LOS CROMOSOMAS Y EL CARIOTIPO

Los cromosomas son las estructuras en que se organiza la cromatina nuclear y que tienen
una expresin dinmica en las distintas fases del ciclo celular. En la mitosis estas
estructuras comienzan un proceso de compactacin que alcanza su mximo nivel en la
metafase. Los cromosomas se tien fcilmente cuando estn condensados y pueden ser
individualizados con el microscopio ptico. Cada cromosoma contiene una molcula de
ADN lineal asociado a distintas protenas y el contenido de genes es variable aunque est
en relacin con su tamao. Por eso, cualquier alteracin en el nmero o la estructura de
los cromosomas puede ser causa de enfermedades. Para la deteccin de estas
alteraciones se desarrollaron numerosas tcnicas y todas ellas requieren de unobservador
entrenado que las interprete. La citogentica es la rama de la biologa que se encarga del
estudio de los cromosomas y sus anomalas.
Los humanos tenemos un nmero total de 46 cromosomas y este nmero vara segn las
especies. Los 46 cromosomas estn constituidos por 23 pares de homlogos y cada
miembro del par proviene de un progenitor. El cariotipo es la constitucincromosmica
de un individuo y es un estudio de rutina en gentica mdica. Los cariotipos se pueden
informar presentando todos los pares cromosmicos ordenados de acuerdo a su tamao,
que en un principio eran recortados de la fotografa de una metafase, y ahora se pueden
hacer con analizadores automticos. De los 23 pares, el par de cromosomas sexuales se
seala por separado para indicar el sexo del individuo. Para citar el cariotipo de un
individuo se indica primero el nmero total de cromosomas y seguidamente los
componentes del par sexual precedido de una coma. As, el cariotipo normal de un varn
se escribe 46,XY y el de una mujer 46,XX. Las anomalas cromosmicas son una causa
ms importante de abortos espontneos, retardo mental y malformaciones.
EL CULTIVO CELULAR Y EL PROCESAMIENTO DEL MATERIAL
Para el estudio cromosmico se debe realizar el cultivo un tejido del individuo donde las
clulas crezcan y se dividan rpidamente. El tejido ms accesible para ese fin es la sangre
y las clulas que crecen son los linfocitos. La tcnica comienza con la toma de una
muestra de sangre perifrica por venopuntura con heparina como anticoagulante.
Se siembran alrededor de 10 gotas en un medio enriquecido y se incuba a 37C durante
72 horas. La estimulacin de la divisin celular se logra con la adicin de un factor
mitognico como es la fitohemaglutinina. Pasado ese tiempo, se agrega una solucin de
colchicina al medio para detener la divisin celular y evitar que las clulas completen la
mitosis. La colchicina acta inhibiendo la formacin del huso mittico y las clulas que
alcanzan la metafase se acumulan en el cultivo. Luego se agrega una solucin
hipotnica que hace que las clulas se hinchen y se las hace estallar con una tcnica de
goteo sobre un portaobjeto y los cromosomas se liberan. Posteriormente el material se fija
y se tien de acuerdo a las diferentes tcnicas.
EL BANDEO CROMOSMICO
Con la tcnica convencional de tincin con Giemsa los cromosomas se tien intensamente
y en forma homognea y se los puede contar y agrupar por su aspecto general y eso era
lo nico que se poda hacer en los primeros cariotipos. La identificacin de cada
cromosoma vino posteriormente con las tcnicas de bandeo. Estas tcnicas que generan
bandas transversales permiten definir a cada cromosoma y estudiar su estructura. Cada
cromosoma tiene del patrn de bandas caracterstico y existen varias tcnicas de tincin
con fines especficos. El bandeo G es el ms utilizado en citogentica clnica.

El bandeo G se logra con un tratamiento controlado con tripsina antes de la coloracin

