FECUNDACION IN VITRO.

El fenmeno o proceso a travs del cual el espermatozoide o clula masculina es capaz

de unirse y penetrar la clula femenina u vulo para formar un nuevo individuo bajo
condiciones de laboratorio (fuera del organismo animal) se conoce como fecundacinin
vitro (FIV).
Este procedimiento se basa en la utilizacin de ovocitos inmaduros, recogidos
directamente del ovario con independencia de la edad y de la situacin fisiolgica de la
hembra. Esta tcnica ofrece la posibilidad de convertir a la hembra en productora de
gametos, equiparndola a los machos productores de semen para la inseminacin
artificial, lo que supondra numerosas ventajas en los programas de seleccin. Sin
embargo, existen varias diferencias fisiolgicas entre los machos y las hembras, que
dificultan la consecucin de este objetivo. As, la poblacin de ovocitos presente en el
ovario es limitada y no se renueva, sino que disminuye progresivamente con la edad
como consecuencia de la atresia. Adems, los ovocitos no son liberados al exterior,
siendo preciso extraerlos del oviducto o de la corteza ovrica. Por otra parte, la poblacin
de ovocitos es muy heterognea en cuanto a su calidad y grado de madurez.
La produccin de embriones in vitro.
La produccin de embriones In vitro es un procedimiento que consta de varias etapas,
cada una de las cuales puede afectar a los resultados finales del proceso. Estas etapas
pueden resumirse en las siguientes: obtencin de ovocitos, seleccin de los ovocitos,
maduracin In vitro (MIV), fecundacin In vitro (FIV) y cultivo de los zigotos resultantes
hasta blastocistos (CIV).
Obtencin de los ovocitos.
La obtencin de los ovocitos se realiza a travs de dos procedimientos bsicos:
A partir de hembras sacrificadas en el matadero, mediante la obtencin de sus ovarios y
la aspiracin de los folculos con un dimetro comprendido entre 3 y 6 mm.
A partir de animales vivos utilizando la aspiracin transvaginal ecoguiada (OPU).
Esta tcnica permite recoger ovocitos en las hembras de ms de 6 meses de edad,
durante los primeros 3 meses de gestacin y a partir de las 2-3 semanas del postparto,
por lo que no interfiere con los ciclos productivos o reproductivos de las hembras
donantes. En el caso de hembras muy jvenes (menos de 6 meses de edad) es necesario
recurrir a la laparoscopa.
Seleccin de los ovocitos
La vaca es una especie mono-ovulatoria por lo que la mayor parte de los ovocitos
obtenidos tras la aspiracin folicular estn destinados a degenerar.
Ello hace necesario estimar la calidad de los ovocitos antes de utilizarlos para la
maduracin In vitro, ya que solamente una parte de los mismos tienen la capacidad de ser
fecundados y soportar el desarrollo embrionario. La seleccin de los ovocitos se realiza
generalmente en base a tres criterios: el dimetro del ovocito, el aspecto de su citoplasma
y las caractersticas del cmulo que los rodea. El dimetro de los ovocitos condiciona su

