Tema 17: PROCESAMIENTO POST-TRANSCRIPCIONAL

Tipos de ARN: ARNm, ARNr, ARNt, ARNhn, ARNsn, ARNsc

Procesamiento en procariotas

Procesamiento en eucariotas
ARNm:

ARNr
ARNt

Adicin de caperuza y poli(A)

Edicin
Splicing y Splicing alternativo

Tipos de ARN
ARN funcionales (no se traducen a protenas)
- ARN ribosmico (rRNA).
- ARN de transferencia (tRNA).
- ARN pequeo nuclear (snRNA)
- ARN citoplasmtico pequeo (scRNA)

ARN informativos (se traducen a protenas)

- ARN mensajero (mRNA).
- ARN heterogneo nuclear (hnRNA).

cido Ribonucleico
ARN heterogneo nuclear (hnRNA)
Molcula precursora del ARNm en eucariotas. Es la molcula transcrita directamente del ADN.
Incluye secuencias codificantes (exones) y no codificantes (intrones). Este ARN ser procesado.

ARN mensajero (mRNA)

Eucariotas: molcula resultante del procesamiento del hnRNA.
Procariotas: molcula transcrita directamente del ADN.
Codifican para una o varias protenas. Su secuencia de nucletidos es traducida en una secuencia
de aminocidos en el proceso de la traduccin.
Incluye formas muy heterogneas tanto en tamao como en secuencia.
Existe, en general, una molcula de mRNA para cada gen o grupo de genes que codifique
una protena

Es el menos abundante de todos los ARNs celulares.

En E. coli. Representa entre el 2 y el 5 % del total del ARN celular

Tipos de ARNs en la clula eucaritica

ARN mensajero
ADN: ncleo

Sntesis protica: citoplasma

Mensajero de vida muy corta

entre el ncleo y el citoplasma

* Es el molde para la sntesis de protenas

* Polinucletido.
* Composicin reflejo de la del ADN que lo especifica.
* Heterogneo en tamao.
* Asociado transitoriamente con los ribosomas.
* De sntesis y degradacin rpida.

Concepto de mRNA introducido por

Franois Jacob y Jacques Monod
en 1961.

Tipos de ARNs en la clula eucaritica

ARN ribosmico (rRNA)

Es el ms abundante en la clula (75%).
Componente de los ribosomas. Funcin estructural
Funcin cataltica en la sntesis de protenas (Ribozimas).

Diferentes tipos en funcin de sus coeficientes de sedimentacin.

16S
Procariotas

+ 21 polipptidos

23S +
5S

34 polipptidos (subunidad ribosmica grande: 50S).

18S + 30 polipptidos

Eucariotas

(subunidad ribosmica pequea: 30S)

(subunidad ribosmica grande: 50S).

(subunidad ribosmica pequea: 40S).

28S
(subunidad ribosmica grande: 60S).
5,8S + 49 polipptidos (subunidad ribosmica grande: 60S).
5S
(subunidad ribosmica grande: 60S).

Tipos de ARNs en la clula eucaritica

ARN de transferencia (tRNA)

ARN pequeo con unos 75 nucletidos de media.
Transporte de aminocidos activados hasta el ribosoma.
Proceso de traduccin del mRNA.
Al menos un tipo de tRNA para cada uno de los 20 aminocidos.
Algunos aminocidos tienen varios tRNAs: Leu y Arg (6 cada uno)
Todos los tRNAs presentan en su extremo 3 la secuencia de nucletidos CCA.
Extremo aceptor del aminocido.

Tipos de ARNs en la clula eucaritica

ARN pequeo nuclear (snRNA)

Son secuencias pequeas de unos 150 nucletidos de media.
Se asocian con protenas especficas formando los Snurps
Participan en el proceso de eliminacin de intrones y unin de exones (ARNm).
Forman parte de los Espliceosomas: Complejos dinmicos grandes formados por Snurps, protenas
denominadas factores de empalme, y los pre-mRNA que se van a procesar.
.

ARN citoplasmtico pequeo (scRNA)

ARN de unos 300 nucletidos 7SL RNA que forma parte del SRP (Signal Recognition Particle).
Partician en el envo de protenas a su destinos finales

Procesamiento de RNA
Procesamiento en procariotas
* RNA ribosmico
* Metilacin
* Rotura nucleoltica
* RNA mensajero
* No modificado
* RNA transferente
* Rotura en 5- y 3* Adicin de CCA
* Modificacin de bases

Procesamiento en eucariotas
* RNA ribosmico (RNA polimerasa I)
* Metilacin
* Rotura nucleoltica
* RNA mensajero (RNA polimerasa II)
* Caperuza 5
* Poliadenilacin 3
* Eliminacin de intrones
* Edicin del ARN

(maduracin o splicing nuclear)

* RNA transferente (RNA polimerasa III)

* Rotura en 5- y 3* Adicin de CCA
* Modificacin de bases
* tRNA splicing

Procesamiento en procariotas
ARNm

Prcticamente no experimentan ningn tipo de maduracin en procariotas.

ARNt y ARNr:

Endonucleasas
1-RNAasa III
2-RNAasa P
3-RNAasa E

Exonucleasas

Se originan por escisin de un mismo

transcrito primario.

Procesamiento en procariotas

ARNt

RNasa D

RNasa P
Modificacin de bases
Escisin en 5
Escisin en 3
Adicin de CCA

Procesamiento en eucariotas

Esquema de un RNA mensajero maduro

Procesamiento en eucariotas
En los extremos del transcrito pre-mRNA se sita una cofia en 5 y una
cola de poli(A) en 3

pre-mRNA

Procesamiento en eucariotas

Modificacin del extremo 5de la cadena de ARNm durante la transcripcin por

adiccin de una cofia.

ARNm

Cofia 0

Hidrlisis del extremo 5trifosfato (RNA-trifosfatasa)

Formacin de un enlace 5-5-trifosfato entre

extremo 5-difosfato y el fosfato-
de un GTP.
(guanililtransferasa)

Metilacin del N7 de la guanina terminal

guanina-7-metil transferasa
(S-adenosilmetionina).

Cofia 1
2-O-metil
transferasa

Cofia 2

Procesamiento en eucariotas

ARNm

Funciones de la cofia en 5:

Marca el extremo 5 para el procesamiento del

primer exn

Esencial para el transporte del mRNA entre el

nucleo y el citosol. Interaccin con protenas
nucleares.

Aumenta la eficiencia de la traduccin.

Interviene en la formacin del complejo de
pre-iniciacin (cytoplasmic cap-binding proteins)

Protege de la actividad de exonucleasas 53

Procesamiento en eucariotas

ARNm

Poliadenilacin en el extremo 3

1. Una endonucleasa especfica reconoce la

secuencia AAUAAA en el pre mRNA
2. Una poli(A) polimerasa aade unos 250
residuos al extremo 3.
El ATP sirve de donador

La poliadenilacin ocurre antes de que

el transcrito se disocie de la ARN
polimerasa II

Cul es el papel fisiolgico de la cola de poli A ?

Confiere estabilidad a frente a la accin de nucleasas.
Facilita y aumenta la efectividad de la traduccin del ARNm
Relacin inversa entre velocidad de degradacin de la cola de poli A y vida media de una molcula de ARNm.

Procesamiento en eucariotas

Modificacin post-transcripcional o correccin del ARN mensajero (RNA editing)

Modificacin a posteriori de la
secuencia del
transcrito. Puede
afectar a uno o a varios nucletidos.

La modificacin del nucletido

puede acarrear un cambio de
aminocido y que ste afecte a la
estructura o la funcin de la
protena.
Ej: Apo B-100 ,Apo B-48.

Se sintetiza en hgado.
Participa en el transporte
de lpidos celulares

-Desaminacin de citidina, generando uridina

- cambio del codn: CAA (Gln)  UAA(stop)

No puede unirse al receptor de

la LDL de la superficie celular
Se sintetiza en intestino delgado
Transporte de grasa de la dieta

Procesamiento en eucariotas

Eliminacin de los intrones: splicing

El pre-ARN mensajero est formado por secuencias codificantes denominadas
exones separados por secuencias no codificantes denominadas intrones.

El proceso de eliminacin de los intrones se realiza en el ncleo, mediante un

mecanismo muy complejo denominado splicing.

