mxico Central, Pas de Gales, Nova Zelndia, Romnia, Turquia e Amrica do Sul.
A doena est relacionada ao pastejo em reas pantanosas em que o pH prximo a
8 ou mais alto. O microrganismo mostra uma predileo por guas alcalinas. Animais
portadores podem introduzir o agente em reas no infectadas. A doena ocorre
principalmente durante o vero e outono.
O local da produo da toxina o fgado. A destruio heptica causada pela
migrao de larvas de F. hepatica que favorece a germinao dos esporos do C.
haemolyticum. A leso heptica importante na multiplicao bacteriana e sntese da
toxina com posterior ocorrncia de surtos de hemoglobinria bacilar em animais aps 2 a
3 dias da realizao de bipsias hepticas. Estudos experimentais em coelhos sugerem a
seguinte seqncia de eventos:
a) migrao das formas imaturas de F. hepatica, atravs do fgado, causando leses
em arterolas e necrose do parnquima heptico;
b) hipoxia e outras alteraes no fgado com necrose, induzindo a germinao de
esporos do C. haemolyticum presentes nas clulas de Kupffer;
c) as clulas vegetativas do C. haemolyticum produzem fosfolipase C que destri as
clulas de Kupffer, deixando as bactrias livres e
d) multiplicao de maior nmero de bactrias e, produo de mais fosfolipase C.
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A toxina beta liberada (fosfolipase C) no fgado causa hemlise macia
intravascular e leso capilar. A hemoglobina passa para a urina. H hemorragias na luz do
intestino como resultado da leso capilar. Os animais infectados separam-se dos demais.
Mostram-se arqueados com contrao da musculatura abdominal e dificuldade ao moverse. Respira com dificuldade e geme. Febre (40 a 41 C), hipotermia e morte. As fezes
mostram-se biliosas ou sanguinolentas. A urina torna-se avermelhada semelhante ao vinho
do Porto e espumosas ( albumina). No h hemcias ntegras na urina. Infartos no fgado
so as principais leses anatomopatolgicas. Esses infartos (tecido necrtico) variam de 5 a
20 centmetros de dimetro, redondos (petit pois) e de colorao mais clara. O infarto
pode ser localizado em qualquer parte do fgado como resultado da trombose de um dos
ramos da veia porta. Nos sinusides hepticos so encontrados grandes nmeros de
bactrias, contendo esporos terminais ou subterminais. As membranas serosas e o tecido
subcutneo apresentam grandes hemorragias, assim como os rgos parenquimatosos.

DIAGNSTICO LABORATORIAL
As leses hepticas so as melhores fontes de esfregaos positivos para o Gram e
prova de imunofluorescncia.
No cultivo, preciso Agar sangue recentemente preparado e condies de
anaerobiose estritas. O C. haemolyticum deve ser cultivado em meios contendo fgado. A
fosfolipase C (beta toxina) inoculada em cobaia por via intramuscular. Coelhos, cobaias e
camundongos so animais indicados na inoculao experimental, pois so sensveis
toxina. A inoculao subcutnea provoca hemorragia, edema e pouco ou nenhum gs, no
ponto de inoculao. A morte dos animais inoculados ocorre em um a dois dias.

TRATAMENTO
A doena caracterizada por morte sbita e, dificilmente tratada com
antimicrobianos. O tratamento precoce com antimicrobianos d bons resultados. O C.
haemolyticum sensvel penicilina G, ampicilina, ao cloranfenicol e s tetraciclinas.
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Antissoro pode ser utilizado como profilaxia e terapia (500 - 1.000 mL). Antissoro,
antitoxina e transfuso de sangue possuem pouco valor prtico pelas caractersticas
populacionais da doena.

PREVENO E CONTROLE
Cultivos formolados e precipitados (toxides) pelo alum so utilizados para
imunizao de bovinos. Em reas endmicas os animais devem ser imunizados a cada seis
meses. A vacinao deve ser repetida a cada 6 a 12 meses em reas endmicas.
O controle estratgico contra F. hepatica deve ser institudo como auxiliar no
controle da HB.

