TAXONOMA - CLASIFICACIN DE LAS BACTERIAS

La clasificacin definitiva de las bacterias esta aun por establecer; los que se utilizan actualmente
deben considerarse como provisionales o transitiva; la mas utilizada suelen ser recogidas de las
manuales BERGEY'S en la 9 edicin de Bergey's Manual of Determinative Bacteriology de 1994, se
agrupan a las bacterias en 35 grupos, situados en 4 categoras mayores:
1. Eubacterias Gram- (bacterias verdaderas) con 16 grupos; en esta categora se incluyen a la
mayor parte de las bacterias que provocan a la patologa humana.
Espiroquetas:
- Familia Leptospiraceae (genero - Leptospira)
- Familia Spirochaetaceae (genero - Borrelia, Treponema)
Helicoidales /vibrioides aerobias - microaerfilas mviles (crecen mejor a bajas presiones de
oxgeno):
- Familia Campylobacteriaceae (genero - Campylobacter, Helicobacter)
Bacilos y cocos aerobios - microaerfilos (crecen mejor a bajas presiones de oxgeno):
- Familia Pseudomonadaceae (genero - Pseudomonas, Stenotrophomonas)
- Familia Alcaligenaceae (genero - Bordetella) => bacilos y coco-bacilos
- Familia Legionellaceae (genero - Legionella)
- Familia Neisseriaceae (genero - Neisseria) => diplococos
- Familia Moraxellaceae / Familia Branhamaceae (genero - Moraxella, Branhamella) =>
diplococos
- Otros generos => Brucella (cocobacilos)
Bacilos anaerobios y facultativos:
- Familia Enterobacteriaceae (genero - Citrobacter, Enterobacter, Escherichia, Klebsiella,
Serratia, Hafnia [coliformes] Morganella, Proteus, Providencia, Salmonella, Shigella, Yersinia/peste)
- Familia Vibrionaceae (genero - Vibrio, Aeromonas, Plesiomonas)
- Familia Pasteurellaceae (genero - Haemophilus)
- Otros generos => Gardnerella
Cocos Gram- anaerobios => genero - Veillonella
- Familia Rickettsiaceae (genero Coxiella, Ehrlichia, Rickettsia) - son parsitos intercelulares
obligados, altamente pleomrficas cocos/bacilos/hilos
- Familia Chlamydiaceae (genero Chlamydia) - son parsitos intercelulares obligados de forma
esfrica.
2. Eubacterias Gram+ con 13 grupos (17-29); en este grupo hay los que provocan patologia
humana (la mayoria).
Cocos => genero - Staphylococcus y Streptococcus
Bacilos esporulados => genero - Bacillus (aerobio) y Clostridium (anaerobio)
Bacilos regulares no esporulados => genero - Lactobacillus y Listeria
Bacilos irregulares no esporulados:
- Familia Corynebacteriaceae (genero - Corynebacterium)
Micobacterias:
- Familia Mycobacteriaceae (genero - Mycobacterium)
3. Micoplasmas (Mollicutes / bacterias sin pared) de 1 solo grupo (30); dentro de este
grupo, los que provocan patologa humana => genero Mycoplasma/ Mycoplasma
pneumoniae y Ureaplasma.
4. Arqueobacterias con 5 grupos (31-35); todas las bacterias de este grupo no provocan patologia
humanas (viven en las situaciones extremas => termofilas/ termogenas)
Taxonoma => la ciencia de la clasificacin que agrupa y separa los organismos de acuerdo con su
caractersticas fenotpicas, estructurales o genticas para facilitar su estudio; la misin => construir un
esquema racional, para clasificar y nombrar los organismos; el sistema jerrquico de la taxonoma se
ha formado gradualmente a partir del sistema binomial / binominal / binaria de nomenclatura genero
y especie establecida por Linneo en 1758 (un botnico); la taxonoma no es una ciencia esttico, goza
de gran dinamismo y esta en la relacion con los avances de los procedimientos empleada para su
estudio; el termino de sistemtica se utiliza como sinnimo de taxonoma; los grupos de taxonoma van

de dominio - imperio - reino - tribu - divisin - clase - orden - familia - genero y especie.
Para la asignacin de una bacteria, se siguen las normas recogidas por el cdigo internacional de
nomenclatura bacteriana y adquieren validez cuando ha sido publicado por el Intl Journal of
Systematic Bacteriology; bien en un articulo o bien dentro de los sistemas en las listas de las bacterias
aprobadas que incluyen sus nmeros; una especie bacteriana, viene definida por un nombre genrico
de un nombre especifico latinizado o helenizado y concuerdan gramaticalmente; la inicial de genero va
con letra maysculas y el de especie con minsculas; tanto el nombre de genero o especie se escriben
con letra cursiva/ italica o en su defecto, subrayado; en la denominacin de un especie, la palabra que
define genero puede ser abreviada a su inicial seguida de un punto (p.ej. E.coli o E.coli); los
nombres de las bacterias no se eligen de manera arbitraria, sino que pueden ser descriptivos, p.ej.
Staphilococcus aureus (cocos en forma de racimos - dorados); o pueden dar homenaje a un autor p.ej.
Pasteurella, Bacilo de Koch, tambin puede dar referencia a un acontecimiento p.ej. Legionella; el
nombre generico es nico; para referirse a un especie o varios especies no determinadas su genero =>
E.spp/ sp; algunas de las categoras taxonomia superiores, se forman aadiendo las palabras que las
asignan distintas terminaciones, p.ej. aceae; para el orden => ales (sufijo) p.ej. Mycoplasmatales; todas
las categoras taxonoma se expresa en cursiva o itlica.
FLORAS BACTERIANAS
Flora Normal de la especie humana => la poblacin de microorganismos comensales que
normalmente coloniza la piel y las membranas mucosas de las personas adultas sanas; la piel y las
mucosas colonizadas por microorganismos dinmicos => cambios cualitativos y cuantitativos
constantemente; 2 poblaciones:
1. La flora residente (FR) => un numero relativamente fijo de especies de microorganismos
(comensales y oportunistas) en una zona definida (si se producen alteraciones, suelen ser temporales);
permanecen intactas; encuentran condiciones fisiolgicas y nutritivas adecuadas; no es esencial para la
vida, pero es normalmente beneficiosa (produce vitamina K en el intestino y ayudan en la absorcin de
nutrientes y impide la colonizacin de microorganismos potencialmente patgenos.
2. La flora transitoria (FT) => microorganismos no patgenos o potencialmente patgenos, que
colonizan la piel o las mucosas en periodo corto de tiempo; tiene poca importancia, pero si la flora
residente se altera, la flora transitoria puede multiplicarse y producir infecciones.
La supresin de FR => vaci ecolgico => ocupacin de microorganismos ambientales o de otras zonas
de cuerpo => infecciones.
FR oportunistas => los que tienen acceso a lugares estriles; algunos ejemplos:
- Streptococcus viridans son comensales del tracto respiratorio superior y de la boca, si alcanza el
torrente sanguneo => si vlvula cardaca daada => posible endocarditis;
- Bacteroides son comensales del intestino grueso => si apendicitis perforada => posible peritonitis o
bacterimia.
- Infecciones de pacientes inmunodeprimidos por causas diversas (cncer, leucemias, linfomas, SIDA)
- E.coli es comensal del colon => lugar estril (o no habitual) a traves de uretra => infeccin urinaria
Las causas de las interpretaciones errneas => no se toma en cuenta al microorganismo como
patgeno o se le descarta (como mero contaminante); la omisin o inclusin de una especie en una de
las categoras no implica que no pueda ser aislada en otra zona del cuerpo o que en condiciones
especiales, pueda producir enfermedad.
Flora normal de la piel, boca y vas respiratorias superiores
- Las principales (en faringe y traquea) => Staphylococcus epidermiditis (coagulasa),Staphylococcus aureus (coagulasa+) en pequeas cantidades, Micrococcus spp, Neisseria de especies
no patgenas, Estreptococos A-hemolticos y no hemolticos, las anaerobias facultativas, Candidas.
- FT/no residente se elimina o se disminuye => pH acido, los cidos grasos de las secreciones sebceas,
lisozima, el sudor y el lavado diario con jabones desinfectantes; se disminuye de forma temporal => la
repoblacin es muy rpida.
- Al nacer => la boca y faringe son estriles; tras 12 horas => Streptococcus viridas (las mas
abundantes en la boca), posteriormente => estafilococos (S.epidermiditis), diplococos Gram-,
difteroides (Corynebacterium); salida de dientes => espiroquetas de Bacteroides, Fusobacterium e
Actynomicetes, vibrios anaerobios, Lactobacilos y levaduras; Adulto normal=> las principales (mira

arriba!!)
- Los bronquios, bronquiolos y alvolos suelen ser estriles.
Flora normal del tracto intestinal
- Al nacer => estril, posteriormente => colonizado por microorganismos de los alimentos
dependiendo de la dieta (p.ej. la leche materna => Estreptococos y Lactobacilos y el bibern => flora
mixta con menos Lactobacilos) .
- Adulto normal => el esfago contiene lo que previenen de la saliva y comida; en el estomago hay
poco (pH acido protegen la clera y salmonelosis - excepto Helicobacter pilorique puede causar ulcera
pptida, tiene ureasa que alcalina/neutralizar el acidez: degradar la urea => amoniaco); el intestino
delgado superior contiene Lactobacilos y enterococos;intestino delgado inferior (leon y ciego) contiene
la flora fecal; el colon contiene >100 especies 96-99% anaerobios facultativo y estricto => Bacteroides
spp, Fusobacterium spp, Lactobacilos/ Bifidobacterium spp, Clostridium spp, cocos Gram+
anaerobios (Peptostreptococcus spp).
- La utilidad/beneficio => sintetiza la vitamina K, transformacin de los pigmentos biliares en
cidos biliares, absorcin y metabolismo primario de nutrientes.
- La administracin de anti-microbianos orales => la posible proliferacin de cepas resistentes
al anti-microbiano administrado y pueden ser diseminada.
- La administracin de ATB por va parenteral en una ciruga intestinal => necesario para reducir al
mnimo posible el numero de microorganismo, evitar trauma en el acto quirrgico y infeccin
peritoneal e diseminada.
Flora normal de la uretra
- Los mas frecuentes son estafilococos, enterococos, Corynebacterias, Neisserias no patgenas,
enterobacterias (la mayora son pobladores de la piel que recubre esta zona).
- En los cultivos de orina, se deben limpiar con cuidado la zona perineal antes de tomar una muestra.
Flora normal de la vagina
- Al nacer, esta colonizada por Lactobacilos aerobios (produce pH acido), posteriormente el pH acido
se convierte en neutro y aparece flora mixta de cocos y bacilos, hasta la pubertad.
- En la pubertad esta colonizada por Lactobacilos aerobios y anaerobios que produce cidos por su
metabolismo de hidratos de carbono => cambio a pH acido (proteccin a los otros microorganismos
potencialmente patgenos.
- En la mujer adulta esta colonizada ademas de los anteriores (Lactobacillus acidophillus - aerobios y
anaerobios), estreptococos anaerobios (hemoliticos o no hemoliticos) y otros; el moco cervical contiene
lisozima con actividad bactericida.
- En la menopausia la flora vaginal cambia, aparece de nuevo una flora mixta de cocos y bacilos.
- La administracin de antibiticos de amplio espectro, puede eliminar las especies protectoras,
producindose una multiplicacin excesiva en la vagina de levaduras (candidas) u otras causantes de
vaginitis.
Flora normal de la conjuntiva del ojo
Predomina los difteroides (Corynebacterium xerosis), Staphylococcus epidermidis y estreptococos no
hemolticos; pueden estar presentes otras especies; el control de la flora lo ejercen las lagrimas, por su
contenido en lisozima.

Tema 13 - Pruebas bioqumicas para la deteccin del

metabolismo hidrocarbonado de las bacterias.
Metabolismo - conjunto de reacciones qumicas que tiene lugar en las celulas vivas; necesitan energa
que se obtiene por oxidacin (perdida de electrones) de sustancias introducidas en forma de alimentos;
la gran mayora de las bacterias (hetertrofas) se nutren de sustancias orgnicas que proceden de otros
seres vivos y otras (auttrofas - cianobacterias) se nutren de sustancias orgnicas que sintetizan ellas
mismas a partir de sustancias inorgnicas; 3 etapas en metabolismo =>
1-catabolismo/hidrlisis/degradacin de sustancias nutritivas => compuestos mas sencillos + energa
en forma de ATP (adenosin trifosfato)
2-anfibolismo/metabolismo intermedio del producto del catabolismo => compuestos de bajo peso

molecular
3-anabolismo/metabolismo biosinttico de sustancias simples => biosntesis de macromolculas
/moleculas complejas + gasto de energa.
Enzima - catalizadores biolgicos (protenas); cada enzima afecta solo a un sustrato especifico.
Reduccin => captan electro nes.
Catabolismo de hidratos de carbono - oxidacin de azucares para obtener la energa es muy
importante, aunque tambin se catabolizan lpidos y protenas; la 1 etapa de la degradacin de la
glucosa => oxidacin de esta para formar acido pirvico (gluclisis); 2 procesos => la respiracin
(necesita O2) o la fermentacin (no necesita O2); la gluclisis (no precisa O2) se produce en 3 vas, en
funcin de la dotacin enzimtica.
1 va glucoltico/ ruta de Embden-Meyerhof Parna (EMP) fue descubierto porPasteur => se
obtiene 2 moleculas de ATP mediante fosforilacin por cada molcula de glucosa que se oxida; este
proceso se puede realizar en presencia o no de O2; a partir de la formacin de acido pirvico, las
bacterias que usan esta va, normalmente utilizan la va fermentativa para acabar transformando este
acido pirvico en cidos mixtos; degradacin/ hidrlisis de glucosa (6C) => acido pirvico + 2 ATP
(fosforilacin) => cidos mixtos (fermentacion); son 9-10 reacciones qumicas con un enzima diferente
en cada una; utilizados por las bacterias fermentadoras que poseen deshidrogenasas (Clostridium,
Enterobacter, Salmonella)
2 va de las pentosas fosfato /va fosfoglucnica (va HMP) - es una ruta mixta y va
alternativa; este ciclo rompe los azucares de 5 carbonos /pentosas y tambin glucosa,mediante
sucesivas reacciones y produce => pentosas intermedias (precursores de sntesis de cidos nucleicos y
ciertos aminocidos) de gran utilidad para las celulas; ademas de la gluclisis via EMP, muchas
bacterias utilizan HMP como una va alternativa para la oxidacin de la glucosa => produce acido
lctico o acido mixto + 1ATP (p.ej.Enterobacterias/ E.coli); esta va es un hbrido de la va ED y la
EMP, ya que en las primeras etapas, la oxidacin de la glucosa es similar a la via ED y en las etapas
posteriores es similar a la va EMP, es decir: proporcionan a las bacterias no oxidativas un medio de
oxidar la glucosa a acido pirvico puro, porque no tienen las enzimas necesarios para comenzar la va
EMP, apareciendo en los sistemas analticos como fermentadoras.
3 va de Entner-Doudoroff (va ED/ va aerobia => requiere O2) - es otra va por la cual la
glucosa se oxida a acido pirvico; por cada molcula de glucosa se producen 1 molcula de ATP para
ser utilizada por la clula en reacciones bio-sintticas; esta va requiere enzimas especficos y solo los
microorganismos que las poseen pueden utilizarla sin seguir la va de las pentosas fosfato ni la
gluclisis; los microorganismos que la utilizan sonPseudomonas y Neisseria (aerobio estricto),
por carecer de las deshidrogenasas necesariaspara oxidar el acido pirvico al acido lctico u otros
cidos; los hidrogeniones se transfieren al ciclo de Krebs y se acabaran obteniendo agua; oxidacin de
glucosa => acido pirvico + 1ATP (no producen acido lctico ni acido mixto)
Respiracin - es un proceso fosforilacin oxidativa de generacin de ATP y se caracteriza por el
aceptor final de electrones generalmente es una molcula inorgnica (O2); la glucosa se degrada =>
acido pirvico se sigue oxidando por la va de la respiracin o la fermentacin (en funcin del sistema
enzimtico que tienen) => ATP + CO2 + H2O; durante la respiracin, cualquier molcula orgnica
puede ser degradada /oxidada con un mayor rendimiento que en la fermentacin.
Respiracin aerbica - cuando el aceptor final de Hidrgenos (electrones) es el O2; en la
respiracin, el acido pirvico producido por la gluclisis se escinde en 2 partes: una parte se unen con
CoA => forman acetil CoA que entra en el ciclo de Krebs donde se liberan electrones y protones (H+);
la otra parte para biosntesis???
Cadena de transporte de electrones (se encuentra en la membrana citoplasmtica de las celulas
procariticas y en las membranas internas de las mitocondrias en las celulas eucariticas) - los
electrones se mueven desde los coenzimas reducidos hasta una molcula inorgnica como O2 en la
respiracin aerbica o hasta una molcula inorgnica diferente del oxigeno NO3- ion nitrato, SO2-4
ion sulfato, etc.; las moleculas transportadoras de electrones son 3 tipos =>
[1] flavoprotenas - realizan reacciones de oxidacin reduccin, [2] citocromos - protenas con un grupo

prostticos (Fe) en forma oxidada, [3] ubiquinonas o coenzima Q - transportadores no proteicos de

bajo peso molecular.
Respiracin anaerbica - cuando el aceptor final de electrones (H-) es una sustancia inorgnica
distinta del O2, tal como iones nitratos NO-3, sulfatos SO2-4, carbonatos CO2-3. (Pseudomonas y
Bacillus)
Fermentacin - proceso que se inicia a partir de acido pirvico formado en la gluclisis de EMP
/HMP, en cual el aceptor final de los electrones es un compuesto orgnico y no requiere
O2; caractersticas principales => (1) no precisa O2, pero se puede ocurrir en su
presencia, (2) no necesita el ciclo de Krebs ni cadena transportadora de electrones, (3) utiliza1
molcula orgnica como aceptor final de electrones, (4) libera energa a partir de azucares y otras
moleculas orgnicas (aminocidos, cidos orgnicos, purinas, pirimidinas), (5) libera solamente 2
moleculas de ATP por cada molcula del sustrato inicial, (6) los productos finales pueden ser acido
lctico, etanol y CO2, acido propinico, acido actico, CO2 y agua, acido butrico, etc. (compuesto
orgnico); cuando el aceptor final de electrones es el lactato, se producir acido lctico y en
general cuando el aceptor final sean otras sales orgnicas, se formaran cidos mixtos p.ej. acido
succnico, que son responsables de la cada de pH en las pruebas empleadas, para la identificacin
bacteriana; ademas, las bacterias que tienen la dotacin enzimtica apropiada, pueden seguir
degradando estos cidos mixtos hasta CO2 y otros compuestos orgnicos; es til el anlisis de los
productos finales para identificar as los microorganismos; la mayor parte de la energa producida en la
fermentacin queda almacenada en los productos finales; las fermentadoras => Streptococcus,
Lactobacillus, Clostridium, Escherichia, Salmonella, Enterobacter.
Prueba de la B-D Galactosidasa (ONPG) - se basa en la capacidad que tienen los
microorganismos de fermentar lactosa, mediante 2 enzimas => Lactosa Permeasa (esta en la
membrana celular y es capaz de transportar la lactosa a traves de ella) y B-D-Galactosidasa (esta en el
interior de la clula y es capaz de desdobla la lactosa en glucosa y galactosa).
Clasificacin de los microorganismos segun su capacidad de fermentar o no la lactosa:
- fermentadores activos de lactosa en 24 horas (poseen ambos enzimas)
- no fermentadores de lactosa (carecen de ambos enzimas, no degradan la lactosa, no penetra en la
clula)
- fermentadores tardos de lactosa (poseen el enzima B-D-Galactosidasa, permeabilizar la lactosa
ligeramente cuando la concentracin es alta en 2-15 das).

La aplicacin fundamental es la diferenciacin de Enterobacteriaceae =>Escherichia (+) es

fermentadora activo, Proteus (-) es no fermentadora y Klebsiella (+) es una fermentadora tarda de
lactosa, es decir lactosa (-) y ONPG (+); para detectar la enzima B-D-Galactosidasa => se utiliza un
compuesto similar a la lactosa (orto-nitrofenol): al liberarse al medio alcalino por la accin de BDG
produce un color amarillo.
Material => 1 tubo de ensayos estriles, bao mara o estufa a 37C, asa de siembra, solucin
fisiolgica esteril, discos de ONPG, microorganismo problema
Tcnica => una suspensin densa (con muchas colonias) de un cultivo puro en 0,5 ml de suero
fisiologico estril se aade un disco de ONPG y mezclar durante unos segundos, incubar a 37C
durante 30-60 minutos (en general se vira antes de 30 minutos)
Resultados => en ONPG+ se produce una coloracin amarillo y en ONPG- no se produce color
(incoloro).

Tema 14 - Pruebas bioqumicas para la deteccin del

metabolismo proteico de las bacterias
Principal productor de energa => catabolismo de la glucosa y las oxidaciones de proteinas y
lpidos (estan relacionados entre si); la hidrlisis de protenas/ protena+agua (mediante enzimas
proteolticos extracelulares, secretadas por ciertas bacterias que sirve para su tipificacin/tipacin) =>
polipptidos y aminocidos; las pruebas bioqumicas investigan fundamentalmente la capacidad de un
microorganismo de producir la hidrlisis de la gelatina; catabolismo de protenas/ protelisis se realiza
mediante proteinasas/proteasas y peptidasas (desaminacin) para obtener => ion amonio NH4+ (+)
acido orgnico; acido orgnico entrar al ciclo de Krebs y ion amonio NH4+ es secretado de la clula.
Produccin de acido sulfhdrico - tcnica con indicador incorporado al tubo/a la placa => algunos
microorganismos actan metabolizando protenas con aminocidos azufrados (cistina, cisteina) y
liberan azufre en forma de gas acido sulfhdrico SH2; el gas es detectado a traves del medio que
contiene fuente de hidrgeno (azucar) fuente de azufre(tiosulfato sodio, cistina, cisteina) y
un indicador de pH (sales de hierro /citrato frrico amoniacal) => un precipitado negro); se observara
la liberacin del gas SH2 por algunos microorganismo que poseen enzimas desulfurasas (activada por
la fermentacin de la glucosa => acidifica/produce cidos/baja el pH) que actan sobre los
aminocidos azufrados; la temperatura de incubacin (estufa) tiene que oscilar entre 35-36C
(superior a 37 se inhibira la produccin de SH2).

Material => tubo de cultivo (KIA/kliger iron agar y TSI/triple sugar iron), agujas y asas de siembra,
estufa de cultivo, muestras de problema; si se realiza en placa de cultivo (Hektoen y SS);
Tcnica => a partir de un cultivo puro y reciente de microorganismo problema se tomara una muestra
con una aguja; sembrar en picadura (tubo de KIA o TSI) o con agotamiento en cuadrante (Hektoen o
SS); incubar durante 18-24 horas; si la tcnica se realiza con Brucella(microaerofila), se debe incubar
con una atmsfera de CO2.
Resultados => SH2 positivo (Salmonela y Proteus) se observa a lo largo de la linea de inoculacin
ennegrecimiento del medio; SH2 negativo (Brucella y Shigella) no se ennegrece el medio.
Bacteria con enzimas desulfurasas (activada por la fermentacin de azucar) + indicador de pH/sales de
Fe + fuente de S + (H+) => H2S gas + indicador pH => precipitado negro insoluble/ puntos negros
(FeS)
Prueba de las descarboxilasas - enzimas que actan sobre el grupo carbxilo de los aminocidos
Lisina, Ornitina, Arginina para formar => aminas (alcalinas) y se desprende CO2 (el proceso se realiza
en anaerobiosis) => se realiza mediante el sistema multiprueba (API - buscar el cdigo en el libro);
estas pruebas se aplican para la identificacin de Enterobacteriaceas; se investiga la alcalinizacin del
medio inicialmente de color purpura, se observara el viraje del color del indicador del pH; la presencia
del enzima investigado supondr la alcalinizacin del medio (sigue el mismo color como el inicio); cada
pocillo contiene indicador de pH y amino acido correspondiente al enzima a investigar; cada
descarboxilasa acta sobre un aminocido especifico; en cada reaccin se desprende CO2 y se
alcaliniza el medio:
- L-lisina + LDC/lisina descarboxilasa => Cadaverina + CO2
- L-ornitina + ODC/ornitina descarboxilasa => Putrescina + CO2
- L-arginina + ADH/arginina deshidrolasa => L-citrulina + NH3 (descarboxilacin) => Putrescina
+CO2

Material => pruebas de API, pipeta Pasteur.

Reactivos => caldo de Moller para descarboxilasas (lleva pequea cantidad en su composicion una
pequea cantidad de glucosa, peptonas y los indicadores rojo cresol y purpura de bromo cresol, pH6);
aminocidos ensayados en forma L, muestra de problema y papel parafina.
Tcnica => se aade una gota del inoculo (suspensin microbiana) en cada pocillo de la prueba de
API; se incuba a 35C durante 18-24 horas.
Resultados => durante las primeras horas de incubacin, el caldo vira a amarillo, por la fermentacin
de glucosa que lleva el medio; pero si el aminocido es descarboxilado, el pH vuelve a subir, ya que se
forma aminas alcalinas que es de color purpura (descarboxilasa+); si se queda amarillo sera
descarboxilasa-; grmenes con descarboxilasa+ (Escherichia no es 100% descarboxilasa+ de Lisina,
Arginina y Ornitina):
- Lisina => Klebsiella, Serratia, Salmonella
- Ornitina => Serratia, Proteus, Salmonella
- Arginina => Salmonella, Pseudomonas

Tema 15 - Pruebas bioqumicas para la deteccin de la

actividad enzimtica de las bacterias
Pruebas oxidasa - esta denominacin se le da de forma genrica al enzima citocromo oxidasa que
participa en la transferencia de electrones en la cadena respiratoria hacia el oxigeno; oxidasa =>
enzima que cataliza la transferencia de electrones del sustrato al oxigeno; los aerobios o anaerobios
facultativos obtienen su energa por la respiracin y la almacenan en forma de ATP, el oxigeno es
reducido a partir de un sustrato orgnico que procede de la nutricin con la intervencin de un sistema
de transporte de electrones denominado cadena respiratoria, producindose agua o perxido de
hidrgeno segn la especie microbiana; los citocromos son hemo-protenas que contiene Fe y actan
como ultimo eslabn de la
cadena respiratoria aerobio, transferindo H+ al O2 con formacin de H2O; este sistema se encuentra
en los organismos aerobios y anaerobios facultativos, carenciandolo de ello los anaerobios estrictos; se
observara el cambio de color de un indicador de pH incoloro cuando esta reducido (pfenilendiamina=> formar indofenol de color violeta oscuro) y coloreado cuando se oxida;
Aplicacin => detectar en el microorganismo estudiado el enzima citocromo oxidasa; diferenciar
entre Enterobacteriaceas (oxi-) de Pseudomonadacea (oxid+); diferencia entre gneros Moraxella
(oxi+), Neisseria (oxi+) de Acinetobacter (oxi-).

Material => placa sembrada con microorganismo problema, asa de plstico, papel de filtro, porta,
reactivo oxidasa de Kovacs.
Tcnica => mezclar una pequea muestra pura con el reactivo en el papel de filtro que se sita por
encima de una porta, esperar 30-60 segundos y se observar el posible cambio de color; otra manera: se
aade directamente el reactivo oxidasa de Kovacs sobre las colonias de la placa Petri con agar sangre y

tambin en otro medio; si son oxidasa positivo toman un color marrn y en seguida pasan a negro
parduzco.
Resultados => oxidasa+ aparece un color purpureo en el papel, si se desarrolla el color a los 10-60"
se considera oxidasa retardado positivo, despus de 60" es negativo; oxidasa- no se produce color.
Pruebas de catalasa
La catalasa es una enzima que se encuentra en la mayora de los microorganismos aerobios y
anaerobios facultativos que contienen citocromo; es un enzima fundamental que acta sobre el
perxido de hidrgeno /H2O2 (es un producto final de la degradacin aerobica oxidativa de los
hidratos de carbono); si se acumula H2O2, estos grmenes moriran; fundamento: si el
microorganismo tiene el enzima catalasa y se pone en contacto con H2O2 => se descompone en H2O +
O2; aplicacin => diferenciacin de Streptococcus (-) de Staphylococcus (+) y Micrococcus (+);

Material => portaobjeto, pipeta Pasteur, asas de siembra de plstico (las de platino catalizar la
reaccin)
Reactivo => H2O2/ agua oxigenada, microorganismo de problema
Tcnica => se coloca una gota de H2O2 (agua oxigenada) en un porta objeto, simultneamente, con
una asa se aade una colonia del cultivo del microorganismo de 12-24 horas, homogeneizar y observar.
Resultados => catalasa+ forma burbujas de O2 inmediatamente; catalasa- no aparecen burbujas; se
podrn observar falsos positivos si se utilizaran medios de cultivo agar sangre o otros que lleven
hemates (los hemates contiene catalasa).
Pruebas de Nitrato reductasa o Nitratasa (se realiza con multiprueba de API)
La nitratasa (nitrato reductasa) es el enzima que cataliza el proceso en cual el nitratos son reducidos a
nitritos (presentes en algunos microorganismos anaerobios o anaerobios facultativos que utilizan
nitrgeno como ultimo aceptor de electrones en el proceso metablico/ respiracin anaerbica);
depende de la especie bacteriana se trate, se pueden producir diversos productos finales; reaccin:
nitrato/NO-3 + nitratasa => nitrito/NO-2 =>N2 (nitrgeno molecular/ gas nitrgeno) o otros =>
amoniaco / oxido ntrico / oxido nitroso / hidroxil amina; la prueba detecta los productos finales
liberados al medio mediante un reactivo colorimtrico API; aplicacin => diferenciacin de especies
de Haemophilus y Neisserias; cuando no se forma color (rojo) al aadir los reactivos, puede
significar => [1] no se ha reducido el nitrato, se comprueba aadiendo polvo de zinc que acta como
reductor y si hay un cambio al rojo, es nitratasa (-) y si no hay cambio de color, sera nitratasa
(+); [2] la reduccin de nitratos ha sido llevada hasta la formacin de N2, se observa con la aparicin
de grietas o burbujas; [3] la reduccin de nitratos ha formado otros productos nitrogenados (oxido
ntrico, amoniaco, hidroxil-amina, etc.);

Material => multiprueba de API; reactivo => Nit A y Nit B, Zinc en polvo, microorganismo; el
medio no debe contener azufre ya que si el microorganismo es productor de H2S (acido sulfhdrico)
este impide la formacin de color; tcnica => hacemos un inoculo a partir de un cultivo puro reciente
de 12-24 horas, inoculamos el medio; incubar a 37C durante 12-24 horas, agregar 1 gota de Nit A y 1
gota de Nit B, observar si hay un cambio o no antes de 30 segundos (se interpreta rpido, ya que el
color puede desaparecer); si no se forma color, se aade al tubo un poco de polvo de
Zinc; resultados => hay 2 posibilidades de que sean Nitratasa+ (Haemophilus y Branhamella
Catarallis): [1] cuando aparece color rojo o rosado fuerte al aadir el reactivo A y B que indica la
reduccin de nitratos a nitritos; [2] al aadir polvo de zink no se desarrolla color indica formacin
de otros productos nitrogenados;Nitratasa- => cuando se forma color rojo o rosado al aadir polvo de
zinc en menos de 30 segundos.
Prueba de Ureasa (se hace en manual y con el sistema API) - detecta la presencia de la ureasa en los
microorganismos cuando se observa la alcalinizacin de un medio liquido; la ureasa cataliza la
hidrlisis de la urea => carbonato amnico, que sube el pH, con lo que el medio se
alcaliniza; aplicacin => diferenciar Proteus (+) de otras Enterobacteriaceas / E.coli (-) o positivo
retardado (+) como Klebsiella;

Material => tubos de cultivo, asas, pipeta Pasteur, estufa de cultivo o bao mara.
Reactivo => caldo urea de Stuart/ urea-indol (de color mbar) y microorganismo de problema
Tcnica => con el asa estril se toma una muestra de cultivo puro reciente 18-24 horas; inoculamos el
microorganismo en un tubo con caldo urea de Stuart; incubar 37C; la reaccin se produce entre 1-4
horas
Resultados => en ureasa (+) el caldo de color mbar vira a rosa fuerte durante el tiempo de reaccin
(1-4 horas); en ureasa (-) no vira el indicador; algunas cepas de Klebsiella, Enterobacter, Brucella,
requieren 6 das de incubacin.
Prueba de Coagulasa (se hace con el kit comercial que contiene Acs anti coagulasa) - observar
la coagulacion del plasma en forma de grumos o precipitacin al ponerse en contacto el
microorganismo con el reactivo (si se utiliza el plasma en la prueba); la coagulasa es un enzima
producido por microorganismos capaz de coagular en plasma; aplicacin =>
diferenciar Staphylococcus aureus (coco Gram+, catalasa+, beta hemoltico + y coagulasa+) de otro
Staphylococcus; esta prueba solo se hace si el germen es coco Gram+, catalasa+, beta hemoltico
+; tcnica => (usando el kit comercial /prueba de ltex) seguir la instruccin de la casa comercial que
hacen el reactivo; resultados => coagulasa+ se observa en forma de grumos (si se utiliza un plasma
como reactivo => se observara la formacin de un hilo de fibrina en la reaccin) y en coagulasa- no se
forma grumos.

Prueba de Triptfano Desaminasa (TDA) - se basa en la capacidad que tienen algunas bacterias
de desaminar el triptfano por la accin de TDA, produciendo => acido indol pirvico que reacciona

con citrato frrico amoniacal y el cloruro frrico que lleva el medio produciendo un color marrn
(determina la presencia de la enzima TDA); tcnica => en un medio liquido de TDA (color mbar); se
puede utilizar el reactivo urea-indol; aadimos 1 sola colonia de un cultivo puro y 1 gota de reactivo
TDA del API, incubar a 37C entre 18-24 horas, y leer; resultado => el color marrn/caf indica la
presencia de TDA+ y sera negativo si no hay cambio de color; los gneros que tienen TDA+ => Proteus,
Providencia y Morganella.

Tema 17 - Pruebas de sensibilidad a los anti-microbianos

Antibiograma - estudio de la sensibilidad del microorganismo patolgico a los antimicrobianos; se
debe hacer antes de establecer el tto de una infeccin microbiana; diferentes metodos de
antibiograma => (1) por difusin que daran resultados cualitativos de resistencia, sensibilidad o
intermedios a los diferentes ATB (2) por dilucin nos dar resultados cuantitativos en base a 2
conceptos (CMI/ Concentracin Mnima Inhibitoria y CMB/ CM Bactericida) (3) por deteccin
enzimtica, consiste en detectar la enzima del germen que confiere resistencia a los ATB p.ej. deteccin
de betalactamasa, adenilasa, acetilasa, etc.
Clasificacin de las sustancias anti-microbianas:
(a) un microorganismo es sensible => cuando ATB alcanza niveles plasmticos => a CMI en el lugar de
la infeccin; CMI => la mnima cantidad de ATB capaz de inhibir el crecimiento de un
germen; CMB => la mnima cantidad de ATB que matara al germen; normalmente CMI es suficiente
para combatir una infeccin y los mecanismos inmunitarios se encargan de eliminar el
microorganismo, siendo por tanto la CMI es el termino mas utilizado.
(b) un microorganismo es resistente => cuando la concentracin mxima de ATB que se puede
localizar en el lugar de la infeccin no es suficiente para eliminar el germen, es decir, la concentracin
de ATB necesario para destruir el germen no se puede elevar mas por efectos txicos secundarios.
(c) microorganismo de sensibilidad intermedia => no esta afectado por dosis normales de ATB dadas a
intervalos normales, pero con una dosis alta en el lugar de la infeccin sin llegar a dosis que produzcan
efectos txicos, puede eliminar el germen.

Casos clnicos => Pseudomonas que da problemas respiratoria/ urinaria y es resistente a casi todos
los ATB, se dar una dosis toxico o una combinacin de ATB por va endovenosa.
Normas bsicas => no efectuar un antibiograma directamente del producto patolgico, ni tampoco
utilizar mezclas de grmenes (se debe realizar un aislamiento por agotamiento en placa), excepto para
muestras de orina ambulatoria (normalmente es una infeccin mono-microbiana); para elegir un ATB
se deber ensayar aquellos que son tiles clnicamente y se encuentran disponibles en el mercado
farmacutico.
Factores a tener en cuenta => (1) caractersticas tintoriales del germen (Gram+o-) (2)lugar de la
infeccin (especialmente las vas urinarias y meningitis); es importante porque es necesario que la CMI
sea alcanzable en los lquidos corporales para que sea efectivo (3)bacteria investigada.
La seleccin de ATB representativo de cada grupo para realizar las pruebas de
sensibilidad
Normalmente se selecciona un ATB representativo de cada grupo para realizar las pruebas de

sensibilidad; habitualmente se acepta que no es necesario hacer pruebas de sensibilidad para un ATB
cuando no se han descrito resistencias en esas especies, p.ej. Streptococcus pyogenes.

1. Betalactmicos => todo el grupo tiene en comn que presenta un anilla betalactmico y el
mecanismo de accin consiste en inhibir la formacin de peptidoglicano de la pared celular;
son bactericidas.
a. Penicilinas - tiene espectro desigual => aveces es mas efectivo a uno pero no a otro.
* Penicilina G sodica - la forma oral es P V
* Amoxicilina - infeccin del tracto respiratorio inferior: bronquitis aguda y crnica, neumonas
bacterianas y bronconeumona, producidas por
estreptococo, estafilococo sensible,neumococo y H.influenzae. Gastrointestinal: fiebre tifoidea o
paratifoidea. Genitourinaria: cistitis, uretritis, pielonefritis, bacteriuria, gonorrea, aborto sptico,
sepsis puerperal. De piel y tejido blando (incluida infeccin de herida quirrgica),
por estreptococo, estafilococo sensible y E. coli.
* Amoxicilina + acido clavulanico (es un inhibidor de las betalactmasas producida por algunas
bacterias)
b. Cefalosporinas - actualmente se ha desarrollado la 4 generacin (semisintticos; bacteriostticas frente a cocos Gram+ y bacilos Gram-)
* Cefotaxima (indicado para gonorrea; profilaxis quirrgica; epiglotitis y meningitis porHaemophilus)
* Cefuroxima (efectividad contra Neisseria gonorrheae y otras bacterias productoras de penicilinasa;
es activa contra Streptococcus pneumoniae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus
epidermidis y estreptococo beta-hemoltico; son susceptibles Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae,
Proteus mirabilis)
2. Derivados de betalactmicos:
* Aztreonam - se utiliza comnmente frente a las infecciones causadas por Pseudomonas
aeruginosa, pero su espectro abarca a las enterobacterias (incluida Escherichia coli), como
p.ej. Klebsiella, Haemophilus, Citrobacter y Proteus.
3. Aminoglicosidos => en general su mecanismo de accin es la inhibicin de la sntesis de protena
en diferentes fases segn el ATB; en general derivan de los hongos y son potentesbactericidas; son de
amplio espectro y provocan toxicidad renal y audio vestbular en alta dosis o a las personas
susceptible.
* Estreptomicina (tratamiento de infecciones causadas por grmenes sensibles,
como:Mycobacterium tuberculosis, Salmonellas, enterococos, estreptococos, neumococos y algunos
Gram- como Haemophilus influenzae; es eficaz en infecciones del tracto respiratorio)
* Gentamicina (Acta sobre bacterias Gram- aerobias, incluyendo enterobactericeas,Pseudomonas
y Haemophilus. Acta tambin sobre estafilococos (S.aureus y S.epidermidis)
* Tobramicina (Infecciones del tracto respiratorio inferior como neumona, bronconeumona y
bronquitis aguda causadas por P.aeruginosa, Klebsiella sp., Enterobacter sp., Serratia sp., E.coli y
S.aureus)

* Neomicina (es activo in vitro contra Escherichia coli, Klebsiella y contra flora anaerbica intestinal)
4. Lincosamidas => inhibe la sntesis proteica
* Clindamicina (es un buen ATB frente anaerobios) - Su actividad antibacteriana es similar a la de
eritromicina (macrolidos) en contra de estafilococos y estreptococos; adems es efectiva en contra
de anaerobios, en especial Bacteroides fragilis.
5. ATB polipeptdicos y glucopeptdicos => su mecanismo de accin es inhibir la formacin de
peptido glicano de la pared celular (bactericidas)
a. Activos frente a Gram+
* Bacitracina - es utilizado para la identificacin del estreptococo del grupo A a cual es sensible;
es bactericida; se utiliza tpicamente para infecciones cutneas (por su efecto de
nefrotoxicidad) acta sobre cocos y bacilos Gram+ (Neisseria y Treponema pallidum)
* Vancomicina - por su alta toxicidad renal y ptica, se reservan para infecciones de Gram+
resistentes; es bactericida; tiene accin ante cocos Gram+ y bacilos Gram+
b. Activos frente a Gram- => ambas (polimixinas) se usan tpicamente sobre Gram-, tambin se
usa como ATB de identificacin; tienen accin ante entero-bacterias (exceptoProteus, Providencia y
Serratia), Pseudomonas aeruginosa, Vibrio, Pasteurella, Haemophillus y Bordetella; son ATB de
segunda eleccin (para bacilos Gram- resistentes a otros ATB)
* Polimixina B
* Polimixina E (Colistina)
c. Activos frente a Mycobacterium tuberculosis
6. Otros
* Fosfomicina - es un ATB de origen espaol de un amplio espectro que acta sobre la pared
celular (se usa en infeccin urinaria)
* Acido fucsidico - acta sobre la sntesis proteica y destaca su accin sobre Staphylococcus aureus.
7. Tetraciclinas - son bacteriostticas y su mecanismo de accin es inhibir la sntesis de las
protenas; no se deben administrar a menores de 8 aos por tener efecto secundarios sobre la
denticin y los huesos; tambin pueden producir toxicidad sobre el tracto gastrointestinal y el
higado; son de amplio espectro; origen biolgico o semi-sinttico; activas frente a cocos y bacilos
Gram+ y Gram- aerobios; son frmacos de eleccin en brucelosis, clera, granuloma
inguinal (ETS).
* Tetraciclina
* Doxiciclina - es el tratamiento de fiebre tifus, fiebre Q, erupciones pustulosas por Ricketsiasy fiebre
de las montaas rocosas por Ricketsias, infecciones del tracto respiratorio causadas por Mycoplasma
pneumoniae; el tratamiento de infecciones causadas por Gram-: chancroidecausado por Haemophilus
ducreyi, plaga debida a Yersinia pestis (anteriormente Pasteurella pestis), tularemia debida a Francisella tularensis (anteriormente Pasteurella tularensis), clera causada por Vibrio cholerae (anteriormente Vibrio comma), infecciones por Campylobacter en fetos causadas por Campylobacter fetus (anteriormente Vibrio fetus), brucelosis causada por especies de Brucella (junto con
estreptomicina), bartonelosiscausada por Bartonella bacilliformis, granuloma inguinal causado
por Calymmatobacterium granulomatis.
8. Cloranfenicol - es de amplio espectro; inhibe la sntesis proteica y es toxica a nivel medular;
es de origen sinttico, bacteriosttico, acta frente a Gram+ y - (especialmenteHaemophilus
influenzae y Salmonella)
9. Macrolidos y similares - inhiben la sntesis proteica; amplio espectro; se dan cuando es alrgica
a penicilina; son bacteriostticos y bactericidas en alta dosis.
a. Eritromicina (un buen ATB frente neumnia atpica, legionelosis, difteria, tos ferina)
b. Azitromicina - para tratar ciertas infecciones causadas por las bacterias, como la bronquitis;
neumona; enfermedades de transmisin sexual (ETS); y las infecciones en los odos, pulmones, piel y
garganta; no tienen ningn efecto sobre los resfriados, la gripe y otras infecciones virales.
c. Claritomicina - interfiere la sntesis de protenas en las bacterias sensibles; faringitis, amigdalitis,
sinusitis, bronquitis aguda, reagudizacin de bronquitis crnica, neumona bacteriana (adquirida en la

comunidad), infeccin de piel y tejidos blandos leve-moderada, foliculitis, celulitis, erisipela, infeccin
localizada o diseminada por Mycobacterium avium oM.intracellulare, infeccin localizada
por M.chelonae, M. fortuitum y M.kansaii. Prevencin de infeccin diseminada por M.avium complex
en pacientes con VIH de alto riesgo
10. Quimioterpicos de sntesis
a. Sulfamidas (es bacteriosttico, de origen sintetico; inhibe la sntesis de acido flico; activo frente
Gram+ y -, Clamidias, Nocardia)
b. Trimetropin+sulfametoxazol (cotrimoxazol) - inhibe la sntesis de acido flico; elimina las bacterias
que provocan infecciones, incluyendo las infecciones que afectan las vas urinarias, los pulmones
(neumona), odos e intestinos
c. Quinolonas (6) - inhiben la replicacion del ADN bacteriano son buenos ATB de amplio espectro,
pero se ha abusado mucho.
d. Norfloxacina - infecciones de las vas urinarias y la prstata; inhibe la replicacin del ADN
bacteriano. La norfloxacina pertenece a una clase de antibiticos llamados fluoroquinolonas; tomar
norfloxacina aumenta el riesgo de que desarrolle tendinitis.
e. Ciprofloxacina - inhibe la replicacin del ADN bacteriano; para tratar o prevenir determinadas
infecciones bacterianas, tambin se usa para tratar o prevenir el ntrax (una infeccin grave que se
puede propagar en forma intencional como parte de un ataque bioterrorista) en quienes han estado
expuestos a los grmenes del ntrax suspendidos en el aire; tomar ciprofloxacina aumenta el riesgo de
que desarrolle tendinitis.
11. Quimioterapia antituberculosa - actualmente se emplea:
* Rifampicina - ATB sistmico, antituberculoso, bactericida. Inhibe la sntesis de ARN bacteriano.
Tuberculosis en todas sus formas (asociado a otros tuberculostticos). Brucelosis.Erradicacin de
meningococos en portadores asintomticos, no enfermos. Alrgicos o con contraindicaciones a otros
antibiticos o quimioterpicos. Infecciones causadas porestafilococos (S.aureus, S.epidermidis, cepas
polirresistentes) y por enterococos (S.faecalis, S.faecium).
* Isoniacida - para tratar la tuberculosis, y para prevenirla en personas que han tenido contacto con las
bacterias de la tuberculosis. Elimina slo las bacterias activas (en crecimiento). Debido a que las
bacterias pueden estar en un perodo de incubacin (sin crecimiento) durante largos perodos, la
terapia con isoniazida (y otros medicamentos para evitar la tuberculosis) debe hacerse durante mucho
tiempo (por lo general entre 6 y 12 meses).
* Etambutol - el tratamiento de tuberculosis pulmonar; debe ser usado en conjuncin con otros
frmacos antituberculosos.
12. Quimioterapia antimictica:
* Nistatina
* Miconazol
* Amfotericina B.
* Fluconazol
13. Quimioterapia anti-viral
* Aciclovir - antiviral activo frente al virus herpes humano, inhibe la replicacin de ADN viral,
interfiriendo con el ADN polimerasa viral.
* Ribavirina - La ribavirina se utiliza con un medicamento interfern, para tratar la hepatitis C en
personas que no han sido tratadas con interfern antes. La ribavirina pertenece a una clase de
medicamentos antivirales llamados anlogos de nuclesidos. Esta acta impidiendo que el virus que
provoca la hepatitis C se propague dentro del cuerpo.

Trminos utilizados en las pruebas anti-microbianas:

- Microorganismo sensible o sensibilidad => es inhibido por un ATB a dosis habituales
- Microorganismo de sensibilidad intermedia => el germen "in vitro" no es claramente sensible al
ATB, pero si lo seria "in vivo" incrementando la dosis habitual sin llegar a dosis toxicas
- Microorganismo resistente o resistencia => no es sensible al ATB a dosis habituales y es necesario
administrar dosis toxicas
- CMI (cantidad mnima inhibitoria) => es la menor concentracin de un ATB capaz de inhibir el
crecimiento bacteriano de una cepa dada
- CMB (cantidad mnima bactericida) => es la menor concentracin de un ATB con la que no quedan
bacterias vivas de una cepa dada
Agentes antimicrobianos (ATB) activos frente a Gram- => Cefuroxima, Cefotaxima, Colistina,
Tobramicina, ; frente a Gram+ => Eritromicina, Tetraciclina, Vancomicina, Meticilina,
Clindamicina, Doxicilina; frente a ambos Gram+ y - => Ampicilina, Cefalotina, Gentamicina,
Cotrimoxazol, Cloranfenicol, Imipenem, Amoxicilina+acido clavulonico.

Clasificacin de los antibiticos segn su efecto bacteriano

Bactericidas => Penicilinas, Cefalosporinas, Aminoglucsidos, Rifampicina, Quinolonas, Monobact
micos, Polimixinas.
Bacteriostticos => Tetraciclinas, Eritromicina, Sulfonamida, Novobiocina, Cloranfenicol
Clasificacin de los antibiticos segn su mecanismo de accin sobre la estructura
bacteriana
I. Inhibicin de la sntesis de la pared celular
Penicilinas
Cefalosporinas
Vancomicina
Fosfomicina
Tercoplanina
Bacitracina
II. Lesin en la permeabilidad de la membrana celular
Poliomixinas
Colistinas

Nistatina
Anfotericn B
III. Inhibicin de la sntesis proteica
Cloranfenicol
Tetraciclina
Aminoglucsidos
Lincomicinas
Eritromicina
IV. Inhibicin de la sntesis de cidos nucleicos
Quinolonas
Sulfonamidas
Rifampicina
Trimetropn

Nota: (*) Penicilina semisinttica resistente penicilinasa

Estudio de la orina
Funcin del rin:
- La eliminacin de nuestro organismo de una importante cantidad de residuos metablicos, muchos
de ellos intiles, y de otros que incluso pueden comportarse como txicos.
- La regulacin de la composicin de los fluidos de nuestro organismo facilitando as, tanto la
supervivencia de las clulas como el optimo desarrollo de todos los procesos metablicos.
- El control hormonal de la presin arterial (adrenalina, noradrenalina)
- El control de los niveles orgnicos del calcio (mineral corticoides aldosterona, 1,25
dihidroxicolecalciferol)
- El control de la eritropoyesis (eritropoyetina)

Nefronas - son unidades funcionales bsicas consiste de 2 partes => el glomerulo (dentro de la
cavidad "capsula de Bowman") y la red tubular.
El glomerulo - rodeado de una cavidad (capsula de Bowman) y dispone de una extensa red
vascular; filtrar/ depurar el plasma 25 ml de sangre por minuto (150 litros de plasma/ dia); se filtra
agua, urea, creatinina, aminocidos, cido rico, glucosa, protenas de bajo pm.
La red tubular - el filtrado por el glomerulo es recogido en la capsula de Bowman y se dirige hacia la
red tubular donde se lleva a cabo un proceso de reabsorcin selectiva => reabsorber agua,
ciertos elementos tiles para el organismo y que deben ser recuperadas (glucosa, agua, sodio, cloruro,
potasio, bicarbonato, urea, aminocidos, proteina) y permite la secrecin de otras que, por su
toxicidad, deben ser posteriormente eliminadas mediante la miccin (amonio, urea,
hidrogeniones/H+); se elimina 1 ml de orina por minuto (1500 ml diarios); la red tubular esta formada
por => tbulo contorneado proximal, asa de Henle, tbulo contorneado distal y tbulo colector.
Mecanismo de la funcin renal:
- Filtracin glomerular => filtra el plasma desde los capilares que lo envuelven hasta la capsula de
Bowman.
- Reabsorcin tubular => el producto de la filtracin glomerular se modifica su composicion al
atravesar la red tubular.
- Secrecin tubular => transporte de sustancias, desde la red capilar hacia los tbulos renales; destaca
la secrecin activa de iones H+, que permite la regulacin del equilibrio acido-base en el organismo.
Procedimiento de la recogida de muestra (el personal facultativo determina el tipo de
muestra necesaria para el anlisis) => informar a la persona del objeto del anlisis; indicar el tipo de
muestra deseada; orientar acerca de la tcnica de obtencin de la misma; indicar las pautas de
almacenaje y transporte adecuado (si se toma fuera del laboratorio); insistir en la importancia de la
limpieza en general y de la higiene antes de la recogida (evitar la contaminacin involuntaria);
describir el tipo y caractersticas mas adecuadas delrecipiente a utilizar; tener en cuenta la capacidad
del paciente para evacuar la vejiga de forma voluntaria y la necesidad de utilizar tcnicas invasivas para
obtener la orina en condiciones adecuadas.
Recogida de muestras de orina
- Miccin espontanea => paciente responsable de la misma para obtener muestra
sin contaminacin; prevencin: eliminar la primera porcin de la miccin y asegurar el lavado
minucioso previo de los genitales; indicaciones: anlisis fisico-qumico, estudio del
sedimento, concentracin de creatina y microbiologia (en ocasiones).
- Cateterismo vesical/ sondaje (realizada por personal enfermera) => pacientes que presentan
dificultades de la miccin, mujeres para evitar la contaminacin vaginal.
- Puncin supra-pbica (realizada por personal facultativo) => diagnostico de infeccin por
microorganismos extraos en nios.
Tipos de muestras para un anlisis de orina (sin supervisin - miccin espontanea):
- Primera orina de la maana => se recomienda porque la concentracin de solutos es variable a lo
largo del da y esta en relacin con la ingesta de liquidos.
- Orina tomada al azar => muestra valida para cultivos microbiologicos
- Orina minutada (fraccionada, de 2 horas, de 24 horas) => gran utilidad para el paciente diabeticos

Anlisis de orina - procedimiento tcnico encaminado a examinar los componentes que la integran,
su cantidad y la proporcin en que se encuentran; su estudio proporciona gran informacin acerca
de mltiples alteraciones orgnicas y de muy diversa etiologa (rion, procesos metablicos) =>
permite detectar alteraciones patolgicas, estados fisiolgicos particulares no patolgicos (embarazo) y
un buen funcionamiento renal.
Objetivos:
- obtener informacin del estado general del rion y las lesiones que pudieran afectarlo
- detectar la existencia de una alteracin a nivel de las vas urinarias
- teniendo en cuenta aquellos productos que se eliminan va urinaria, detectar alteraciones
funcionales de otros rganos
- detectar las alteraciones metablicas de diversa etiologia
- se intenta encontrar sustancias o componentes que normalmente no se encuentran en la orina
- detectar alguna alteracin en la concentracin (por defecto o por exceso) de componentes que
habitualmente se encuentran en la orina
Tipos de anlisis de orina => anlisis elemental, completo, rutinario, anormales y sedimento.
Parmetro bioqumico => Densidad - Bilirrubina - Cuerpos cetnicos - Protenas - Urobilinogeno Glucosa - Hemoglobina - Nitritos - pH - Hemates - Leucocitos (actualmente se
utiliza determinacin por qumica seca / tiras reactivas).
Anlisis general de una muestra de orina:
- Fsico/macroscpico => cantidad, aspecto/turbidez, color, olor, densidad, pH
- Qumico/anormales => protenas, glucosa, cuerpos cetnicos, sangre/hemoglobina, bilirrubina/
pigmentos biliares, urobilingeno/ urobilina, nitritos
- Microscpico => estudio de estructuras cristalinas/cristales y de formas amorfas en suspensin,
estudio citolgico, estudio bacteriolgico.
- Microbiolgico => urinocultivo, identificacin del germen (pruebas bioqumicas), ATB
(antibiograma).
- Parasitolgico => tcnicas especificas de visualizacin macroscpica de parsitos;
estudio microscpico de parsitos en la muestra de orina: parsitos enteros o parte de ellos, huevos,
formas de resistencia (quistes).
El orden cronolgico de un anlisis general=> caractersticas fsicas macroscpica sedimentacin (a 1500 rpm durante 10-15 minutos) - pruebas bioqumicas (tiras reactivas); la muestra
sobrante se debe guardar hasta que la analtica haya concluido; hay que revisar los resultados del
sedimento concuerdan con las pruebas qumicas y comprobar las anomalas detectadas han sido
confirmadas.
Examen fsico - macroscpico
Es orientativo => para diagnosticar una patologa, hay que confirmar con
otros anlisis complementarios; hay que tener en cuenta situaciones fisiolgicas (menstruacin, grado
de hidratacin, etc.) que pueden alterar las caractersticas de la muestra;
1)- Cantidad / diuresis normal 1200-2000 ml/24H; alteracin => oliguria/inferior,
poliuria/superior, anuria/falta de eliminacin (<300 ml/24H)

2)- Aspecto / turbidez; recin emitida: clara y transparente; almacenada: sedimento blanco/fosfatos y
carbonatos, sedimento rojizo (uratos desaparecer al calentar la orina a 60C);
3)- Color amarillo / mbar (en funcin de la concentracin)
4)- Olor aromtico, ligeramente amoniacal
5)- Densidad 1.010-1.030 (se determina mediante tiras reactivas);
6)- pH normal 5,5-6 (ligeramente cida); pH alcalino => posible contenido de grmenes con ureasa.
Pruebas bioqumicas cuantitativas
Protenas - en condiciones normales las protenas se encuentran 130-150 mg/da en funcin del
volumen de orina eliminado; en recin nacidos 2-8 mg/100 ml;cantidad de protena (con peso
molecular menor)=> (a) albumina 1/3 del total (fisiolgica); (b) globulinas; (c) protena de TammHorsfall (T-H) es muco-protena viscosa que no se encuentra en el plasma - se forma en el tubulo
contorneado distal, constituye la matriz de los cilindros; (d) transferrina; (e) IgA.
Proteinuria => eliminacin de proteina en orina superando los VN
- intensa (>4 g/da) indica un dao renal grave; se dan en sndrome nefrtico, glomerulonefritis (aguda
y crnica), congestin venosa renal;
- moderada (de 0,5 - 4g/da) indica un dao renal menos graves; se dan en pielonefritis
con hipertensin, nefropata diabtica, mieloma multiple.
- leve (<0,5 g/da) se dan en riones poliqusticos, lesiones renales incipientes.
- de patrn glomerular => pierde su selectividad en la filtracin.
- de patrn tubular => cuando hay lesin tubular
- de forma intermitente o transitoria => puede ser fisiolgica (hay que comprobarlo)
- de forma persistente => suele cursar con hematuria y su pronostico es peor.
Glucosa - la orina normal carece casi por completo de glucosa (filtrado y absorbido); normoglucemia
=> 6-120 mg/dl; umbral renal 160 mg/dl; glucosuria => aumento de la concentracin de glucosa en
orina por encima de los VN, causada por (1) aumento de la glucemia por encima de umbral renal
(2) alteracin renal (tubulopata)
Cuerpos cetnicos (compuesto por acido acetilacetico/diacetico, acido beta-hidroxibutirico,
acetona) - en personas sanas, los CC se sintetizan en el hgado y se metabolizan por completo, de forma
que en la orina aparecen en concentraciones mnimas (indetectables); cetonuria=> aparicin de
cuerpos cetnicos detectables en orina; la presencia de cetonuria y el aumento de cetonemia implica
que no se realiza correctamente el catabolismo oxidativo de los cidos grasos; las causas de cetonuria:
- sobrecarga de lipidos en la dieta
- diabetes mellitus (coma diabetico)
- vmitos (en nios y embarazadas)
- bajo consumo de hidratos de carbono o alteracin en su metabolismo
- ayuno prolongado
Hemoglobina - no aparece en orinas normales; hemoglobinuria => presencia de Hb en orina (si la
cantidad es alta, se puede ver a simple vista); causas => enfermedad renal de vas altas,
anemias hemolticas, reacciones transfusionales, infecciones (malaria, paludismo)
Pigmentos biliares (bilirrubina y biliverdina) - se forman en bazo, higado y MO
por degradacin fisiolgica de Hb; 2 tipos => BB-Albumina / indirecta y BB-Glucurnico

/directa; aparece BB en orina, siempre que aumente la BB directa en sangre por causas => enfermedad
obstructiva (ictericia obstructiva/ acumulacin en sangre), lesiones hepticas(hepatitis, hepatotoxicidad).
Urobilingeno - BB directa con la bilis, pasa al intestino delgado donde por accin de la
flora bacteriana se transforma en urobilingeno o estercobilingeno (se elimina en mayora con las
heces y la orina en menor concentracin); la cantidad de urobilingeno aumenta en la orina en las
hepatitis y las anemias hemolticas; la determinacin de urobilingeno debe realizarse rpidamente en
orina, ya que se transforma en urobilina + O2(falso negativo).
Nitritos - su aparicin en la orina indica crecimiento bacteriano (bacteriuria), de germenes capaces de
reducir los nitratos ingeridos con la dieta, hasta nitritos (entero-bacterias); un resultado negativo de la
prueba de los nitritos, no indica ausencia de microorganismos, ya que puede haber bacterias que no
son productores de nitritos o ausencia de nitratos ingeridos en la dieta.
Examen microscpico de orina - sedimento urinario - estudio de elementos o estructuras de
origen y composicion variados que aparecen suspendidos en la orina que proporciona ayuda para el
diagnostico y evolucin de las enfermedades renales; la muestra debe examinarse antes de
transcurridas 3-4 horas desde su recogida (algunas estructuras como celulas y cilindros se
lisan fcilmente; obtencin del sedimento: homogeneizar bien la muestra, verter 10 ml en un tubo
de centrifuga (fondo cnico), centrifugar a 1500 rpm durante 10 minutos; decantar el sobrenadante
(quedando solo 1 ml), re-suspender el sedimento residual, montar un fresco (una gota entre porta y
cubreobjetos, evitando la formacin de burbujas), observar al microscopio a 40x,
intensidad lumnica media y condensador a media altura; tambin se puede observar a 10x en
el permetro de cubre si hay los cilindros hialinos.
Estructuras organizadas
- Hemates: pueden proceder de cualquier parte del sistema renal; en gran numeroindica infeccin,
traumatismos, neoplasias y litiasis renal; presencia normal de 1-2/campo o como
una contaminacin menstrual; pueden confundirse con levaduras y cristal de
oxalato clcico monohidratado; con tincin Gram se diferenciar => los hemates son teidos de
rojo, levaduras de violeta y cristales incoloros; es importante distinguir entre macro-hematuria (se ve
en el sedimento de color rojizo) y micro-hematuria (nicamente se detecta al microscopio), tambin si
el color rojo observado macroscpicamente procede de hemates o Hb (al centrifugar el sedimento, el
color rojizo de Hb permanece).

- Leucocitos (neutrfilos): pueden proceder de cualquier parte del sistema renal; >50% de ellos se
lisan al permanecer mas de 2-3 horas a temperatura ambiente; presencia normal de 1-2/campo (varn)
y 1-3/campo (mujer); cifra superior de normal en el sedimento => piuria (>5 leucocitos/campo indica
=> infeccin renal en cualquier nivel);

- Espermatozoides: formados por 2 partes cabeza y cola; frecuente en un sedimento

del varn (eyaculaciones recientes, poluciones nocturnas, etc.), y en mujer despus de haber
mantenido relaciones sexuales.
- Bacterias: la composicion de orina es un excelente medio de cultivo para los microorganismos;
la mayora de ocasiones son fruto de una contaminacin de la flora saprofita alojada en
zonas prximas al meato urinario => anal, perineal, vaginal (sobre todo en mujeres); su presencia en el
sedimento, no debe ser tenida en cuenta salvo que vaya acompaada de piuria (aumento de leucocitos).
- Levaduras: su presencia en la gran mayora debido por una contaminacin, salvo acompaada de
una piuria; en personas diabticas, debido a la glucosuria, parecen facilitar el crecimiento mictico;
su identificacin es sencilla, por su forma ovoidea, frecuentemente con presencia de celulas
en gemacin; su tamao es ligeramente mayor que los hemates (pueden confundirse); su aumento en
la orina se trata de vaginitis causada por Candida albicans.
- Parsitos: (1) Protozoos: normalmente se trata de Trichomonas vaginalis (frecuente en
sedimentos de mujeres con vaginitis que puede ser asintomtico y mas raro en los de
hombres); aspecto piriforme de mayor tamao que los leucocitos y una gran motilidad (por sus
flagelos); su identificacin es mas complicada cuando la motilidad esta mermada (al ser de un tamao
semejante al de los leucocitos); la piuria que le acompaa puede hacer pensar (errneamente) en
una infeccin bacteriana y se descarta esta posibilidad al obtener urocultivos negativos;
(2) otros parsitos: su aparicin es siempre el resultado de una contaminacin de la muestra de orina
con materia fecal;

Celulas epiteliales: el rbol urinario esta revestido por 3 tipos de epitelio => (1)columnar
/tubular /renales /cuboideo (capsula de Bowman, tbulos distal, proximal y colector) (2) transicional
o urotelio (pelvis renal, urteres, vejiga y uretra) y (3) escamoso (uretra y vejiga); una
escasa descamacin es normal, pero se puede aumentar por causas => microorganismos,
productos qumicos, cuerpos extraos, procesos degenerativos, procesos invasivos-destructivos.
- Celulas tubulares /renales /cuboideas: son de tamao 1/3 mayores que los leucocitos; su
forma normal es redonda con ncleo grande y cntrico; un sedimento normal 0-1/campo; aumentado
en pielonefritis y glomerulonefritis.