con Giemsa y produce bandas claras y oscuras en los cromosomas. Las bandas oscuras
contienen ADN rico en bases A-T que replica tardamente y son pobres en genes
constitutivos y las bandas claras contienen ADN rico en G-C que replica tempranamente y
tienen muchos genes constitutivos
Cuando un cromosoma est ms elongado puede mostrar un mayor nmero de bandas y
esto se aprovecha para estudiarlo con mayores detalles. Esta metodologa que permite
buscar alteraciones estructurales mnimas se conoce como bandeo de alta resolucin y
se logra sincronizando el cultivo y con preparaciones hechas en profase o prometafase, es
decir, antes que los cromosomas alcancen su compactacin mxima. Los cromosomas en
la mitad de la metafase muestran un nivel de resolucin de 400 bandas mientras que los
de alta resolucin alcanzan niveles de resolucin de 550 y hasta de 850 bandas.
Tabla I: Las tcnicas de bandeo ms usadas.
Bandeo G:
Tincin con Giemsa previo tratamiento controlado con tripsina que
degrada las protenas y produce bandas claras y oscuras. A las
oscuras se las llama G+.
Bandeo R:
Tincin con Giemsa previo tratamiento con calor. El bandeo R es el
reverso del bandeo G.
Bandeo Q:
Tincin con mostaza de quinacrina o acridina. Se examina con
microscopio de luz fluorescente y se ven bandas brillantes en
distintas intensidades. Las bandas ms brillantes se corresponden
con las G+.
Bandeo C:
Tincin con Giemsa o fluorocromos (actinomicina D o
cromomicina) y tratamiento previo con calor o lcalis. Muestra las
regiones cromosmicas que contienen heterocromatina que son
las centromricas de todos los cromosomas y las secciones en 1q,
9q, 16q y distal de Yq.

TECNICAS DE BANDEO CROMOSOMICO

Producen patrones de bandas en los cromosomas metafsicos
Banda: parte de un cromosoma, que es claramente distinguible de los segmento
adyacentes, por aparecer ms clara o ms oscura con una o ms tcnicas de bandeo. Las
bandas que se tien oscuras con un mtodo, pueden aparecer claras con otro.
TIPOS DE BANDAS

ESTUDIO DE LOS CROMOSOMAS

BANDEADO CITOGENTICO
La apariencia de los cromosomas al microscopio. Particularmente importante para
distinguir visualmente distintas regiones, llamadas bandas claras y oscuras, que dan a
cada cromosoma una apariencia nica. Sirve para estudiar los cromosomas en el cariotipo,
para buscar alteraciones cromosmicas.

MTODO SKY: cariotipo espectral

Es una tcnica de laboratorio utilizada para visualizar los 23 pares de cromosomas
humanaos, en que cada par es pintado con un color fluorescente distinto.
Para qu se usa?
Muchas enfermedades estn asociadas a anormalidades cromosmicas. Por ejemplo,
cromosomas en clulas cancerosas exhiben frecuentemente translocaciones, donde
fragmentos de cromosomas son trasladados a otros. Para identificar tales anomalas y
determinar su papel en la enfermedad es importante desarrollar nuevos mtodos para
diagnosticar desrdenes genticos.
Los mtodos tradicionales tien a los cromosomas de blanco y negro, tcnica que sirve
para determinar el tamao y nmero. Sin embargo, no pueden identificar translocaciones
y otras anomalas. Usando SKY se ve fcilmente cuando hay un cromosoma pintado en un
color y con un fragmento pintado en otro color.
Cmo trabaja?
Se preparan colecciones de cortas secuencias de DNA sencillo, llamadas sondas.
Cada una es complementaria de una nica regin de un cromosoma. Juntas, todas
construyen un entramado que es complementario a todos los cromosomas. Cada sonda es
marcada con una molcula fluorescente que se corresponde con el cromosoma del que es
complementario. Por ejemplo, sondas que son complementarias al cromosoma 1 son
marcadas con molculas amarillas, y las del 2 con rojas.

Cuando son mezcladas con los cromosomas de una clula humana, las sondas se hibridan
o unen al DNA del cromosoma. Al hibridarse, las sondas fluorescentes pintan el conjunto
de cromosomas en los colores del arco-iris. Los cientficos pueden usar computadoras para
analizar los cromosomas pintados para determinar donde exhiben translocaciones u otras
estructuras anmalas.

HIBRIDACIN FLUORESCENTE in situ. (FISH)

La FISH es una tecnologa reciente que utiliza sondas de DNA marcadas con un
fluorforo para detectar o confirmar anomalas gnicas o cromosmicas que generalmente
estn ms all de la capacidad de resolucin de la citogentica de rutina. En primer lugar,
la muestra de DNA (cromosomas metafsicos o ncleos en interfase) se desnaturaliza,