capacidad para madurar, de tal forma que los ovocitos bovinos con un dimetro inferior a
110 m se encuentran todava en fase de crecimiento y no han adquirido aun la capacidad
para madurar. Los ovocitos rodeados por un cmulo compacto formado por varias capas
de clulas, presentan mayores porcentajes de maduracin, fecundacin y de desarrollo
hasta blastocistos, que los que carecen de cmulo o los que estn rodeados solamente
por la corona radiata.
Diversos autores han tratado de establecer una relacin entre el aspecto del citoplasma y
la competencia del ovocito para madurar, ser fecundado y soportar el desarrollo posterior
(Younis et al., 1989; Momozawa y Fukuda, 1995; Nagano et al., 1999). As, se ha
comprobado que los ovocitos que presentan un ooplama oscuro muestran una
acumulacin de lpidos y un buen potencial para el desarrollo, mientras que los que
presentan un citoplasma plido tienen una baja densidad de orgnulos y escaso potencial
de desarrollo. Por otra parte, cuando el ooplasma es negro, los ovocitos estn
envejecidos y tienen un potencial para soportar el desarrollo muy bajo (Nagano et al.,
2006).
Maduracin.
Consiste en propiciar la progresin en el desarrollo del vulo de la vaca o
novilla, una vez obtenido de ovarios de matadero o animales vivos por
aspiracin transvaginal. Esto se logra colocando estos vulos en medios
enriquecidos y suplementados con hormonas, como la hormona folculo
estimulante (FSH), la hormona luteinizante (LH) o los estrgenos (E) durante un
periodo de 24 horas.
Fecundacin.
Consiste en incubar los vulos madurados (producto de la fase anterior) con
espermatozoides vivos y mviles durante un periodo de 6 a 24 horas, luego de
un proceso de seleccin y capacitacin espermtica que nos permitir a su vez
de deshacernos de componentes del plasma seminal, crioprotectores y
espermatozoides muertos o con escasa vitalidad. La capacitacin espermtica
generalmente se logra exponiendo los espermatozoides vivos a
concentraciones de heparina y cafena, entre otras. Estas sustancias logran
estimular el proceso de capacitacin del espermatozoide que lo prepara para
interaccionar y fecundar el vulo.
Cultivo.
Aquellos embriones de 4 o ms clulas resultantes de la FIV son cambiados del
medio de fecundacin a un medio de cultivo embrionario donde los embriones
continan su divisin celular a 8, 16 y 32 clulas hasta llegar a mrulas y
blastocistos. Al llegar a estos estadios, los embriones pueden ser transferidos a
vacas receptoras (en fresco) o congelados para su posterior uso. Durante esta
etapa destacan la presencia en el medio de cultivo de diversas fuentes de
energa como la glucosa y aminocidos esenciales y no esenciales.
APLICABILIDAD DE LA FECUNDACIN IN VITRO EN LA GANADERA

El establecimiento y la adopcin de una nueva tecnologa en nuestros sistemas

de produccin bovina de leche y carne estarn probablemente determinados
por la existencia de condiciones y prerrequisitos, entre los cuales se contaran
los siguientes:
Tecnologa Eficiente. La FIV ha venido superando obstculos desde los aos
70. Hoy da por cada 100 vulos colocados a madurar se puede esperar que
ms del 90% alcance el estadio de Metafase II o estadio en el que puede ser
fecundado por el espermatozoide. De esos maduran ms de 90 vulos para
luego de la fecundacin iniciarn su divisin celular aproximadamente de 50 a
70 vulos. De estos vulos fecundados, 20 a 40 llegan a ser embriones
(blastocistos) transferibles.
Costos por debajo de ingresos.
La FIV garantizara bajos costos en la medida que el nmero de vulos sea alto,
constante y de apropiado valor gentico, de manera de masificar la produccin
de embriones por semana (400 embriones/tcnico). La combinacin de FIV con
otras tecnologas como el sexaje de embriones, semen sexado, ICSI (inyeccin
intracitoplasmtica de espermatozoides) o la aspiracin transvaginal de vulos
aunque aumentan los costos, en general, incrementar mucho ms el valor del
embrin producido.
Tcnica probada bajo condiciones comerciales.
Aun cuando la FIV no se aplica ampliamente a nivel mundial (slo el 7% de los
embriones transferidos son producidos in vitro), ha demostrado ser
comercialmente aplicable en pases como Canad y Brasil.
Simplicidad en su aplicacin.
La aplicacin de la FIV no impone exigencias adicionales sobre el sistema de
produccin diferente a las exigidas por otras tecnologas como la inseminacin
artificial y la transferencia embrionaria.
Flexibilidad para insertarse en el sistema.
La produccin in vitro de embriones se podra llevar a cabo usando vulos
provenientes de ovarios de matadero, de vulos aspirados de animales lite sin
necesidad de sacrificarlos o con vulos adquiridos a empresas especializadas a
nivel mundial. Los espermatozoides pueden provenir de semen fresco o
congelado. La FIV puede producir embriones con gametos de cualquier raza y
suele obedecer la seleccin del productor. Accesibilidad de equipos,
asesoramiento tcnico y repuesto. Todos los equipos y reactivos utilizados en
FIV son normalmente utilizados en laboratorios clnicos y de investigacin, y
aunque no son normalmente producidos en el pas, si pueden ser adquiridos a
travs de representaciones locales.
Publicidad y Educacin.