Procesamiento en eucariotas

Estructura de los intrones

Secuencia variable en longitud (50 a 10.000 pb). Todos comienza con GU y termina con AG.

En vertebrados la secuencia consenso es:

Extremo 5: AGGUAAGU
Extremo 3: 10 pirimidinas (U o C), N, C y la secuencia AG.

GU-AG

Todos los intrones poseen una secuencia interna importante que se denomina centro de ramificacin.
Esta secuencia se situ entre 20 y 50 nucletidos secuencia arriba del sitio de empalme 3.

Los puntos de corte y empalme se especifican mediante las secuencias situadas en

los extremos de los intrones

Procesamiento en eucariotas

Cmo se unen los exones ?

Implica la rotura y formacin de nuevos enlaces fosfodiesteres

Ataque nucleoflico al
5del segundo exn
Extremo 3OH
libre del exn 1

Formacin enlace
fosfodiester 5-3

Ataque nucleoflico
(2-5-fosfodister)

Precursor
Lazo intermedio

Dos reacciones de
transesterificacin

Generacin de un grupo 3-OH

libre en el extremo 3en el exn 1

Producto

Unin del grupo 3-OH con el

grupo fosfato 5del exn 2

Procesamiento en eucariotas

Cmo se unen los exones ?

Los RNAs nucleares pequeos (snRNAs) de los espliceosomas catalizan el

empalme de los precursores de mRNA
Espliceosoma: Complejos dinmicos grandes (60S) que se forman durante la maduracin del mRNA
Formados por:
- snRNPs o snurps: asociaciones de snRNAs y protenas
- Cientos de protenas factores de empalme
- los pre-mRNA que estn madurando

Reconocen sitios de unin 5y 3de los exones

as como los puntos de ramificacin.

Unin de U2-snRNP al
centro de ramificacin
Unin de U1-snRNP al
sitio 5de splicing 5

snRNAs: U1, U2, U4, U5, U6

Procesamiento en eucariotas

Clulas de mamfero

Asociacin del complejo U4/U6 U5,

previamente formado al complejo
U1-U2 (espliceosoma inactiva ).

Interaccin de U5 con la secuencia

del exn en el centro de corte y unin 5.

Liberacin de
U2,U5,U6-intrn (lazo)

U5 interacciona con el exon en 3 .

Ataque nucleflico
grupo 3-OH del exn 1 al centro de emplame del exn 2.
U6 se disocia de U4.
U6 se reordena e interacciona con U2
y el extremo 5 del intrn
Separacin de U1 (spliceosoma
activo)

Se forma el lazo U2-U6: centro cataltico

Primera reaccin de transesterificacin
Ataque nucleflico del OH 2 del adenilato
U5 alinea el exn libre en 5 con el
situado en 3

Procesamiento en eucariotas

La maduracin est catalizada principalmente por molculas RNA

(Ribozimas), con las protenas desempeando un papel secundario

Procesamiento en eucariotas

Splicing alternativo
1. Mecanismo que crea diversos ARN maduros a partir de un mismo gen,
mediante corte y empalme de distintas combinaciones de exones.
2. La seleccin que controla qu centros de cortes y empalmes son
elegidos, viene determinada por la unin de factores de
maduracin.
3. Se generan distintas formas de una protena segn el tejido, estado
de desarrollo, va de sealizacin

Mecanismo que genera diversidad proteica

En el genoma humano, la mayor parte de los

pre-mRNA experimentan splicing alternativo

Procesamiento en eucariotas

Splicing alternativo

Gen de la Calcitonina

Protena relacionada con el gen de la calcitonina

Procesamiento en eucariotas

ARNr

Las molculas de ARN ribosmico se forman por rotura de transcritos primarios

RNA polimerasa III (nucleoplasma)

RNA polimerasa I (nucleolo)

snoRNPs

Procesamiento en eucariotas

ARNt
RNA polimerasa III

Sufren una escisin de una secuencia gua 5.

Eliminacin de un intrn de 14 nucletidos.
Sustitucin del extremo terminal 3UU por CCA.
Modificaciones qumicas de bases y ribosa.

RNasa P

endonucleasa
ligasa