proceso que separa las hebras complementarias de la estructura en doble hlice del DNA.
A la muestra desnaturalizada se le aade entonces la sonda de inters, marcada con un
fluorforo, que se asociar al DNA de la muestra en el sitio diana, en el proceso
denominado hibridacin, donde se vuelve a formar una doble hlice. La seal emitida por
la sonda se observa mediante un microscopio de fluorescencia y as la muestra de DNA se
puede clasificar segn la presencia o ausencia de la seal.
FISH de metafase
La FISH puede usarse sobre clulas en metafase para detectar microdeleciones
especficas ms all de la capacidad de resolucin de la citogentica de rutina, o para
identificar material extra de origen desconocido. Puede tambin ser de ayuda en casos
donde es difcil determinar mediante la citogentica de rutina si un cromosoma tiene una
delecin simple o si est implicado en una reorganizacin sutil o compleja. Adems, la
FISH de metafase puede detectar algunos de los reordenamientos especficos que se
observan en ciertos tipos de cncer.
El nmero de sndromes de microdelecin diagnosticados por FISH est aumentando con
rapidez. La sensibilidad de estos ensayos es en todos los casos mejor que la de la
citogentica de rutina, pero depende del sndrome en concreto. En algunos, la sonda es
especfica para el gen defectuoso, como en el Sndrome de Williams, donde el 96% de los
pacientes con diagnstico confirmado poseen una delecin en el gen de la elastina. En
otros sndromes como el de Prader-Willi/Angelman, la etiologa es heterognea y las
microdeleciones slo existen en una parte de los casos (60%).
Sndromes de microdelecin actualmente diagnosticables mediante FISH

Sndrome del maullido (cri-du-chat)

Sndrome de Kallman

Sndrome de Miller-Dieker

Sndrome de Williams

Sndrome de Smith-Magenis

Sndrome de Wolf-Hirschhorn

Deficiencia de esteroide-sulfatasa

Sndrome de Prader-Willi/Angelman

FISH de interfase
La FISH se puede usar sobre clulas en interfase para determinar el nmero de copias de
uno o varios cromosomas, as como para detectar algunas reorganizaciones especficas
que son caractersticas de ciertos tipos de cncer. La ventaja principal de la FISH de
interfase es que se puede realizar muy rpidamente si es preciso, normalmente en 24
horas, porque no requiere crecimiento de las clulas.Un buen ejemplo es el ensayo de
aneuploida, que se realiza sobre clulas del fluido amnitico cuando hay una fuerte
indicacin clnica de una de las trisomas ms comunes. Se desnaturalizan los ncleos de
la muestra, se hibridan con sondas especficas para los cromosomas 13, 18, 21, X e Y, y
habitualmente en 24 horas se dispone de los resultados. La prueba de aneuploida suele

incluir tambin una citogentica de rutina para confirmar los resultados o detectar
cualquier anomala no detectada por la FISH de interfase.
Qu es FISH?
Usa molculas fluorescentes para teir genes o cromosomas. Es muy utilizada para
mapear genes e identificar anomalas cromosmicas.
Cmo se realiza?
Rodea a la preparacin de cortas secuencias de ADN sencillo, llamadas pruebas, que son
complementarias a las secuencias de ADN objeto de la investigacin. Estas sondas
hibridan o se unen al ADN complementario y como estn marcadas con seales
fluorescentes llevan a los investigadores a localizar la secuencia. A diferencia de la
mayora de las otras tcnicas, puede ser usado en clulas sin dividir usando un
procedimiento altamente verstil.
Usan 3 tipos distintos de sondas FISH, cada una de las cuales tiene distintas aplicaciones:
Sondas de locus especficos hibridan una regin particular del cromosoma.
Este tipo de sonda es til cuando se han aislado una pequea porcin de un gen y se
desea determinar que gen est localizado ah. Preparan una sonda de una de las piezas de
los genes y observan qu sonda se hbrida.
Alphoid. Las sondas del centrmero son generadas de secuencias repetitivas encontradas
en centrmeros. Porque cada cromosoma puede ser teido en diferente color, los
cientficos usan esta tcnica para determinar si el paciente tiene el nmero correcto de
cromosomas o si hay una copia extra de alguno.
Usando la muestra de sondas, se pueden generar un cromosoma entero, y general el
cariotipo espectral. La imagen a todo color de los cromosomas lleva a los cientficos a
distinguir entre los cromosomas basado en sus colores, mejor que el bandeado tradicional
en blanco y negro. Es particularmente til en los casos en que haya habido una
translocacin al final de uno de los cromosomas.

La librera genmica comprende un set de una bacteria, cada

una portando pequeos fragmentos de DNA humano. Para
simplificar, clones de unos fragmentos representativos
coloreados, se muestran, En la realidad todos los fragmentos
mal definidos sern tambin clonados

En amarillo se seala una deleccin en uno de los dos

cromosomas 7 con sndrome de Williams.