- Celulas de transicin (segunda capa de vejiga): el epitelio transicional espluriestratificado (3

capas => basal, intermedia y superficial); las celulas son de tamao 2-4 veces mayor que leucocitos; su
forma es redondeada, piriforme o raqueta con un ncleo pequeo; un sedimento normal 0-2/campo;
su aumento exige un estudio citolgico mas completo (p.ej. tincin de Papanicolau), por posibilidad de
un carcinoma en cualquier punto entre la pelvis renal y la vejiga.

- Celulas del epitelio escamoso: son planas y tienen abundante citoplasma con nucleo centrico y
pequeo; a veces sus bordes aparecen doblados, replegados; un sedimento normal 0-1/campo.

Cilindros: se forma en tbulos colectores y distales; es un resultado de la consolidacin de

las protenas en los tbulos de las nefronas; es normal encontrarse algunos (sobre todo hialinos) en el
sedimento; se desintegra en la orina a pH alcalino y en presencia de bacterias (con ureasa); la matriz de
todos ellos es una muco-protena (Tamm-Horsfall) segregada en la orina; causantes de
su formacin => (1) disminucin del pH de la orina, (2) aumento de la densidad o concentracin de
solutos, (3) un grado de estancamiento de la orina (disminucin del filtrado glomerular); el lugar de la
nefrona en que se forman, determina su tamao y forma => cilindros estrechos (contorneados)
proceden de los tbulos distales y cilindros anchos se originan en los tbulos colectores.
- Cilindros hialinos: se pueden encontrar en grandes cantidades en orinas normales
(deshidratacin y estrs fsico) y tambin en nefropatas; su aparicin en el sedimento no
tiene significacin clnica (1-2/campo); para visualizar su escasa refringencia, hay que evitar un exceso
de iluminacin; normalmente sus contornos se aprecian con suficiente nitidez y uno de sus extremos es
romo (un dedo de guante); existe tambin cilindros granulo-hialinos, muy semejante a los hialinos,
pero con algunas incrustaciones en su estructura (sin significacin clnica);

- Cilindros granulosos: predomina la estructura granular y desaparece el aspecto hialino;2

tipos => cilindros granulosos finos (semejante a los hialinos en tamao y forma; tienen mayor
refringencia debido a la masiva pequeos grnulos de inclusin) y cilindros
granulososgruesos (estructura totalmente diferente a los hialinos; son de mayor tamao,
aspecto rgido y mayor refringencia; sus borden son contrastados y angulados; en orinanormal 01/campo; el aumento de su presencia indica una nefropata.

- Cilindros celulares: la presencia de ellos en la orina nunca es normal; tipos:

(1) Epiteliales - la matriz del cilindro engloba celulas epiteliales que se han desprendido de la luz
tubular; gran variedad de nefropatas, lesiones del epitelio tubular (debidas
adiversos txicos industriales, medicamentos y virus) puede causar la formacin de este cilindros.
(2) Hemticos (eritrocitarios) - aparecen en sedimentos con hematuria; es un signo de lesin a nivel
del parnquima renal (vasculares o pielonefritis); la cantidad de estos cilindros suele ser escasa y
dificulta su localizacin.
(3) Leucocitarios - fcil de reconocer porque los leucocitos presentes en su matriz se conservan
estables durante el trayecto por los tbulos; su presencia normalmente acompaada por piuria
intensa e indica infeccin localizada en el parnquima renal(pielonefritis) o lesiones de tipo
inflamatorio (glomerulonefritis aguda).
(4) Bacterianos - se parecen a los granulosos toscos; generalmente unidos a piuria y muy
probablemente se trate de una pielonefritis.

- Cilindros grasos: cilindros granulosos o celulares con pequeas inclusiones lipdico (gotitas de
grasa); muy refringentes y tonalidad amarillenta donde se localizan dichas inclusiones; indica
una nefropata todava no manifestada.

- Cilindros creos: son muy refringentes, rgidos, de apariencia dura, superficie rugosa y
brillante (como la cera de las velas), los extremos angulados y generalmente de gran tamao; su
presencia es un sntoma claro de una alteracin renal importante; suelen estar inmersos en
una cilindruria (presencia de la mayora de los diversos tipos de cilindros).

Estructuras no organizadas
Cristales: en general son productos finales del metabolismo que adoptan formas cristalinas segn la
condiciones fsico-qumicas de la orina (la pH sobretodo, densidad, temperatura, etc.) y se excretan a
nivel urinario; se diferencian en 3 grupos:
(1) Cristales endognos normales - no corresponden a alteraciones metablicas ni funcionales, muy
frecuente en el sedimento y pueden aparecer en orinas recin emitidas.
(2) Cristales endognos patolgicos - reflejan trastornos metablicos o afectacin grave
de algn rgano o sistema y muy raras veces aparecen en orina.
(3) Cristales exgenos - aparecen en la orina tras la introduccin en el organismo (va enteral o
parenteral) diversas sustancias (contrastes radiolgicos/ contraste radiopaco va endovenosa y
medicamentos p.ej. sulfonamidas, etc.)

- Cristales de acido rico: en orinas cidas; son birrefringentes; de formas variadas (p.ej. agujas);
color entre marrn rojizo, el amarillo e incluso incoloros; indica una situacin patolgica o
concentraciones elevadas de acido rico; un sedimento normal 0-2/campo.

- Cristales de oxalato clcico mono-hidrato y di hidratado: en orinas cidas y ligeramente

neutras; menos frecuente; de forma prismas incoloros -casi nunca aislados-unidos por un punto
intermedio (pesas de gimnasia), la mas frecuente es de forma sobre; tambin los hay de forma
redondeados, finamente estriados, incoloros y con una depresin central (radios de bicicleta); un
sedimento normal 0-2/campo.

- Uratos amorfos: en orinas cidas; se presentan como un precipitado amorfo, coloreado debido a la
presencia de pigmentos urinarios de color amarillo-naranja (color ladrillo); no tiene mucha
importancia clnica.

- Cistina: en orinas cidas; tiene significacin clnica por si solos => aparecen comoconsecuencia de
cistinuria; aspecto incoloro con forma de placas hexagonales, regulares finasy transparentes;
es imprescindible una vez observados en el sedimento, confirmar la concentracin de cistina en la
orina.

- Leucina y tirosina: en orinas cidas; raramente se observan; son productos finales

del metabolismo proteico y suelen aparecer juntos en situaciones clnicas graves=> destruccin o
necrosis tisular importante, fundamentalmente de tejido heptico (hepatitis, cirrosis, etc.); los cristales
de tirosina forman manojos de agujas finas y los de leucina son
como grnulos esfricos de estras radiales y concntricas, de aspecto oleoso o graso y muy
refringentes; ambas son de color amarillo o marrn.

- Cristales de bilirrubina: en orinas cidas; de pacientes con bilirrubinemia (bilirrubina alta en

sangre); de forma agujas con color marrn-rojizo (flecha verde).

- Uratos amoniacos: en orinas muy alcalinas; de color amarillo/marrn muy intensa; predomina la
forma esfrica de distinto tamao; no tienen mucha importancia clnica, peropueden estar asociados a
infecciones del tracto urinario, por bacterias con ureasa+.

- Carbonato clcico: en orinas alcalinas o neutras; no es frecuente y no tiene mucha

importancia clnica (procedencia de ingesta vegetales); de forma amorfo o granular, en ocasiones
como pequeos lazos y raramente como pequeas esferas incoloras;

- Fosfato clcico (hipurato clcico): en orina alcalina o neutra; no es frecuente; de forma prismas
largos y afilados (agujas), en ocasiones se agrupan formando rosetas o estrellas, tambin como placas
granulares, amorfas e incoloras (similares a acido rico); no tiene mucha importancia clnica, pero
puede ser ligada a hipertrofia de prstata o algunas infecciones
urinarias crnicas; clculos urinarios contienen fosfato clcico.

- Fosfato triple (amnico-magnesico-clcico): frecuente en orinas alcalinas o neutras; de forma

tapa de atad, aunque tambin puede verse como octaedros (muy variable); no tiene mucha
importancia clnica.

- Cristales de creatina: raramente encontrados en orinas de adultas, pero es frecuente en orinas de

nios y nias antes de la pubertad; es un metabolito de la degradacin endgena del tejido
muscular (su aumento => distrofias musculares, poliomielitis, etc.); de forma pseudohexagonal caracterstica.
- Fosfato amorfo: en orinas alcalinas; de semejante forma a uratos amorfos, pero de color
blanquecino.

Informe del sedimento urinario

1. debe preceder por el estudio de "anormales" en orina (tiras reactivas => pH, densidad
y caractersticas patolgicas)
2. deben observarse al microscopio optico (40x) al menos 10 campos.
3. debe proporcionar una visin del valor medio de cada elemento o estructura, obtenido en todos los
campos observados.
4. debe ser "escueto" y "conciso" (solo hay que poner lo verdaderamente importante)
5. debe seguirse un orden => hay que informar primero el examen realizado de citolgico, segundo el
de qumico y por ultimo el de microbiolgico.
Examen citolgico:
- celulas hematolgicas => se redactan con nmeros y abreviaturas (p.ej. 6-8 L/C = no.leucocitos por
campo); se informa si existe piuria y hematuria y si se forma acmulos.
- celulas epiteliales => se redactan con adjetivos: escasas (algunas 1-3) - moderada (3-4) abundante (6-8) - intensa (muy abundante 10-12); las importantes son las renales y las de transicin;
las celulas escamosas (de las vas bajas), se informan cuando son abundantes.
- cilindros: se redactan al igual que las celulas; es importante identificarlos e indicar en el informe el
tipo de cilindro.
Examen qumico (en un sedimento de orina normales, es frecuente no incluirlos en el informe):
- cristales => se redactan con adjetivos; cuando son muy abundante, se habla de "diatesis".
- compuestos amorfos => se redactan con adjetivos
Examen microbiolgico:
- bacterias => se redactan con adjetivos; es necesario especificar el tipo de m.o. y su movilidad
- levaduras => se informa con adjetivos.
Examen microbiolgico de una muestra de orina - en condiciones normales carecen totalmente
de flora bacteriana; la infeccin del tracto urinario es frecuente y la mayora de
m.o. patgenos proceden de la flora intestina => Bacilos Gram- (E.coli, Proteus spp, Pseudomonas

aeruginosa, Klebsiella pneumoniae); Cocos Gram+ (Streptococcus grupo D y

Staphylococcus); Levaduras (Candida spp.); la toma de muestra debe ser obtenida en condiciones
aspticas en un recipiente estril, evitando en todo momento la contaminacin; el paciente debe ser
instruido de la forma mas adecuada.
Anlisis de microbiolgico (urinocultivo)
1. Preparacin de un "inoculo"
2. Sembrar en medio Cled (la ausencia de electrolitos, impide la invasin por
proteus);McConkey (un medio selectivo y diferencia para m.o. Gram-); agar Cetrimide (eficaz para
la bsqueda de pseudomonas)
3. Incubar a la temperatura optima de crecimiento de los m.o. buscados (generalmente a 37C)
4. Realizar el recuento tras la incubacin (presumible-mente han crecido los causantes de la infeccin)
=> menos de 10.000 mo/ml de orina es negativo; mas de 100.000 mo/ml hay infeccin urinaria; entre
10.000 y 100.000 mo/ml el diagnostico es incierto; puede haberse infeccin no detectada por causas
=> un tratamiento ATB instaurado, una obstruccin a nivel de las vas renales o la muestra recogida
por una puncin supra-pbica (sin pasar por la uretra, donde esta la infeccin).
5. Una vez determinada la infeccin, hay que resembrar en medios selectivos, para proceder
la identificacin (tipacin) del germen causal de la misma.

Tema 18 - Cocos aerobios y anaerobios facultativos

(patologa e identificacin)
Gram+ => Micrococaceae (Staphylococcus - Micrococcus - Stomatococcus Planococus); Streptocococeae (Streptococcus - Pediococcus - Gemella Aerococcus);Peptococaceae
Gram- => Neisseriaceae (Neisseria - Branhamella - Moraxella)
Staphylococcus => cocos Gram+ inmviles, aerobios y anaerobios facultativos, tamao +/- 1 um; en
forma de racimos, catalasa+, gelatinasa+, nitratasa+, fermentadores de muchas azucares (via EMP); no
capsulados y resiste al calor; crecen en medios generales y medios con alto contenido de NaCl
(halfilo); resistentes a agentes externos, distribuidas ampliamente en la naturaleza, flora normal de
las mucosas y la piel, causante de la intoxicaciones alimentarias, heridas, etc.
Especies importantes (existe >25 especies y varios sub-especies/ cepas)
(1) S. aureus (saprofito de >40% de fosas nasales y 10% de vaginas) => estafilococo dorado
(pigmento amarillo); coagulasa+; fermenta el manitol; sensible a la novobiacina.
- 30 Ags (propiedades antifagocitarias y producen estructuras pigenas/ caractersticas en las
lesiones: polisacrido A es el mas importantes - inducen la formacion de Acs; protena A - un potente
agente antignico) => se subdividen en tipos segn sus caracteres antignicos;
- Produce toxinas (hemolisinas - lisan eritrocitos y leucocitos; t.exfoliativa/ exotoxina - causa
eritemas en la piel; leucopidinas - destruyen pmn y macrfagos; enterotoxina - anula la accin del
jugo gstrico y acta en el centro del vomito, nauseas y diarreas);
- Fermentos/enzimas (coagulasas - activa la protrombina; fibrinolisinas o estafiloquinasasactivador del plasmingeno; penicilinasas o beta-lactamasa - romper el anillo b-lactamico de las
penicilinas creando resistencia);
- Hemolisinas alfa - provoca hemlisis beta en AS; hemolisina beta - provoca hemlisis alfa en

AS;
- Enterotoxinas tipo A, B (causan intoxicaciones alimentaria) y D causa enterocolitis;
La accin patogena directa => procesos inflamatorios, forunculos, supurativos y de
necrosacin (en heridas y quemaduras); indirecta => afecta al tubo digestivo por la entero-toxina
(gastroenteritis con nauseas, vmitos y diarreas, duracin 1-2 das, se trata con sueros orales o antidiarreicos); la bacteria no llega al intestino (solo su toxina), por eso no se encuentra en las heces; crece
muy bien con la temperatura veraniega y en las cremas; infeccin generalizada
(septicemia) => formacin de cogulos o trombos intravenosos, artritis, pleuritis,
endocarditis, osteomielitis o meningitis en los debilitados (periodo de incubacin 1-6 horas).

(2) S.epidermidis y (3) S.saprophyticus son estafilococos oportunistas; distribuidas en el medio

ambiente, la piel y mucosas; son patgenas en debilidad; S.saprophyticus puede tener pigmento
dorado y puede fermentar Manitol; S.epidermidis sensible a la novobiocina (lo que le diferencia a
S.saprophyticus).
Aislamiento de los estafilococos:
- Muestra procede de las heces => medios selectivos Chapman, ricos en NaCl(carcter halfilo),
contiene manitol (diferencia S. aureus del resto de Staphylococcus); Otros tipos de muestras => medio
AS (observar caractersticas de las colonias - color, hemlisis, etc).
Pruebas bioqumicas:
- Los estafilococos degradan muchas azucares (glucosa, sacarosa, fructosa, manosa, etc.);
produce gelatinasa+, catalasa+, nitratasa+, crecen muy bien a 37C, hemolisina alfa y beta, coagulasa+
(S.aureus).
Diagnstico bacteriolgico:
- Toma muestra con torunda estril o por puncin segn los casos en total asepsia; tincin Gram;
aislamiento en medio Chapman/manitol salado y AS, tras la incubacin observar las colonias;
pruebas bioqumicas - coagulasa (S.aureus), fermentacin de glucosa, catalasa, gelatinasa, hemolisinas
alfa y beta (cepas patgenas), fibrinolisinas, fermentacin del manitol (S.aureus); estudio de la
sensibilidad a la novobiocina(diferenciar S.epidermidis de S.saprophyticus)
- Diferenciacion del genero Staphylococcus y Micrococcus (en principio no es patogeno) =>
Staphylococcus sensible a bacitracina y eritromicina; Micrococcus a veces pueden daroxidasa+.
- Estafilococos coagulasa- es un grupo heterogneo (+ importante
son S.epidermidis yS.saprophyticus) 80% en el pasado no causan infecciones importantes, pero cada
vez esta tomando mas importancia; ademas muestra resistencia a varios ATB alternativa de penicilina
(meticilina y cloxacilina); pueden producir infecciones urinarias, bacteriemias (por la implantacin de
cateteres i.v.) y endocarditis.

Streptococcus => cocos Gram+, tamao pequeo, capsulados, anaerobios facultativos, se agrupan en
cadenas, fermentador de glucosa, son saprofitos, oportunistas y algunos patgenos; poseen Ags
(polisacrido C - segn sus caractersticas, se clasifican engrupos A-V de
Lancefield; protena M antifagocitarias, la posee el grupo A)
Clasificacion
A. segn el tipo de hemolisis (capacidad de romper hemates - produce hemlisis alrededor de sus
colonias en AS) => gamma hemoltico, alfa hemolticos/ hemlisis parcial (decoloracin parda verdosa
- S.viridans);beta hemolticos/ hemlisis total (halos de transparencia grandes entorno a su colonia) grupos A, B, C, D (enterococo) G y F; estreptococo NO Beta-hemolticos - grupo
D, S.viridansy S.pneumoniae (alfa y gamma)
B. segn sus caracteres bioqumicos (sensibilidad a bacitracina, optoquina, tolerancia a
NaCl, degradacin de bilis esculina y factor CAMP):
- Sensible a bacitracina (grupo A)
- Crecimiento en NaCl 6,5% (grupo D enterococos)
- Factor CAMP => potenciar la accin hemoltica de S.aureus (lo produce grupo B)
- Pruebas de bilis esculina - hidrolisan este compuesto (grupo D enterococos)
- Sensible a optoquina (S.pneumoniae /neumococo)
- Hidrlisis de hipurato sdico (grupo B)
C. segn los caracteres antignicos (a traves de reacciones serologcas especificas
=> aglutinacin, precipitacin, inmunofluorescencia, etc.) => los Ags en la pared celular
(pptido glicano - toxica y facilita la unin de ellos a las clulas epiteliales invadidas; polisacrido C distintas caractersticas que confiere la agrupacin de los estreptococos (grupos de Lancefield);
- Grupo A (la + importantes) => la mayora son Beta-hemolticos y patogenos al
hombre; protena M se presenta como pelos en el permetro de la pared celular (anti-fagocitaras).
- En las capsulas del grupos A y C se encuentra enzima hialuronidasa(caractersticas antifagocitaras)
Accin patgena e Inters clnico:
(1) Streptococcus del grupo A (S.pyogenes) => causan 90% de las infecciones estreptoccicas;
muy sensibles a los agentes externos; son floras de la mucosa nasal y farngea; poseen polisacrido C
(proporciona la especificidad de grupo) y protena M(facilita la adherencia a las clulas invadidas
y proteccin a la fagocitosis); son Beta-hemolticas, sensibles a la bacitracina y variable a optoquina
- Poseen hemolisinas estreptoccicas/ estreptolisinas (O y S); estreptolisina
S(poco antignico) => holoprotena toxica responsable de hemlisis en medio AS;estreptolisina
O (muy antignico) => hetero-protena exotxica muy activa de efecto hemoltico frente
a glbulos rojos y leucocitos (pmn y macrfagos => alterando la estructura celular); induce a
la formacin de Acs ASLO.
- Produce toxina eritrognica responsable del exantema de la fiebre escarlatina;
- Enzimas estreptoquinasas (activador de plasmingeno => plasmina en fibrinolisis); induce a
la formacin Acs; se utiliza en el hospital en procesos trombo-gnicos.
- Enzima desoxirribonucleasa estreptoccica (despolimeriza ADN); son antignicas y se
distingue en 4 grupos (A-B-C-D).
- Enzima Hialuronidasa (hidroliza el acido hialurnico del tejido conjuntivo); facilita su invasin.

- Proteinasa estreptoccica (origina procesos inflamatorios y necrosacin)

Patogenicidad de S.pyogenes (grupo A) => Infecciones en la piel o mucosas (+frecuentes anginas/faringitis sobre todo a nios/contacto directo, otitis y sinusitis) 95% de infecciones nasofaringeas son producidas por estreptococos del grupo A; infecciones NO supuradas/ inmunolgica =>
fiebres reumticas (complicaciones de tto no adecuados), glomerulonefritis, endocarditis, meningitis,
sepsis.

(2) Streptococcus del grupo B (S.agalactiae) => saprofito del hombre en rino-faringe, urogenital, vaginal e intestinal; produce infecciones oportunistas; hipurato+(degrada el hipurato sdico)
es lo que le diferencia del grupo A; posee factor CAMP (potenciar la accin hemoltica de S.aureus);
puede origina meningitis e infecciones pulmonares en el neonato, infecciones del tracto respiratorio,
mucosas, piel, etc; son Beta-hemoliticos, resistente a la bacitracina;

(3) Streptococcus del grupo C => es el mas proximo al grupo A; sonBeta hemolticos (tambin alfa
y gamma) y muy sensible a los agentes externos; resistente a la bacitracina; crecen en medios
salinos (NaCl 6,5%); posee enzima hialuronidasa; saprofito del hombre en la rinofaringe; puede
producir mastitis en vacas, muermo en caballos y sepsis ??? en el hombre.
(4) Streptococcus del grupo D => son alfa, beta y gamma hemolticos; resistentes a agentes
externos y ATB;
- los enterococos => S.faecalis y S.faecium; son saprofitos del intestino del hombre; crecen bien en
NaCl 6,5% (a diferencia de los NO enterococos); hidrolizan la bilis esculina; son alfa-betagamma hemolticos; resistente a la bacitracina; puede producir infeccin urinaria e herida.
- los No enterococos => S.bovis, S.equinus y S.anginosos (afecta vacas y caballos);hidrolizan la
bilis esculina; resistente a la bacitracina;
(5) Streptococcus del grupo G, F y E => saprofitos de la rinofaringe, vias genitales e intestino en
el hombre; pueden producir infecciones en vias urinarias, heridas; resistente a la bacitracina; son alfa y
beta-hemolticos; crecen variable en medios salinos (NaCl 6,5%)
(6) Streptococcus Alfa hemoliticos (S.viridans) => no son capsulados; producen alfa y gamma
hemolisis; saprofitos de la orofaringe, mucosa bucal, placa dental (caries); resistente a la optoquina;

(7) Streptococcus pneumoniae (neumococo) => es un grupo a parte; diplococos, Gram+ y son
capsulados; muy sensibles a medios externos; son alfa y gamma hemolticos;sensibles a optoquina;
crecen variable en medios salinos (NaCl 6,5%); saprofito en aparato respiratorio; puede producir
neumonias, inflamaciones sinusitis, otitis y meningitis (mas frecuente en adultos);

Aislamiento:
- toma de muestra con total asepsia de la rino-faringe con hisopo estril, una muestra del pus (si
hubiera); se analiza de inmediato (estreptococos son sensibles a medios externos);
- un frotis para la tincin de Gram; si se sospecha S.pneumoniae se realiza una tincin negativa con
tinta china y prueba de "Quellung" (determinar Ags de la capsula); se produce una reaccin de
Quellung cuando un Acs tipo especfico se une al polisacrido capsular del neumococo y causa un
cambio en el ndice refractivo de la cpsula hacindola aparecer hinchada y ms visible.
- la siembra en AS-CNA (posibles hemlisis - estreptococos son resistentes a nalidixico que inhibe el
crecimiento de otros grmenes); realizar hemocultivos si se sospecha endocarditis o sepsis; las colonias
son grisaceos, redondos de bordes lisos y pequeos; medios selectivo y diferencial con NaCl 6,5% =>
permite el crecimiento de enterococos del grupo D.
Pruebas bioqumicas:
- pruebas de catalasa-, hemolisis en AS, sensibilidad o no de optoquina y bacitracina; hidrolisis
de hipurato (positivo en el grupo B), utilizacin de bilis esculina.
- identificar los grupos antignicos segn el tipo de sustancia polisacrido C (clasificacin de
Lancefield) por metodo serolgicos => prueba de ltex (romper la capsula para sacar la
sustancia; reaccin inmuno-complejo Ag-Ac).
- los Gram+ en general son sensibles a la vancomicina excepto algunos cocos Gram+, catalasa- que no
son estreptococos (Pediococcus es resistente a la vancomicina).
Pruebas serologcas / inmunologicas:
- la bsqueda en el suero (dilucin seriadas) del paciente de Acs frente a toxinas y enzimas de
estreptococos (sobre todo grupo A) => ttulos de Acs antiestreptolisinas O (ASLO); para saber si
la infeccin es aguda o creciendo; en caso de fiebres reumticas con ttulos de ASLO negativos, se
determinan los ttulos de Acs antiestreptoquinasas (ASK), antihialuronidasas(ASH); pruebas
de hinchamiento capsular con suero antineumococico polivalente (prueba de Quellung) muy utilizado
para determinar S.pneumonia => se aaden Acs contra Ags capsulados, si hay aglutinacin es signo de
que esta estreptococo.
Neisseria => cocos Gram-; en forma de diplococos (granos de caf), aerobios; son saprofitos de
mucosas (genitales, faringe, fosas nasales) y cavidades del hombre y los animales;citocromo-oxidasa y
catalasa+; utilizan azucares con metabolismo oxidativa y fermentativa;
producen pigmentos carotenoides; nutricional-mente exigentes; sensibles a medios externos.
Especies mas importantes - 4 gneros => Neisseria, Branhamella (B.catharralis), Acinetobacter y
Moraxella.
(1) Neisseria meningitidis (meningococo) => es una especie patgena para el hombre;
son parsitos obligados del hombre (no se encuentran libre en la naturaleza); es difcil de cultivar si
hay competicin (acompaadas por otros grmenes); son capsulados; utiliza glucosa y maltosa;
posee fimbrias (facilita su adherencia) y capsulas (contiene polisacridos con
comportamientos serolgicos diferentes A,B,C, etc.); crecen a 35-37C; son muy sensibles a medios

externos; producen meningitis epidmico (contagio por gotas de flugge en contacto ntimos);
otros causantes de meningitis => Haemophyllus influenzae, Streptococcus agalactiae, Escherichia coli,
Pseudomona aeroginosa, Micobacteria, Neisseria meningitidis, Cryptococcus neoformans y otros.
(2) Neisseria gonorrhoeae (gonococo) => idnticas caractersticas que meningococo;
utiliza glucosa como fuente de carbono; requieren medios enriquecidos con CO2 5-10% para potenciar
su crecimiento a 35-37C; son muy sensibles a medios externos y son parsitos estrictos del hombre
y produce gonorrea (no se encuentra libre en la naturaleza);
(3) Neisseria saprofitas => saprofitos de la rino-faringe y genitales; son poco exigentes y crecen a
22-35C en medios generales; resistentes a medios externos y no son patgenos para el hombre.
Accin patgena e inters clnico
Neisseria meningitidis (meningococo) => diplococos /granos de caf; coloniza las mucosas
y vas respiratorias (sobre todo superiores); 5-30% son portadores sanos en rino-farngeo; afectan
a nios de 6 meses hasta 5 aos (causas mas importantes de mortalidad
infantil); tambin afectan nios mayores y adultos jvenes de 6 hasta 25
aos;estructura antignica => componentes de su capsula (polisacrido), las fimbrias (facilitar la
adherencia y la invasin) y protenas de la membrana (toxica sobre las celulas invadidas);
Cuadro clnico - comienza con una rino-faringitis de sintomatologa leve (sobre todo en nios - en
adultos se forman Acs anti meningococo) evoluciona a forma severa, se complica con bronquitis; si el
meningococo pasa a la sangre, originara micro-focos en la piel conerupciones petequiales (1-2mm) en
el tronco e extremidades inferiores, cefaleas, fiebres altas, artralgias; puede pasar a
LCR con fiebres muy altas, cefaleas fuertes, rigidez de nuca, vmitos, diarreas, etc.; se agravan hasta la
muerte sin tto efectivo y rpido; el examenLCR es turbio, purulento con abundantes meningococos
(debido a acumulacin de pmn con meningococo dentro (celulas CLUE); tto con penicilina (G) - el tto
del portador es rifampicina.

Neisseria gonorrhoea (gonococo) => idnticas caractersticas que el meningococo; su afinidad

particular es sobre las mucosas uro-genitales, con fimbrias (adherencia a las celulas epiteliales
dificultando la fagocitosis); posee endo-toxina que inactiva Acs prximos; produce gonorrea en
hombres y mujeres (ETS);
Cuadro clnico - tras un contacto sexual, los gonococos se adhieren a la superficie de la
mucosa gracias a las fimbrias y protenas de la membrana; posteriormente se penetran a tejidos subepiteliales y empiezan a multiplicarse, liberando endo-toxina con efecto toxico a la uretra, cuello
del tero, ano (donde colonicen), produce la destruccin de celulas del epitelio
y supuracin (secrecin purulenta) y dolor a la miccin; en las mujeres puede ir acompaada
por uretritis, vaginitis y 20% salpingitis de las trompas (produce esterilidad en mujeres); 50% de los
casos son asintomticos con lo que la ausencia de tratamiento conduce a la cronificacin; puede
provocar bacterimia dando artritis supurativos; tto => penicilina o sus derivados; en neonatos
provoca gonococia ocular que conduce a la ceguera - se previene instilando gotas de nitrato de plata mtodo de "Crede" y (contra Chlamydia es mas efectivo) eritromicina???

Aislamiento - caracteres bioqumicos - diagnostico

N.meningitidis - toma de muestra de LCR (puncin lumbar), sangre y/o exudado faringeo; se deben
examinar de lo antes posible (sensibilidad al medio externo); se transporta en un medio de ThayerMartin modificado a 37C (en caliente); si la muestra de LCR es turbio o purulento, se divide en 2-3
tubos; 1er tubo se centrifuga y sobre el sedimento se realizan frotis Gram; 2nd tubo se utiliza para
la siembra en AS, agar chocolate, Mueller Hinton y Thayer-Martin; 3er tubo se realiza un hemocultivo
y recuento celular; meningococo crecen dando colonias transparentes diminutas y no hemolticas; las
placas se incuban a 37C enambiente de CO2 5-10%.
- Pruebas bioqumicas => catalasa+, oxidasa+, prueba de la utilizacin de glucosa y maltosa
por oxidacin (aerobio), lactosa-, nitratasa-.
- Estudios serolgicos => inmunofluorescencia directa del LCR o el suero, contrainmunoelectroforesis y tcnica ELISA.
- Existe sistema de multi-prueba para Neisseria y Haemophylus.
N.gonorrhoeae - toma de muestra a partir de la uretra (hombre), recto en homosexuales y uretra,
cuello de tero y recto (mujer), se realizan en el laboratorio (sensibilidad a medio externo), por la
maana antes de la primera miccin (al ser posible); se procede de inmediato al estudio directo y la
siembra en medios especficos o se transporta en medio TM modificado.
- se realiza la tincin (Gram- en forma de granos de caf); en el frotis se ven los pmn con diplococos
dentro; la siembra se har en AS, agar chocolate, Thayer-Martin (con factores de crecimiento y ATB
vancomicina, anfotericina, colistina y trimetropin que inhibe el crecimiento de otros grmenes); en TM
los gonococo son colonias pequeas de color gris y los meningococo son blanquecinas se incuba a 3537C y atmsfera enriquecida de CO2 5-10%;
- Pruebas bioqumicas => utilizacin de azucares por va oxidacin (glucosa+, lactosa, maltosa+ para
meningococo, y sacarosa); oxidasa y catalasa son positivos, nitratasa-.
- Pruebas serologcas => hemo-aglutinacin, inmunofluorescencia indirecta, ELISA (mas utilizadas)
- Sistema de identificacin multiprueba para Neisseria y Haemophylus.

Neisseria saprofitos (Neisseriaceas) - normalmente son flora de oro-faringe/ naso-faringe; son

especies de bajo patogenicidad, aunque a veces implicadas en meningitis y otros; no requieren medios
especiales para su crecimiento.
- Branhamella catharralis / Moraxella catharralis => hoy en da la clasificacin es confusa (la
tendencia - dentro de la familia moraxellacea), otros autores tienden a diferenciarla y la clasifican
como familia Branhamellaceae; es Gram-, oxidasa+, catalasa+, nitratasa+ (reducen nitratos a
nitritos), no fermentan azucares, crecen bien en medios generales (AS, agar chocolate y Thayer
Martin), son aerobias o 5% de CO2; flora normal de naso-faringe, pero a veces se asla como agente
causal en septicemias e infecciones otorrinolaringolgicas (sinusitis, otitis).
- Acinetobacter => anteriormente clasificada dentro de la familia Gram- no fermentadoras (pero

oxidasa- => bacteria inerte) junto con Pseudomonas; actualmente esta incluido dentro de la familia
Moraxellaceae; son microorganismos que pueblan fundamentalmente suelos y aguas y presentes en
medios hospitalarios (infeccin nosocomial); la especie mas importante
=> A.calcoaceticus (causan neumonas, infecciones urinarias y sepsis); crecen en Mac, AS y otros;
en AS producen colonias grises con halos de hemlisis, oxidasa-, catalasa+, son cocobacilos Gram- (se
pueden confundir con Neisserias por su tamao).
- Moraxella => coco-bacilo, Gram-, no fermentador, inmvil, oxidasa+, catalasa+, difcil de
distinguir con Neisseria; en general los no fermentadores son muy difciles de distinguir y requiere
numerosas pruebas bioqumicas para etiquetarlos.

Tema 19 - Entero-bacterias y vibrios

(patologa e identificacin)
Entero-bacterias - bacilos o coco-bacilos Gram-, aerobios y anaerobios
facultativos, mviles (flagelacin pertrica) o inmviles, fermentadoras de glucosa (con o
sin produccin de CO2), oxidasa-, catalasa+; algunos usan metabolismo fermentativo y otros usan
metabolismo oxidativo; la mayora son nitratasa+; algunos son sulfuhidratasa+ (Proteus y Salmonella),
indol+ (E.coli); son saprofitas/ flora del tracto gastrointestinal del hombre y de los
animales; tambin se encuentra en el agua y en el suelo; resistentes a medios externos; son
potencialmente patgenos en individuos debilitados y produce infecciones oportunistas; algunos
son patgenos siempre donde sea se encuentra, otras depende de la muestra donde se asla y el resto se
cuestiona su papel.
Caractersticas antignicas:
- Ag somtico / Ag O => es lipo-polisacrido, termo-estables, se encuentra en la pared bacteriana, es
una endo-toxina (la parte polisacrido es muy antignico y la parte lipdica es inactiva bioqumicamente).
- Ag capsular / Ag K => se encuentra en la capsula bacteriana, es polisacrido, es antifagocitaras (relacionado con la virulencia de ciertas especies como E.coli K-1 y Salmonella thyphi).
- Ag flagelar /Ag H => es caracterstico de las cepas mviles, es proteico y responsable de
la accin patgena de la bacteria.
Clasificacin segn su capacidad para fermentar la lactosa:
- Fermentadoras rpidas de lactosa (coliformes) => Escherichia, Enterobacter y Klebsiella(tarda a
veces)
- Fermentadoras lentas de lactosa / ONPG+ (coliformes) => Citrobacter, Serratia, Hafnia, Yersinia
(patgeno) y Shigella sonnei.
- NO fermentadoras de lactosa (no coliformes) => Salmonella, Shigella, Proteus, Morganella,
Providencia y Edwardsiella.
Salmonella - entero-bacterias no coliformes, mviles con flagelacin pertrica; bacilos Gram-; en
general provocan infecciones entrico febriles (gastroenteritis, entero-colitis o fiebres tifoideas o paratifoideas).
Especies importantes - S.typhi, S.choleraesuis, S.enteritidis, S.paratyphi A,B y C, S.arizonae.
Accin patgena e inters clnico
- Ag somtico O, Ag flagelar H y Ag capsular VI (en S.typhi - Ag termolbil con poderprotector frente
a los cidos /cida gstrica, resistencia y anti-fagocitaras)
- endo-toxina y enterotoxina (efecto irritante y citotxico sobre el tracto intestinal)
Cuadros clnicos
1. Infecciones entricas (S.typhi - fiebres tifoideas o S.paratyphi A,B o C - para-tifoideas); Las
fiebres tifoideas son transmitidas al hombre va oral (alimentos crudos, poco hechos, mal conservados
y aguas contaminadas), llega al estomago, resiste la acidez gstrica,pasa al intestino delgado
(leon), penetra por endocitosis destruyendo parte de las celulas de la mucosa intestinal; una vez

dentro las salmonellas son fagocitadas por macrfagos ytransportadas por

diferentes vas y provoca bacterimia => todo sucede en el periodo de incubacin (8-15 das); comienzo
brusco de signos y sintomas => los macrfagos les transportan hacia el bazo, higado y MO,
produciendo multiplicacin de nuevas salmonellas, volver al intestino generando placas
ulceradas, necrosacin de placas de Peyer y en casos mas graves originar perforacin y hemorragias.
Las fiebres para-tifoideas son mucho mas leve con un periodo de incubacin de entre 7-10
dias con bacterimia y estado febril que dura varias semanas; no hay perforacin intestinal ni
hemorragias ni invasin de salmonellas a otros rganos; cuadros clnicos => dolores de cabeza,
fiebres altas, anorexia, astenia/ cansancio; preciso un tratamiento que dura 9-10 das.
2. Infecciones gastrointestinales y enterocolitis (S.enteritidis - la mas
frecuente,S.choleraesuis, S.typhimurium y otras); periodo de incubacin 12-36 horas; se
transmite por alimentos contaminados con una concentracin de salmonellas de 10 millones a mil
millones/ml, depende de tipo de la cepa; el alimento les facilita su llegada a pasar el estomago y llegar
al intestino delgado colonizando el leon y el ciego, se penetran por fagocitosis al epitelio y se
multiplican originando una inflamacin que genera cuadros diarreicos con dolor abdominal (perdidas
de electrolitos y agua), fiebres altas, nauseas, vmitos; re quiere untratamiento de re-hidratacin que
dura 6 das - las floras se encargan de eliminarlas.

Aislamiento - pruebas bioqumicas - diagnostico de Salmonella

Salmonelosis => toma muestra de las heces (coprocultivo), anlisis del alimento sospechoso; medios
de cultivo SS, McConkey, caldo selenito; pruebas bioqumicas: ONPG-, TDA-, Citrato+ (S.cholerasuis y S.enteritidis, tambien son CO2+ y Ornitina descarboxilasa+), SH2+, fermentacion de azucares:
Glucosa+, Trehalosa+ (S.typhi yS.enteritidis), etc.
Fiebres tifoideas y para-tifoideas => toma muestra de diferentes localizacin segn la fase de
enfermedad; en la fase de incubacin se busca en heces (coprocultivos), en
orina(urocultivo), sangre (hemocultivo); en la fase inicial de la enfermedad / periodo febril, se
realiza hemocultivo; en el periodo posteriores o finales se busca en heces (coprocultivo); medios
adecuados; se realiza las pruebas bioqumicas, reacciones de aglutinacin cuantitativa (ttulos) de Ags
O, H y VI a traves de sueros especficos monovalentes y polivalentes, especialmente para Ag VI
(pruebas inmunolgicas).
Mucaptest => prueba inmunolgica utilizando suero polivalente (Acs anti O y anti H), un resultado
positivo dara unas colonias fluorescentes (posible Salmonella).

Shigella - bacilo Gram- inmvil, no fermentador de lactosa (excepto S.sonnei) ; son patgenas para el
hombre, provoca afecciones graves y contagiosas sobre el tracto gastrointestinal (disentera bacilar)
especialmente en ambientes de salubridad baja.
Accin patgena e inters clnico - se debe a la produccin de sustancias toxicas, Ags O y
K, plsmidos (facilita la invasin), adhesinas (adherencia a las celulas que invaden),exotoxina con
propiedades cito-toxicas (tipo A - origina necrosis celular, ulceras, hemorragias y perforacin), neurotoxicas y entero-invasivas (tipo B - adherencia a las celulas del epitelio gastrointestinal); al llegar al
intestino del hombre va oral (puede resistir el acido gstrico, por la alta cantidad ingerido
y tambin protegido por los alimentos), ejerce su accin toxica, pasar al colon originando necrosis con
signos y sintomas caractersticas (las toxinas deS.disenteriae no suelen pasar a la sangre); cuadros
diarreicos van acompaados dedolor clico, nausea, vmitos, malestar general y fiebres muy altas
con deposiciones sanguinolentas con moco y pus.
Aislamiento - pruebas bioqumicas, diagnostico de Shigella
Toma muestras de heces recin emitidas en los primeros das de la enfermedad (hay mayor numero de
shigellas), eligiendo restos de moco y sangre si los hubiera; el estudio riguroso(teniendo en cuenta
que Shigella se destruye en medios cidos y a temperaturas <4C; medios de cultivos SS, McConkey,
Hektoen, Yersinia CIN, Campylosel, TCBS;pruebas bioqumicas TDA, KIA (K/A para Shigella y A/A
para S.sonnei), ONPG (positivo para S.sonnei), fresco, ureasa-, VP-, nitratasa+, manitol
(positivo para Shigella y negativopara S.disenteriae); pruebas de aglutinacin cuantitativa (titulo) para
demostrar Acs en el suero del paciente a traves de sueros especficos mono y polivalentes.

Escherichia - entero-bacterias bacilar o coco-bacilar Gram- mviles, fermentadoras de glucosa y

lactosa, produce CO2, aguantan temperaturas altas (la diferencia de otros coliformes), resistente a
medios externos, fcil de encontrar en el agua, alimentos (indicativo de contaminacin fecal reciente);
saprofito de flora aerobia y anaerobia facultativa del tubo digestivo; puede provocar trastornos
gastrointestinales de diarrea, infecciones urinarias, meningitis en neonatos y
excepcionalmente bacterimia; la especie mas importante para el hombre es E.coli (segn la cepa
puede tener Ag somtico O, capsular K y flagelar H, fermentos y endo-toxinas).
Accin patgena e inters clnico - los cuadros clnicos son variables segn el tipo de toxina
que originen; algunas cepas de E.coli forman Ag O y K anti-fagocitaras y resistencia a bactericidas y
ATB (alto poder invasivo); otras cepas forman endo-toxinas, causante de cuadros febriles y diarreicos;
otras cepas tienen un mecanismo de accin anlogo al de Shigella con menor gravedad; a veces
la entero-toxina que producen es parecida a la deVibrio cholerae que causa perdida masiva de agua y
electrolitos.
- si la cepa de E.coli forma una entero-toxina citotxica parecida a Shigella => cuadros diarreicos en
brotes epidmicos que afectan a nios y lactantes (E.coli entero-patgena)
- si forma una entero-toxina semejante a Vibrio cholerae => procesos diarreicos en nios,
adultos, originndose espordica-mente brotes epidmicos (diarrea del viajero - E.colienterotoxgena)
- si forma una entero-toxina citotxica similar a S.disenteriae => procesos diarreicos graves,
hemorragico espordicamente en brotes (E.coli entero-hemorragica)
- si presenta ciertos plsmidos que incrementan su capacidad de invasin => cuadros diarreicos graves
que afectan a nios, adultos con brotes epidmicos en casos aislados (E.colientero-invasiva)
Las cepas de E.coli se distingue con sueros antignicos; E.coli tambin puede provocar infecciones
urinarias (cistitis, pielonefritis, etc), infecciones biliares, heridas, meninges (meningitis en neonatos).
Aislamiento, pruebas bioqumicas - diagnostico
Toma de muestra representativa de alimento, agua, heces, exudado; frotis de Gram; medios de cultivo
Mc, Levine; pruebas bioqumicas => lactosa+, indol+, citrato-, sensible a la Colistina.

Yersinia - entero-bacterias muy patgenas para el hombre (Y.pestis - causante la peste bubnica); son
coco-bacilos Gram-, mviles a 25Ccon flagelacin pertrica e inmviles a 37C, fermentadores de
glucosa (ONPG variable),capsuladas (Y.pestis) y oxidasa-.

Especies mas importantes - Y.pestis (agente etiolgico de la peste bubnica en el hombre)

trasmitida a traves de ratas y pulgas, originando enfermedad grave febril, epidmico de alta
mortalidad; Y.pseudotuberculosis afecta animales y excepcionalmente al
hombre; Y.enterocolitica (sacarosa+ en medio TSI); los 2 ltimos afectan mas a animales que al
hombre (nios) => originando estados febriles y diarreicos.
Accin patgena e inters clnico de Y.pestis => cuadros agudos y febriles con
alta inflamacin de los ganglios linfticos, hemorragias internas, petequias difusas en la piel, en
ocasiones septicemia y neumnia; es muy contagiosa, se origina en lugares de salubridad baja; la
muerte se produce por shock sptico (fracaso multi sistmico) o por neumnia; factores de
virulencia:
- La toxina murina (liberada al medio cuando muera la bacteria) => protena que bloquea
la utilizacin de O2 por parte de las celulas.
- Endo-toxinas (liberadas en el transcurso de la enfermedad) => origina el proceso febril
- Ag V con propiedades anti-fagocitaras
- Coagulasas y fibrinolisinas
Y.pestis llega al hombre a traves de la picadura de pulga (infectada por ratas con peste),atraviesa los
vasos linfticos, pasa a los ganglios donde se multiplica originando bubones,pasa a la sangre y se
disemina por el bazo, higado, pulmones, piel, mucosas, se multiplica provocando
lesiones pigenas (toxina murina), hemorrgicas, necrtica y edematosa; en casos graves aparece
coagulacion intravascular diseminada (CID) (por la accin de lascoagulasas)
o ditesis hemorragica (por la accin de las fibrinolisinas), colapso circulatorio, toxema generalizada y
muerte; formas clnicas:
1. Peste bubnica (la mas frecuente); tras el periodo de incubacin de 3-7 das despus de la
picadura, aparecen signos y sintomas con escalofros, vmitos, formacin de bubones en las ingles
axilas y/o zonas submaxilares (los tejidos circundantes aparecen inflamados); sin tratamiento se
agrava hasta la muerte.
2. Peste pulmonar (es la complicacin de peste bubnica); se produce afeccin pulmonar grave con
insuficiencia respiratoria, cianosis; es altamente mortal.
3. Peste septicmica es estadios ltimos de la peste en cual quiera de sus formas y es generalmente
mortal.
Aislamiento - pruebas bioqumicas - diagnostico
Toma de muestra de exudados purulentos del bubn (por aspiracin), de sangre, LCR, tejido
pulmonar, ndulos linfticos o esputo, heces, segn los casos; la tincin Gram-, nigrosina
(visualizacin de capsulas); medios de cultivo => Mc, Yersinia CIN (colonias muy
pequeas); pruebas bioqumicas => mvil a 22C y inmvil a 37C, Lactosa-, ONPG+,ureasa+, indol y
TDA-, oxidasa-, nitratasa+; a veces Y.pestis y Y.pseudotuberculosis son ONPG
variable; Y.enterocolitica es sacarosa+.

Entero-bacterias oportunistas - bacilos Gram- aerobios y anaerobios facultativos, poco

exigentes nutricional-mente, ampliamente distribuidos en el medio ambiente; son saprofitos de la flora
gastrointestinal, resistente a medios externos y ATB; no son patgenos al no ser si el husped es
debilitados, pueden provocar infecciones hospitalario; en la mayora son lactosa+, bacilos Gramcoliformes;

Principales especies de coliformes/ lactosa+ (Escherichia, Enterobacter, Citrobacter, Serratia,

Klebsiella y Hafnia) y no coliformes /lactosa- (Proteus, Morganella y Providencia).
1. Escherichia => Gram- aerobias y anaerobias facultativas, fermentadoras rpidas de lactosa y
glucosa, produce CO2, indol+, citrato-, sensible a Colistina, mviles.
2. Enterobacter => fermentadora rpida de lactosa, produce CO2, produce acetona de la glucosa
(VP+), citrato+, mvil, ornitina-descarboxilasa+, son comensales de flora intestinal; puede provocar a
individuos debilitados diarreas, infecciones del tracto respiratorio, heridas, etc; especies
importantes: E.aerogenes y E.cloacae.
3. Serratia => fermentadora lenta de lactosa (ONPG+) y la
glucosa,produce acetona (VP+), mviles, citrato+, ADNasa+, ornitina-descarboxilasa+, saprofitas del
hombre y tambin en el medio ambiente (agua y otros lquidos), resistentes a ATB y desinfectantes;
provoca infecciones urinarias y sepsis a personas debilitadas.
4. Citrobacter (huelen a peste) => fermentadora lenta de lactosa (ONPG+), mvil, fermenta la
glucosa y VP- RM+, citrato+; son comensales del tubo digestivo del hombre y puede provocar
infecciones urinaria, respiratoria, sepsis, bacterimias, meningitis a los individuos debilitados; especies
importante => C.freundii.
5. Klebsiella => inmviles, fermentadoras tarda de lactosa, utiliza glucosa
yproduce acetona (VP+), citrato+, ureasa+; son comensales del tracto gastrointestinal
y vas respiratorias superiores; puede provocar neumonas, rinitis, infecciones urinarias; especies
importante => K.pneumoniae (sub especies VP+ y VP-) y K.oxytoca (indol+).
6. Hafnia => mviles a 22C y inmviles a 37C, fermentadora lenta de lactosa (ONPG+),citrato+,
utiliza glucosa y produce acetona (VP+); provoca infecciones hospitalarias.
7. Proteus, Morganella y Providencia => NO fermentan la lactosa, pero si glucosa y produce
CO2, RM+; mviles, TDA+ (diferenciar del resto entero-bacterias), pueblan aguas residuales, el suelo,
materia orgnica y son comensales en la flora intestinal del hombre; pueden provocar infecciones
hospitalarias; especies importantes:
- Proteus mirabilis (indol-, ureasa+, TDA+, SH2+), P.vulgaris (indol+, ureasa+, TDA+)
- M.morganii (ureasa+, indol+, TDA+)
- Providencia rettgeri (ureasa-, indol+, TDA+)
P.mirabilis puede provocar infeccin urinaria, descompone la urea de la
orina quegenera precipitacin de sales clcicas => formacin de clculos renales; tambin puede
provocar infecciones gastrointestinales, toxinfecciones alimentarias, heridas, etc.

Accin patgena e inters clnico - si el husped se encuentra debilitado (postoperatorio,

tratamiento inmunosupresores) los saprofitos podran ser patgenos; las infecciones mas frecuentes
=>
- tipo urinario (40% de las infecciones hospitalarias - pacientes sondados, encamados,
intervencionados quirrgica-mente) provocado por E.coli, P.mirabilis, P.vulgaris, Klebsiella y
Enterobacter, provocando cistitis (de las vas bajas) y pielonefritis (de las vas altas); son infecciones
agudas con fiebre, dolor lumbar, polaquiuria o anuria y disuria; es frecuente en los anlisis de orina
piuria, bacteriuria y proteinuria;
- tipo abdominal son poco frecuente => abscesos y peritonitis debido a perforacin intestinal.
- tipo respiratorio (20% de las infecciones hospitalarias) afectando vas respiratorias
altas, neumonas y bronco-neumonas (pacientes con afecciones crnicas)
Aislamiento - pruebas bioqumicas - diagnostico
- Toma de muestra segn las afecciones o procesos patolgicos en condiciones de total asepsia
- Examen directo (fresco y tincin Gram)
- Aislamiento en medios especficos/ selectivos (Hektoen, Mac) que inhiben los Gram+
- Pruebas bioqumicas e inmunolgicas

Familia Vibrionaceae - Genero Vibrio, Aeromonas y Pleisomonas (los patogenos)

Especie mas importante y patgeno del genero Vibrio - V.cholerae => bacilos Gram- anaerobios
facultativos de morfologa curva (pleomrficos), mviles (flagelacin loftrica), crecen bien en medios
generales y pH alcalino (sensibles al medios cidos), oxidasa+ (la diferencia de la
enterobacteriaceae), halfilo, catalasa+, afectan al tracto gastrointestinal del hombre; es el agente
causal del clera => provoca diarreas graves hasta llegar a la deshidratacin (diarreas masivas), shock
hipovolmico, coma y muertepor deshidratacin (puede perder hasta 10-15 lt/da de agua y
electrolitos); se diferencia dePseudomonas por la diferencia en el patrn de fermentacion de azucares.
Accin patgena e inters clnico:
- Ag somtico O (polisacridos) se utiliza para su tipacin
- Ag flagelar H (no tiene valor para su tipacin - comn a todas las cepas)
- Exotoxina / entero-toxina proteica (el principal efecto patgeno del clera - provoca diarrea masiva)
- Adhesina (protena que tiene afinidad por los azucares) que permite adherirse a la pared intestinal
Para formar cuadros graves es necesario su penetracin por va oral (agua o alimentos contaminados
con el bacilo, p.ej. productos marinos crudos), eludir el medio acido del estomago (sucede cuando se
ingieren >100 millones de grmenes - en el caso de epidemias donde se encuentra 1 milln/ ml de
agua).
Aislamiento - caracteres bioqumicos - diagnostico
- Toma de muestra a partir de las heces diarreicas, vmitos, procedindose de inmediato a
su identificacin (sensible a medios externos); medio de transporte Cary-Blair.
- Aislamiento en medios de cultivo especficos TCBS que impide el crecimiento de gran parte de
microorganismos => produce colonias amarillas por la fermentacion de la sacarosa sobre el medio
verde y tambin se siembre en el Mc.
- Pruebas bioqumicas => oxidasa+, catalasa+, sacarosa+ (produce un tipo de acido dbiles que no
bajara mucho el pH)
- Pruebas serologcas para determinar el titulo de Acs.
Aeromonas - bacilo Gram- no fermentadoras de la misma familia; el especie mas
importante Aeromonas hydrophila; catalasa+ y oxidasa+, VP+, lactosa-, ureasa-, indol+, SH2, mviles; no son halfilo (a diferencia de Vibrio) implicadas en procesos diarreicos.
Plesiomonas - tiene las mismas caractersticas bioqumicas que Aeromonas (excepto en pruebas de
VP y ornitina descarboxilasa); el especie mas importante Plesiomonas shigelloides(se propone a
incluirla a la familia enterobacterias); hay que hacer API para distinguirla de Aeromonas (Plesiomonas
- ornitina descarboxilasa+)

Tema 20 - Bacilos y cocobacilos aerobios y anaerobios

facultativos (patologa e identificacin)
Pseudomonas - bacilos pequeo (coco-bacilo) Gram-, mviles (flagelacin), en generalaerobios
estrictos, catalasa y citocromo oxidasa positivos, en generalmetabolismo glucdico oxidativo;

ampliamente distribuidos en el agua y suelo, pasando de aqu a los animales y al hombre;

son oportunistas en el ambiente hospitalario (pacientes inmunodeprimidos), en ocasiones resultan
muy graves (resistente a muchos ATB - hay que combinar varios).
Los especies mas importantes:
- P. aeroginosa => presenta pigmentos fluorescentes, saprofita en la piel, tubo digestivo??, puede
provocar cuadros graves en individuos debilitados y es mortal si se produjese septicemia;
- P. maltophilia (ahora se llama Stenotrophomonas maltophilia) se llama as, porqueoxida
maltosa (no oxida la glucosa); cogen cada vez mas importancia; oxidasa variable.
Accin patgena e inters clnico - Pseudomonas aeroginosa
- Ag somtico O (polisacridos), Ag flagelar H (proteico), Ag mucoide M (produce exotoxinas
=> enterotoxina responsables de cuadros diarreicos y toxina eritrodrmica).
- Sustancia => (1) piocina (pigmento azulado de accin bactericida), (2) fluoresceina(pigmento verde
amarillo) y (3) pigmento melnico (tie de color marrn los cultivos).
- Cuadros graves o muy graves (de carcter oportunista) => sinusitis crnicas, infecciones del aparato
respiratorio (neumonas, faringitis, bronco-neumonas); puede producir endocarditis en drogadictos y
paciente con SIDA; enterocolitis, pielonefritis y meningitis en neonatos; en grandes quemaduras,
agravando la lesin o provoca infeccin de heridas quirrgicas; en casos mas graves puede
originar bacterimia (quemaduras graves).
Aislamiento - caracteres bioqumicos - diagnstico bacteriolgico
- Toma de muestra de cualquier producto patolgico, especialmente de carcter purulento en total
asepsia.
- Examen directo (tincin Gram); si el pus es azulado se sospechara de P.aeroginosa.
- Aislamiento en medios generales (el bacilo piocinico es fcil de cultivar) a temperatura 37C; es
importante estudiar la presencia de pigmentos que se difunden en el medio; lapiocianina es un
pigmento responsable de la coloracin azul verdosa que puede adquirir el medio y el olor a jabn de las
colonias son las caractersticas de P.aeroginosa.
- Pruebas bioqumicas de citocromo oxidasa+, catalasa+, gelatinasa+, utilizacin de la
glucosa va oxidativa (aerobio).
- Pruebas serologcas para buscar Acs anti Pseudomonas.

Brucella - bacilos pequeos (coco-bacilos) Gram- inmviles, aerobios estrictos, algunas crecen mejor
en atmsferas ricas en CO2 (5-10%), su crecimiento es lento, catalasa+, oxidasa+, nitratasa+, ureasa+,
sensibles a medios cidos y se destruyen fcilmente a temperatura de pasteurizacin.

Especies mas importantes (en funcin del husped en el que anidan):

- Brucella melitensis afecta a cabras y ovejas; afecta al hombre a traves de sus leches no esterilizada,
quesos frescos, carne cruda o poco hecha.
- Brucella abortus afecta a bvidos (la mayora de los casos de brucelosis en Espaa - en
menor proporcin B.melitensis)
Accin patgena e inters clnico - depende de su estructura antignica; Brucella es capaz de
mantenerse latente en el interior de la celulas que la han fagocitado y posteriormente, empezar a
multiplicarse con la consiguiente produccin de endo-toxina;penetran en el hombre a traves de heridas
y va digestiva (alimentos procedentes de animales infectados (leche no esterilizada, quesos frescos,
carne cruda o poco hecha); posteriormente,pasaran a los ganglios linfticos, donde sern fagocitadas
por neutrfilos (en la sangre) y macrfagos (en los tejidos) y se distribuyen por todo el organismo,
volver a pasar al torrente circulatorio originando bacterimia (brucelosis aguda o fiebres de Malta);
se caracteriza por artralgias difusas (dolores de articulaciones), sudoracin abundante,
esplenomegalia y otras distintas formas clnicas dependientes de la localizacin de Brucella
(orquitis, neumnia brucelar, etc); las fiebres son ondulantes con tendencia a las recidivas(frecuente
entre los 3 y 6 meses subsiguientes a la infeccin por Brucella);

Bordetella - bacilos o coco-bacilos Gram- aerobios estrictos, inmviles (algunas

son mviles), capsulados; son parsitos estrictos (no se encuentran libres en la naturaleza); se
transmite por las gotitas de flugge o contacto directo.
Especies mas importantes:
- Bordetella pertussis (bacilo Bordet y Gengou) => la mas patgena y es elagente etiolgico de la
tosferina
- B.parapertussis => aislada en casos benignos de tosferina y no es estrictamente patgena
- B.bronchiseptica => afecta mas a animales que al hombre; aislada en el hombre excepcionalmente
en casos benignos de tosferina.
Accin patgena e inters clnico (Bordetella pertussis) - se infectan a traves de gotitas
(flugge) que se producen al hablar; tras periodo de incubacin de 1-2 semanas, empiezan a
multiplicarse en la superficie de las celulas epiteliales ciliadas de la traquea, bronquios y bronquiolos,
originando inflamacin en estas zonas, paralizacin de sus cilios y consiguiente necrosacin; presenta
una fuerte accin tusgena (tos seca) que puede llegar a agotar debido a la accin de la toxina proteica y
incremento de las mucosidades queobstruyen los bronquios (bronco-constriccin) lo que facilita
un dficit en la ventilacin pulmonar; puede originar cianosis, taquicardia y vmitos alimenticios; es
altamente contagiosa, pero ya existe vacunas de la tosferina.

Haemophilus - bacilos muy pequeos Gram- aerobios y anaerobios

facultativos, inmviles y patgenos para el hombre y muchos animales; sensibles a medios
externos, desecacin, el calor y muchos antispticos; necesita medio de cultivo especifico con sangre
como AS o agar chocolate (contiene factores X/hemina o ferroprotoporfirina y factor V/NAD o
nicotinamida-adenina-dinucleotido necesarios para el proceso de respiracin).
Especies mas importantes (clasificadas en funcin de los factores que necesitan):
- Haemophilus influenzae (bacilo de Pfeiffer) es el agente etiolgico de 10-15% de lasmeningitis en
nios de corte edad en Espaa y de neumonas en ancianos; requiere ambosfactores V y X.
- H.parainfluenzae es agente causales en ciertas meningitis, afecciones respiratorias y
septicemias; tambin son saprofitos en fosas nasales y boca; requiere solo factor V.
- H.ducreyi es agente etiolgico del chancro blando (enfermedad venrea /ETS); requiere solo factor X.
Accin patgena e inters clnico (Haemophilus influenzae):
- Es capsulada (su capsula esta formada por polisacridos distintos de A-F) en Espaa es mas frecuente
la del tipo B.
- Posee endo-toxina que es responsable de lesiones en la traquea y bronquios en procesos neumnicos
- Suelen afectar a las vas respiratorias originando neumonas, bronquitis aguda en ancianos y adultos
debilitados.
- Puede producir meningitis en nios de corta edad; se transmite por va area y mas frecuente en
invierno y primavera; comienza como infeccin de las vas respiratorias altas yposteriormente se
extiende via sangre hasta el sistema nervioso produciendo meningitis purulenta con mortalidad alta
sin tratamiento a tiempo.
- Existe vacuna para H.influenzae tipo B.
Aislamiento - caracteres bioqumicos - diagnostico de Haemophilus:
- Toma de muestra a partir del exudado farngeo, esputo o lquidos purulentos (en caso
de infeccin de vas respiratorias), LCR por puncin lumbar (en caso de sospecharmeningitis).
- Examen directo (tincin Gram, tincin negativa)
- Se cultiva en agar chocolate o AS de conejo/caballo, se aaden discos que contengan factores V y X,
ATB como la bacitracina que inhibe a otros grmenes; se formaran satelitismo segn sus necesidades
de los factores; incubar en la atmsfera rica en CO2.
- Pruebas bioqumicas => indol+, ureasa+, nitratasa+, oxidasa variable (segn la cepa),fermentacion
de glucosa positiva, ONPG-.
- Tcnicas inmunolgicas => determinar el Ags capsular (se realizan por la urgencia del diagnostico)

Legionella - la especie mas importante para el ser humano, es Legionella pneumophila(el

agente etiolgico de la legionelosis / neumnia atpica por Legionella); un coco-bacilo o bacilo Gram, aerobio estricto, requiere medios muy especficos para crecer (agar legionella),catalasa+, oxidasa+, en
ocasiones puede presentarse de forma filamentosa; en general son mviles, pero algunas cepas
son inmviles.
Accin patgena e inters clnico - se transmite va area a partir de aerosoles procedentes de
aguas contaminadas o sistemas de aire acondicionado o humidificadores
contaminados con Legionella; tras el periodo de incubacin (+/- 1 semana) se produce fiebres altas,
astenia, malestar generalizado, tos, anorexia, dolor pleural agudo, disnea (un cuadro tpico de
una neumnia atpica); se conoce como la enfermedad de los legionarios; el pronostico sera mas
severo en ancianos o adultos debilitados aunque con el tratamiento preciso suele remitir sin problema.

Bacillus - de la familia Bacillaceae; el genero Bacillus son bacilos esporulados aerobios o anaerobios
facultativos con tamao entre 1-7 micras Gram+ y en su mayora mviles; otro genero de la misma
familia es Clostridium son bacilos esporulados y anaerobios estrictos, que origina en
su mayora potentes exotoxinas responsables de cuadros clnicos graves.
Especies mas importantes de Bacillus:
- Bacillus anthracis (agente etiolgico del ntrax o carbunco)
- Bacillus cereus (responsable en muchas ocasiones de trastornos gastrointestinales)
- otros bacilos son comensales para el hombre o saprofitos del suelo, agua, etc., y que depende del
estado inmunitario, puede producir diferentes cuadros clnicos (p.ej. Bacillus subtillis).
Accin patgena e inters clnico de Bacillus anthracis:
- Es un bacilo grande, habitualmente se presenta en forma de cadenas cortas o en parejas,
formando fcilmente esporas sobre todo en los cultivos viejos; es inmvil, presenta
capsulas(los patgenos) y exotoxina proteica que proporcionan propiedades anti-fagocitaras.
- En general, el cuadro clnico que produce es el carbunco animal o humano; en el humano tiene lugar
tras un primer contacto a partir de animales infectados que tras periodo de incubacin de 23 das surge una pstula maligna (color negro en la mano) en el punto de contagio (las manos y
cabeza); comienza con una ppula eritematosa que se complica a vescula pruriginosa que se convierte
en ulcera o escara, que sin tratamiento puede necrosarse y extenderse en superficie y profundidad; los
casos no tratados, podran ser graves, ya que existe el riesgo de septicemia intensa que en pocas
horas podra originar la muerte; lo mas habitual son las formas benignas que curan con facilitad tras

un tratamiento.
- En casos excepcionales pueden aparecer formas internas como el carbunco pulmonar ante
la inhalacin de polvo contaminado con esporas de Bacillus anthracis que da lugar
a neumonas graves; tambin puede producirse carbunco intestinal por la ingestin de alimentos
contaminados con las mismas esporas y originara diarreas, vmitos, dolor tipo clico, fiebre, etc.