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Clostridium septicum
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Edema Maligno (EM)
Gangrena Gasosa (GG)

INTRODUO
O C. septicum foi a primeira espcie identificada do gnero Clostridium spp, sendo
denominada na poca de Vibrion septique, por Pasteur e Jubert, em 1877. Foi chamado
Bacillus oedematis maligni por causa de sua associao com o tipo de leso original
(Edema maligno), mas que agora chamado de Gangrena Gasosa (GG). As propriedades
do C. septicum so semelhantes ao C. chauvoei. Desse modo, o C. septicum tem sido
chamado de C. chauvoei tipo A e o C. chauvoei tem sido chamado C. chauvoei tipo B.
O Clostridium septicum est no solo e nas fezes dos animais domsticos. um
invasor aps a morte, particularmente nos ruminantes, podendo invadir o fgado quando
sofre migrao de larvas de F. hepatica (Gariev 1986). As infeces iatrognicas
(Harwood, 1984) so mais comuns em equinos do que em outras espcies, ocorrendo
tambm em infeces umbilicais em ovelhas. Braxy em ovinos e bovinos causada pela
invaso do C. septicum sobre mucosa abomasal lesionada pelo frio ou pela pouca qualidade
do alimento (Schamber et al. 1986). Necrose hemorrgica, edema e toxemia so achados no
abomaso e intestino delgado proximal (Ellis et al. 1983).
O agente est associado como causa do edema maligno dos animais domsticos e
homem decorrente de feridas traumticas, carcinoma oculto intestinal, diabetes melitos,
cirrose heptica e doena vascular perifrica (Chen et al. 2001). Mionecrose clostridiana
no traumtico incomum, mas fatal; com comeo sbito, taquicardia acumulo de gs nos
tecidos moles e formao de bolhas (Burke e Opeskin 1999). Hemorragia, edema e necrose
se desenvolvem rapidamente quando a infeco se espalha ao longo dos planos faciais. Dor,
edema de picada, crepitao do local, diminuio da temperatura, sugerindo perda da
circulao (Hickey et al. 2008) e curso clnico menor que 24 h. A fonte de infeco no
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homem geralmente intestinal com mortalidade de que varia entre 33% a 58% (Rechner et
al. 2001).
Os produtos txicos ou potencialmente txicos do C. septicum incluem toxina
(DNase, leukocidina), toxina (hialuronidase) (Princewill and Oakley, 1976); toxina
(hemolisina O2 lbil) e neuraminidase (Gadalla e Collee, 1968; Zenz et al. 1993), mas a
principal fator de virulncia a toxina (Tweten, 2001).
A toxina secretada como uma prototoxina com 46,450 Da que possui 72% da
sequencia de aminocidos semelhante estrutura primria da aerolisina da Aeromonas
hydrophila (Ballard et al. 1995). A atividade especfica da toxina aproximadamente 1,5
106 unidades hemolticas /mg e a LD 50 de aproximadamente 10 g/kg (Ballard et al.
1993). A toxina aparentemente liga-se aos receptores de protenas ncoras ao
glicofosfatidil inositol (Gordon et al. 1999). Ela ativada pela clivagem proteoltica do
fragmento cido do aminocido C-terminal; um propeptdeo que pode uma chaperona
intramolecular que estabiliza monmeros da toxina e as acompanha para a membrana
onde a ativao das proteases e oligomerizao so seguidas pela formao de poros na
membrana plasmtica (Ballard et al. 1993; Sellman and Tweten, 1997). Delees dos
domnios transmembranosos da toxina elimina a formao de poros e toda e qualquer
contribuio da toxina na patogenia da doena (Kennedy et al. 2009). A furina e outras
proteases eucariticas ativam in vivo a toxina na superfcie celular (Gordon et al. 1997).
O curso clnico curto e se foca na preveno e no tratamento. A morte seguida ao
desafio com o C. septicum retardada pela imunizao. A resposta conferida pelos
anticorpos aos toxides produz uma imunidade longa nos animais domsticos (Green et al.
1987; Hjerpe, 1990), embora possam existir diferenas na imunogenicidade dentre as
espcies de hospedeiros (Green et al. 1987). Segundo Knott e colaboradores, em 1985,
trabalhando com bovinos confinados, as perdas com mortes foi de aproximadamente 50%
dos vacinados com uma economia estimada em mais de (R$ 20,0) ($10) / animal devido
dupla vacinao e, com um custo mdio de menos de (R$ 0,50) ($0.25) / dose.

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DISTRIBUIO
O C. septicum habitante normal do solo e nas fezes de herbvoros e outras espcies
animais. Est associado ao "Braxy" e ao carbnculo sintomtico (poucas vezes) em bovinos
e ovinos; assim como na Gangrena Gasosa de feridas em bovinos, ovinos e do homem.

