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La tinción de Gram es un método de tinción diferencial que permite distinguir entre bacterias Gram positivas y Gram negativas en función de su reacción a la decoloración. Las bacterias Gram positivas retienen el colorante después de la decoloración debido a su gruesa capa de peptidoglicano, mientras que las bacterias Gram negativas se decoloran por su delgada capa de peptidoglicano.
La tinción de Gram es un método de tinción diferencial que permite distinguir entre bacterias Gram positivas y Gram negativas en función de su reacción a la decoloración. Las bacterias Gram positivas retienen el colorante después de la decoloración debido a su gruesa capa de peptidoglicano, mientras que las bacterias Gram negativas se decoloran por su delgada capa de peptidoglicano.
La tinción de Gram es un método de tinción diferencial que permite distinguir entre bacterias Gram positivas y Gram negativas en función de su reacción a la decoloración. Las bacterias Gram positivas retienen el colorante después de la decoloración debido a su gruesa capa de peptidoglicano, mientras que las bacterias Gram negativas se decoloran por su delgada capa de peptidoglicano.
La tincin de Gram es un mtodo que no tie igualmente todas las
clulas, es un proceso denominado tincin diferencial. La tincin de este tipo ms extensamente utilizada es la tincin de Gram, denominada as por el bacterilogo dans Hans Christian Gram, quien la desarrollo. Sobre la base de su reaccin a la tincin de Gram, las bacterias pueden dividirse en dos grupos, Gram positivas y Gram negativas. Debido a su importancia en taxonoma bacteriana ya que indica diferencias fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias, describiremos aqu con cierto detalle la tincin de Gram. Las clulas fijadas al calor sobre un portaobjetos se tien primero con una solucin de cristal violeta (otros colorantes bsicos no son tan efectivos) y son lavadas despus para quitar el exceso de colorante. En este estado todas las clulas, tanto las Gram negativas como las Gram positivas, estn teidas de azul. El portaobjetos se cubre entonces con una solucin de yodo (I2) yoduro potsico (KI). El ingrediente activo es aqu el yodo, el yoduro potsico simplemente hace soluble el yodo en agua. El yodo entra en las clulas y forma un complejo insoluble en agua con el cristal violeta. De nuevo tanto las clulas Gram positivas como las Gram negativas se encuentran en la misma situacin. Se lleva a cabo despus de la decoloracin, usando bien alcohol o bien acetona, sustancias en las que es soluble el complejo yodo cristal violeta. Algunos organismos (Gram positivos) no se decoloran mientras que otros (Gram negativos) lo hacen. La diferencia esencial entre esos dos tipos de clulas est, por lo tanto, en la resistencia a la decoloracin. Despus de la decoloracin las clulas Gram positivas son todava azules, pero las Gram negativas son incoloras. Para poner de manifiesto las clulas Gram negativas se utiliza una coloracin de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina bsica. Despus de la coloracin de contraste las clulas Gram negativas son rojas mientras que las Gram positivas permanecen azules. Deben destacarse dos aspectos cruciales de la tincin de Gram: 1) El tratamiento con cristal violeta debe preceder al tratamiento de yodo. El yodo por s solo tiene poca afinidad con las clulas. 2) La decoloracin debe realizarse con poco agua para evitar que pierdan la tincin las clulas gram positivas. El proceso de decoloracin debe ser corto y es esencial un clculo preciso del tiempo para obtener resultados satisfactorios. Finalmente, el carcter de gram positivo no es siempre un fenmeno del todo o nada. Algunos organismos son ms gram positivos que otros y algunos son gram variables, es decir, unas veces gram positivos y otras gramnegativos.
La tincin de Gram es uno de los mtodos de tincin ms importantes
en el laboratorio bacteriolgico. Microorganismos Gram. Positivos Las eubacterias Gram. Positivas son clulas con una gruesa pared celular de peptidoglucano. Ests clulas poseen una membrana citoplasmtica con fosfolpidos y protenas. Por fuera de la membrana citoplasmtica se encuentra la pared celular que est compuesta por una ancha capa de peptidoglicano. A su vez, estas cadenas se encuentran unidas entre s mediante pptidos, que son pequeas cadenas de aminocidos que se entrecruzan. Estos puentes peptdico son caractersticos de las distintas bacterias y presentan mayor rigidez cuanto ms completo sea el entrecruzamiento. El peptidoglicano es una malla porosa que otorga forma y rigidez a la clula, y evita que la clula estalle en medios hipotnicos. Al ser porosa permite el paso de nutrientes desde el exterior y el movimiento de enzimas catalticas y productos de secrecin hacia el exterior de la clula. Microorganismos Gram Negativos Las eubacterias Gram. Negativas son clulas con una delgada capa de peptidoglicano y una segunda envoltura denominada membrana externa. Las clulas se encuentran envueltas por una membrana citoplasmtica formada por una bicapa fosfolipdica y protenas. Por encima de esta membrana se encuentra una fina capa de peptidoglicano que se halla unida a unas lipoprotenas de anclaje que fijan la membrana externa. El Mordiente: El mordiente es una sustancia empleada en tintorera que sirve para fijar los colores en los productos textiles. La funcin del mordiente es favorecer la fijacin del colorante en las fibras. Este trmino es usado principalmente en la industria textil para designar a aquellas sales metlicas (de aluminio, hierro, plomo) tambin sustancias orgnicas (casena, gluten, albmina).Tambin existen mordientes que sirven para fijar colorantes en tinciones biolgicas de clulas animales o vegetales. Que en esta oportunidad ser para los microorganismos como Bacillus sp, Staphylococcus sp, y E. coli La observacin microscpica puede realizarse a partir de una muestra (examen directo) y se debe tener en cuenta.
1.- Examen al Fresco. (Microorganismos vivos) Se utiliza normalmente
para ver movilidad de las bacterias. En el caso de hongos y protozoos, permite determinar adems caractersticas morfolgicas.
6. Fundamente como la Gram positiva mantiene el color
primario.
La tincin de Gram es una tincin diferencial que permite
distinguir bacterias Gram positivas de Gram negativas, que es posible gracias a la naturaleza fsica de sus paredes celulares. El peptidoglicano no se tie propiamente, ms bien acta como una barrera de permeabilidad para evitar la prdida de cristal de violeta. Durante el proceso las bacterias se tien primero con cristal y luego se trata con yoduro (lugol) para favorecer la retencin del colorante. Cuando a continuacin se decolaran las bacterias Gram positivas con etanol o acetona, se cree que el alcohol contrae los poros de la gruesa capa de peptidoglicano. En consecuencia, el complejo colorante-iodo no es eliminado durante la fase de decoloracin y las bacterias Gram positivas continuaran de color azul. Por el contrario la capa de peptidoglicano de las bacterias Gram negativas es muy fina, sin tantos enlaces y con poros de mayor tamao, adems, tambin es posible que el tratamiento con alcohol extraiga suficientes lpidos de la envoltura de las clulas Gram negativas, como para aumentar su porosidad. Por estos motivos, el alcohol elimina ms fcilmente el complejo cristal violeta-yodo de las bacterias Gram negativas. Bibliografa: