TCNICAS DE SEPARACIN E IDENTIFICACIN POR

CROMATOGRAFA
I. OBJETIVOS
Adquirir destreza en tcnicas de separacin e identificacin de pigmentos por
cromatografa.
Conocer los fundamentos fisicoqumicos involucrados en los procesos de
separacin por cromatografa.

II. FUNDAMENTO TERICO

CROMATOGRAFIA
La tcnica de cromatografa se basa en el principio general de distribucin de un
compuesto entre dos fases, una fija y una mvil. Esta tcnica se emplea no solo para
separar los componentes de una mezcla, sino tambin como criterio de pureza e
identificacin.

CROMATOGRAFIA DE ADSORCION
Particin entre las fases liquida activa y la slida estacionaria. El resultado de tales
separaciones depende principalmente de la eleccin de las fases adecuadas, las cuales
pueden dividirse en:
a) Fases normales

Fase estacionaria: polar (gel de slice, almina, celulosa, etc.).

Fase activa: no-polar, polar ( hexano-ter-metanol)

b) Fases reversas

Fase estacionaria: no polar (geles de slice modificados, nylon, poliestireno).

Fase activa: polar (metanol/agua/acetonitrilo)

CROMATOGRAFIA DE COLUMNA

Frecuentemente, las mezclas de sustancias orgnicas se preparan absorbiendo el

material disuelto en un pequeo volumen de disolvente, sobre una columna
de almina, eluyendo la columna con una sucesin de disolventes de poder eluyente
creciente, es decir, con capacidad creciente para desalojar las sustancias absorbidas. El
eluyente se recoge en fracciones numeradas, cada una de las cuales se evapora para
examinar el residuo. Si los componentes de la muestra son tipos qumicos diferentes,
algunos se eluyen al principio del proceso y otros en la fracciones medias y finales.

CROMATOGRAFIA DE CAPA FINA

Esta tcnica micro analtica emplea almina como adsorbente, lo mismo que en las
columnas cromatogrficas, pero en la forma de una capa fina sobre una placa de cristal.
El disolvente sube rpidamente hacia arriba por la capa fina y, en el caso de que la
sustancia sea un compuesto coloreado, pronto se observa una sola mancha, ya
caminando al mismo tiempo que el frente del disolvente o ms corrientemente, a alguna
distancia del comienzo de dicho frente. Se puede sacar el portaobjetos y rpidamente
marcar el frente antes de que el disolvente se evapore y calcular el valor del Rf. Si se
encuentran presentes dos compuestos coloreados y si seleccionan dos disolventes
apropiados, pueden aparecer las dos manchas.

III.DATOS Y RESULTADOS

Cromatografa en columna

Fase estacionaria
Almina

Acetona
ter de
petrleo
Mezcla ter
de petrleoacetona

Pigmentos separados
Amarillo
Verde(clorofila)
(beta-caroteno)

Cromatografa en capa fina

Fase estacionaria
Slice gel

Fase mvil

Fase mvil
ter de
Acetona
petrleo

ter de petrleo

Fase mvil
Acetona

Distancia
recorrida por
el solvente

Color de los
pigmentos
separados

Distancia
recorrida
(cm)

5.3
4.8

Amarillo
Verde
Amarillo
Verde N1
Verde N2
Verde N3
Verde N4

0.9
0
4.8
3
2.5
2
1

5.5

IV.DIAGRAMA DE FLUJO DE PROCESO

Mezcla ter de
petrleo-acetona

Rf(
Distancia recorrida por el compuesto

Distancia recorrida por el solvente

0.1875
0
0.8727
0.5455
0.4545
0.3636
0.1818

V. OBSERVACIONES
Cromatografa en columna
En la cromatografa en columna, la fase estacionaria era la almina.
Se observa que el pigmento en aparecer en la columna fue el pigmento de color
amarillo, cuando se utiliz el ter de petrleo como solvente.
De la misma manera, una vez obtenido el pigmento de color amarillo (beta-caroteno)
se cambi el ter de petrleo por la acetona, con el fin de obtener el pigmento de color
verde (clorofila).
La velocidad de obtencin de los pigmentos a travs de la columna pudo controlarse
mediante el uso del vaco.

Cromatografa en capa fina

En la cromatografa de placa fina, la fase adsorbente era la slica gel.
Una vez colocado una gota del extracto a separar en cada una de las placas, se procedi
a introducir la placas en los vasos de precipitado, donde se pudo observar el ascenso
de cada uno de los solventes(fase mvil) a travs de la slica gel.(fase estacionaria)
En la placa colocada en el vaso de precipitado que contena ter de petrleo, se
obtuvieron dos pequeas manchas, de color amarillo y verde.
En la placa colocada en el vaso que contena acetona solo se pudo observar el arrastre a
travs de slica gel de color verde del pigmento inicialmente colocado en la placa.
En la placa colocada en el vaso que contena una mezcla de ter de petrleo-acetona se
obtuvieron una mancha de color amarillo y cuatro manchas de distintos tonos de verde.

VI.

CONCLUSIONES
En la cromatografa de capa fina se puede concluir que la acetona no es un buen
solvente para lograr la separacin del extracto utilizado en la experiencia, en cambio,
con la mezcla ter de petrleo-acetona, se logr una mejor separacin de los
componentes de dicho extracto.
La movilidad del pigmento a separar depender del adsorbente, la temperatura,
estructura de dicho pigmento y del solvente.
Las fuerzas con que los pigmentos se fijan al adsorbente (slica gel) es debido a la
polaridad entre ellos.