MORFOLOGIA E COLORAO
O C. septicum um bastonete grande; mede 2 a 10 m de comprimento e 0,4 a 1
m de dimetro; desenvolve filamentos curtos ou longos, podendo ser diferenciado do C.
chauvoei que no produz formas alongadas; pleomrfico, incluindo formas de cigarro,
formas gordas, formas de limo ou com extremidades puntiformes; esporo oval
(subterminal ou central) que deforma a clula bacteriana; flagelos peritrquios; mveis;
Gram positivo quando jovem, mas com o tempo torna-se Gram varivel; formas
pleomrficas coram-se irregularmente (nos plos e centro).

CARACTERSTICAS CULTURAIS
O C. septicum anaerbio estrito. Cresce bem nos meios comuns, sendo favorecido
pela adio de glicose. As colnias no meio slido so redondas e semitransparentes, mas
logo se torna maior, de colorao acinzentada, com bordos filamentosos e irregulares.
Possui crescimento em "ondas". Produz hemlise no meio de AS com hemcias de eqinos.
Esse clostrdio no meio de carne cozida produz colorao rsea da carne porque no h
digesto. A cultura produz odor ranoso. A gelatina liquefeita, mas o soro no digerido
aps cinco a sete dias de incubao. O meio de litmus milk sofre a fermentao do tipo
stormy. O leite coagulado aps quatro a cinco dias de fermentao.

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ANTGENOS E TOXINAS
O C. septicum produz quatro toxinas:
a) - alfa (lecitinase) necrotizante, hemoltica e letal.
b) - beta (dessoxiribonuclease), leucocida.
c) - gama (hialuronidase).
d) - delta (hemolisina).
A toxina mais importante a alfa. Ela fatal, necrotizante e tambm contm uma
hemolisina oxignio estvel.

ETIOPATOGENIA
A patogenia est relacionada com a produo das toxinas. A infeco de ferida
(denominada de edema maligno) irradia-se a partir do ponto de infeco em um perodo de
horas ou dias. O msculo adquire cor escura nos planos aponeurticos, desenvolvendo
hemorragia, edema e necrose. O msculo torna-se enfisematoso com aspecto semelhante ao
carbnculo sintomtico ou como a gangrena gasosa. As tumefaes crepitantes mudam de
dolorosas e quentes para indolores e frias.
Os sinais clnicos so: febre, taquicardia, anorexia e abatimento. O curso da
enfermidade rpido e mortal (um dia).
O Braxy dos escoceses e o Bradsot dos dinamarqueses fazem parte de uma
doena mortal em ovinos produzidas pelo C. septicum em clima frio. Produz uma leso na
parede do rmen semelhante ao tecido subcutneo. Os sinais clnicos so: toxemia e dor
abdominal. No Homem, a infeco de feridas devido ao C. septicum pode progredir at
celulite ou at gangrena gasosa.

DIAGNSTICO LABORATORIAL
O material deve ser processado o mais breve possvel, pois aps a morte h a
invaso dos tecidos pelo C. septicum. necessrio o diagnstico diferencial entre o C.
septicum e o C. chauvoei, podendo ser utilizada a imunofluorescncia.
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CONTROLE E PREVENO
O tratamento pode ser realizado com ATMs, incluindo penicilina e tetraciclina por
via sistmica e/ou local. O debridamento, drenagem e limpeza das leses com antisspticos.
Os bezerros devem ser imunizados aos 3-4 meses de idade e os cabritos e cordeiros na
poca do desmame. aconselhvel a vacinao anual. O controle pode ser obtido com a
vacinao com toxide (alfa).

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Clostridium chauvoei
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Carbnculo Sintomtico (CS)

