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FACULTAD DE CIENCIAS FARMACÉUTICAS Y BIOQUIMICA “EXTRACCION CASERA DEL ADN” CURSO: bioquímica DOCENTE: Dr. Herles MENDOZA

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACÉUTICAS Y BIOQUIMICA

“EXTRACCION CASERA DEL ADN”

CURSO:

bioquímica

DOCENTE:

Dr. Herles MENDOZA CESPEDES

ALUMNA:

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACÉUTICAS Y BIOQUIMICA “EXTRACCION CASERA DEL ADN” CURSO: bioquímica DOCENTE: Dr. Herles MENDOZA

MARCELO BONILLA ANGELA

TURNO:

noche

AULA:

2X

LIMA –PERU

2016

EXTRACCION CASERA DEL ADN

I.

INTRODUCCIÓN

El ADN (y también algo de ARN) aparecerá entonces como un agregado de fibras blanquecinas de aspecto mucoso que se adhieren a una varilla de vidrio o a la pipeta. Podemos añadir unas gotas de azul de metileno o verde de metilo al tubo para teñirlo. Por último, se puede situar sobre un porta, teñirlo de la misma manera y observarlo al microscopio. También se puede conservar dejándolo secar sobre papel de filtro o suspendido en alcohol al 50% o 70%.

El ADN y ARN son biomoléculas que intervienen en el almacenamiento y la transferencia de la información genética. Son componentes fundamentales de la célula y constituyen en conjunto, entre el 5 y el 10% del peso seco. Normalmente no se encuentran solos sino que se hallan formando núcleo proteínas, ya que suelen unirse a determinados tipos de estas, como las histonas. El ARN se localiza tanto en el citoplasma celular como en el núcleo, mitocondrias y cloroplastos, mientras que el ADN se sitúa fundamentalmente en el núcleo de la célula y también cloroplastos y mitocondrias en pequeñas cantidades. Poseen una importancia manifiesta por el hecho de que ellos dirigen y llevan a cabo la síntesis de proteínas, y por tanto de las enzimas necesarias para el funcionamiento celular. Por otra parte el ADN es el vehículo de la herencia que se transmite de padres a hijos de generación en generación.

II.

OBJETIVO:

Observar sin ayuda de ningún instrumento óptico, el ADN, utilizando materiales caseros cuyo gasto no es alto.

III.

MARCO TEÓRICO:

La extracción es un procedimiento de separación en el que el soluto de una disolución se distribuye entre dos líquidos inmiscibles, generalmente uno acuoso y otro orgánico. La extracción es una de las técnicas más empleadas para separar compuestos orgánicos de la disolución eso suspensiones acuosas en las que se encuentran. Para ello, se agita la mezcla con un disolvente orgánico inmiscible con el agua y se dejan separar ambas capas. De este modo, el soluto presente se distribuye entre las fases orgánica y acuosa de acuerdo con sus solubilidades relativas, siendo la relación entre la concentración de la sustancia en ambos disolventes el llamado coeficiente de distribución o de reparto. El ADN lleva codificada la información genética. En las células eucariontes como son las del hígado de res, se encuentra asociado a proteínas histonas formando la cromatina. Esta se encuentra totalmente condensada con el fin de ocupar el mínimo volumen posible en el interior de la célula. En la práctica se obtienen buenos resultados realizando tres o cuatro extracciones consecutivas con un volumen de disolvente orgánico aproximadamente tres veces menor que el de la fase acuosa. La elección de disolvente depende de la naturaleza de la sustancia que se desea extraer y de su solubilidad en dicho disolvente.

IV. Materiales Hígado de pollo.

Licuadora. Vaso de precipitación. Tubo de ensayo. Recipiente de vidrio o plástico.

Sustancias

Agua Enzimas (jugo de piña).

Detergente liquido

EXTRACCIÓN CASERA DEL ADN

 Licuadora.  Vaso de precipitación.  Tubo de ensayo.  Recipiente de vidrio o plástico.

V.

PROCEDIMIENTO

Extracción de ADN de la cebolla y el tomate:

PROCEDIMIENTO:

Realizamos exactamente

lo

mismo que

con

el

hígado

de

pollo

a

diferencia que lo los dos vegetales procederemos a licuarlo CON AGUA FRIA.

PROCEDIMIENTO:  Realizamos exactamente lo mismo que con el hígado de pollo a diferencia que lo
PROCEDIMIENTO:  Realizamos exactamente lo mismo que con el hígado de pollo a diferencia que lo

Luego filtrar ambos vegetales

PROCEDIMIENTO:  Realizamos exactamente lo mismo que con el hígado de pollo a diferencia que lo
PROCEDIMIENTO:  Realizamos exactamente lo mismo que con el hígado de pollo a diferencia que lo
PROCEDIMIENTO:  Realizamos exactamente lo mismo que con el hígado de pollo a diferencia que lo

Luego lo colocamos en el recipiente de precipitación y le agregamos 50 mL de detergente o TAMPON líquido y lo revolvemos con ayuda de una bagueta sin formar espuma, lo dejamos reposar durante 5 a 10 minutos. Finalmente colocamos la mezcla en tres tubos de ensayo.

 Luego añadimos una cucharada de enzimas (jugo de papaya) a cada envase y lo revolvemos

Luego añadimos una cucharada de enzimas (jugo de papaya) a cada envase y lo revolvemos con cuidado y lentamente por unos 5 minutos.

 Luego añadimos una cucharada de enzimas (jugo de papaya) a cada envase y lo revolvemos

Cebolla

Pudimos observar que el tomate no se observó muy bien su ADN a comparación de la cebolla que se observó mucho mejor el ADN.