Acinetobacter - (tambin esta descrito en genero de Moraxella/ Neisseriaceas) este genero engloba
especies que pueblan la flora de suelos y agua, al igual que Pseudomonas, son bacilos Gram- no
fermentadoras, capsuladas y presentes en ambiente hospitalarios donde afectan a pacientes
inmunodeprimidos; la especie mas frecuente es Acinetobacter calcoaceticus que
produce infeccin urinaria, neumonas y sepsis; crecen bien en Mc y AS que da colonias grises y Bhemolticas; se diferencian de Pseudomonas en que Acinetobacter es oxidasa-;
son fcilmente confundible con Neisserias porque es bacilo muy pequeo (cocobacilo); tambin es muy resistente a los ATB.

Tema 21 - Corinebacterium (patologa e identificacin)

Genero Corinebacterium - pequeos bacilos inmviles a temperatura corporal, se comportan
como Gram+, suelen agruparse en formas geomtricas parecidas a letras chinas o abecedario
(empalizadas); presenta granulaciones metacromticas, catalasa+, anaerobios facultativos y pueden
dar lugar a un velo superficial en medios lquidos; presentan ciertos rasgos comunes
con Mycobacterium en su pared bacteriana que es muy rica en cidos miclicos, arabinosa y galactosa,
aunque la tincin de BAAR (Zhiel-Nielssen) paraCorinebacterium resulta negativa; la especie mas
importante es Corinebacterium diphteriae.

Accin patgena e inters clnico de Corinebacterium diphteriae - el bacilo diftrico llega al

hombre por va respiratoria a traves de gotitas de saliva (pflugge) u objetos recientemente
contaminados invadiendo la oro-faringe y las amgdalas; desde aqu se extiende, liberando toxinas y
enzimas inhibiendo la sntesis proteica celular, originando necrosis en las celulas epiteliales que
invade; este epitelio necrosado junto con leucocitos y fibrina formara una pseudomembrana que cubre
las amgdalas, que puede llegar a provocar una obstruccin respiratoria si se extiende por la nasofaringe y laringe; tal pseudomembrana se encuentra fuertemente adherida a las mucosas, de forma que
si se intenta arrancar, originaria al paciente una fuerte hemorragia; en general los signos y sintomas de
la difteria suelen ser de tipo respiratorio; en casos excepcionales, por va linftica podra pasar a la
sangre difundindose al resto del organismo.

Tema 22 - Mycobacterium y Nocardia

(patologa e identificacin)
La familia Mycobacteriaceae engloba un solo genero Mycobacterium; son pequeos bacilos
finos rectos y a veces incurvados, excepcionalmente pueden encontrarse algo filamentosos;
son inmviles con una pared tpica y caracterstica no encontrada en ninguna otra familia
excepto Nocardia (altamente enriquecida con cidos miclicos y componentes creos que se tie
muy difcilmente - responde a Gram+), se necesitan colorantes con alta capacidad tintorial para
su penetracin; una vez teidos son altamenteresistentes a la decoloracin cida (AAR+ o acido alcohol
resistencia positivo) lo que les diferencia del resto de microorganismos; son muy distribuidos en la
naturaleza, pueden sersaprofitos del agua y suelo y puede provocar infecciones graves al hombre y en
ocasiones crnicas como la lepra; necesita gran cantidad de oxigeno para sobrevivir (aerobias
estrictas).
Las especies mas importantes del genero Mycobacterium (3 importantes grupos):
(1) Bacilos de Mycobacterium cultivables en medios artificiales, de crecimiento lento(>1semana hasta
3 semanas); en funcin de los cuadros clnicos se subdividen en 2 grupos:
a. especies que producen tuberculosis al hombre y a los animales (Mycobacterium
tuberculosis y Mycobacterium bovis).
b. especies de micobacterias atpicas de crecimiento lento, podran presentar un poder patgeno para
el hombre distinto al de la tuberculosis y la lepra (Mycobacterium avium y Mycobacterium marinum).
(2) Micobacterias de crecimiento rpido (<1semana); no tiene inters clnico (no son patgenos) para
el hombre.
(3) Bacilos de Mycobacterium no cultivables sobre medios artificiales y patgenos para el hombre
(Mycobacterium leprae) y ciertos roedores (Mycobacterium lepraemurium)
Los micobacterias tambin se pueden clasificar en funcin de la produccin de pigmentos, de
las morfologas de las colonias y de la velocidad del crecimiento.

Accin patgena e inters clnico

Mycobacterium tuberculosis - responsables de tuberculosis en el hombre
Muy rica en componentes lipdicos en su pared celular dotndole un carcter tintorial
especifico AAR+ que servir para su identificacin y clasificacin; contiene protenas que provocan la
formacion de Acs (reaccin de la tuberculina /test de Mantoux); es capaz decrecer en el interior de las
celulas que constituyen el sistema retculo endotelial, se multiplican dentro de ellas sin ser destruida;
en el frotis de baciloscopia se puede observar forma cordones microscpicos.
Llega al hombre por inhalacin (excepcionalmente por ingestin de alimentos contaminados con
Mycobacterium o a traves de las heridas de la piel); produce una lesin primaria en el pulmn y mas
concretamente a nivel de los alvolos pulmonares, provocando unaintensa reaccin inflamatoria que
da lugar a exudacin; estos bacilos pueden llegar hasta los vasos linfticos y de aqu a los ganglios,
retornando a la circulacin venosa y originandofocos metstasis en distintos rganos; sin tratamiento
se va desarrollando evolucionando hacia una necrosis "caseosa" (parecida a queso de
caverna); despus de 6 semanas o mas va evolucionando hacia una destruccin y desintegracin de las
celulas pulmonares con la formacin de una masa solida, homognea, parecida al queso (caverna
tuberculosa); provocara fiebres mas o menos variables, sudoracin por la tarde, adelgazamiento
progresivo, tos dbil o intensa (a veces con esputos muco-purulentos) y en fases mas
avanzada,hemoptisis; en general cualquier parte del organismo podra verse afectada a causa de
diseminacin (gastrointestinales, genito-urinarias, pericrdicas, etc.)
Mycobacterium leprae - productoras de la lepra en el hombre
Se multiplica con extraordinaria lentitud y su clnica es bastante insidiosa y no ha podido ser cultivado
en ningn medio in vitro, por lo que se conocen poco
sus caractersticas microbiolgicas; su nico reservorio es el hombre con autentica predileccin por las
terminaciones nerviosas; es un bacilo inmvil, rectilneo, se tie con Zhiel-Nielssen (AAR+); suelen
encontrarse en la mucosa nasal, en la dermis y en biopsias de lesiones en individuos con lepra;
La va de entrada es a traves de lesiones en la piel, se propagan a los nervios superficiales prximos,
concretamente a las celulas de Schwam; de aqu propagarse via linftica al sistema venoso y disemina a
otros rganos (lepra lepromatosa); se multiplica mejor en las partes mas fras del organismo (la cara,
extremidades) invadiendo los nervios mas superficiales; el bacilo se multiplica en el interior de
los macrfagos de la piel y las celulas de Schwam, originando inflamacin y perdida de sensibilidad; en
estado grave tambin aparece en rganos mas profundos y su pronostico es mas complicado; su
periodo de incubacin es muy difcil de determinar, puede durar muchos aos; su periodo
de invasin es muy insidioso, sintomas raros y no asociables a lepra (picor, hormigueo y perdida de
sensibilidad en las manos/pies; a partir de aqu, de forma lenta y progresiva aparecen
lesiones cutneas (maculas prominentes en extremidades y cara); su periodo durara toda la vida y
su evolucin mas o menos grave depender del grado de inmunidad del husped; tto => ATB
sistemico.
Micobacterias atpicas - producido por Mycobacterium avium y Mycobacterium marinum
Las micobacterias atpicas son m.o. patgeno para el hombre, frecuentemente de carcter pulmonar, a
veces confundido con Mycobacterium tuberculosis ya que la sintomatologa es similar => tras
una invasin, se producen formacin de tubrculos y consiguiente necrosis caseosa con formacin de
cavernas, diseminacin y cuadros de fibrosis pulmonar con rara aparicin de focos extra-pulmonares;
la gravedad de lesiones depende del estado inmunolgico del paciente;
los grmenes invadir especialmente individuos inmunodeprimidos; la va de entrada es muy variable
(respiratoria o mucosas).

Aislamiento - caracteres bioqumicos - diagnostico

a)- Aislamiento de Mycobacterium tuberculosis
- Muestras puede proceder de esputo, aspirado bronquial, aspirado gstrica; LCR e orina; la muestra
de esputo han de someterse a una descontaminacin, homogenizacin y concentracin (mediante
centrifuga) previa al cultivo; LCR, orina, etc. se puede sembrar directamente, pero lo mejor
seria centrifugar-lo antes.
- Se realizara un examen microscpico del frotis previa tincin de Zhiel-Nielssen (AAR); tambin se
pueden utilizar tinciones fluorescentes (auramina, rojo de tiacina, naranja de acridina), cuando se
sospecha que hay pocos bacilos (todo se trabaja bajo la campana de flujo laminar).
- Para aislar el bacilo de Koch de muestras estriles (LCR, orina) se utilizaramedios lquidos como
Proskauer-Beck; si pretendemos hacerlos crecer en medios slidos (esputo), existe
medios especficos como Lowenstein-Jensen o Coletsos, que contienen huevo, aminocidos, sales
minerales y verde malaquita (inhibe los grmenes contaminantes) cuyo crecimiento es lento (2-4
semanas); tambin existe agar Middlebrook que se suele emplear junto con el anterior para completar
su identificacin; Micobacterias son muy exigentes en su crecimiento => incubar a 37C, en la
oscuridad, en el ambiente con CO2 de 5-10% (en 1 semana) y en atmsfera normal a partir de la 2
semana; los tubos desenroscados hasta que se evaporen el agua (sin secar el medio); la mayora tardan
entre 3-6 semanas en crecer (algunos aun mas); si hay crecimiento, se har la identificacin de
su morfologa mediante tincin de Zhiel-Nielssen y pigmentos.
- Pruebas bioqumicas => la mas importante es la prueba de la niacina+ (todas las micobacterias
producen cido nicotnico durante su crecimiento; M.tuberculosis no metabolizan el cido nicotnico y
por ello lo acumulan y es excretada al medio, sobre todo en medios con base de huevo, del cual puede
ser extrada y detectada); es nitratasa+ y catalasa+(solo algunas cepas de Mycobacterium tuberculosis
no tienen la catalasa; en general tienencatalasa termolbil (a temperatura alta no tienen catalasa).
- Pruebas serologcas => la mas utilizada es la tcnica ELISA; actualmente la identificacin se hace con
el PCR, posteriormente se realiza la hibridacin con las
sondas genticas (ADN) de M.tuberculosis marcadas.
- Pruebas de alergia /la prueba de la tuberculina (Mantoux); tuberculina es un extracto proteico de
bacilo tuberculoso; es solo toxico para individuos que han estado en contacto con dicho germen,
originando una reaccin intradrmica en la cara anterior del brazo intensa; este
eritema endurado (ppula de >10mm es positivo) se debe leer hacia 48-72 horas (se mide la ppula no
la zona roja); despus de las 4-6 semanas posteriores al contacto, la prueba del Mantoux dar de por
vida positiva.
b)- Aislamiento de Mycobacterium leprae
- Muestras a partir de heridas sospechosas en piel y otras localizaciones.
- Se realiza una tincin de Zhiel-Nielssen o AAR, que deber dar positiva
- No podr ser cultivada en medios de cultivo

- Se realizara un diagnostico serolgico (un estudio de la inmunidad celular y humoral del individuo)
- Pruebas cutneas: (depende del resultado, se hace los 3 pruebas o solo algunos).
1. reaccin de la lepromina => para conocer el tipo de lepra que posee ese individuo (prueba de intradermorreaccin /Ag de bacterias inactivadas); Las personas que no tienen lepra tendrn poca o
ninguna reaccin de la piel al Ag. Los pacientes con un tipo particular de lepra, llamado lepra
lepromatosa, no tendrn ninguna reaccin de la piel al Ag; una reaccin positiva de la piel se puede
observar en pacientes con lepra tuberculoide y lepra dimorfa tuberculoide.
2. test de pilocarpina => para buscar la ausencia de sudoracin de la piel lesionada despus de
una inyeccin de clorhidrato de pilocarpina.
3. test de la histamina => inyectar histamina de tal forma que en una piel sana aparecer una
reaccion alrgica caracterstica, mientras que en las lesiones lepromatosas esto no sucede debido a que
los nervios perifricos estn lesionados y no aparecer ninguna reaccin alrgica.
c)- Aislamiento de Micobacterias atpicas
- Recogida de muestra de los lugares sospechosos en total asepsia
- Tincin de Zhiel-Nielssen (positiva); tincin fluorescencia con auramina, rojo de tiacina, naranja de
acridina.
- Cultivos en medios Lowenstein-Jensen, Coletsos o caldo Middlebrook, donde se puede observar el
aspecto de las colonias, su velocidad de crecimiento y la presencia de pigmentos.
- Pruebas bioqumicos: niacina- (la diferencia de Mycobacterium tuberculosis), catalasa+, nitratasa+.
- Pruebas serologcas de ELISA
Actualmente en grandes laboratorios, se utilizan medios de cultivos radiomtrico (Bactec TB)de
deteccion mas rapida que contiene liquido de soporte (agar Middlebrook) con ATB para inhibir los
demas grmenes y el sustrato marcado con un istopo del carbono C14; las micobacterias al
crecer metabolizan el sustrato y liberan gas CO2 marcado radioactivamente que
es detectada automticamente por el Bactec y una vez que se ha detectado crecimiento en alguno de los
medios, se realiza la tincin de Ziehl-Neelsen para ver si lo que ha crecido son BAAR o no.

Baciloscopias - las extensiones para baciloscopias se deben hacer previamente a

la descontaminacin (CHNa 2-4%) de las muestras y homogenizacin (N-acetil cisteina) ,
posteriormente su concentracin por centrifugacin; la preparacin del frotis del esputo ha de hacerse
seleccionando la parte mas purulenta que es donde hay mas micobacterias; cuando se lleva acabo
la tincin de los frotis, se debe evitar el contacto fsico entre las portas para
evitar contaminacin cruzada; es importante cuantificar el numero de bacilos encontrados ya que
esta directamente relacionado con el grado de contagiosidad del paciente y con la gravedad de
la infeccin.

El genero Nocardia - corresponde a actinomicetos aerobios que forman micelio vegetativoque

tiende a fragmentarse originando estructuras bacilares o coco-bacilares; Gram+ inmovil,aerobios
estrictos y AAR+ (tiene caractersticas anlogas al Mycobacterium) poseen gran cantidad de acidos
micolicos de cadena larga en su pared bacteriana; poseen ademas glicolpidos y fosfolpidos que sirve
para su identificacion y diferenciacin; algunas especies son patgenas para el hombre.
Accin patgena e inters clnico
Gran parte de nocardiosis son infecciones de carcter oportunista; no produce toxinas, pero contiene
en su pared bacteriana alta proporcin de lpidos que le confiere una resistencia a los sistemas de
defensa (macrfagos, linfocitos, etc.); tiene capacidad de crecer y multiplicarse en el interior de los
tejidos (macrfagos) como parsito intracelular y solo crece cuando las defensas del individuo se
encuentran bajas; las manifestaciones clnicas mas frecuentes son:
A. Nocardiosis pulmonar - causada sobretodo por Nocardia asteroides que produce lesiones
pulmonares con abscesos, inflamacin diseminada semejante a la tuberculosis; pueden surgir reas de
necrosis y diseminarse por sangre a otros rganos provocando septicemia.
B. Micetomas (lesiones granulomatosas) de carcter crnico originadas en eltejido subcutneo donde
se producen tumefaccin, abscesos y pstulas y/o ndulos que al abrirse presentan exudados serosanguinolentos; generalmente causados por Nocardia brasiliensis y es frecuente en las extremidades
inferiores y superiores; presenta periodos de remisin y es caracterstico de climas tropicales;

Tema 23 - Bacterias anaerobias

(patologa e identificacin)
Anaerobias - todas aquellas bacterias incapaces de crecer y/o mantenerse en contacto con O2 a la
presion atmosfrica; presentan un metabolismo anoxibitico => incapaz de utilizar O2 de

la atmsfera como aceptor final de electrones; en su lugar utilizan sustratos orgnicos como aceptores
finales de electrones(respiracin anaerbica /fermentacion); la presencia de O2 puede
ser (1) bactericida /toxica /letal directa o bacteriosttico (crecern de nuevo cuando las condiciones
son favorables); (2) inhibir ciertos sistemas enzimticos o la funcin reguladora primordial del
metabolismo celular; (3) generan producto txicos al interaccionar sus componentes propios con O2;
los anaerobios son las bacterias predominantes en la flora normal humana y en algunas partes p.ej.
boca o intestino estn en proporcin de 1000:1 con respecto a la flora aerobia, por tanto, la mayora de
la infeccin que provoca los anaerobios son endgenas; dentro de los anaerobios se distingue
=> anaerobios estrictos y anaerobios aero-tolerantes/microaeroflicos (puede crecer a 2-8% de O2).
Genero Clostridium - bacterias anaerobias esporuladas; son bacilos Gram+, anaerobios estrictos,
forman esporas a nivel terminal o subterminal, presentan flagelacin pertrica, mviles, no presentan
capsulas excepto Clostridium perfringes; ampliamente distribuidas en el suelo, agua, etc. y
altamente resistente a medios externos; responsable de infecciones e intoxicaciones muy graves
(ttanos, botulismo, gangrena gaseosa, etc.); las especies mas patgenos actan mediante
la formacin de toxina con poder toxico sobre el husped; algunos podran formar parte de la flora
normal del hombre y animales.

Las especies mas importantes

A. Clostridium que originan toxinas cuyo mecanismo de accin es neuro-toxico =>Clostridium
tetanii - el agente etiolgico de ttanos y Clostridium botulinum - agente etiolgico del botulismo.
B. Clostridium que originan toxinas que actan sobre tejidos provocando histotoxicidad =>Clostridium perfringes - agente etiolgico de la gangrena gaseosa; para su penetracin en
el organismo se requieren lesiones previas.
C. Clostridium que originan toxinas que actan sobre el tracto digestivo (clostridios entero-toxicos)
=> Clostridium difficile - responsable de trastornos gastrointestinales no graves.
D. Clostridium responsables de cuadros purulentos (clostridios pigenos) => Clostridium perfringes;
es frecuente la presencia ademas, de otras bacterias anaerobias.
Accin patgena e inters clnico
A. Clostridium que ejercen accin neuro-toxica sobre las personas (C.tetanii y C.botulinum)
Clostridium tetanii - es un bacilo Gram+ pequeo, formadora de esporas (aspecto de tambor o
cerilla), habitan la tierra y el intestino del hombre y animales; produce 3 toxinas responsables del
cuadro tpico del ttanos que son transportadas va sangunea o humoral hasta SNC bloqueando
la liberacin de neurotransmisores, originan hiperactividad de las neuronas motoras que da lugar a
convulsiones y parlisis espstica o espasmo muscular a nivel perifrico; se ve alterado el sistema
muscular variando el ciclo de contraccin-relajacin de forma que este entra en fase de contraccin y
no se recupera (rigidez tetnica / episttonos).
Para que se produzca el ttanos es necesario una serie de condiciones tales como que el
microorganismo germine (condiciones adecuadas de anaerobiosis); tras una herida profunda (cortante,
punzante, mordeduras, araazos, partos, abortos, quemaduras, ulceras por decubito) o herida
superficiales (rozaduras) se pueden infectar y formar costra que facilita la infeccin anaerobia; en las
condiciones favorables de anaerobiosis, las esporas deClostridium tetanii en el ambiente pasan a la
herida, germinan y tras un periodo de incubacin (5-7 das), se origina su accin patgena; es rara que
se produzca de forma local en la zona de entrada; la forma generalizada es mas habitual y mas grave; es
importante la deteccin precoz y medidas profilcticas (vacunacin se renueva cada 10 aos).

Clostridium botulinum - bacilos Gram+ anaerobios estrictos, grandes, mviles por

su flagelacin y presentan esporas; es capaz de formar neuro-toxinas peligrosas y potentes sobre las
personas que originan parlisis o debilidad muscular; las esporas son distribuidas ampliamente en el
aire, suelo, ciertos alimentos (conservas, pescados, etc.); si las condiciones en el ambiente son de
anaerobiosis, germinaran; su accion patgena sobre el organismo seraneuro-paralizante y con una
dosis de 10 elevado a -8 (10 nanogramos) de su toxina es suficiente para causar la muerte (es el veneno
mas potentes hasta ahora), que solo se producen en condiciones adecuadas de
anaerobiosis, temperatura en torno a 30C, pH neutro o ligeramente acido y permiten que germine la
espora; sus toxinas son de carcter proteico y termolbiles (se destruyen a temperatura 100C durante
5 minutos o 70C de 30-60 minutos).
El mecanismo de accin de las toxinas botulnicas => a traves de los alimentos contaminadosllega esta
neuro-toxina al tubo digestivo del hombre y producir toxinfeccin alimentariainicialmente;
de aqu via sangunea y linftica llega hasta sistema nervioso perifrico donde acta en las
terminaciones nerviosas, originando parlisis en el musculo esqueltico y otras
manifestaciones neurolgicas como visin borrosa, fotofobia, sequedad de boca, lengua y faringe,
disfagia, disartria (dificultad al hablar), debilidad de los musculos (flacidez) incluyendo los
respiratorios que puede llegar mortal por fallo respiratorio y arritmias cardacas (depende de la
cantidad de toxina o del germen); su periodo de incubacin en torno 18-36 horas despus de
la ingestin del alimento contaminado y los cuadros mas graves se originan en un periodo
de incubacin inferior a 24 horas.
B. Clostridium que ejercen accin histo-toxica en mltiples tejidos
Clostridium perfringes - ejercen un efecto toxico importante pero no actan sobre SNC; son
Gram+, anaerobia estricta, la nica especie capsuladas, ampliamente distribuida en el suelo; de aqu a
traves de heridas profundas, puede pasar al hombre produciendo gangrena gaseosa; tambin puede
encontrarse en la flora intestinal; capaz de formar toxinas que actan sobre los tejidos, entero-toxina,
hemolisina, neuroaminidasa.
El mecanismo de accin => tras la va de entrada (heridas) en condicin anaerobiosis adecuadas,
germinan las esporas y proliferan; es frecuente que se contaminen con otro tipo de bacterias aerobias
que consiguen agotar el oxigeno aumentando las condiciones de anaerobiosis, se disminuye el pH
aumentando el acido lctico y facilitando la liberacin de las enzimas proteolticas y sustancias toxicas;
se producirn los efectos lesivos y graves sobre los tejidos extendindose a los vecinos, se rompern las
estructuras celulares a nivel de sus membranas, se destruirn las celulas hemticas, las celulas
endoteliales, las membranas de las celulas musculares originando procesos de dermo-necrosis con
dao tisular (gangrena).
Ademas de provocar la gangrena gaseosa a traves de heridas infectadas, C.perfringes es tambin el
agente etiolgico de una toxo-infeccin alimentaria producida por la ingestin de carne
contaminada provocando cuadros diarreicos y dolor abdominal leve; existen otros casos mas
excepcionales y graves que da lugar a cuadros diarreicos muy acuosos y sanguinolentos, vmitos y
estado de shock producido por C.difficile.

Aislamiento - caracteres bioqumicos - diagnostico

- Toma de muestra representativa, adecuada y estril en medios especficos de transporte anaerobiosis
con sustancias reductoras (bolsas generadoras de CO2) que crean atmsferas sin O2 o en una jeringa
sin aire (tapando la aguja).
- Se har un examen directo (tincin de Gram) donde se pueden apreciar las formas de esporas
(palillos de tambor); tambin se puede realizar tincin de esporas.
- Se cultivaran en medios de cultivos especficos como ASA (agar sangre anaerobio); incubacin a 37C
en 48 horas en condicin anaerobisis, utilizando unacampana con un sobre generador de gas CO2, da
lugar a la liberacin de H y CO2; el O2 que existe en el anterior de la campana, se une al H, forman
H2O que se depositan en forma de gotitas en las paredes, tambin hay que introducir un indicador de
anaerobiosis (una tira reactiva).
- Pruebas bioqumicas => cuando existe crecimiento en el medio anaerobio, se monta directamente el
API en un recipiente/ una caja, tambin anaerobio.

Bacterias anaerobias no formadoras de esporas - crecen en ambientes de bajo potencial oxido

reductor o ambientes microaerfilos; son ampliamente distribuidos en la naturaleza y muy pocas
capaces de producir cuadros patgenos graves al hombre; gran parte de ellos forman parte de la flora
gastrointestinal, vaginal o bucal del hombre, no ejerciendo efecto patgeno alguno.
Las especies mas importantes
A. Bacilos Gram+ no esporulados:
- Lactobacillus => microaerfilos, crecen mejor en anaerobiosis; son flora habitual de laboca, vagina
e intestino del hombre; son de gran utilidad a nivel industrial (produce acido lctico para los yogures);
no intervienen en ningn proceso patgeno para el hombre.
- Propionibacterium => son anaerobios, pueden crecer en ambientes microaerfilos; forman parte
de la flora normal intestinal, tracto urinario y piel.
- Bifidobacterium => es flora intestinal del hombre y no son patgenos.
B. Bacilos Gram- no esporulados:
- Bacteroides => son flora intestinal, vaginal y bucal del hombre y se ha asociado en ocasiones
a procesos gastrointestinales, especialmente Bacteroides fragilis que acta comooportunista.
- Fusobacterium => solo la especie Fusobacterium nucleatum se asocia a
algunosprocesos patgenos en el aparato respiratorio y tracto genital femenino,
de carcter oportunista.
C. Cocos Gram+ no esporulados:
- Ciertos Streptococcus anaerobios que se encuentran frecuentemente en la floragastrointestinal y
bucal; no son patgenos.
- Peptococcus => no produce efecto patgeno sobre el hombre

D. Cocos Gram- no esporulados:

- Veillonella => forma parte de la flora intestinal y bucal y no son patgenos para el hombre.
Accin patgena e inters clnico
Salvo excepciones, no son relacionados con procesos patgenos y la patogenicidad que pudiera
desencadenar alguno de ellos depende sobre todo de las circunstancias del husped (oportunistas);
pueden producir infecciones post-quirrgicas, complicaciones de escaras o ulceras por decubito,
complicaciones de herida en general.
Aislamiento - caracteres bioqumicos - diagnostico
- Toma de muestra en condiciones adecuada (anaerobiosis)
- Examen directo (tincin de Gram)
- Se aislaran en medios anaerobiosis (ASA/ANA - agar sangre anaerobio)
- Pruebas bioqumicas se realiza con API en condicin anaerobia

Tema 24 - Espiroquetas (Treponema, Borella y

Leptospira); patologa e identificacin
La familia Espiroquetaceas (con inters clnico para el hombre) - Treponema, Borrelia y
Leptospira; corresponden a especies bacterianas cuya morfologa es filamentosa, helicoidal o espiral
con filamentos axiales relacionados con su movilidad; presenta una pared celular fina y flexible de lipopolisacrido y lipo-proteica donde se encuentran la mayora de Ags especficos de estas; son Gram(difcilmente se tie), tambin se pueden visualizar por el microscopio de contraste de fases; presentan
un metabolismo oxidativo y/o fermentativo(aerobias o anaerobias facultativas); difundidas en las
aguas, el suelo y como agentescomensales en las mucosas del hombre y animales.
La familia Espiroquetaceae se divide en 5 generos:
- Genero Espiroqueta => espiroquetas mas grandes y no existen especies patgenas para el hombre.
- Genero Cristispira => son de tamao algo menor que el Espiroqueta y no es patgeno para el
hombre.
- Genero Treponema => son espiroquetas muy helicoidales, muy finas, pequeas y mviles;
son microaeroflicas y presentan un metabolismo fermentativo; existen especies patgenas para el
hombre - Treponema pallidum (el agente etiolgico de la sfilis).
- Genero Borrelia => son espiroquetas mas grandes que Treponema; son microaeroflicas y presentan
pocas espiras que son amplias e irregulares; su metabolismo es fermentativo y son difciles de cultivar
en medios artificiales; pueden provocar fiebres recurrentes al hombre transmitido por artrpodos.
- Genero Leptospira => son espiroquetas largas, muy finas y con numerosas espiras, profundas y
regulares; es difcil su visualizacin aunque se suele utilizar microscopia de contraste de fases;
son aerobias con un metabolismo oxidativo; se cultivan con facilidad en medios artificiales;
ampliamente distribuidas en la naturaleza, especialmente en las aguas; pueden parasitar al
hombre provocando leptospirosis.

Genero Treponema - son espiroquetas pequeas, finas con un numero de espiras entre 520 distribuidas de forma regular, con gran movilidad; se tie difcilmente con Gram y se tie mejor con

Giemsa o tincion de plata y se visualiza con la microscopia de campo oscuro y de contraste de fases; no
crece en medios de cultivo in vitro y requiere un medio de cultivo in vivo para crecer (testculo de
conejo); crece bien en situaciones de bajo potencial oxido-reductor (microaerofila), presentando en
ocasiones una respiracin anaerobia y un metabolismo fermentativo; el especie patgena para el
hombre es Treponema pallidum que transmite la sfilis por contacto directo; existen dentro del
genero Treponema especies comensales de las mucosas, tracto urinario, vaginal, tubo digestivo, etc.
que no son patgenos para el hombre y se pueden cultivar.
Treponema pallidum es la especie mas importante por su difusin cosmopolitana; es el agente
causal de sfilis; no son capaces de vivir fuera del organismo humano, ya que mueren
por desecacin; su transmisin es por contacto directo (va sexual) y si no se detecta a tiempopuede
durar toda la vida; mecanismo de accin:
- Periodo primario de la sfilis => comienza tras un primer contacto con lesiones ricas en
treponemas presentes en las mucosas; periodo de incubacin 10-90 das (termino medio de 21 das)
aparece en la zona genital un chancro primario con abundantes treponemas, se
van diseminando va hemtica y linftica a otras localizaciones convirtiendo-se en
unaenfermedad sistmica; es frecuente su multiplicacin en ganglios prximos a la zona genital
originando pequeas tumoraciones (adenopatias); transcurrido un tiempo corto de 2-6 semanas estos
signos desaparecen espontneamente y entra en una fase silente.
- Periodo secundario o sfilis florida => surge despus de un tiempo entre 2 meses y 2 aos de la
fase silente; de forma sbita se produce una espiroquetemia en general muy florida por las manchas en
la piel y en las mucosas, muy ricas en treponemas y altamente infecciosas; tambin puede surgir
excepcionalmente una forma eruptiva como lesiones en otros rganos, fiebre en
ocasiones, pstulas o ppulas muy ricas en treponemas; este
cuadro clnico de carcter sistmico remite a las pocas semanas (2-6 semanas), volviendo a entrar en
una nueva fase de latencia.
- Periodo terciario o sfilis terciaria => surge tras la fase de latencia entre 3-30 aos, una forma
muy grave con mal pronostico; el numero de treponemas en sangre es muy escaso y muy abundante en
ganglios, bazo, huesos, sistema nervioso (neuro-sfilis) y aparato cardiovascular; es frecuente
la formacin de granulomas, necrosis, gomas, parlisis general progresiva, aneurisma artico, etc.
Resumen de la evolucin de sfilis => Incubacin 10-90 das (termino medio 21 das) - Periodo
primario (2-6 semanas) - fase silente (2 meses - 2 aos) - Periodo secundario/ sfilis florida (2-6
semanas) - fase latente (3-30 aos) - Periodo terciario/ Neuro-sfilis forma muy grave con mal
pronostico.
Aislamiento - caracteres bioqumicos - diagnostico del genero Treponema pallidum
- Treponema pallidum se asla muy difcilmente, no crece en medios in vitro, solo lo hace en medios in
vivo (testculos de conejo) y el diagnostico de la infeccin se establece durante los periodos primario y
secundario mediante muestras de exudados, condilomas, etc.
- Examen directo al microscopio de campo oscuro o microscopio de contraste de fases o microscopio
de fluorescencia de una tincin de Giemsa o tincin Nitrato de plata (sales de plata; es una tcnica
difcil de efectuar, reservada a los laboratorios especializados, til en la deteccin de Pneumocytis
carinii, Legionella, Treponema, hongos, Rickettsias).
- Pruebas serologcas => se realiza la prueba de la presencia de Acs anti Treponema pallidum en el
suero del paciente con Ags especficos de Treponema pallidum que presentan una sensibilidad y
fiabilidad del 100%; los resultados dependen del periodo de sfilis en el que se encuentre; tambin se
incluyen las inmunofluorescencia indirecta, as como las de hemo-aglutinacin pasiva partiendo
de hemates tratados con Treponema pallidum que es muy sensible y econmica.