INTRODUO
O Carbnculo Sintomtico (CS) e edema maligno compreendem o grupo das
mionecroses, clostridioses altamente fatais causadas por bactrias anaerbicas do gnero
Clostridium, que afetam o tecido muscular e subcutneo de ruminantes e outras espcies
animais.
Nos bovinos, o carbnculo sintomtico uma infeco endgena no contagiosa
produzida pelo C. chauvoei. Em contraste, o edema maligno nas diferentes espcies
animais susceptveis, uma doena exgena, relacionada com a presena de feridas na
pele, podendo ser causada pelo C. chauvoei, C. septicum, C. sordellii, C. novyi tipo A e C.
perfringens tipo A (Gyles, 1993).
O C. chauvoei foi chamado de C. feseri, Bacillus anthracis symptomatici ou
Bacillus carbonis uma importante causa de carbnculo sintomtico (CS) nos ruminantes.
Tem distribuio mundial e causa srios prejuzos econmicos.
Clostridium chauvoei causa carbnculo sintomtico uma miosite necrotizante
enfisematosa que parece edema maligno (Burke and Opeskin, 1999). Os animais infectados
desenvolvem febre alta anorexia depresso e claudicao com leses crepitantes e morte
sbita. Nas reas centrais da leso so geralmente secas e enfisematosas, mas nas reas
perifricas leso so edematosas, hemorrgicas, necrticas e a infiltrao leucocitria
pequena.
O papel da toxina e da toxina (ADNase) no so definidos (Ramachandran
1969). A expresso do flagelo est associada virulncia e sujeita a variao de fase
(Tamura et al. 1995 ); a imunidade antiflagelo (Kojima et al. 2000 ); anticorpos antiflagelos
idiotpicos imunizam o camundongo contra o desafio (Kijima-Tanaka et al. 1994).
Protenas recombinantes da flagelina no induziram proteo de camundongos contra o
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desafio (Kojima et al. 2000). O soro hiperimune obtido em equinos e penicilina pode ser
utilizado na terapia e na profilaxia da enfermidade.

MORFOLOGIA E COLORAO
O C. chauvoei um bastonete reto com bordos arredondados visto no tecido e no
cultivo; mede 3-8 m de comprimento e 0,6 m de dimetro; pleomrficos com
apresentao solitria ou em cadeias de trs a cinco organismos no exsudato peritonial das
cobaias inoculadas; esporo oval e excntrico semelhante ao limo; mveis (jovens) com
flagelos peritrquios; pleomrfico cora-se diferentemente quando jovens e quando
subcultivados.

CARACTERSTICAS CULTURAIS
So pouco exigentes. So estritamente anaerbios. A adio de sangue ou tecido
favorece o crescimento. Cresce bem em meios contendo infuso de fgado, pois requerem
cistena.
As colnias crescidas no AS so delicadas, esfricas, irregulares e compactas. So
pouco hemolticas, evidenciando uma estreita faixa de hemlise ao redor das colnias. No
caldo fgado, o seu crescimento mostra-se moderadamente turvo. Liquefaz a gelatina,
contendo um pouco de soro. Cresce no meio de soro-sangue coagulado e coagula a
albumina do ovo. O meio de carne cozida torna-se avermelhado e o fluido turvo. No h
digesto da carne e apresenta pouco gs. As culturas tm odor ranoso caracterstico.

ANTGENOS & TOXINAS


As principais toxinas produzidas pelo C. chauvoei so:
a) - alfa toxina (lecitinase), hemoltica, necrotizante e letal).
b) - beta toxina (ADNase)
c) - gama toxina (hialuronidase) e
d) - delta toxina (hemolisina)
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ETIOPATOGENIA
O C. chauvoei est distribudo no solo e trato intestinal dos herbvoros. A
sobrevivncia do agente no solo sob a forma de esporos o fator mais significante para a
transmisso aos bovinos, pois a ingesto de pastos contaminados com esporos constitui-se
na principal fonte de infeco.
Bovinos jovens, entre quatro meses e trs anos de idade, no mais alto nvel
nutricional so os mais susceptveis.
H duas manifestaes do carbnculo sintomtico nos bovinos. A forma clssica,
mais freqente e que atinge normalmente o tecido muscular esqueltico e a forma visceral,
raramente encontrada, afetando principalmente o corao (Uzal et al., 2003). A patogenia
do CS em bovinos, ainda incerta. Na forma clssica, a hiptese corrente que os esporos
presentes no intestino so veiculados por macrfagos at musculatura onde permanecem
em latncia. Traumas nas grandes massas musculares proporcionam um ambiente de baixo
potencial de xido-reduo, possibilitando a germinao dos esporos e a conseqente
produo de toxinas.
Acredita-se que as toxinas, em especial, a toxina alfa necrosante, mas tambm o
fator edema, a hialuronidase (gama), a ADNase (beta) a hemolisina oxignio lbil (delta) e
a neuraminidase so responsveis pelas leses iniciais. possvel que o processo txico
seja incrementado pelo metabolismo bacteriano, produzindo gs por processo fermentativo.
Nos bovinos, a enfermidade vem precedida da permanncia de esporos nos
msculos esquelticos e procedentes do intestino. Os fatores que favorecem a germinao
dos esporos, multiplicao das bactrias e produo de toxinas provocam a formao de
leses que se caracterizam por edema, hemorragia e necrose das miofibrilas. A parte central
da leso seca, que se escurece, tornando-se enfisematosa como conseqncia da
fermentao bacteriana mesmo com leso edematosa e hemorrgica, na periferia.
Animais (6 meses - 3 anos) gordos bem alimentados entrada incerta ??? oral
(pastejo) multiplica intestino linfticos circulao alfa toxina (necrotizante
leucocida) efeito difusor da toxina - hialuronidase - mionecrose (esponja)- toxina
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circulante toxemia fatal degenerao do corao e rgos parenquimatosos
bacteremia morte (1 a 2 dias).

SINAIS CLNICOS E LESES


Nos bovinos, o CS ocorre em animais em bom estado nutricional e com idade entre
6 meses e 3 anos. Estes fatores ocorrem em campos com histrico da doena. Alguns
animais apresentam morte sbita, outros evidenciam sinais de edema crepitante nas grandes
massas musculares.
Clinicamente, os animais apresentam temperatura elevada, anorexia, depresso e
manqueira quando o membro atingido. O local torna-se edematoso e, palpao,
observada crepitao decorrente das bolhas de gs produzidas pela multiplicao da
bactria. A evoluo para morte ocorre geralmente em at 72 horas. A leso acompanhada
por edema, hemorragia e necrose miofibrilar, exalando acentuado odor ranoso (Hateway,
1990). Em relao ao edema maligno nos bovinos, o mesmo apresenta sintomatologia
clnica, curso e leses macro e microscpicas bem semelhantes s do carbnculo
sintomtico clssico. Os animais tornam-se claudicantes e febris. A morte acontece
geralmente, aps 24 horas do incio dos sinais clnicos. Na poro central da leso h uma
rea bem definida de msculo com colorao mais escura, necrtica e com pequenas bolhas
de gs. Em volta desta rea, o tecido conetivo torna-se rseo com fluido amarelado ou
hemorrgico. H septicemia causada pelo agente, pouco antes da morte.

DIAGNSTICO LABORATORIAL
Isolamento de C. chauvoei difcil, uma vez que deve ser cultivado em estritas
condies anaerbias e as amostras esto freqentemente contaminadas com outras
bactrias anaerbicas que mascaram o C. chauvoei. O mtodo padro para deteco de C.
chauvoei baseada no cultivo. As quantidades de C. chauvoei so altas na maioria das
amostras do msculo de bovinos mortos pelo CS. No entanto, isso nem sempre o caso,
pois a flora contaminante pode impedir o cultivo. Antes de identificao bioqumica,
importante ter uma cepa controle. A deteco rpida e um sistema confivel na deteco do
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C. chauvoei so desejveis em amostras que contm uma flora mista. Exemplos de casos de
carbnculo so enviados para o laboratrio como o tecido muscular, pois este o material
mais fcil a partir da qual extrair uma cultura pura.
As amostras podem ser enviadas para o laboratrio como compressas de tecido
muscular infectado que podem no exigir isolamento de cultivo puro. As fezes podem
conter esporos e formas vegetativas que passam pelo sistema digestivo dos animais em
pastos contaminados. O diagnstico laboratorial pode identificar o C. chauvoei no msculo
lesionado ou no sangue cardaco, atravs de esfregao. Se a morte ocorreu recentemente,
devemos enviar osso longo de bovino ou ovino (metacarpo ou metatarso) em refrigerao
ao laboratrio.
As amostras inoculadas com crescimento em carne cozida ou Tarozzi devero ser
inoculadas em cobaias, para confirmao das leses e reisolamento do agente. No
laboratrio, a diferenciao entre o C. septicum e o C. chauvoei se do pelas caractersticas
morfolgicas e pela imunofluorescncia. Em esfregaos de tecidos infectados se podem
identificar bastonetes esporulados, atravs da IF.