OBSERVACIÓN

Observamos que el ADN en si está formada por una doble hélice.

RECOMENDACIONES

Que al momento de revolver las mezclas lo hagamos con mucha cuidado o si no romperemos el ADN.

RECOMENDACIONES Que al momento de revolver las mezclas lo hagamos con mucha cuidado o si nog ente contiene lauril sulfato de sodio, el cual limpia los trastes removiendo grasas y proteínas. Éste actúa de la misma manera en el protocolo de extracción de ADN, separando las " id="pdf-obj-6-6" src="pdf-obj-6-6.jpg">

DISCUSION:

El producto filamentoso obtenido de la extracción no es ADN puro ya que, entremezclado con él, hay fragmentos de ARN. Una extracción "profesional" se realiza añadiendo enzimas que fragmentan las moléculas de ARN e impiden que se unan al ADN. Para realizar una extracción pura ocurrirá que el detergente contiene lauril sulfato de sodio, el cual limpia los trastes removiendo grasas y proteínas. Éste actúa de la misma manera en el protocolo de extracción de ADN, separando las

grasas (lípidos) y las proteínas que constituyen las membranas que rodean la célula y el núcleo. Una vez que estas membranas se han roto, el ADN es liberado de la célula El calor suaviza los fosfolípidos (grasas) en las membranas que rodean la célula y el núcleo. También desactiva (desnaturaliza) a las enzimas desoxirribonucleicas (ADN asas) las cuales, si están presentes, pueden cortar el ADN en pedazos tan pequeños que lo haría imposible de ver. Si las enzimas se desnaturalizan y el ADN se desenrolla, éste pierde su forma y se vuelve inactivo. Las enzimas se desnaturalizan a 60° Celsius y el ADN se desnaturaliza a 80° Celsius. Los zumos de piña y papaya contienen un enzima, la papaína, la solución ablandadora de carne también actúa como una enzima, que contribuye a eliminar las proteínas que puedan contaminar el ADN. La solución ablandadora de carne actúa como una enzima. El ADN se precipita en el alcohol fuera de la solución, donde puede ser visto. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa.

El proceso de extracción de ADN desde una célula es el primer paso para muchos procedimientos (protocolos) de los laboratorios de biotecnología. Los científicos deben ser capaces de separar suavemente el ADN de sustancias no deseadas que se encuentran en las células, evitando que el ADN se desnature (que se rompa). El material que se necesita para ello es fácil de encontrar y el procedimiento es sencillo .Cada uno de los ingredientes tiene su propia función. La solución de sal y jabón sirve para romper la membrana plasmática y nuclear e incluso la pared celular. El líquido de lentillas elimina las proteínas que degradan el ADN. El alcohol etílico sirve para precipitar el ADN. Factores que afectan el rendimiento, calidad y pureza del ADN:

Cantidad de material de partida Número de copias de las moléculas de AN Cantidad de tejido.

Condiciones en las que se encuentra el material de inicio(fresco, congelado, fijado) Contaminantes e interferentes en el material biológico.

CONCLUSIONES

Aquí ya se observa la culminación de la Extracción del ADN en la cual el ADN asciende hasta llegar al alcohol, en lo cual también se observó que las proteínas y las grasas se quedan en la parte acuosa de la mezcla.

La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas. En primer lugar tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol. La solución de lavavajillas y sal ayudada por la acción de la licuadora es capaz de romper la pared celular y las membranas plasmática y nuclear.

Los zumos de piña y papaya contienen un enzima, la papaína, que contribuye a eliminar las proteínas que puedan contaminar el ADN.

El alcohol se utiliza para precipitar el ADN que es soluble en agua pero, cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interfase entre el alcohol y el agua.

CUESTIONARIO

1. ¿Por qué el jugo de piña actúa como una enzima?

Porque la piña contiene papaína, sustancia que degrada las proteínas.

2. ¿Por qué utilizamos alcohol para separar el ADN células?

de

las

El ADN es una molécula muy larga y tiende agruparse. De ahí la facilidad para retirarla. Para aislar el ADN hay que hacer que precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol precipita en la interfase entre el alcohol y el agua. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa.

  • 3. qué

¿Para

sirve

la

pizca

de

sal

que

ponemos

en

la

mezcla?

La sal en disolución actúa disminuyendo la solubilidad de las proteínas, lo que hace que precipiten y se separen más fácilmente del ADN.

  • 4. ¿Para qué utilizamos el detergente? El detergente (O gel o champú) utilizado en el experimento tiene como función destruir las membranas celulares del tejido vivo que estamos utilizando; el detergente disuelve las grasas, que es el componente principal de la membrana plasmática y nuclear de las células (es el mismo principio por el que el gel limpia la grasa de nuestra piel). Al romperse las membranas celulares se permite la salida del ADN al exterior. La licuadora ayuda en la rotura de estas células.

  • 5. ¿Para qué se utiliza el alcohol? El ADN es una molécula muy larga y tiende agruparse. De ahí la facilidad para retirarla. Para aislar el ADN hay que hacer que precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol precipita en la interfase entre el alcohol y el agua. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa.

  • 6. ¿Para qué se añaden enzimas o zumo de piña? Las enzimas son unas sustancias que atacan a las proteínas de las células, lo que permite romperlas y separarlas del ADN, que es el material que buscamos. Si no disponemos de enzimas, podemos utilizar

zumo de

piña

(el

cual contiene papaína, sustancia que degrada las

proteínas).