Es vital que el potencial usuario y la comunidad donde ha de insertarse

conozcan las expectativas reales de su aplicacin.
BENEFICIOS DE LA APLICACIN DE FIV
Los beneficios de alguna tecnologa siempre deben cuantificarse
econmicamente cuando se aspira que la misma tenga impacto en la
ganadera nacional, aspecto este que en ocasiones los investigadores olvidan y
que termina perjudicndolos con las dificultades para la consecucin de fondos
para la investigacin cientfica. Sin embargo, cuando se habla del aspecto
econmico no necesariamente hay que referirse a la inversin inicial, sino a los
flujos de caja a ser generados en los aos subsiguientes.
La FIV posee nichos de aplicacin donde su xito ser ms probable. Por
supuesto, que las empresas agropecuarias o fincas donde ya se aplique alguna
otra tecnologa como la inseminacin artificial o se lleve un control
reproductivo confiable, y exista a la vez una gerencia entusiasta y
comprometida con el proceso productivo, probablemente constituyan lugares
apropiados para la aplicacin de esta tecnologa.
La FIV realmente no tiene exigencias adicionales a las establecidas por la IA o
la Transferencia Embrionaria (TE), dado que el embrin in vitro se realiza en un
laboratorio de FIV y slo se lleva el embrin a la finca dentro de una pajuela
idntica a las usadas para semen. Este embrin ser almacenado en tanques
de nitrgeno lquido igual que el semen.
En conclusin, podemos sealar que la fecundacin in vitro (FIV):
Constituye una tecnologa que abre las puertas a la produccin masiva de
embriones bovinos doble propsito, sin mayores exigencias sobre el sistema
productivo mejorado, actualmente en funcionamiento.
Se apoya sobre tecnologas ya utilizadas en nuestro entorno (como por
ejemplo: la transferencia embrionaria, y el procesamiento y congelacin de
semen), lo cual resulta ventajoso porque se aprovecha la infraestructura ya
existente, as como el personal especializado y la familiaridad del productor
con la tecnologa. Igualmente, la FIV puede perfectamente apoyarse en nuevas
tecnologas que sern aplicadas en el futuro, como el sexaje de semen y de
embriones, para imprimir un mayor valor comercial a los embriones
producidos.
Deficiencia de la tcnica.
Sin embargo, esta tcnica es todava poco eficiente, lo que dificulta su
aplicacin a gran escala:
1.- A pesar de los numerosos esfuerzos realizados para mejorar la eficiencia de
esta tcnica continua teniendo un bajo rendimiento, el porcentaje de ovocitos
capaces de transformarse en embriones transferibles se encuentra estancado
entre el 30 y 40%.

2.- Los embriones producidos in vitro son de menor calidad que los obtenidos in
vivo, existiendo entre ellos numerosas diferencias:
Morfolgicas: embriones ms oscuros y de menor densidad por su mayor
contenido citoplsmico de lpidos (Massip et al, 1995), con un menor nmero
de blastmeros, sobre todo a nivel de la masa celular interna (Rizos et al,
2002), una zona pelcida ms frgil (Duby et al 1999) reduccin del espacio
perivitelino y mayor velocidad de desarrollo.
Cromosmicas: una elevada proporcin de los embriones presentan
mixoploidia: clulas normales y clulas poliploides.
Funcionales: alteraciones en la comunicacin intercelular, con una expresin
anormal de las protenas que conforman las uniones gap.
Metablicas: mayor contenido en lpidos, presentando mayor concentracin
de triglicridos y menor de lpidos de otras clases.
Alteraciones en la expresin gnica.
Mayor incidencia de apoptosis (Pomar et al. 2005). Todo ello determina una
reduccin de su potencial de desarrollo pre- y postimplantacional, ocasionado
bajos porcentajes de gestacin (30 a 40%), y una escasa resistencia a la crio
preservacin, dificultando su conservacin a largo plazo. 3.- Incremento de la
mortalidad embrionaria, abortos, problemas gestacionales como el
hidroalantoides y alargamiento de la gestacin 4.- Nacimiento de terneros muy
voluminosos, con anomalas estructurales y funcionales, conocido con el
nombre de sndrome de exceso de volumen fetal, que disminuyen el vigor de
los animales en el momento de su nacimiento y provocan una mayor
mortalidad peri natal. Algunos estudios indican que ms del 30% de los
terneros derivados de embriones producidos in vitro presentan un peso
superior a los 50 Kg, independientemente de su raza.