TRATAMENTO
O tratamento para o CS contraditrio e, muitas vezes, impossvel de ser aplicado.
A medida de controle adotada no surto a imunizao de todos os animais com ou sem a
aplicao de penicilina de ao retardada.
O C. chauvoei sensvel a penicilina que pode ser utilizada concomitantemente ao
soro hiperimune no local da leso. Tetraciclinas e cloranfenicol podem ser empregadas nos
estgios iniciais da doena.

CONTROLE E PROFILAXIA
A imunizao preventiva dos animais evita o aparecimento de carbnculo
sintomtico e sua repercusso econmica. O toxide o cultivo inativado pelo formol e
precipitado pelo alum. A imunizao de bovinos inicia aos 3-6 meses e depois anual.
Embora a imunidade seja forte e adequada, aconselhvel a revacinao duas a trs
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semanas aps a primeira. A vacinao deve ser feita no vero e outono, conforme o manejo
aplicado. O soro hiperimune preparado em eqinos, geralmente no utilizado por razes
prticas e econmicas.
No Brasil, existe uma vacina viva comercializada e indicada para bovinos, ovinos e
caprinos. a nica vacina viva do mundo e produzida pelo laboratrio Manguinhos.

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Clostridium sordellii
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INTRODUO
O Clostridium sordellii um importante patgeno tanto do homem quanto dos animais
domsticos. A morte de pacientes ps-cirurgias geralmente devido substituio de
articulao do joelho. Este microrganismo pode causar tambm endometrites (ps-parto ou
espontnea) com comeo repentino, sinais de gripe, hipotenso refratria progressiva e
edema de progresso rpida. Os achados laboratoriais so de leucocitose acentuada e
hematcrito alto.
O curso clnico curto, levando a morte na maioria dos casos (Rorbye et al. 2000).
Recentemente, o C. sordellii foi associado endometrite e ao choque sptico ps uso
intravaginal de drogas como o misoprostol ou mifepristona (Aronoff et al. 2008). O C.
sordellii causa comum de fascite necrozante aps injeo de herona (Dunbar and Harruff
2007).
O C. sordellii foi um agente importante no intestino de bovinos acometidos da
sndrome de morte sbita (Manteca et al. 2001) e esta enterite foi experimentalmente
reproduzida (Al-Mashat e Taylor, 1983). A infeco causada pelo C. sordellii deve ser
diferenciada da peritonite aguda associada infeco umbilical dos ruminantes (Ortega et
al. 2007).
As toxinas letais e hemorrgicas so antignica e funcionalmente semelhantes s
toxinas B e A do C. difficile, respectivamente (Geny et al. 2007). O pulmo e corao so o
alvos preferenciais em camundongos inoculados com a toxina letal por via intraperitoneal e
leso das clulas endoteliais causaram aumento da permeabilidade vascular. O papel da
fosfolipase do C. sordellii na patogenia no bem conhecida (Karasawa et al. 2003). Ela
possui maior homologia fosfolipase do C. bifermentans do que com a toxina do C.
perfringens e sua atividade hemoltica foi menor que 1% que a do C. perfringens tipo A.
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A imunizao de cobaias com toxides (toxina letal e hemorrgica) protegeu contra
o desafio e ambas devem fazer parte do imungeno (Amimoto et al. 2001).
Uma reviso de 10 anos de registros do King County Medical Examiner's
detectou 87 mortes devido fascite necrotizante e infeces necrotizantes relacionadas aos
tecidos moles. Em 64 desses casos, havia dados suficientes para fornecer uma anlise das
manifestaes, microbiologia e fonte de infeco. Metade (32) dos casos foram devido
injeo de herona black tar, uma forma quase exclusiva de herona no noroeste dos
Estados Unidos. Destes, devido injeo de alcatro negro, 24 foram infeces
clostridianas com vrias espcies representadas, oito dos quais foram C. sordellii. Dos 32
casos no associados com a injeo de drogas, predominaram espcies de estreptococos,
com S. pyogenes isoladas em 14 casos. S no trs de 32 casos associados ao uso de drogas
injetveis foram infeces clostridianas. Essas diferenas foram estatisticamente
significativas. O S. aureus foi isolado de 14 casos, dois eram cepas resistentes meticilina.
No geral, 28 dos 64 casos eram infeces multimicrobianas, 15, devido injeo de
alcatro negro e 13 no associadas injeo de drogas. Este estudo permite concluir que a
fascte necrotizante, devido injeo de herona black tar uma clostridiose e desta