Diagnostico serolgico de las sfilis - existe 2 tipos de pruebas (no treponmicas y treponmicas)
a) No treponmicas => son de gran sensibilidad y fcil de hacer; se usa para prueba de screening y
si resulta (+), hay que confirmar con pruebas treponmicas; tambin se utiliza como un seguimiento de
la enfermedad; se le llama tambin prueba de WASSERMANN; consiste en enfrentar el suero del
paciente con sustancia lipdica "cardiolipina" que no es Ags treponmicos; si existen Acs anti Tp en el
suero, reaccionaran con la cardiolipina (+); pero al no ser la cardiolipina un Ags treponmicos, puede
dar lugar falsos positivo con otras enfermedades; 2 tipos de pruebas => VDRL (Venereal Disease
Research Laboratory) y RPR (reagina plasmtica rpida) son pruebas
de aglutinacin con partculas de carbn (darn grumitos grises).
b) Treponmicas => se utilizan como prueba confirmativas con varias tcnicas: (1) FTA(tcnica
fluorescencia de Acs anti Tp) enfrentando Ags de Tp con posibles Acs anti Tp en el suero del
paciente; (2) FTA abs donde previamente se absorben posibles Acs naturales anti Tp
saprofitos; (3) TPHA (Tp Haemagglutination Assay) que tiene como base hemaglutinacin y sencillo
de realizar (no se necesita microscopio fluorescencia); (4) tambin se puede utilizar pruebas
de ELISA para detectar IgM y IgG; todas son pruebas muy especificas; no se utilizan para el
seguimiento, porque sera siempre resulta (+).
Genero Borrelia - son espiroquetas de mayor tamao con espiras mas amplias e irregulares con
extremos afilados y son mviles; las especies patgenas para el hombre y los animales,originan fiebres
recurrentes endmicas y epidmicas; es microaeroflica con un metabolismo fermentativo; se tien con
facilidad de Gram- y se puede cultivar in vitro, pero requiere medios muy especficos; las especies mas
importantes del genero Borrelia, se transmiten por piojos y por garrapatas.
Accin patgena e inters clnico - las fiebres recurrentes son una enfermedad muy cosmopolita,
en ocasiones endmica a condiciones de salubridad muy baja; tras la picadura del vector, ya sea
garrapata o piojo, pasan las borrelias a la sangre del husped, ayudadas por el rascado que provoca el
aplastamiento del piojo /garrapata, que dar lugar a micro-traumas en la piel y facilitan el paso de
dichas borrelias; despus de unos7 das de incubacin se originan fiebres, dolores musculares, cefalea,
etc; clnica que dura unos 10 das y luego desaparecer, produciendo posteriormente recurrencias; no es
una enfermedad grave y es fcil de tratar, especialmente con tetraciclinas.

Genero Leptospira - son espiroquetas muy finas con espiras regulares, muy numerosas y apretadas,
con sus extremos ligeramente incurvados y mviles; se tien dbilmente con Gram, tambin se pueden
teir con Giemsa; su metabolismo es oxidativo (crecimientoaerobio); existe en la naturaleza
leptospiras saprofitas y parsitas; puede originar de forma casual leptospirosis en el hombre
con cuadros febriles; el reservorio son animales, consideradas como zoonosis.

Tema 25 - Rickettsias, Chlamydias y Micoplasmas

(patologa e identificacin)
Genero Rickettsia - son parsitos celulares estrictos (porque su dotacin enzimtica es muy escasa)
de los artrpodos (crecen muy bien en el citoplasma); son coco-bacilos Gram-; producen en el hombre
enfermedades transmitidas por piojos, garrapatas, pulgas y caros.

Especies mas importantes de la familia Rickettsiaceae - hay 3 gneros importantes

=>Rickettsia, Rochalimaea y Coxiella (Coxiella burnetti es coco-bacilo Gram+ que origina
la fiebre Q).
Accin patgena e inters clnico:
(1) Tifus exantemtico epidmico - producido por R.prowazekii; mediante la picadura de piojo;
tras el periodo de incubacin de 1-2 semanas, aparecen escalofros, fiebres altas (40C), cefaleas,
dolores generalizados, ndulos inflamatorio de los capilares, arteriolas, vnulas, la piel y musculos
(dificulta la corriente sangunea y en casos graves puede provocar gangrena en las extremidades); es
frecuente la formacin de maculas rosadas y posteriormente ppulas y petequiales.
(2) Tifus murino o endmico - producido por R.typhi mediante la picadura de la pulga, garrapatas
y caros; tras el periodo de incubacin de 4-15 das, se produce fiebres altas, cefaleas, artralgias y
mialgias generalizadas con un cuadro clnico leve sin complicaciones ni recidivas como el
tifus exantemtico.
(3) Fiebres manchadas de las montaas rocosas - producida por R.rickettsiitrasmitidas por
las garrapatas; tras el periodo de incubacin de 3-6 das, aparecen fiebres altas, mialgias generalizadas
y una mancha negra en la zona de la picadura; en Espaa la especie mas extendidas es R.conorii, el
agente de la fiebre botonosa o exantemtica mediterrnea, transmitida al hombre por
la garrapata (sobre todo del perro); tras el periodo de incubacin de 2-6 das provoca una mancha
negra a modo de botn en el lugar de la picadura, fiebre, artralgias, mialgias generalizada y manchas
maculo-papulosas; no se suelen complicar y responden bien al tratamiento.
(4) Fiebre Q - producida por Coxiella burnetii mediante inhalacin de esta u otras(presencia
de artrpodos), la va de entrada no se conocen hasta la fecha; tras el periodo de incubacin de 3
semanas, se produce un estado febril con mialgias generalizadas ycuadro clnico leve.
Aislamiento - caracteres bioqumicos - diagnostico del genero Rickettsia
Se toma 2 muestras de sangre en estadios febriles (cuando hay mas Rickettsia):
- La 1 se centrifuga para obtener un sedimento sanguneo (concentracin alta de Rickettsia); se usa
para realizar varias tinciones p.ej. May-Grunwald-Giemsa (las rickettsias aparecen de color
purpura), tincin Gram (resulta negativo para Rickettsia y positiva para Coxiella
burnetii), tincin inmunofluorescencia y estudios de microscopia electrnica (para observar); el
sedimento tambin se usa para sembrar en medios de cultivo celular o embriones.
- De la 2 se obtiene sueros para pruebas serologcas (buscando ttulos de Acs), con tecnicas
inmunofluorescencia, seroaglutinacin o ELISA.

Genero Chlamydia - se consideran mas prximos a virus que a bacterias;

son parsitos intracelulares estrictos (carecen de mecanismo biosinttico auto-suficiente) del hombre y
animales; son cocos pequeos de Gram-, inmviles; poseen ADN y ARN y su multiplicacin es
por divisin binaria (a diferencia de virus); es capaz de vivir en medios intracelulares durante mucho
tiempo sin presentar una sintomatologa clara lo que facilita la cronificacin de procesos infecciosos.
Especies mas importantes - dentro de la familia Chlamydiaceae:
- Chlamydia psittaci => parsito intracelular de animales y excepcionalmente del hombre(tras
la inhalacin de heces de pjaros infectados), provocando brotes neumnicos de distinta gravedad.
- Chlamydia trachomatis => parsito intracelular del hombre,
provocandoinfecciones sistmicas o locales de distinta gravedad y afectando especialmente a los
genitales y a los ojos.
Accin patgena e inters clnico - se multiplican en el citoplasma de la clula que parsita,
presentando un ciclo con 2 tipos celulares diferentes:
- En 1er periodo formara una clula densa o corpsculo elemental con gran resistencia a la sequedad,
lo que permitir la dispersin de Chlamydia; es la forma infectiva.
- En 2nd periodo formara una clula mas grande de menor densidad o corpsculo reticulado, que es
responsable de la divisin binaria y por tanto de crecimiento clamidias.
El proceso del ciclo => la forma infectiva (corpsculo elemental) penetra en la clula que va a parasitar
ayudado por los Ags especficos, se produce infeccin celular, se forma una vescula citoplasmtica que
bloqueara los mecanismos de defensa de la propia clula; a partir de aqu este corpsculo elemental
aumenta su tamao, su pared se hace mas fina y permeable permitiendo el paso de
complejos enzimticos, ATP y otras sustancias que van a necesitar de la clula que parasitan; el
citoplasma de la clamidia se hace mas denso y esponjoso y aparece la segunda forma, donde comienza
a multiplicarse por divisin binaria.
Cuadros clnicos de Chlamydia trachomatis:
- Tracoma => tras un contacto directo se produce una infeccin crnica en el epitelio conjuntival y
corneal, siendo frecuentes las recadas y sobre infecciones con evolucin lenta hacia la ceguera;
frecuente en edades infantiles.
- Conjuntivitis neonatal => aparece entre la primera y la segunda semana despus del nacimiento;
surge una conjuntivitis purulenta al neonato, asociada a infecciones genitales por clamidias en la
madre; puede evolucionar positivamente o hacia lesiones anlogas al Tracoma.
- Linfogranuloma venreo => es una infeccin que se trasmite por contacto venreo.
Aislamiento - caracteres bioqumicos - diagnostico del genero Chlamydia
Debido al elevado riesgo de infeccin en el laboratorio al manipular clamidias se suelen
utilizar metodos indirectos (serolgicos) a veces tambien se realiza examenes citologicos en
cultivos especficos.
- Se toman muestras de secreciones oculares y/o genitales
- Se realiza un examen directo que incluyen una tincin de Giemsa y de Gram.
- Se realizan tcnicas citolgicas
- Se realizaran exmenes indirectos mediante tcnicas serologcas (la mas frecuente ELISA) que son
mas seguras y fiables; existe un kit para buscar clamidias.

Genero Micoplasma - es uno de los microorganismos mas pequeos existentes en bacteriologa y se

caracteriza por no contener pared celular => sensible a la presin omotica del medio (se lisan
facilmente), su morfologa es pleomorfismo y resistente a ciertos antibiticos cuya mecanismo
de accin se establece en la pared bacteriana; se dividen por divisin binaria y vivir de forma
independiente y crece bien in vitro a partir de medios artificiales enriquecidos; se encuentra extendidos
en la naturaleza; son comensales de la mucosa del hombre; existe
especies patgenas como Micoplasma pneumoniae que afecta al aparato respiratorio.
Especies mas importantes - dentro de la
familiaMicoplasmataceae estn los gneros Micoplasma y Ureaplasma; solo unas 10 especies
pueden producir algn efecto patgeno en las membranas celulares de las mucosas orofarngeas y uro-genitales; la mas importante para el hombre es Micoplasma
pneumoniae(produce neumonas); el Ureaplasma urealyticum es otra especie patgeno que se asocia a
ETS junto con el Micoplasma hominis.
Accin patgena e inters clnico
- Su infectividad se relaciona con su adherencia (debido a una glicoprotena especifica) a los epitelios
de las mucosas; su pleomorfismo puede adoptar formas filamentosas y alargadas que aumenta la
superficie de contacto a las estructuras epiteliales a las que se une; una vez adherida, los cilios de las
celulas epiteliales que tapizan la mucosa se paralizan y provoca alteraciones metablicas en dichas
celulas epiteliales.
- Cuadros clnicos => cuadro pulmonares y mas raramente cuadros genitales o uro-genitales,
siendo Micoplasma pneumonia es mas importante como el agente causal mas frecuente de
las neumonas atpicas.
- En casos excepcionales se han podido aislar Micoplasma hominis y Ureaplasma
urealyticum en procesos uretrales y genitales como salpingitis, vaginitis, prostatitis, cervicitis, etc. (son
casos muy raros)
Aislamiento - caracteres bioqumicos - diagnostico
- Se toman muestras de la mucosa farngea, secreciones uretrales, exudados, muestras de esputo, de
sangre, etc segn la patologa.
- Se realiza un frotis de la muestra que se puede observar en campo oscuro con nigrosina, al
microscopio de contraste de fases o con la tincin de Giemsa (se tie dbilmente).
- Se siembra en medios especficos y con un alto grado de humedad para evitar la desecacin.
- Se realiza pruebas bioqumicas => fermentacion de glucosa, prueba de arginina, ureasa, etc.; existe
un kit de la deteccin micoplasmas.
- Metodos serolgicos son mas rpidos, mas fiables y mas utilizados en la actualidad
(inmunofluorescencia y ELISA).

Genero Campylobacter - son bacilos Gram- cortos con forma de coma, espiral o alas de gaviota (en
cultivos jvenes); son microaeroflicos, mviles por un nico flagelo polar; no fermentan los
carbohidratos, oxidasa+ y catalasa+; habitan el tracto gastrointestinal de muchos animales; en el
hombre se asocian a infecciones gastrointestinales (via de entrada oral/ digestiva), fundamentalmente,
y cada vez en mayor grado a infecciones extra-intestinales (meningitis, endocarditis, artritis sptica),
especialmente en pacientes con SIDA.
Especies clnicamente importantes para el hombre - C.jejuni, C.coli y C. laridis sonagentes
etiolgicos de diarrea; C.fetus subsp. fetus produce septicemia en pacientes inmuno-suprimidos.
Aislamiento a partir de "heces" - la siembra inmediata en medios selectivos a la toma de muestra;
si se tiene que posponer, se utilizaran medios de transporte especiales (Cary-Blair o Campy-Thio)
donde se mantiene viables; el cultivo de campylobacter tiene que cumplir 3 requisitos =>
(1) empleo de medios selectivos p.ej. "Campylosel" contiene sangre de cordero con ATB y antifngico o
"Skirrow" contiene sangre de caballo con ATB
(2) uso de atmsfera reducida de O2/ microaeroflica se consigue mediante sistema de evacuacinreemplazo hasta lograr 5% de O2, 10% de CO2 y 85% de N2 o campanas anaerobios con sobres
comerciales que generan la atmsfera deseada.
(3) temperatura de 42C en aislamiento inicial entre 24-48 horas (para inhibir la flora fecal
acompaante), despus pasa a 37C el 3 da; las placas han de incubar hasta 72 horas antes de
descartarse como negativas; a esta temperatura se consigue el mximo aislamiento deC.jejuni y C.coli.
Si pretende aislar otras especies de campylobacter distintas a C.coli y C.jejuni => ha de emplear medios
selectivos sin cefalosporinas, incubacin a 37C, atmsfera microaeroflica, incubacin de 7 das.
Identificacin - los campylobacter termoflicos dan lugar a colonias grises, incoloras, mucosa y
no hemolticas; se les hace una tincin Gram (bacilos Gram- con forma de S en cultivo joven y en
cultivo viejo pueden dar formas cocoideas); se monta un fresco para observar la movilidad; son oxidasa
y catalasa positivos; para diferenciar entre las especies se puede montar un API o se realizan varias
pruebas => (1) crecimiento a distintas temperaturas, (2) sensibilidad al acido nalidixico y a la
cefalotina (3) hidrlisis del hipurato (se introduce una tableta dentro de un tubo inoculado, dar + si
cambia a color amarillo).
Campylobacter jejuni => crecimiento a 42C, hipurato+, sensibilidad a Nalidixico y resistente a
Cefalotina
Campylobacter coli => crecimiento a 42C, hipurato-, sensibilidad a Nalidixico y resistente a
Cefalotina
Campylobacter fetus => no crecen a 42C, hipurato-, resistente a Nalidixico y sensible a Cefalotina
Campylobacter laridis => crecimiento a 42C, hipurato-, resistente a ambos Nalidixico y Cefalotina
Patogenia y patologia - C.jejuni es la especie con mayor frecuencia se asocia a infeccion en el
hombre (gastroenteritis con eliminacin de sangre en heces), se adquiere por via oral (comida y
bebidas contaminadas) o por contacto con animales infectados; sensible a pH gstrico (debe ingerirse
una concentracin elevada de ellos para que se produzca infeccion); se multiplica en el intestino
delgado, invade el epitelio y produce inflamacin; en ocasiones puede pasar al torrente circulatorio y
desarrollarse un cuadro de fiebre entrica; la diarrea acompaada de dolor abdominal agudo, dolor de
cabeza y fiebre; la infeccin es autolimitada resolviendose en una semana sin necesidad de ATB; los
casos graves se trata con eritromicina.

Helicobacter Pylori - se aislaron por 1 vez (1982) del estomago de pacientes con
lesiones gstricas y ulcera pptica; son bacilos curvados Gram- con forma de espiral y gran actividad
ureasa; se les denomino Campylobacter pyloridis, posteriormente se rectifico a Campylobacter pylori y
cuando demostraron que difera morfologicamente del genero Campylobacter, se propuso
la creacin de un nuevo genero Helicobacter que se incluyo la especie de Helicobacter pylori; se
trata de una especie de reciente descubrimiento, implicada en procesos de infeccin gstrica.
Metodos de deteccin de H.pylori
- Metodos directos => las muestras mas idneas para el aislamiento de H.pylori son las biopsias de
las zonas pliegues de la mucosa gstrica del antro, cuerpo y fundos; se remitirn directamente al
laboratorio para proceder a su cultivo inmediato en medios especficos para H.pylori; una porcin de la
biopsia se invertir en la realizacin de un frotis para la tincin Gram o Giemsa.
- Incubacin => las placas deben incubarse en condiciones reducidas de O2 (5%), de 10% CO2 y 85%
N2. Se consigue mediante sistema de evacuacin-reemplazo o usando jarras de anaerobios con sobres
comerciales que generan dicha atmsfera; la temperatura optima es de 37C (no se desarrolla a 25C,
30C ni 42C); en aislamiento primario, es conveniente incubar las placas hasta 7 das; Las colonias
son de 1-2 mm de dimetro, translucidas y poco hemolticas.
- Identificacin => son oxidasa+, catalasa+, ureasa+, hipurato- (algunas cepas son capaces de virar
la urea de Christensen en minutos); es sensible a la cefalotina y resistente al nalidixico (algunas cepas
pueden ser sensibles); no son fermentadora de carbohidrato; crece a 37C.
Metodos indirectos:
- Prueba de la urea rpida (de Christensen) => un trozo de biopsia se inocula en un medio con
alta concentracin de urea y un indicador de pH.
- Prueba de la urea respiratoria => el paciente ingiere urea marcada y tras un periodo de tiempo se
mide el nivel de CO2 espirado; se puede emplear urea marcada con C13, que se detecta con
un espectrofotmetro de masas y urea marcada con C14 detectada con un contador de centelleo
(un mtodo diagnostico rpido y no invasivo, pero requiere un equipo especial par al lectura).
- Prueba serologa => para detectar Acs utilizando la tcnica de ELISA.
Patologa - existen pruebas claras de que H.pylori esta implicado en diversas patologas gstricas,
pero se cuestiona como la causa de dichas infeccin; parece claro que es agente etiolgico de gastritis
aguda; se piensa que tambin pueda tener un papel en la gastritis crnica activa; en las ulceras
ppticas se asla 100% de pacientes con ulcera duodenal y 77% de ulcera gstrica; parece ser que su
presencia no es suficiente para desarrollar la ulcera; no esta claro el papel que desempea en la
dispepsia no ulcerosa, en el reflujo gastro-esofgico y en el carcinoma gstrico; hasta 50% de
la poblacin adulta de >60 aos es portadora de este microorganismo; se desconoce su modo
de transmisin; se ha propuesto una posible adquisicin del mismo por contacto con
animales, regin periodontal y transmisin persona-persona (ninguno estn demostrados)
Sensibilidad antibitica - H.pylori es sensible in vitro a un gran numero de ATB, pero, el
tratamiento in vivo es difcil; nunca se emplea mono-terapia porque no es eficaz, suelen administrarse
varios frmacos juntos y aun as no se consigue erradicar al m.o. por lo que son frecuentes
las recadas tras la supresin de la terapia.

Tema 26 VIROLOGA CLNICA (caractersticas generales de los

virus)
Introduccin - virus es un parsito intracelular estricto que requiere infestar una clula para
sintetizar sus componentes y ensamblar nuevos viriones; son de muy pequeos tamaos (filtrables) y
se caracteriza por su mecanismo de replicacin, organizacin y composicion; virologa clnica se
remonta al siglo XX y la composicion de un virus fue determinada por Schlesinger en 1933; en
los ltimos aos se han descubierto otros agentes infecciosos mas simples como los viroides y los
priones;
- los viroides => moleculas circulares de ARN de bajo Pm sin cubierta proteica que causan
enfermedades a las plantas, infectar a los hombres y animales;
- los priones => son protenas que parecen estar codificadas por genes celulares y actan como
seales reguladoras en las celulas que invaden, resistentes a los procesos fsico-qumicos que inactivan
a los virus y no producen respuesta inmune o inflamatoria en el husped; provocan prurigo lumbar de
las ovejas y cabras (scrapie), encefalopata espongiforme en las vacas y enfermedades neurodegenerativastransmisibles en el hombre (p.ej. Creutzfeldt-Jacob /encefalopata espongiforme
progresiva y sndrome de Gerstman-Straussler-Streinker y el kuru); la patogenia (de todas) se
caracterizan por desordenes progresivos como ataxia (dificultad motrica), demencia, deterioro
cognitivo y motor; tras un periodo de incubacin largo (meses o aos), aparecer los
sintomas clnicos; el tropismo de la infectividad es SNC, seguido por el bazo y ndulos linfticos; en el
cerebro se detecta acumulacin anormal de protena-prion en el genoma del husped; los priones son
resistentes a las proteasas e induce una degeneracin neuronal.

Concepto de virus - es un bloque de material gentico (ADN o ARN) rodeado de una

cubierta protena (cpside) que le sirve como vehculo para su transmisin; algunos presenta
membrana lipdica (envuelta) que se adquieren de la membrana citoplasmtica de la clula infectada
durante el proceso de salida; los virus envueltos tienen un matriz proteica que sirve como puente entre
la nucleocpside y la envoltura; carecen de organelas citoplasmticas para crecer y multiplicarse, por lo
que necesitan la maquinaria de una clula husped, pero si poseen algunos enzimas (nucleasas,

transcriptasas, etc.); virines la partcula viral completa (genoma + nucleocpside); se clasifican por
el tipo de husped que parasitan (virus animales, vegetales, bacterifagos)

Estructura y morfologa de los virus - son de tamao entre 20-25 nm hasta 200-300
nm; su observacin requiere un microscopio electrnico.
- Estructura del genoma => ADN o ARN mono-catenario o bicatenario; la mayora de virus ARN
tienen genomas mono-catenaria excepto los reovirus/rotavirus (bicatenario); los virus ADN suelen
ser bicatenario, excepto parvovirus (mono-catenario); los genomas (core o ncleo) pueden ser
moleculas lineales o circulares nicas o segmentadas en varios fragmentos.
- Estructura de la cpside => su funcin es de proteger el genoma del medio extracelular y facilitar
la entrada al interior de la clula; estn compuestas de subunidades proteicas repetidas (capsmeros)
que a su vez estn compuestas de moleculas proteicas (protmeros); segn la disposicin que adopten
los capsmeros /la cpside, se clasifican en virus de simetra helicoidal (normalmente son virus
ARN), icosaedrica (20 caras triangulares y 12 vrtices) y compleja.
- Estructura de la envoltura => los lpidos de la envoltura es lipoprotica y procede de la
membrana clula infectada, pero las protenas suelen ser virales desplazados a las protenas celulares
originales; en algunos casos, las protenas incluyen una matriz (protena M) que contacta/ engancha
con la nucleocpside; los virus envueltos tienen estructuras glucoproticas (espculas) importantes
para los procesos de adsorcin y penetracin al interior de la clula.

Ciclo vital de los virus - las estrategias de replicacin varan dependiendo de la estructura del virus
y de su material genmico, pero en general conlleva pasos de => adsorcin/ adherirse - penetracin decapsidacin - replicacin - ensamblaje - liberacin.
- Adsorcin => la unin de la partcula viral a la superficie de la clula; no requiere energa y no
depende de la temperatura; intervienen moleculas proteicas de la superficie
del virin (protenas de unin) y protenas de la superficie de la membrana de la clula diana
(protenas receptoras); en los virus envueltos, la protena de adherencia viral son las espculas de la
capa externa de la envoltura.
- Penetracin => tras ser adherido, se penetra el virin completo o solo el genoma y las polimerasas
entran en el citoplasma celular, esto se lleva a cabo por 3 mecanismos: penetracin directa, endocitosis
o fusin; penetracin directa => la membrana solo permite la entrada del genoma viral (ocurre
en virus sin envuelta p.ej. fagos); endocitosis=> los viriones adsorbidos, quedan rodeados por la
membrana citoplasmtica de la clula husped formndose una vescula endosmica (mecanismo mas
utilizados de losvirus sin envuelta); fusin => utilizado por los virus envueltos; existen 2 maneras
de fusin: en los paramyxovirus, su envuelta se fusiona con la membrana citoplasmtica directamente
y la nucleocpside se libera al interior del citoplasma; en el resto de virus envueltos, la envoltura viral
se fusiona con la membrana celular formndose una vescula endosmica que posteriormente libera
la partcula viral hacia el citoplasma.
- Decapsidacin => se degrada la cpside viral para que el genoma viral pueda liberarse e iniciar
la transcripcin y la traduccin; en la mayora la penetracin y la decapsidacin se produce a la vez.

- Replicacin => es la fase donde se produce la sntesis de todas las macro-moleculas virales;
la clula husped debe proporcionar la energa y los medios suficientes que a veces puede afectar su
propio metabolismo celular, pero en otros casos apenas se alteran; es esencial que
los ARNm transcriban la informacin viral y la replicacin de la informacin gentica y que
posteriormente mediante los componentes celulares se traducen para fabricar protenas que se
necesitan.
a. Replicacin de virus ADN bicatenario => tras la adsorcin y la penetracin, el ADN viral es
liberado y penetra en el ncleo + ARN polimerasas celulares => ARNm transcrito y traducido para
la sntesis ADN viral; para el proceso de traduccin => ARNm emigra al citoplasma celular y es
traducido para formar las protenas de la cpside => que posteriormente son transportadas
al ncleo para ensamblar el virin completo que sern liberados por lisis celular; la excepcin dar al
virus ADN poxvirus (grande y de simetra compleja) que realiza el proceso
de transcripcin y traduccin en el citoplasma celular utilizando su propia ARN polimerasa
dependiente del ADN viral, ya que no pueden utilizar ARN de la clula husped que se localiza en
el ncleo.
b. Replicacin de virus ADN mono-catenario (fagos, parvovirus) => necesitan un
intermediario replicativo para formar ADN bicatenario que puede transcriben el ARNm (ARN
polimerasa celular necesita como plantilla una ADN bicatenario); como resumen: ADN monocatenario + ADN polimerasas de la clula husped => produce ADN bicatenario + ARN polimerasas
celulares => forma ARNm
c. Replicacin de virus ARN mono-catenario de polaridad (+) => ARN viralpenetrado en el
citoplasma de la clula husped es reconocida de inmediato como ARNm por los ribosomas, los cuales
la captan e inician su traduccin a protenas virales y tambin un enzima RNA polimerasa
(transcriptasa); RNA polimerasa producida + ARN viral (se utiliza como molde) => replicacin del
ARN viral (todo ocurre en el citoplasma independientes del ADN del husped).
d. Replicacin de virus ARN mono-catenario de polaridad (-) => su ARN de polaridad (-)
complementa el ARNm que es de polaridad (+); mediante su propio ARN polimerasas sintetizara el
ARNm que despus le servir de molde para la sntesis de nuevo ARN de polaridad (-) y tambin para
la traduccin de sus protenas utilizando la maquinaria celular.
e. Un caso especial de Retrovirus => virus ARN mono-catenario de polaridad (+) queposeen un
enzima transcriptasa de reversin (transcriptasa inversa / retro-transcriptasa); su genoma ARN +
retro-transciptasa => produce ADN de polaridad (-) + (la misma) retrotranscriptasa => origina ADN

bicatenario que se integran al ADN celular y permanece alli durante tiempo prolongado; En un
momento dado el ADN integrado se reactiva y es transcrito a ARNm vrico por la polimerasa
del husped y entonces, se completa el ciclo replicativo.

- Ensamblaje y liberacin => se puede producir tanto en el ncleo como en el citoplasma, tras
la replicacin del genoma viral y la transcripcin de las protenas virales, los viriones se ensambla y se
libera de la clula husped; consiste en la unin ordenada del acido nucleico y de las protenas para
formar la nucleocpside, dando lugar a un virin viable; la liberacin de los virus sin envuelta
(desnudos) se produce por lisis celular; en caso de virus envueltos, salen al exterior por gemacin de
una zona de la membrana nuclear o citoplasmtica (depende si son virus ADN o ARN); la zona de la
membrana por donde se producir la gemacin, adquiere primero las espculas y las protena de la
matriz (codificadas por el virus), que atrae a la nucleocpside, fusionndose a la
membrana, formndose la envuelta y liberndose el virin al exterior; en caso de poxvirus(mas grandes
y complejos), estos pueden sintetizar sus propias envueltas; en caso deretrovirus, el virus no se libera
de la clula sino que se integra en su genoma y permanecer as largo tiempo o de por vida; el proceso
de ensamblaje y liberacin es a veces ineficaz, formndose partculas no infectivas.

Taxonoma vrica - los virus se dividen en familias, genero, especie o tipo y segn su forma del
genoma, tamao, forma, estructura, sintomatologa clnica que producen, tropismo celular,
etc; segn el tipo de genoma que contienen y su estructura => se clasifica en virus ARN y virus ADN.
Virus ARN
1. De simetra cubica o icosaedrica sin envuelta - mono-catenario de polaridad (+) que utiliza
su propio ARN como mensajero (pueden ser inmediatamente traducidos por la clula husped ya que
no se necesita transcribir ARNm) con la excepcin de Reoviridae(bicatenarios) que utilizan su propia
ARN polimerasa para transcribir ARNm; todos se ensamblan en el citoplasma de la clula husped y
son resistentes al ter.
- Familia Reo-viridae => tamao intermedio (60-80 nm de dimetro), los nicos bicatenarios; el mas
importante para el hombre es el Rotavirus (provoca problemas diarreicos), tiene forma redonda.

- Familia Calici-viridae => son pequeos (35-39 nm), tienen poca importancia en
microbiologa clnica; el mas importante /patgeno para el hombre es el virus de
Norwalk(productor de gastroenteritis) y el virus de Hepatitis E (su inclusin no es definitiva)

- Familia Picorna-viridae => son pequeos (20-30 nm); los gneros mas importantes son
losEnterovirus (>70 enterovirus que incluyen el Poliovirus, Echovirus, Cosxackievirus y el virus de
la hepatitis A) y los Rhinovirus (>100 rhinovirus).

2. De simetra cubica o icosaedrica con envuelta - mono-catenario de polaridad (+), todos se

ensamblan en el citoplasma de la clula husped y son sensibles al ter.
- Familia Retro-viridae => son grandes +/- 100nm, de elevado Pm, contienen trazas de ADN y poseen
transcriptasa inversa (retro-transcriptasa) en su dotacin; adquieren su envoltura en la
membrana citoplasmtica de la clula husped; se engloban todos los virus ARN tumorales; se divide 3
subfamilias: Oncoviridae (causan tumores y canceres), Spumaviride yLentiviridae (dentro de
esta estara VIH).

- Familia Toga-viridae => son de 40-70 nm y adquieren su envoltura en la

membrana citoplasmtica; se incluyen la mayora de los arbovirus (transmitidos por artrpodos - los
arbovirus pertenecen a numerosas familias como Togaviridae, Flaviviridae, Arenaviridae, Reoviridae);
se incluyen tambin los no arbovirus: Alphaviruscon virus Sindbis su principal tipo, Pestivirus con
el virus de la diarrea mucosa como su principal tipo y Rubivirus con rubeolavirus su principal tipo.