 Adems se puede concluir que el valor de Rf nos indica el grado de retencin por el
adsorbente, por lo cual un valor pequeo de Rf nos indicar que dicho compuesto ser
ms difcil de eluir y por lo tanto se desplazar menos.
En la cromatografa en columna el ter de petrleo nos permiti la obtencin del
pigmento amarillo (beta-caroteno), ya que al ser el ter de petrleo un solvente no
polar, el beta-caroteno (sustancia no polar) se disolvi fcilmente en l a medida
que flua por la columna.
Debido a que la clorofila es una sustancia polar, fue ms retenido por la almina
(adsorbente polar) que el beta-caroteno (sustancia no polar).
Luego de haber concluido la obtencin del pigmento amarillo se procedi a obtener
la clorofila usando como solvente la acetona y debido a que la acetona es una
sustancia polar, la clorofila se disolvi fcilmente en ella a medida que flua por la
columna, mejorando el flujo de la clorofila a travs de la columna.

VII.

BIBLIOGRAFA
Brewster, Ray Q; Vanderwert, Calvin A; Mc Ewen, William (1977). Curso prctico de
qumica orgnica. Ed. Alhambra, Tercera edicin. Pg. 43-47
Tipos de cromatografa. Fecha de consulta: 28 de Setiembre del 2015.Disponible en:
http://blog.utp.edu.co/docenciaedwin/files/2014/09/TIPOS-CROMATOGRAF
%C3%8DA.pdf
Separacin por cromatografa en columna de pigmentos vegetales y sus espectros
de absorcin. Fecha de consulta: 28 de Setiembre del 2015.Disponible en:
http://www.bib.uia.mx/gsdl/docdig/didactic/IngCienciasQuimicas/lqoa003.pdf

VIII.

APENDICE

Cromatografa intercambio inico en la desmineralizacin del agua

El intercambio inico es una de las operaciones unitarias, que tienen como funcin la
separacin, que est basada en la transferencia de materia fluido-slido. Que involucra la
transferencia de uno o ms iones, de la fase fluida al slido por intercambio o
desplazamiento de iones de la misma carga, que se encuentran unidos por fuerzas
electrostticas a grupos funcionales superficiales. La eficacia del proceso depende del
equilibrio slido-fluido y de la velocidad de transferencia de materia. Los slidos suelen ser
de tipo polimrico, siendo los ms habituales los basados en resinas sintticas.
El intercambio inico est basado en la adsorcin, que es un proceso de separacin de
ciertos componentes de una fase fluida hacia la superficie de un slido adsorbente.
Generalmente pequeas partculas de adsorbente se mantienen en un lecho fijo mientras
que el fluido pasa continuamente a travs del lecho hasta que el slido est prcticamente
saturado y no es posible alcanzar ya la separacin deseada, con lo cual el lecho se ha de
regenerar.

La mayora de los adsorbentes son resinas, compuestos orgnicos de gran peso molecular
que tiene la propiedad de disponer de un residuo catinico o aninico intercambiable, y
gracias a su alta porosidad, la adsorcin puede tener lugar fundamentalmente en el interior
de las partculas, y aumentado as el rea de contacto. La separacin se produce debido a
la diferente afinidad de las resinas con los cationes y aniones que se desean eliminar, y por
tanto la buena eleccin del lecho favorecer la separacin de los iones y la eficacia
depender del equilibrio slido-lquido y de las velocidades de transferencia de materia.

Intercambio inico en lecho fijo

La operacin de intercambio inico se realiza habitualmente en semicontinuo, en un lecho
fijo de resina a travs del cual fluye una disolucin. El rgimen de funcionamiento no es
estacionario por variar continuamente la concentracin de los iones en cada punto del
sistema. Las instalaciones constan generalmente de dos lechos idnticos, de forma que si
por uno de ellos circula la disolucin que contiene los iones que se desea intercambiar, el
otro se est regenerando.
El siguiente grfico muestra el principio de la cromatografa de intercambio inico:

Al inicio de la operacin de un lecho, la mayor parte de la transferencia de materia tiene

lugar cerca de la entrada del lecho donde el fluido se pone en contacto con intercambiador
fresco. A medida que transcurre el tiempo, el slido prximo a la entrada se encuentra
prcticamente saturado y la mayor parte de la transferencia de materia tiene lugar lejos de la
entrada.
Debido a la resistencia que opone el sistema a la transferencia de iones desde el seno del
lquido a los centros de intercambio, se establece un gradiente de concentracin en el lecho
(Figura a). La regin donde ocurre la mayor parte del cambio de concentracin es la llamada
zona de transferencia de materia, esta zona separa la zona virgen de la resina y la de
saturacin y sus lmites frecuentemente se toman como C/Co = 0,95 a 0,05.

Figura a. Perfiles de concentracin en el lecho a lo largo del tiempo

A medida que progresa el intercambio inico la zona de transferencia de materia se

traslada en el lecho hasta alcanzar su extremo inferior (figura b), instante a partir del cual la
disolucin de salida contendr cantidades crecientes de los iones que se desea
intercambiar.

Figura b. Evolucin de la concentracin en un lecho de intercambio inico

El tiempo transcurrido desde el comienzo de la operacin en el lecho hasta que los iones de
la disolucin aparecen en la corriente de salida o ms concretamente, cuando se alcanza la
mxima concentracin permisible en el efluente, se denomina Tiempo de ruptura (tR).
En este momento, la corriente se desviara a un segundo lecho, iniciando el proceso de
regeneracin del primero. La curva que representa la evolucin de la concentracin del
efluente que abandona el lecho recibe el nombre de Curva de ruptura. (Figura c)
El conocimiento de la curva de ruptura, es fundamental para el diseo de un lecho fijo de
intercambio inico, y en general debe determinarse experimentalmente, dada la dificultad
que entraa su prediccin.

Figura c. Diagrama concentracin de efluente-tiempo