MORFOLOGA CROMOSMICA CARIOTIPO

MORFOLOGA CROMOSMICA
El cromosoma es el material hereditario (ADN) organizado alrededor de un
esqueleto proteico, cuyas funciones son las de conservar, transmitir y expresar la
informacin gentica contenida en los genes que porta. En un ncleo eucaritico cada uno
de los cromosomas es estructuralmente independiente de los otros, aunque no
funcionalmente, debido a las interrelaciones que se establecen entre los mismos. Su
estructura ha adquirido mayor complejidad a lo largo de la evolucin, desde nicas
molculas de ADN de simple organizacin (procariontes), hasta complejas asociaciones de
ADN con protenas histnicas, que constituyen la cromatina (eucariontes). El cromosoma
metafsico, como se expres en el captulo 1, corresponde al estado de mxima
contraccin de la cromatina, en el cual es posible estudiar los caracteres externos tales
como forma, tamao y nmero.
Estructuras cromosmicas
a) Longitudinalmente en un cromosoma metafsico se diferencian las siguientes
estructuras:
Telmeros: corresponden a la porcin terminal de los cromosomas, que si bien
morfolgicamente no se distinguen, cumpliran con la funcin especfica de impedir
que los extremos cromosmicos se fusionen, manteniendo as la estabilidad de la
estructura cromosmica necesaria para la replicacin completa de cada
cromosoma, y la segregacin (separacin) correcta de las cromtidas hermanas.

 Crommeros: representan porciones discretas de heterocromatina compactada

cuyo nmero, tamao y forma es variable. Su estructura es especfica para cada
pareja de cromosomas y son principalmente visibles al comienzo de la profase
meitica muestran una distribucin uniforme a lo largo del cromosoma,
constituyendo as un carcter diferencial de importancia en sistemtica.
Centrmero: corresponde a una constriccin en la estructura de cada cromosoma,
tambin denominada constriccin primaria centromrica que presenta una
posicin constante en el mismo. A l se asocian protenas que se unen a las fibras
del huso durante la divisin celular, para permitir la migracin anafsica de las
cromtidas hermanas a cada polo (mitosis y meiosis ll) o de los cromosomas
homlogos en meiosis l. Generalmente est asociado a secuencias de ADN
altamente repetidas, la heterocromatina constitutiva.
Constricciones secundarias : estn ubicadas hacia los extremos de los brazos
cromosmicos y en general tienen funcin desconocida; aunque en algunos cromosomas,
corresponden a la regin organizadora del nucleolo (NOR) portadora de secuencias de
genes para la sntesis de cidos ribonucleicos ribosomales (ARNr's); estos cidos nucleicos
conjuntamente con protenas constituyen este complejo denominado nucleolo (uno
varios). Por su fcil deteccin y observacin su presencia reviste gran inters en estudios
citogenticos, y como slo aparecen asociados a algunos cromosomas del complemento
(nmero total de cromosomas por clula somtica), tambin poseen gran valor
sistemtico. Cada constriccin secundaria separa una porcin cromosmica del resto del
cuerpo cromosmico, llamado satlite.
b) En sentido lateral en un cromosoma metafsico se distinguen dos cromtidas
cromatidios (hermanos), morfolgicamente idnticos, como consecuencia de la replicacin
ocurrida en el perodo S de la interfase.

Figura 1 - Estructuras del cromosoma metafsico eucaritico.

Forma de los cromosomas

Las cromtidas permanecen unidas por el centrmero y segn la posicin del mismo. Los
cromosomas se clasifican en:
Metacntricos: el centrmero separa brazos aproximadamente del mismo tamao.
Submetacntricos: cuando el centrmero est alejado del centro y los brazos son
desiguales.
Acrocntricos :Cuando el centrmero est cerca de uno de los extremos y uno de
los brazos es muy corto
Telocntricos: el centrmero presenta una posicin terminal.
Clasificacin de los cromosomas segn la posicin del centrmero

Tamao de los Cromosomas

La longitud de los cromosomas vara dentro de un amplio rango; desde 3,5 en
insectos y 5 de en dicotiledneas, hongos y humanos (cromosomas cortos), hasta 30
(cromosomas largos) principalmente en monocotiledneas ortpteros y anfibios. En
algunos organismos, junto a los cromosomas de tamao normal del complemento, se
diferencian los microcromosomas de tamao muy pequeo (aves y reptiles).
Con respecto al ancho de los cromosomas, raramente excede las 3 . El tamao
cromosmico debe ser considerado en trminos relativos, ya que el grado de

compactacin o enrollamiento puede variar, debido al pretratamiento que se le realiza al