- Familia Flavi-viridae => son de 40-50 nm y adquieren su envoltura en las membranas intracitoplasmticas (antes se incluyen dentro de la familia Togaviridae y los han separado por su menor
tamao y por el lugar de su ensamblaje que ocurre en el retculo endo-plasmtico);
incluyen 2 gneros de importancia clnica: (1) Flavivirus (antes llamados arbovirus del grupo B) que
destaca el virus de la fiebre amarilla y del dengue; (2) virus de la Hepatitis C; actualmente se
incluye de manera no definitiva al virus de la hepatitis G.

3. De simetra helicoidal - todos son envueltos, mono-catenario de polaridad (-) que utiliza su
propia transcriptasa (ARN polimerasa) para transcribir ARNmensajero; se ensamblan en el citoplasma
y son sensibles al ter.
- Familia Rhabdo-viridae => de forma bala o bastn; el dimetro del cilindro +/- 70nm con longitud de
175nm; adquieren su envuelta en la membrana citoplasmtica; el genero mas importante es virus de la
rabia.

- Familia Paramyxo-viridae => de tamao 150-300nm,

son pleomrficos predominandoformas esfricas rugosas y filamentosas; adquieren su envuelta en la
membrana citoplasmtico; se incluyen 3 gneros: Paramyxovirus (virus de la parotiditis/paperas,
parainfluenza tipos 1,2,3,4A,4B...), los Morbilivirus (virus del sarampin, entre otros) y
losPneumovirus (virus sincitial respiratorio - causan bronquiolitis en nios pequeos).

- Familia Orthomyxo-viridae => morfolgicamente semejante a la familia Paramyxoviridaepero mas

pequeos 80-120nm, parecidos tambin a la familia Rhabdoviridae (los 3 proceden de un
ancestro comn); adquieren su envoltura en la membrana citoplasmtica; se incluyen2 gneros: los
virus de la influenza o de la gripe tipos A, B y C.

- Familia Arena-viridae => de tamao 50-300nm, adquieren su envoltura de la

membrana citoplasmtica; algunos producen infecciones virales "lentas"; el mas importante es virus de
la fiebre de Lassa (en Africa).

- Familia Bunya-viridae => de tamao 80-100nm, de forma esfrica, adquieren su envoltura en el

aparato de Golgi; la mayora de los gneros son arbovirus.

- Familia Corona-viridae => de tamao 80-130nm, morfolgicamente se parecen a Orthomyxovirus,

pero sus proyecciones en la superficie a modo de ptalos o "corona solar"; adquieren su envoltura en
las membranas intra-citoplasmticas; la mayora de los gneros son virus respiratorios de vas altas.

Virus ADN
a. De simetra cubica o icosaedrica sin envuelta - su genoma es ADN bicatenario
con excepcin de Parvo-viridae (mono-catenario); todos se ensamblan en el ncleo y sonresistentes
al ter
- Familia Adeno-viridae => de tamao mediano 70-90nm; se conocen 34 tipos que afectan al hombre y
mucho de ellos afectan el tracto respiratorio.

- Familia Parvo-viridae => de tamao muy pequeo 18-26nm con genoma ADN mono-catenario;
la mayora no tienen importancia clnica, excepto parvovirus B19, pertenece al
genero Parvovirus que causa eritema infeccioso.

- Familia Papova-viridae => son de tamao pequeos 45-55nm con ADN de tira circular; el genero mas
importante es el Papilomavirus o virus de las verrugas con 66 tipos depapilomavirus
humanos (PVH); los Papovavirus en general producen enfermedades latentes y crnicas y algunos
son oncognicos.

b. De simetra cubica o icosaedrica con envuelta - son bicatenarios y todos se ensamblan en

el ncleo con excepcin de Irido-viridae que se ensamblan en el citoplasma.
- Familia Herpes-viridae => de tamao medio +/-100nm, adquieren su envoltura en la membrana
nuclear y son sensibles al eter; de los 80 virus que existen, solo 8 tienen inters clnico para el hombre
y se divide en 3 subfamilias: (1) Alphaherpesviridaecon gneros importantes el virus Herpes
simples tipo 1 y 2 y el virus Varicella-zoster; (2)Betaherpesviridae con gneros Citomegalovirus al
citomegalovirus humano (Herpesvirus humano tipo 5) y al Herpesvirus humano tipo6, y al
genero Roseolovirus con elherpesvirus humano tipo 7; (3) Gammaherpesvirus que incluyen virus de
Epstein-Barr(herpesvirus humano tipo 4) que provoca enfermedad de Beso, pertenece al
generoLimphocriptovirus.

- Familia Hepadna-viridae => de tamao 40-50nm, adquieren su envoltura en el citoplasma,

son resistentes al ter y poseen un genoma ADN parcialmente bicatenario; el mas importante es
el virus de la hepatitis B.

- Familia Irido-viridae => de tamao grande 130-300nm, sensibles al ter, adquieren su envoltura en

la membrana citoplasmtica y tambin se ensamblan en el citoplasma (a diferencia de otros); no tienen

importancia clnica para el hombre, pero si en veterinariacomo el virus de la fiebre porcina africana.

c. De simetra compleja
- Familia Pox-viridae => son virus animales mas grandes 230x400nm de forma ladrillo o ovoide; se
caracteriza como la nica familia de virus ADN que se replica y ensambla en el citoplasma,
pues contienen una RNA polimerasa ADN dependiente (no necesita la maquina nuclear), de
hecho su replicacin es posible en celulas a-nucleadas (sin ncleo); sonresistentes al ter y poseen una
doble envuelta (una la adquieren en el aparato Golgi y la otra en la membrana citoplasmtica; los mas
importante son virus de la viruela, virus de la vacuna o vaccinia y virus del molluscum contagiosum.

Principales familias de virus de inters clnico

1. Virus ARN (mono-catenario)
1.1. Familia Reo-viridae (tamao mediano 60-80nm - icosaedrico - sin envuelta - se ensamblan en
el citoplasma) - contiene 6 gneros, nicamente cabe destacar Rotavirus)
Rotavirus (forma de rueda - el nico bicatenario) => descubiertos en 1973 en nios con
gastroenteritis; el nico con importancia clnica (agente causal
degastroenteritis espordica y epidmica en lactantes y nios; la infeccin suele ser asintomtica en
neonatos; afecta principalmente a nios entre 6-24 meses; la prevalencia mxima en invierno y
raramente en verano; periodo de incubacin 1-3 das, precediendo los vmitos a la diarrea que suele
mantenerse de 4-5 das; el virus se detecta en heces (dura bastante horas fuera del husped)
1.2. Familia Calici-viridae (pequeos 35-40 nm - icosaedrica - sin envuelta - de polaridad+) - se
ensamblan en el citoplasma) => tiene poca importancia en clnica, posibles agentes causales de
gastroenteritis en cualquier da del ao y a cualquier edad; es el agente Norwalk (virus que causan

gastroenteritis en EEUU) que ahora esta dentro de Parvovirus - Parvoviridae; se incluye de forma no
definitiva el virus de Hepatitis E.
1.3. Familia Picorna-viridae (virus muy pequeos 20-30nm - icosaedrica - sin envuelta - de
polaridad+) - es una familia importante y una de las que mayor numero de virus presenta, destacando
2 gneros Enterovirus y Rhinovirus.
Enterovirus - se asocian con distintos sndromes clnicos como parlisis, meningitis asptica,
encefalitis, miocarditis, pericarditis, pleurodinia, herpangina, infecciones agudas del tracto respiratorio
y fiebre aftosa; son habitantes transitorios del tracto digestivo humano; existen >70 sero-tipos, siendo
el tipo 72 es el virus de la Hepatitis A; todos se diseminan por va fecal-oral y
la mayora son asintomticas; los mas importantes sonPoliovirus, Echovirus y Coxsackievirus;
- Los virus de poliomielitis /Poliovirus son tres (tipos 1,2 y 3), mas temidos normalmente por
la parlisis flcida (de cintura para-bajo) y deformidades aunque son complicacin infrecuente; la
vacuna es de Sabin (virus atenuados), tambin Salk (virus inactivados); la vacuna de poliomielitis se
administra a los nios de 2-4-6-18 meses.

- Los virus Echo y Coxsackie tienen distintas manifestaciones (muy ubicuo/ de todo tipo).
Para el diagnostico debe recurrirse al cultivo; el aislamiento de un enterovirus de heces o de faringe no
indica necesariamente una relacion causal con el cuadro clnico, y deben descartarse otras causas; por
el contrario si se trata de LCR.
Rhinovirus - agentes etiolgicos mas frecuentes del resfriado comn (rinitis agudas); existen >100
tipos
1.4. Familia Toga-viridae y Familia Flavi-viridae (toga=envuelta - icosaedrica - de polaridad+ se ensamblan en el citoplasma); ambos son de forma icosaedrico, virus de RNA mono-catenario con
envuelta; se incluyen la mayora de los arbovirus; losv.Togaviridae (pequeo 40-70 nm, adquiere su
envuelto en la membrana citoplasmtica de la clula mientras los v.Flaviviridae (40-50 nm, lo
adquieren de retculo endo-plasmtico; dentro de Togaviridae estn los arbovirus y los gneros no
arbovirus como Alphavirus(sindbis), Pestivirus y Rubivirus (rubeola) dentro de Flaviviridae esta
el virus Hepatitis C y otros que producen enfermedades como fiebre amarilla, dengue, de
genero flavivirus que pertenecen a los arbovirus tipo B (transmitidos por artrpodos).
Virus de la Rubeola del genero Rubivirus (no es un arbovirus) - descrito hace >200 aos; consta la
importancia como agente causal de malformaciones congnitas desde la epidemia de 1940 en Australia
(un oftalmlogo australiano constato un elevado numero decataratas congnitas y ceguera asociados a
esta enfermedad); la infeccin suele ser benigna y auto-limitada; sintomas => procesos

respiratorios superiores leves, erupcin eritematosa y linfadenopata sub-occipital y retro-auriculares;

en adultos se puede complicar con artritis transitoria o artralgias; rara vez produce encefalitis o
purpura trombocitopnica; muy importante la infeccin en gestantes por posibles aparicin de sordera
neuro-sensitiva, alteraciones cardacas, cataratas, retraso del crecimiento y sintomas encefalticos;
la incubacin dura 14-21 das; diagnosticopor mtodo serolgico (tcnica de ELISA) para detectar
IgG y sobre todo IgM en las embarazadas y un resultado positivo indica inmunizacin frente al virus;
actualmente es poco frecuente debido a la vacuna obligatoria que se incluye en
latriple vrica (paperas, sarampin y rubeola) que se pone a los nios de15 meses (suele dar
inmunidad permanente) y una dosis de recuerdo a los 6 aos (solo las nias); a los 11 aos solo se dan
vacuna de varicela.
Clnica de Rubeola => empieza con eritema en la cara y se extiende hacia abajo (es un
eritema maculo papuloso); es menos llamativo que de la sarampin; dura +/- 3 das y puede
haber enantema palatino.

1.5. Familia Retro-viridae (de tamao grande +/- 100nm - icosaedrica - con envuelta - de
polaridad+ - se ensamblan en el citoplasma) => poseen enzima transcriptasa inversa / retrotranscriptasa; a esta familia pertenece el virus de la inmuno-deficiencia humana VIHque se estudia
aparte.
1.6. Familia Orthomyxo-viridae (de tamao 80-120nm - helicoidal - envuelta - de polaridad (-) y
se ensamblan en el citoplasma) - en1918 tras la Guerra Mundial, mato mas personas que la propia
guerra; esta compuesta por los distintos tipos de virus influenza/ Gripe (tipo A, B y C).
Virus Influenza /la gripe espaola (empez en Espaa) - causan gripe, infeccin respiratoria aguda
epidmica normalmente durante mes de noviembre-abril; la va de transmisin es area, periodo
de incubacin 1-4 das, seguido de clnicas tipo respiratorias superior, mas grave en los ancianos; se
realizan campaas de vacunacin todos los aos (sobre todo a los ancianos y pacientes broncopulmonares), ya que presentan gran variabilidad antignica segun el serotipo que causa la epidemia
(tiene gran poder mutagnico); existe 3 tipos => A, B y C (A y B causan epidemias de importancia);
los influenza A se subdividen segn la diferente composicion antignica (en la envoltura) de la
hemaglutinina y la neuraminidasa; el diagnostico es clnico; recientemente se introduce metodos de
diagnostico de muestras clnicas de antgenos virales; el de mayor importancia clnica es virus
respiratorio sincitial (VRS); para el diagnostico rpido se usa la inmuno-fluerescencia directa en
aspirados naso-faringeos, esputos o biopsia de pulmn;existe un kit con Ags virales para detectarlos.
1.7. Familia Paramyxo-viridae (de tamao grande 150-300nm - helicoidal - envuelta - de
polaridad (-) y se ensamblan en el citoplasma) => morfolgicamente parecida al de anterior/

Orthomyxoviridae; todos ellos son causas importantes de enfermedad respiratoria en los nios; se
incluyen 3 gneros Paramyxovirus (virus de la parotiditis/paperas y parainfluenza), Morbilivirus (virus
del sarampin), Pneumovirus (virus sincitial respiratorio)
Virus Parainfluenzae (VPI) del genero Paramyxovirus - los 5 tipos de VPI producen infecciones
del tracto respiratorio, siendo el 1 y el 2 los principales causantes de laringo-traqueobronquitis, el 3 de
bronquiolitis y neumnia en nios (segundo agente despus del VRS), el 4 y el 5 causan infecciones
mas suaves; el diagnostico es clnico.
Virus respiratorio sincitial (VRS) del genero Pneumovirus - es la causa mas importante
de neumnia y bronquiolitis en nios y recin nacidos; produce un amplio espectro de infecciones,
siendo la mas frecuente es el resfriado comn con abundante rinorrea; VRS esmuy contagioso y se
manifiesta en forma de brotes invernales; la inmunidad no es completapor lo que se dan las reinfecciones (mas suaves); Es importante que la excrecin de virus se mantenga durante 2 o 3 semanas
(mas tiempo para los inmunodeprimidos), por lo que al ingresar un nio en el hospital durante 1 o 2
semanas, puede ser contagioso todava (es el agente mas frecuente de infeccin nosocomial
en pediatra); las infecciones graves se trata con la ribavirina (inhibe la sntesis del ARN
viral); el diagnostico rpido es la inmunofluorescencia en secreciones respiratorias.
Virus del Sarampin - causa una enfermedad aguda, febril, exantemtica, de gravedad variable
que afecta a nios de 5-9 aos, se contagia por va respiratoria y conjuntival;sintomas clnico => los
primeros das como un catarro naso-oculo-faringo-laringeo, luego aparece fiebre, cara
rubicunda, congestin de mucosa y a los 3-4 das aparece "manchas Koplik" (manchas blanquecinas
diminutas delante del 1 y 2 molar) dura un par de das; empieza aparecer exantema, primero retroauricularmente, despues se extiende a todo el cuerpo, las palmas y las plantas de los pies mas tenue en
zonas distales, sube a la fiebre y el exantema tenue se hace muy eritematoso; tras 2-3 das mejora
bruscamente y desapareciendo los signos en el orden del aparecimiento (dar inmunidad
permanente); el diagnostico es por metodos serolgicos.

Virus de la parotiditis - es una enfermedad endmica con incidencia todo el ao; es rara en nios <
1 ao, gracias a la inmunidad de la madre; afecta a nios de 5-14 aos, se transmite por va area y por
objetos introducidos a la boca (dar inmunidad permanente); clnica => tras 24horas
de clnica inespecifica, aparecern dolor y tumefaccin de retro-parotidia y odo, aumento de fiebre,
puede haber afectacin de nervio facial leve y bilateral; complicacin => meningitis, orquitis,
pancreatitis o artritis; diagnostico es por va serolgico; el diagnostico es por metodos serolgicos.

1.8. Familia Rhabdo-viridae (de tamao grande en forma de bastn, dimetro 70nm y longitud
175nm - helicoidal - con envuelta - de polaridad (-) y se ensamblan en el citoplasma) =>
caracterstica tpica de su morfologa es forma de "bala"; el mas importante es el causante de la rabia o
hidrofobia (se atraganta con el agua).
Virus de la rabia - causa enfermedad infecciosa aguda del SNC, de gran importancia histrica por
los trabajos de Pasteur; existe la obligacin de vacunar todos los aos a perros y gatos, ya que es una
zoonosis en la que el hombre es un eslabn irrelevante; existen 2 formas epidemiolgicas =>
urbana (lo adquieren perros y gatos no inmunizados) y salvtica (los zorros); normalmente el virus esta
presente en la saliva de animales rabiosos, transmitindose por mordeduras (son fuentes
de infeccin humana); el diagnostico sola realizarse postmortem, mediante la observacin de los
cuerpos de Negri (cerebro); tambin se pueden cultivar en laboratorio; clnica de animales =>
cambian de carcter, se vuelven caprichosos, pierden apetito, ingerir objetos no engullibles autllan con
ronca, irritabilidad creciente y muerden a personas y animales; mueren en 2 semanas; clnica de
humanos => la incubacin 1-3 meses depende del lugar de la mordedura; el virus se propaga por los
nervios a una velocidad 1mm/hora; comienza con la alteracin del sueo, dolor de la
mordedura, tambin parestesias/ hormigueos de la zona, trastornos respiratorios (en la voz),
posteriormente aparece espasmos farngeos tras la ingestin de lquidos o solo de verlo
(hidrofobia), salivacin espumosa y espasmos en las extremidades (basta con pequeos estmulos de
luz o ruidos, para provocar lo); las personas suelen morir por parlisis en pocas horas tras
la afectacin de bulbo-raqudeo; el cuadro normal es de 3-6 das, despus mueren.

1.9. Familia Corona-viridae (de tamao 80-130nm - helicoidal - envuelta - de polaridad (-) y se
ensamblan en el citoplasma) => adquieren su envoltura (con proyecciones a modo de ptalos/ corona
solar) en las membranas intra-citoplasmticas; escasa importanciaen patologa, nicamente causan el
resfriado comn y pueden estar involucrados en cuadros de gastroenteritis.
2. VIRUS ADN (bicatenario)
2.1. Familia Parvo-ridae (de tamao muy pequeo 18-26nm - icosaedrico - sin envuelta - se
ensamblan en el ncleo - resistentes al eter) => son de tamao muy pequeo y sonlos nicos que
presentan ADN de una sola hebra (mono-catenario); algunos tienen importancia en veterinaria y solo
destaca uno como patgeno humano (Parvovirus B19).

Parvovirus B19 (estaban incluidos en virus Norwalk) - fue vinculado al eritema infecciosoen
1983; es benigna y afecta nios en edad escolar; presentan una erupcin eritematosa en las
mejillas (cara enbofetada) y un exantema en extremidades y tronco (respeta a las palmas, las plantas y
los labios); los adultos son propensos a artropata asociada, que se resuelve en 2-4
semanas; diagnostico por mtodo serolgico y metodos de ELISA.

2.2. Familia Papova-viridae (de tamao pequeo 45-55nm - ADN de tira circular - icosaedrico - sin
envuelta - se ensamblan en el ncleo - resistente al ter) => son unos viruses
oncognicos (efecto cancergeno), producen enfermedades latentes y crnicas, causantes verrugas
genitales o condilomas (se asocian a carcinoma de crvix) y papilomas(Papilomavirus/ virus Papiloma
humano); el diagnostico es de tipo clnico y serolgico; prevencin => se vacunan a las nias de < 14
aos.
2.3. Familia Adeno-viridae (de tamao mediano 70-90nm - icosaedrico - sin envuelta - se
ensamblan en el ncleo - resistente al ter) => producen principalmente patologa al tracto
respiratorio, ocular y gastroenteritis; las infecciones respiratorias solo son significativas en nios <6
aos; el diagnostico se realiza mediante clnicas y tcnicas serologcas.
2.4. Familia Hepadna-viridae (de tamao pequeo 40-50nm - ADN parcialmente bicatenario icosaedrico - envueltos - se ensamblan en el ncleo - resistentes al ter) => su envuelta se adquiere en
la membrana citoplasmtica y se ensamblan en el ncleo; en esta familia se encuentra virus hepatitis
B que se estudiara a parte.
2.5. Familia Herpes-viridae (de tamao medio +/-100nm - icosaedrico - envueltos - se ensamblan
en el ncleo - sensibles al ter) => adquiere su envuelta de la membrana nuclear y se ensamblan en
el ncleo; destaca 3 subfamilias => Alphaherpesviridae (VHS 1y2, virus Varicella-Zooster),
Betaherpesviridae (CMV y Roseolovirus), Gammaherpesvirus (VEB/Limphocriptovirus); todos los
virus producen infecciones latentes, capaces de reactivarse.
Virus Herpes Simple (VHS) - producen infecciones latentes que se reactivan con o sin lesiones que
sirven de fuente de infeccin para individuos susceptibles (los virus de Herpes no se cura, solo se
acantona y se puede reactivar); existen 2 tipos => VHS-1 (tropismo por lesiones por encima de la
cintura y suele ser leve) y VHS-2 (se encuentra principalmente en los
genitales, transmitindose por va venrea); cada individuo tiene un tropismo estable;suele ser bucal,
comienza con hormigueo y luego aparecen vesculas, costra y desaparece en +/- 1 semana; VHS-1 se
transmite por secrecin oral, infeccin a nivel peri-oral, tambin otras zonas como los ojos; VHS-2
normalmente daran infeccin genital y se contrae por va sexual; en EEUU en ciertas capas sociales, es
la enfermedad venrea mas frecuente; en mujer gestante se puede transmitir al bebe va placenta o
canal de parto o en los primeros das de vida; en general estos virus tienen
capacidad oncognicos como VEB (virus Epstein-Barr), puede producir cncer cervical; el

diagnostico se realiza mediante la tincin de Giemsa de celulas raspadas de lesiones herpticas, para
observar las caractersticas de las celulas gigantes multi-nucleadas; tambin se cultivan en SHELLVIAL.

Citomegalovirus (CMV) - producen infeccin asintomtica, pero con gran importancia

en huspedes inmuno-comprometidos; las infecciones se pueden clasificar en congnitas, perinatales o pos-natales (antes o despus del parto); es la causa mas frecuente de infeccin congnita; el
CMV se ha detectado en saliva, orina, leche materna, semen, por lo que su transmisin es
variada; tambin se transmite por transfusiones o trasplantes; en pacientes inmuno-competentes,
normalmente son asintomtica, si da clnica va a ser semejante a mononucleosis
infecciosa (virus Epstein-Barr), comofiebre, adenopatias, hepatomegalia; en paciente
inmunodeprimidos es diferente, en general dar fiebre, neumonitis, colitis, esofagitis,
hepatitis, infeccin congnita y perinatal, puede dar retraso mental, ictericia y sordera; el
diagnostico => por serologa buscando Acs anti CMV (metodos ELISA), cultivo en SHELLVIAL (artificial) ya que no se pueden cultivar en celulas vivas.
Virus Varicela-Zster (VVZ) - la varicela y el herpes zster representan diferentes
manifestaciones clnicas de un mismo virus; la varicela es mas frecuente en nios y se caracteriza por
fiebre y exantema vesicular generalizado; es una infeccin primaria mientras su reactivacin producir el herpes zster, aparece normalmente en adultos (cuando hay
una disminucin de la inmunidad) que consiste en una erupcin dolorosa circunscrita de lesiones
vesiculares, acompaada de inflamacin de las races dorsales de los nervios raqudeos o de los
ganglios sensitivos craneales; los estadios son => macula - ppula - vescula - umbilicacin costra; caractersticamente existe estados evolutivos todos mezclado a la vez y prurito sobre todo en el
tronco y cara (menos en las extremidades); el diagnostico sera tipo clnico y tambin por los distintos
metodos en laboratorio => examen directo previa tincin Giemsa por microscopio electrnica,
por serologa (ELISA) y por cultivo celular.

Virus de Epstein-Barr (VEB) - es uno de los virus humanos mas ubicuos, linfotrpico y
oncognico; la infeccin primaria suele pasar en la infancia, aumentando su sero-prevalencia 60-70%
en jvenes y 80-90% en adultos; el sndrome clnico mas frecuente es lamononucleosis

infecciosa (enfermedad de beso) que presenta fiebre, adenopatias, faringitis y linfocitosis con
linfocitos atpicos; VEB tambin se ha asociado a carcinoma naso-farngeo y al linfoma de
Burkitt; diagnostico => la prueba de Paul Bunnell es la deteccin de Acs heterofilos
y tambin por mtodo de ELISA.

Herpesvirus Humano 6 (HHV-6) - es un virus de muy reciente aparicin, se ha aislado

en sndromes linfo-proliferativos y se ha vinculado al exantema sbito (elevacin brusca de la
temperatura hasta 40C de 2-4 das, seguida de un descenso rpido que coincide con la aparicin de un
exantema maculo-papular que persiste 1-2 das; el diagnostico sera clnico y serolgico.
Herpesvirus Humano 7 - se descubri en 1989 (reciente); tiene tropismo por los linfocitos T,
provocando exantema sbito; se investiga si tiene relacion con sndrome de fatiga crnica (que lo
padecen sobre todo mujeres mayores).
2.6. Familia Pox-viridae (ADN bicatenario - doble membrana) - son de tamao grande 230400nm, con forma de ladrillo, se replica en citoplasma y se ensamblan en el citoplasma;el mas
importante es el virus de la viruela, virus de Moluscum Contagiosum y virus de la Vaccinia;
- Viruela se contagia por inhalacin y tras 15 das aparece fiebre, mialgias y erupcin ppula vesicular
dura y luego evoluciona a pstulas y a la curacin; a veces puede provocar muerte por exantema
hemorragica o una sobre infeccin bacteriana.

- Virus de la Vaccinia es muy prximo al virus de la viruela; en individuos inmunodeprimidos

puede provocar complicaciones, pero en los inmuno-competentes es auto-limitado; es importante
en los principios de la vacunacin (Jennen); ltimamente se investiga su utilizacin como vector para
actuar como vacuna contra virus de Hepatitis B, Herpes simple y VIH, ya que su genoma es susceptible
de poder insertarle secuencias de genes que codifiquen protenas de otros virus y que
se expresaran posteriormente cuando el virus se replique, con lo cual tendramos Acs contra estos
virus.

- Virus de Moluscum Contagiosum - provoca enfermedad cutnea benigna, contagiosa que

pueda adquirir por compartir objetos o contacto sexual; aparece en epidermis lesiones nodulares
blancas de aspecto nacarado de 2-10 mm que son indoloras; cualquier traumatismo provoca su
contagio; desaparece entre 2 meses y 1 ao.

Esquema de Virus Respiratorio

HEPATITIS VIRAL - es una enfermedad sistmica que afecta fundamentalmente el Hgado; se

conocen 7 virus de la hepatitis, denominados A,B,C,D,E,F y G que pertenecen cada uno a familias
y gneros distintos, pero que tienen todos un tropismo heptico (no tienen relacin taxonmica);
existen adems otros virus que producen hepatitis, comoCitomegalo virus y el virus de Epstein-Barr; se
pueden clasificar segn la principal va de transmisin y la tendencia a la cronicidad en 2 grandes
grupos(1) transmisin fecal-oral y no cronifican: VHA, VHE y VHF (2) transmisin parenteral y
pueden cronificar: VHB, VHC, VHD y VHG.

Virus de la Hepatitis A (VHA) - aislado en 1973, pero se sospech mucho antes; virus ARN de la
familia Picornaviridae (de pequeo tamao 20-30nm, icosadrica, sin envuelta, polaridad+) dentro del
gnero Enterovirus, el tipo 72; la mayora de infecciones son aguda sin cronificarse (<1%
fulminante); se encuentra en las heces durante el periodo de incubacin(hasta 2 semanas).
Transmisin - se disemina por la ruta fecal-oral (estrecho contacto persona-persona) con la
implicacin de agua y alimentos que pueden causar brotes epidmicos; la mayor excrecin del virus en
heces se da en las semanas previas a la aparicin de la ictericia, sobre todo en la fase tarda de la
incubacin; otras vas de transmisin del virus son posibles pero poco probables; existe casos durante
todo el ao, con un pico en otoo.
Sintomatologa clnica suele ser menos grave que la hepatitis B; en general, la infeccin
es asintomtica y la gravedad aumenta con la edad; el periodo de incubacin 20-45 das, a
continuacin suele aparecer fiebre, mialgias, fatiga, ictericia, anorexia, dolor de cabeza o dolor en
epigastrio y aumento de las transaminasas (GPT, GOT) y hepatomegalia.
Diagnostico requiere la confirmacin del laboratorio; se observ el virus por la primera vez
por Feinstone en 1973 y es cultivable, pero se utiliza la serologa basada en la respuesta inmunitaria; el
mtodo ms utilizado es ELISA detectando Acs IgMVHA en su fase aguda; tambin se pueden detectar
Ags virales en heces (detectar Acs total de IgG y IgM no tiene utilidad clnicamente); IgM suele durar 6
meses; IgG confiere inmunidad y la mayor parte de nuestra poblacin de >40 aos los tienen; hasta la
fecha no se han descrito casos de cronicidad.
Prevencin las medidas ms importantes son la higiene personal, lavado y desinfeccin de manos y
objetos contaminados; no es necesario el estricto aislamiento del paciente mientras se mantiene las
medidas de desinfeccin-esterilizacin, cloracin y nivel higinico-sanitarias; inmunizacin pasiva =>
se dispone una inmunoglobulina eficaz tanto paraprofilaxis pre-exposicin (se estudia la relacin
coste-eficacia antes de utilizarla/ solo si viajan a zonas endmicas) como postexposicin; inmunizacin activa => existe una vacuna con buenos resultados (virus inactivados) que se
pone al mes, 6 meses y al ao (3x).

Virus de la Hepatitis B (VHB) es un virus ADN de la familia Hepadnaviridae (ADN parcialmente

bicatenario, icosadrica con envuelta, resistentes al ter), de gran importancia socio-sanitaria y
distribucin mundial (250 millones portadores asintomtico 1% desarrollan cirrosis heptica o
carcinoma hepato-celular que son complicaciones ms importantes); primeros casos se describieron
en 1833 en Bremen (Alemania), por la administracin de la vacuna de la viruela que contiene suero

humano, pero hasta los aos 40-50 no se distingui de la hepatitis A; en 1965 Blumberg descubri el
Ag Australia y se identific el virus.
Estructura se distinguen una serie de estructura del virus que dan lugar a los marcadores
serolgicos:
-Ag de superficie => HBsAg o Ag Australia (marcador de infecciosidad, codificado por el gen S) que
induce a la formacin de HBsAc o anti-HBs que confiere inmunidad.
-Ag del core o nucleo-cpside => HBcAg codificado por el gen C que no se detecta en sangre pero si su
HBcAc (marcador epidemiolgico que se mantiene de por vida); IgM-HBcAc se detecta
como marcador ms fiable de hepatitis B aguda.
-Ag soluble => HBeAg que induce al HBeAc (HBeAg es el marcador de pronstico de la enfermedad, ya
que se correlacionan con el nivel de replicacin del virus; HBeAc es unmarcador de buena evolucin).
-Adems se distinguen su genoma ADN y una polimerasa.
- El virin completo se denomina partcula de Dane, ya que existen formas incompletas en sangre
(como p.ej. HBsAg).
Infeccin por VHB la mayora son sub-clnicas/ asintomtica (50-80%) y solo se detectan en
controles serolgicos; la mayora de las infecciones sintomticas son auto limitadas y se resuelven en
menos de 6 meses (Hep.aguda); la lesin heptica puede ser nula o leve o llegar a casos de hepatitis
fulminante (> de 6 meses se pueden cronificar); lasintomatologa clnica es similar a la de Hepatitis A;
un periodo de incubacin es de 1-6 meses; entre 5-10% de las infecciones se hacen persistentes y se
mantiene de por vida (como portador asintomtico o sintomtico); en la mayora de ocasiones la
funcin heptica y la histologa son normales, pero en otras ocasiones dan lugar a sndromes hepatitis
crnica persistentes (HCP) y hepatitis crnica activa (HCA); HCP es menos progresiva que HCA (puede
ser ms grave y desembocar en cirrosis).