forma significativamente diferente da de fascete necrotizante, devido a outras causas.
O C. sordellii foi uma descoberta potencialmente importante nos intestinos de
bovinos com a "sndrome da morte sbita". Culturas puras de um isolado do C. sordellii
obtidos a partir de um caso de enterite hemorrgica em uma vaca de dois anos de idade
foram utilizadas para infectar os bezerros em trs experimentos. O C. sordellii deu incio a
um ligeiro aumento na temperatura retal e fezes moles com sangue e muco no prazo de um
a seis dias da inoculao em seis bezerros, em dois experimentos controlados. O C.
sordellii foi isolado nas fezes dos animais afetados, mas somente de seu intestino grosso ao
abate. Pequenas alteraes inflamatrias foram observadas no trato gastrointestinal. A
patognese da infeco do C. sordellii foi estudada experimentalmente em bezerros e o
filtrado da cultura reproduziu alteraes clnicas e patolgicas semelhantes aos produzidos
pela cultura geral. Nesses estudos, o organismo foi isolado da poro anterior do trato
gastrointestinal aps quatro dias da inoculao. As mudanas histolgicas produzidas
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consistiram em congesto discreta e alteraes inflamatrias na mucosa do jejuno e leo e
dilatao das criptas e dilatao capilar na mucosa do intestino grosso. A relao entre C.
sordellii e as mudanas observadas em infeces naturais e experimentais foi comparada
com s do C. difficile no homem.
A infeco pelo C. sordellii deve ser parte do diagnstico diferencial da peritonite
aguda eqina associada com infeco remanescente do cordo umbilical.
A anlise histopatolgica e bioqumica identificou os pulmes e o corao como
rgos alvo preferenciais pela toxina letal (LT). Extravasamento macio de sangue fluido
na cavidade torcica resultando num aumento da permeabilidade vascular do pulmo,
gerando profunda modificao como desidratao aumento do hematcrito, hipxia e
finalmente falncia cardiorrespiratria. O aumento da permeabilidade vascular induzida
pela LT resultado de modificaes das clulas endoteliais pulmonares quando evidenciadas
pela ME. A anlise imunoistoqumica demonstrou que a VE-caderina, uma protena
participante nas junes intercelulares foi redistribuda da membrana para o citosol nas
clulas endoteliais do pulmo. Nenhum sinal importante da inflamao induzida pela LT
foi observado que pudesse participar da sndrome do choque txico.
O principal efeito da LT a inativao de pequenas GTPases dependentes da
glicosilao, em particular Rac, que est envolvida na polimerizao da actina que ocorre
"in vivo" nos pulmes levando desestabilizao da juno da E-caderina. Concluindo que as
clulas mais suscetveis LT so as clulas endoteliais vasculares do pulmo. A toxina letal
(LT) e a toxina hemorrgica so antigenicamente e funcionalmente similares s do C.
difficile toxinas A e B, respectivamente. As leses preferenciais em camundongos
inoculados com a toxina letal por via intraperitoneal so pulmes e corao, alem de leso
das clulas endoteliais provocadas pela permeabilidade vascular. Toxina glicosilada letal,
Ras, Rac e Ral, diferem de outras grandes toxinas clostridianas na modificao da Ras.
O gene que codifica a enzima fosfolipase C do C. sordellii (CSP), foi clonada e
expressa como uma protena histidina-alvo (His-tag). A protena foi purificada para
comparar suas atividades enzimticas e biolgicas com as fosfolipases do C. perfringens e
do C. bifermentans. A fosfolipase do C. sordellii possui 371 resduos de aminocidos na
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forma madura e possuir maior homologia com a fosfolipase do C. bifermentans do que com
a fosfolipase do C perfringens A.
A atividade da hidrlise dos fosfolipdios (gema de ovo) foi cerca 30% menor do
que aquela observada no C. perfringens tipo A e somente 1% da atividade hemoltica. A
fosfolipase do C. sordellii txica para camundongos e a imunizao com C. bifermentans
ou C. sordellii no protege contra a fosfolipase do C. perfringens tipo A. Ela tem maior
homologia com a fosfolipase do C. bifermentans do que com a toxina do C. perfringens, e
sua atividade hemoltica menor 1% que a do C. perfringens tipo A.
A imunizao de cobaias com toxides da toxina letal (LT) e da toxina hemorrgica
(HT) protegeu contra o esporo desafio e ambos devem estar contidos no imungeno.

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