material para su observacin al microscopio, y al margen de error propio del proceso de
medicin.
Nmero cromosmico
Tambin esta caracterstica es muy variable aunque constante y determinada para cada
especie. En un individuo diploide las clulas somticas presentan un nmero de
cromosomas 2n, cigtico somtico, mientras que las gametas, producto de la meiosis
a partir de una clula 2n, presentan la mitad del nmero cromosmico denominado n
gamtico; en las clulas diploides cada par de cromosomas est formado por uno de
origen paterno y otro de origen materno.
En un organismo eucarintico se define como nmero bsico, x, genmico,
genoma, al nmero de cromosomas diferentes entre s, y que son indispensables para la
supervivencia y desarrollo completo del organismo, estando cada uno de los diferentes
cromosomas representado una sola vez; en un individuo diploide el nmero x es igual al
nmero n.
Cromosomas segn su funcin
En el complemento cromosmico de una especie, pueden diferenciarse los
cromosomas A y los cromosomas supernumerarios, accesorios B. Los primeros incluyen
tanto a los autosomas, siempre presentes en plantas y animales, como a los gonosomas
cromosomas sexuales presentes en muchos grupos de animales y excepcionalmente en
vegetales (plantas con dioecia). En alrededor de 200 especies vegetales, adems de los
cromosomas A estn presentes en nmero variable los cromosomas B, de tamao muy
reducido, usualmente heterocromticos (figura 3) y aunque an no est claramente
establecido, los mismos tendran efecto sobre la duracin del ciclo celular, frecuencia y
distribucin de quiasmas y fertilidad. Al ser inestables en su comportamiento meitico y
mittico su transmisin es muy variable y an dentro del mismo individuo, existen
diferencias en su nmero en las distintas clulas.
Figura 3 - Cromosomas B en Puschkinia libanotica

Nmero: Las clulas somticas de la mayora de las especies eucariticas tienen dos
juegos de cromosomas, se trata de especies diploides, con un juego de cromosomas
materno y otro paterno. El nmero de cromosomas se denomina nmero diploide y se
representa como 2n. El nmero de cromosomas de un juego cromosmico y que se
corresponde con el nmero de cromosomas de un gameto de la especie se le denomina
nmero haploide y se representa como n. Todos los cromosomas de las clulas
somticas aparecen por parejas de cromosomas homlogos (uno procedente del padre y
otro de la madre) existiendo por tanto n parejas de homlogos. Los dos cromosomas
homlogos tienen informacin para los mismos tipos de genes, aunque no poseen idntica
secuencia de bases nitrogenadas, ya que en un posicin determinada o locus puede

encontrase la informacin que determina el color azul de ojos mientras que en el

homlogo puede existir informacin para el color marrn. Sin embargo, los dos
cromatidios hermanos de un mismo cromosoma poseen exactamente la misma
informacin gentica (la misma secuencia de bases nitrogenadas). El nmero de
cromosomas 2n vara mucho de unas especies a otras y no existe relacin entre el nmero
de cromosomas, existen especies vegetales con pocos cromosomas como Haplopappus
gracilis (2n=4), Crepis capillaris (2n=6) y Secale cereale (2n=14), especies vegetales con
bastantes cromosomas como Triticum aestivum (2n=42) y especies vegetales con muchos
cromosomas como Ophioglossum petiolatum (n >500). En animales sucede algo
semejante, hay especies con pocos cromosomas como la hormiga australiana Myrmecia
pilosula cuyos machos tienen un cromosoma (2N01) y las hembras dos cromosomas
(2n=2), especies con bastantes cromosomas como la humana Homo sapiens (2n=46) y
especies con muchos cromosomas como el lepidoptero Lysandra atlantica (2n=434-466).
No existe ninguna relacin entre el nmero de cromosomas 2n y la complejidad evolutiva,
ni entre el nmero de cromosomas y la cantidad de ADN. Un ejemplo claro de esta
situacin es el de los ciervos del gnero Muntiacus en el que hay especies muy similares
(denominadas especies gemelas) una con 2n=6 (M. muntjak) y otra con
2n=46 (M. reevesi).
Relacin entre cantidad de ADN y evolucin
Analizando los organismos desde aqullos menos evolucionados y simples en estructura y
funcin, hasta los ms complejos y de aparicin ms reciente en la historia evolutiva, se
Especie
Nmero cromosmico observa una variacin muy
grande y paradjica en el
2n
nmero de cromosomas, tal
Gusano (Ascaris megalocephala)
2
como se observa en el
Maz (Zea mays)
20
siguiente cuadro:
Trigo (Triticum aestivum)
42
Hombre (Homo sapiens)
46
Perro (Canis familiaris)
78
Gallina (Gallus gallus)
82
Pez (Acipenser baeri)
248
Helecho (Ophioglosum petiolatum)
510