Epidemiologia existen reas hiper-endmicas, endemia media y baja (Espaa est en baja); el
nico reservorio importante es el hombre que transmite el virus por contacto ntimo (va sexual,
parenteral y vertical-perinatal) y mediante objetos personales o materiales de hospitales (familiares y
personal sanitario corre un mayor riesgo); la existencia de HCP presenta un reservorio estable para el
virus y asegura su supervivencia indefinida que se detecta en lquidos corporales (sangre, heces, orina,
bilis, lagrimas, semen, leche materna, sudor, secreciones vaginales, LCR, liquido sinovial y sangre de
cordn);

Marcadores en la infeccin aguda auto-limitada (en el orden de aparicin):

-HBsAg (aparece antes del 1 mes y desaparece antes de 6 mes)
-HBeAg (aparece el 1 mes y desaparece antes del 3 mes)
-DNA viral (aparece despus del 1 mes y desaparece al 3 mes)
-Anti HBc (aparece entre 1-2 mes; Anti-HBc IgM desaparece antes del 5 mes => Hepatitis aguda)
-Anti HBe (aparece al 3 mes)
-Anti HBs (aparece antes del 7 mes)
Prevencin es la medida ms eficaz para combatir la infeccin; es un virus muy contagioso cuando
hay exposicin parenteral; existe inmunizacin pasiva (gammaglobulina hiper-inmune eficaz en
situaciones de pre y post-exposicin ) y inmunizacin activa (vacuna de HBsAg que se administra
universalmente a 0-1-6 meses que produce respuesta inmunitaria de 90-95%).

Virus de la Hepatitis D (VHD) descubierto en 1977; es un virus ARN incompleto /defectivo que
requiere HBsAg para su replicacin (adquieren su envuelta del virus B y si no hay infeccin de por VHB
no la hay por VHD).
Tipos de infeccin:
1-Coinfeccin => infeccin simultneamente por ambos virus (VHB y VHD); el curso natural de VHB
no se modifica; al resolverse la infeccin de VHB, re resuelve tambin la de VHD; clnicamente la
hepatitis es ms grave y la tasa de hepatitis fulminantes es mayor (hasta 20%).
2-Sobreinfeccin => cuando el VHD sobre infecta a portadores crnicos de VHB; aqu si se modifica el
curso natural de VHB y la mayora de las sobreinfecciones (70%) desembocan en hepatitis crnica y
acaban en cirrosis entre 15-20 aos.
El pronstico de VHD depende de marcadores de replicacin del virus (anti-HBe) => puede acabar en
hepatitis crnica o cirrosis; cuando no hay marcadores de replicacin => puede evolucionar a
la curacin.

Virus de la Hepatitis C (VHC) es de reciente descubierto (1988 - aunque se sospech desde hace
mucho tiempo) del que quedan an muchos interrogantes por resolver; en actualidad se sabe que VHC
es responsable del 80-90% de los casos de hepatitis post-transfusional y del 20-50% de los hepatitis
espordica; es un virus del tamao medio dentro de la familia Flaviviridae (virus ARN icosadrica

pequeo de tamao 40-50nm con envuelta, de polaridad+ y sensibles al ter); se distingue regiones
para la envoltura (E), el core (C) y otras no estructurales (NS).
Infeccin por VHC se diseminan fundamentalmente por la va parenteral; es la causa ms
frecuente de hepatitis post-transfusional, hepatitis espordica y ampliamente distribuido entre
ADVP (adicto a la droga de va parenteral), pacientes en dilisis y hemoflicos; se puede transmitir por
contacto sexual o convivencia con portadores (menor importancia que Hep.B);la clnica es similar a la
de la hepatitis B; 25% cursan con ictericia y la tasa de mortalidad es <1%; el curso es indolente y
prolongado; el inicio no es muy brusco, es frecuente las recurrencias, 50-70% tienden a cronificar y 2025% acaban desarrollando cirrosis.
Prevencin tratar todo tipo liquido corporal como potencialmente infeccioso; todava no se
dispone inmuno-profilaxis; un paciente con VHC negativa no significa que no lo padece, porque la
sensibilidad de las tcnicas ms utilizadas no es 100% fiable; si se sufre un accidente en el laboratorio o
en la prctica clnica con sangre anti-VHC+, se debe realizar un protocolo de seguimiento serolgico de
la persona; existen evidencias de que VHC puede estar implicada en cncer heptico.

Virus de la Hepatitis E (VHE) se descubri en 1983 y es responsable de la epidemias por

transmisin fecal-oral en India, Paquistn, frica del Norte y Mjico (pases de baja salubridad); el
curso es corto y parece ser que se puede transmitir parenteralmente, pero no transfusional-mente; el
virus todava no est catalogado, se parece ms a los calcivirus da lafamilia Calciviridae (virus ARN
icosadrica de tamao pequeo 35-40nm sin envuelta, de polaridad+); clnica => aunque no se
cronifica al igual que VHA, tiene un pronstico peor (la mortalidad 1-2%), ms grave en gestantes del
3 trimestre del embarazo (mortalidad de 20%); la habitual va de transmisin es a travs del agua de
bebida.

Virus de la Hepatitis G (VHG) se transmite por va parenteral; esta relacionado con virus de
la familia Flaviviridae (virus ARN icosadrica de tamao pequeo 40-50nm, con envuelta de

polaridad+); provoca aisladamente un cuadro benigno, pero puede dar una coinfeccin con el VHB y
VHC con mayor tendencia a la cronicidad.
Virus de la Hepatitis F (VHF) se transmite por va entrica (fecal-oral)
SEROLOGIA DE LAS HEPATITIS VIRICAS (1993)
Marcadores serolgicos para el diagnstico de la hepatitis A la mayora de infecciones son
aguda sin cronificarse (<1% se fulmina); se encuentra en las heces durante el periodo de incubacin
(hasta 2 semanas); su deteccin con fines diagnsticos no se emplea rutinariamente.
-Ac Anti-VHA IgM => siempre es positivo en el inicio de la sintomatologa clnica (hasta 3-6 meses); se
usa como marcador de infeccin aguda; en Ag viral es detectado solamente en el hgado y no se utiliza
para el diagnstico.
-Ac Anti-VHA IgG => su presencia demuestra un contacto previo con el virus (se mantiene durante
largos periodos de tiempo).
Marcadores serolgicos para el diagnstico de la hepatitis B la evolucin clnica es variable
(desde asintomtica y anictrica hasta una enfermedad aguda que se puede complicar hacia la
cronicidad, la cirrosis o forma fulminante fatal); es evidente su relacin con el carcinoma hepatocelular; la determinacin cualitativa y cuantitativa de ciertas protenas virales (Ags) y de los Acs nos
sirve para evaluar la situacin actual y pronosticar el futuro de la infeccin.
-Ag de superficie HBs Australia (HBsAg) => se sintetiza en el citoplasma del hepatocito; debido a que
los hepatocitos fabrica un exceso de estos, una parte es liberada a la sangre y puede ser detectada
durante el periodo de incubacin (es el 1 marcador que aparece, incluso 2-6 semanas antes de que
aparezca los sntomas, aunque pueda haber de 5-10% de hepatitis aguda sin este marcador), en la fase
aguda de la enfermedad y en el estadio crnico; si la evolucin es favorable desaparecer a los 3-6
meses de la enfermedad; por el contrario, si se mantiene ms de 6-8 semanas despus o si no existe
una disminucin significativa de su ttulo, es indicio de mal pronstico y de evolucin a la cronicidad.
-Ac anti-HBs => es el indicador de recuperacin de la enfermedad y el ultimo en aparecer(+/- a los 3
meses de su evolucin); persiste durante mucho tiempo neutralizando al virus y confiriendo
proteccin; en los individuos vacunados es el nico marcador presente.
- Ac anti-HBc => Ag HBc pertenece a la cpside y no se detecta serolgicamente, ya que no se
encuentra libre, sino en el virus entero; solo se detecta Anti-HBc; es el 1 Ac que aparece en la
enfermedad, detectable con los primeros sntomas de la enfermedad en la fase aguda y en la
crnica (entre 3-5 semanas despus de Ag Australia y es el 4 marcador en hacerse positiva); puede
significar una infeccin pasada o curada dada la larga persistencia de estos Acs en el suero (su
positividad confirmada en solitario no asegura la proteccin frente a la enfermedad).
-Ag e (HBeAg) => es parte del Ag core; proteolticamente degradado y antignicamente diferente; es
el 2 marcador, detectable en la fase aguda y en algunas formas de enfermedad crnica en las que
histolgicamente se corresponde con hepatitis crnica activa (HCA); su valor clnico se funda en
su excelente correlacin con la presencia de replicacin viral y viremia; la sangre con HBeAg (+) se
debe considerar como infecciosa; su estudio es obligatorio en todos los sueros de HBsAg (+).
-Ac anti-HBe => es el 5 marcador; su aparicin indica buena evolucin y una baja infectividad del
paciente; en la mayora de los casos es detectable poco antes de que desaparezca HBsAg, pudiendo
encontrarlo (+) durante varios aos despus de la infeccin.

-DNA viral libre (VHB-DNA) => es el 3 marcador; su deteccin en el suero mediante la hibridacin no
es una tcnica de rutina, a pesar de tratarse de un marcador muy sensible tanto de la presencia del
virus como de su actividad replicativa; el VHB-DNA es positivo en un elevado nmero de pacientes
HBeAg (+).

Marcadores serolgicos para el diagnstico de la hepatitis D

1- Antgeno delta (HDcAg) => aparece fugazmente en sangre en la primo infeccin y su utilizad
clnica es muy limitada.
2- Anticuerpos Anti-Delta (Anti-HD IgM) => es el marcador ms importante que aparece despus de
la aparicin del Ag y se mantiene positivo a bajos ttulos a un tiempo limitado si la evolucin es
favorable; persistir su positividad a ttulos altos en casos que evolucionan a la cronicidad.
3- Anticuerpos Anti-Delta IgG (Anti-HD IgG) => aparecen ms tarda y se mantiene positivo durante
largos periodos de tiempo; su deteccin indica solamente contacto con el virus.
Esquema evolutivo:
-Coinfeccin de VHB y VHD = Ag Australia (+), Anti-HBc IgM (+) y AntiHD IgM (+)
-Sobre infeccin de VHD en paciente con VHB = Ag Australia (+), Anti-HBc IgM (-) y Anti-HD IgM (+)
4- RNA Viral (HD-RNA) => la positividad por tcnicas de hibridacin o PCR indica presencia del
virus.
Marcadores serolgicos para el diagnstico de la hepatitis C
-Anticuerpos Anti-VHC => se detecta empleando Ags sintticos o recombinantes; pruebas
confirmatorias de Acs Anti-VHC => se detectan por mtodo Western Blot para ver las bandas.
-RNA viral (VHC-ARN) => no se suele hacer porque la epidemia es corta.
Marcadores serolgicos para el diagnstico de la hepatitis E se estn comercializando
pruebas que detectan Ag y Acs especficos (IgG y IgM) mediante tcnica de ELISA.
DIAGNOSTICO DE LA INFECCION
A-Hepatitis Aguda
Marcadores de rutina (los que se suelen pedir al laboratorio):
VHA => anti-VHA IgM
VHB => HBsAg o Ag Australia y HBc IgM
VHC => anti-VHC (totales)
VHD => anti-VHD IgM (en pacientes ADVP)
Criterios generales de interpretacin:
-La presencia de anti-VHA IgM => es diagnostica de infeccin aguda por VHA.
-La presencia de HBsAg y anti-HBc IgM => es diagnostica de infeccin aguda por VHB;

-La presencia simultnea de anti-VHD IgM y anti-HBc IgM asociada a hepatitis aguda => se
considera diagnostica de coinfeccin aguda por ambos VHB y VHD; la presencia de anti-VHD IgM y
HBsAg en ausencia de anti-HBc IgM => indica sobre infeccin por VHD en un portador crnico de
VHB. En cualquier caso, dada la situacin epidemiolgica actual en Espaa, no parece recomendable la
bsqueda rutinaria de la infeccin delta en pacientes ADVP.
-La seroconversin de anti-VHC es un criterio fiable para un diagnstico de infeccin aguda por VHC
(cambio de negativo a positivo); la seroconversin suele retrasarse mas de 3 meses desde el comienzo
de los sntomas, por lo que requiere el estudio de muestras de seguimiento al menos hasta el 6 mes;
no se ha demostrado que la deteccin de anti-HVC IgM sea de utilidad en el diagnstico de la hepatitis
C aguda.
Criterios de interpretacin en pacientes ADVP las tasas de seropositividad para VHB (antiHBc total) y VHC (anti-VHC) en individuos ADVP superan el 80%; entre los ADVP crnicamente
infectados por VHB (positivos para HBsAg), la seropositividad para VHD (anti-VHD total) se aproxima
a dicho porcentaje; es frecuente que los ADVP se hallen crnicamente infectados por uno o ms de
dichos agentes en un episodio de hepatitis aguda, resultando imposible precisar su etiologa.

B-Hepatitis Crnica
Marcadores de rutina:
VHB => HBsAg y anti-HBc total (IgM + IgG)
VHD => anti-VHD total (en pacientes ADVP positivos para HBsAg)
VHC => anti-VHC
Criterios de interpretacin:
-La presencia de HBsAg y anti-HBc total asociada a hepatitis crnica => es diagnostica de hepatitis B
crnica; la presencia adicional de anti-VHD total => indica una sobre infeccin crnica por ambos
VHB y VHD.
-La presencia de anti-VHC asociada a hepatitis crnica => es altamente indicativa de hepatitis C
crnica, aunque no es un diagnostico seguro; la deteccin de ARN viral en suero mediante PCR ayuda a
establecer el diagnostico, pero un resultado negativo aislado no lo descarta, ya que la viremia es
intermitente en muchos casos; dado el alto costo de mtodos de confirmacin de anti-VHC, se
considera que una re comprobacin del resultado positivo mediante un segundo mtodo de cribado
(mtodo screening con tcnica de ELISA) que utilice Ags obtenidos por tecnologa diferente, es
suficiente para establecer la presencia de anti-VHC en pacientes con hepatitis crnica.
VIH o SIDA
Descubrimiento del virus se sospech desde 1981 en 5 casos de neumona porPneumocystis
carinii en varones homosexuales previamente sanos y va aumentando el nmero de casos y se fue

asociando esta inmunodeficiencia adquirida al sarcoma de Kaposi; en junio de 1982 se contabilizaron

439 casos y en EEUU se emite un informe para definir los casos de SIDA; en febrero del mismo
ao Montagnier expone la hiptesis de un retrovirus linfotropico pudiera ser el agente causante del
sndrome; en Mayo de 1983 se aislo por primera vez el virus por Montagnier en Francia a partir de un
ganglio linftico de un paciente con linfadenopatia persistente (LAV) y Gallo en EEUU de un enfermo
de SIDA (HTLV-III).

El virus es un virus ARN de la familia Retroviridae, subfamilia Lentiviridae (=incubacin lenta >10
aos) con tipos 1 y 2; esta familia de virus se caracteriza por sintetizar ADN a partir de ARN viral,
mediante una retro-transcriptasa; consta de nucleo-cpside y envoltura; es muy sensible a los agentes
qumicos y calor; sus principales genes son:
a) Estructurales:
-Gen GAG (Core) => protenas 24
-ENV (Envoltura) => glicoprotenas 41, 120 y 160
-POL (Polimerasa) => es importante
b) Reguladores => genes que regulan la replicacin viral y el papel de todos ellos no est
completamente dilucidado

Patogenia en la infeccin aguda, el virus se une principalmente a receptores CD4 gracias a gp41 y
gp120; por lo tanto, sus clulas diana fundamentalmente son los linfocitos T4 (aunque tambin se
unir a los linfocitos B que tiene CD4, a los macrfagos, a las clulas cerebral, y a los precursores de
hemates); este episodio se manifiesta como un cuadro pseudogripal; es importante saber que la
respuesta inmunitaria en forma de Acs frente al virus se puede demorar 6-8 semanas (periodo de
ventana +/- 3 semanas); a continuacin el ARN se copia a ADN por accin de la transcriptasa inversa,
se pone en circulacin y se integra en el ADN de la clula (periodo de latencia); latencia o crecimiento
es clave de la patogenia de la enfermedad; normalmente la fase de latencia se prolonga durante
periodos largos de tiempo (2-8 aos incluso ms), pero en un momento dado puede progresar la
enfermedad con un progresivo deterioro de la inmunidad hasta desarrollar el SIDA; el ciclo biolgico
se resumen=>
Entrada de virus transcripcin de ARN al ADN integracin en la genoma de T4 formacin de
nuevos viriones tras periodo de latencia (al salir, el virin tomara en su salida parte de la membrana

celular para utilizarla como su envuelta, esto hace que se destruye los T4, se paraliza el sistema
inmunolgica y acaba provocando el SIDA.

Epidemiologia las vas de transmisin del virus => por sangre, sexual y vertical-perinatal; en
Espaa la tasa de transmisin por sangre es importante (el principal grupo afectado sonlos UDVP/
ADVP y homosexual), a diferencia de Francia o EEUU, donde los mas afectados son homosexuales; en
cuanto a las tasas de transmisin madre-hijo oscilan 15-50%, cobrando una especial importancia en
frica; la transmisin al personal sanitario o similar es 0,2% y requiere contacto con mucosas de la
sangre o liquido corporal infeccioso (o tambin de lquidos donde se haya cultivado al virus).
Sintomatologa clnica de SIDA desde que una persona se infecta hasta que se desarrolle la
enfermedad, suele transcurrir 6-10 aos; el estudio de la evolucin de SIDA puede realizarse por las
manifestaciones clnico que van apareciendo o por marcadores bioqumicos (el descenso de la cifra de
linfocitos T4); a partir del 1996 la determinacin de la cantidad de virus circulante en la sangre de la
persona infectada (carga viral) se ha convertido en principal marcador de la evolucin de la
enfermedad.
Fases de la enfermedad
(1) fase de la infeccin aguda => la mayora de los pacientes experimentan al cabo de unas 3 semanas
de haber infectado con el virus una serie de sntomas pseudogripales como fiebre, cefalea, eritema,
adenopatas y sensacin de mal estar, desaparecen despus de 1-2 semanas; durante esta fase, el VIH
se multiplica a gran velocidad; en un primer momento se produce un descenso de la cifra de linfocitos
(total), pero dentro de poco alcanzan las cifras normales en respuesta de una activacin del sistema
inmunolgico; los individuos son altamente contagiosos durante esta fase;
(2) fase asintomtica que puede durar 10 aos o incluso mas; durante este periodo, el virus continua
replicndose, causando destruccin progresiva del sistema inmune; durante esta fase, el recuento de
los linfocitos es normal;
(3) fase sintomtica precoz, se suele iniciar el desarrollo del sntoma clnico caracterstica de la
enfermedad; apareciendo infecciones oportunistas de carcter leve p.ej. de tipo viral =>CMV, Herpes
zoster, de tipo bacterianas => Mycobacterium, Legionella, infestacin de parsitos => Pneumocystis
carinii, Cryptosporidium, algunos hongos => Aspergillus yCndida;
(4) fase avanzada en la que aparecen infecciones y tumores, definitorios del SIDA (sarcoma de Kaposi)
que adems, puede complicarse con un cuadro neurolgico (demencia del SIDA)con alteraciones
motoras y del rea cognitiva, debido a la accin directa del virus sobre SNC;la supervivencia media de
los pacientes con la SIDA ya desarrollado suelen ser 18-125 semanas, dependiendo del tipo de infeccin
que tenga; en ningn caso habr supervivencia cuando estn en esta fase.

Diagnstico de laboratorio de la infeccin por VIH en Espaa fundamentalmente serolgico,

por la importancia y las implicaciones que conlleva; se realiza mediante tcnicas de ELISA en primera
instancia (tcnica de cribado), aplicando a los positivos, mtodos de confirmacin => Western Blot
(WB), inmunofluorescencia (IFI) o radioinmuno-precipitacion (RIPA).
**) El Western Blot es ms utilizado y permite diferenciar los Acs frente a las distintas protenas del
virus; tiene distintos criterios para la interpretacin de los resultados (OMS, CDC, Cruz Roja) y los
resultados se clasifiquen en:
-Positivos => lo ms aceptado es que haya bandas de envoltura (g41, gp120 y gp160) y adems bandas
del core (p24, p31 y p66) o de la polimerasa o de ambos.
-Indeterminados => se detecta la presencia de alguna banda frente a alguna protena del virus (solo
algunas protenas del core en pacientes con lupus y factor reumatoide).
-Negativo => ausencia de banda o que no se corresponde a ninguna del virus (a estas personas se hace
un seguimiento durante 6 meses, para descartar que no sean falsos negativos).
La tcnica de WB consiste bsicamente en la incubacin de unas tiras de nitrocelulosa en los que sean
transferido las protenas de los virus, bsicamente las estructuras con el suero del problema durante un
tiempo que oscila 2-4 horas hasta los 18 horas; tras cual se revela la presencia de Acs frente a diferente
protenas del virus mediante diferentes tcnicas inmuno-enzimticas dependiendo del fabricante; el
resultado ser la aparicin de bandas coloreadas de mayor o menor intensidad en el lugar de la tira
donde estn situadas las protenas de VIH contra las cuales existen Acs en el suero del problema; la
lectura puede hacerse de manera manual, comparando las bandas con un control (+) o de manera
automatizada por densitometra; recordar en valores absolutos, la cifra de CD4 900-1500
linfocitos/m3 de sangre (en valores relativos 35-45%); las de CD8 600-900 linfocitos/m3 de sangre;
cuando la cifra de CD4 disminuye por debajo de las 200-400 linfocitos/m3 de sangre, ser indicativo
de SIDA.

*) Los mtodos de cribado (ELISA) son ms sensibles y ms especficos, siendo lo ms novedoso los de
3 generacin con capacidad de detectar IgG e IgM, acortando el periodo de ventana.
*) Tambin existen mtodos rpidos, aplicables en situacin de urgencia como la aglutinacin con
partculas de ltex o los que utilicen Ags fijados a soportes solidos o membranas (se llamaDot-Blot).
*) Las tcnicas de centros especializados => cultivo y PCR; la PCR es una tcnica con mucho futuro que
presenta una enorme sensibilidad y especificidad, pero no estn al alcance de la mayor parte de los
laboratorios; una importancia aplicacin de estas tcnicas es el diagnostico de hijos y madres
portadoras del VIH.
*) Marcadores de monitorizacin o seguimiento de la enfermedad (deteccin del Ag p24); en fases
tardas, se puede observar el declinar de los Acs anti p24 que se pueden utilizar con el mismo fin.
*) De todos modos, el que ms se utiliza para un diagnstico de SIDA es el recuento celular de los
linfocitos CD4 o T4 (o el cociente respecto a los T8).

MTODOS DIAGNSTICOS EN VIROLOGA CLNICA

Objetivo de laboratorio - proporcionar el diagnstico etiolgico y orientar correctamente el
tratamiento en el menor tiempo posible; de manera simultanea se intenta practicar 2 tipos de
diagnostico =>
- D directo (visualizar o aislar el germen mediante el cultivo e identificarlo =>
en virologa clnica no es posible, por las caractersticas fsicas y biolgicas del virus, porque se ha de
hacer mediante la deteccin de sus componentes, p.ej. Ags o cidos nucleicos).
- D indirecto (la identificacin de los componentes de la respuesta inmune especifica/ Acs
generados).
Metodos de diagnostico directos:
a) Examen directo de la muestra (macroscpica /a simple vista) => aspecto purulenta (en
una infeccin viral nunca hay pus), presencia de sangre, moco, etc.
b) Microscpia => con la Microscpia ptica solo se puede identificar los cambios celulares (efecto
citoptico) sufrido por las celulas infectadas y con la Microscpia electrnica se puede visualizar el
virus (en laboratorios de experimentacin).
c) Cultivo => los virus se multiplican exclusivamente en el interior de las celulas vivas, por ello
debemos preparar previamente un soporte celular que permita su crecimiento in vitromediante
siguientes tcnicas:
- cultivo de rganos => las secciones de algunos rganos pueden ser viables varias semanas y nos
permiten cuidadosamente aislar por ej. virus sincitial respiratorio (VRS) mediante secciones de tejido
respiratorio.
- cultivo de tejidos => fragmentos de tejidos en suspensin (cultivar adenovirus en un tejido
adenoideo)
- cultivos celulares => celulas aisladas obtenidas por disociacin mecnica y con
enzimas proteolticas a partir de tejidos; las celulas disociadas y separadas se colocan en un frasco de
cristal o de plstico; las celulas se adhieren a las paredes del frasco y se cubren con medios nutritivos

para mantenerlas viables; en condiciones optimas, las celulas se multiplican hasta que cubran la
pared formando una capa continua de crecimiento sobre las que se podrn replicar los virus del
problema; tipos de cultivos celulares:
*) cultivos primarios => es el primer pase in vitro, tomados directamente de un organismo vivo; las
celulas se siembran en un frasco con medio de crecimiento, conservan el numero de cromosomas,
tienen un periodo de vida corto y permiten el crecimiento de gran variedad de virus (p.ej. celulas del
rion de conejo y mono, embrin de pollo).
*) lineas diploides => son celulas de un solo tipo (somticas) que se pueden cultivar durante un
tiempo limitado, conservan el numero de cromosomas (46) y con ventaja de quese mantiene durante
mas tiempo que cultivo primario.
*) lineas celulares continuas => se cultivan in vitro indefinidamente y tiene un cariotipo
heteroploide (numero menor que las celulas somticas); se originan de tejido maligno o
por mutacin de una clula diploide; el cultivo se multiplican de forma indefinida y suelen presentar
aberraciones en el numero de cromosomas; estas celulas se pueden mantener a -70C o -90C
indefinidamente (p.ej. lineas celulares Hep-2 y Vero).
*) Shell-vial => es una tcnica de cultivo celular que se ha desarrollado en los ltimos aos y que
permite obtener el crecimiento de numerosos virus y ciertas bacterias en un corto periodo de
tiempo (24-48 horas); sobre un vial se coloca una mono capa de celulas con 1ml de medio de
crecimiento, y sobre ello se coloca 0,2 ml de la muestra problema; el mtodo se basa en
la centrifugacin (suave) de la muestra sobre la mono capa, y tras un corto periodo de incubacin se
pone de manifiesto la expresin de los Ags virales en la mono capa mediante tincin inmunolgica; la
ventaja => la rapidez de obtencin de resultados en 24-48 horas, detectamos los Ags a las pocas horas
de iniciarse la infeccin; tiene una sensibilidad superior al cultivo celular, porque inoculamos el mismo
volumen de muestra en un rea mas pequea y mas fcil la observacin al microscopio de
fluorescencia.
Identificacin del crecimiento en el cultivo celular - las mas frecuentes y disponibles en el
laboratorio:
1). Efecto citoptico - los virus al multiplicarse provocan cambios en la clula donde se replican que se
manifiesta por una modificacin en la morfologa celular que se pueden observar (p.ej. inclusiones
dentro de las celulas, hinchazn del citoplasma, formacin de celulas gigantes multi-nucleadas) en
la clula sin teir o teidas (se ve mas detalladas); cada virus presenta un tipo de
efecto citoptico caracterstico que puede ser identificado en menos de 1 semana (p.ej. enterovirus,
herpesvirus, adenovirus o poxvirus tienen como efecto citoptico la destruccin o lisis celular en 24-48
horas; la fusin celular/ formacin de sincition son caracterstico de herpes virus, CMV, virus
herpes zster, etc.)
2). Formacin de cuerpos de inclusin - son cambios histolgicos que se producen en las celulas por los
componentes virales o por variaciones en las estructuras celulares; pueden localizarse en el ncleo, en
el citoplasma o en ambos y se clasifican segn su tincin en eosinfilos o basfilos; cada virus produce
unos cuerpos de inclusiones caractersticos.
3). Hem-adsorcin - es la capacidad que adquieren las celulas infectadas por un virus para adherir a su
superficie los hemates de diversas especies (p.ej.aves, carnero).
4). Hem-aglutinacin - la capacidad que adquieren las celulas infectadas por el virus de aglutinar
diversos tipos de hemates, por la formacin en su membrana de este tipo de protenas, las
hemaglutininas.
5). Deteccin mediante metodos inmuno-enzimticos o por inmunofluorescencia, de los Ags virales
mediante Acs especficos para los cuerpos de inclusin celular.

Las muestras para el aislamiento de virus se deben recoger lo antes posible, no despus de los 3-7
primeros das del inicio de la enfermedad; se pueden conservar a 4C durante 24 horas y si no, se
deben congelar a -70C porque muchos virus son lbiles a -20C; las muestras que se utilizan con
mayor frecuencia son secreciones nasales, frotis farngeo, exudado conjuntival, lquidos vesiculares,
raspados de piel, heces, orina, LCR, etc.
d) Deteccin de los componentes estructurales virales - las tcnicas mas usadas que permiten
detectar Ags en suero y lquidos orgnicos (cuando existe una alta concentracin viral,
sera fcil detectarlos) son:
- Aglutinacin en ltex => a las moleculas de ltex se les une varias molculas de Acs conocidos y
cuando se pone en contacto con una solucin que contiene el Ag (la muestra problema) se origina
una aglutinacin que puede visualizarse; es una tcnica sencilla, sensible, re-producible y barata. Su
sensibilidad depender de la pureza del Ac utilizado.
- Contra-inmunoelectroforesis => esta basada en el principio de que los Ags virales (o bacterianos en
su caso) suelen tener carga (-) y los Acs (+), en medio alcalino; con este fundamento se colocan las
soluciones de Acs conocidos y del Ag problema en unas cavidades realizadas en un gel de agarosa de tal
manera que puedan difundir libremente; se colocan unas mechas en los extremos de la capa de
agarosa, que conectan con unas cubetas que contienen un buffer con una composicion diferente
dependiendo del sistema Ag-Ac; cuando se aplica una corriente elctrica, las molculas de Ags con
carga (-) migran hacia el nodo que esta en el extremo opuesto de la placa; los Acs son arrastrados por
el buffer levemente alcalino y, en el punto en que ambas lineas se encuentran, se forma una banda
de precipitacin visible; es una tcnica de alta sensibilidad pero laboriosa, que precisa una
alta concentracin de Ag y Ac.
- Enzimoinmunoensayo => se basa en la deteccin de Ags mediante el empleo de un Ac unido a una
enzima, que mantiene la capacidad de canalizar la reaccin Ag-Ac; el enzima utilizado puede ser
peoxidasa de rabano, Beta-galactosidasa o fosfatasa alcalina; la presencia del inmuno-complejo es
detectada por una reaccin coloreada que se produce al aadir el sustrato; el empleo de enzimas
tiene una serie de ventajas:
*) el enzima se une al Ac pero deja libre los lugares de unin al Ag
*) el enzima no se modifica con la reaccin Ag-Ac y queda unido al inmuno-complejo junto con el
sustrato amplificando la reaccin y aumentando la posibilidad de deteccin
*) los conjugados con enzimas son muy estables
*) la lectura de la reaccin se realiza en un espectrofotmetro y la cantidad de sustrato liberado es
directamente proporcional a la cantidad de Ag fijado en la reaccin
*) la lectura tambin puede hacerse cualitativamente de forma manual, "de visu".
La reaccin tiene lugar en 2 fases => en la 1- en unos pocillos sobre los que se ha fijado un Ac
especifico; al agregarle la muestra que puede contener los Ags, se unen formando el complejo Ag-Ac;
posteriormente se hace un lavado para eliminar el resto de Ags no unidos a los Acs de la placa y
otras partculas que pudieran interferir, en la 2- se agrega un Ac marcado con un enzima que se une a
los sitios de unin del Ag y al aadirse un sustrato, da lugar a una reaccin coloreada, que
procederemos a medir en un espectrofotmetro; es una tcnica que necesita varias horas para
su realizacin.

- Radioinmunoanalisis => tiene el mismo fundamento que el ELISA, pero en vez de unir un enzima al
Ac, se le une un radioistopo, y lo que se mide en ultima instancia es
la radiactividad que estar en proporcin directa a la cantidad de Ag que haba en la muestra
problema; es una tcnica con la misma sensibilidad que el ELISA, pero es mas costosa y se necesita
trabajar con material radioactivo, lo que plantea problemas en cuanto al personal y las instalaciones;
esta tcnica se utilizo por primera vez para detectar el Ag de superficie del virus de la hepatitis B.
- Inmunofluorescencia directa (IFD) => el Ag unido a una fase solida, en este caso un portaobjetos, se
pone en contacto con el Ac marcado con una sustancia fluorescente (p.ej. isocianato de fluoresceina,
rodamina, europio, etc.); tras un periodo de incubacin, se lava para eliminar el exceso de Acs y se
observa al microscopio de luz ultravioleta; esta tcnica nos permite demostrar no solo la reaccin AgAc, sino tambin la localizacin exacta donde se produce (superficie celular, citoplasma, ncleo...).