Resumo sobre enzimas

Enzimas so protenas que agem como catalisadores biolgicos. So

catalisadores poderosos e especficos que fazem as reaes ocorrerem mais
rpido.
Exceto um pequeno grupo de molculas de RNA catalticas , todas as enzimas
so protenas .A atividade cataltica depende da integridade das suas
conformaes nativas . Se uma enzima for desnaturada ou dissociada sua
atividade cataltica perdida.
As estruturas proteicas primaria,secundaria,terciaria e quaternria das enzimas
so essenciais para a atividade cataltica .
Algumas enzimas dependem de um componente qumico adicional
denominado cofator, que pode ser um ou mais ons inorgnicos como
Fe,Mg,Mn ou Zn, ou uma molcula orgnica complexa chamada de coenzima.
Uma coenzima ou um on metlico que se ligue muito firmemente ,ou mesmo ,
covalentemente a uma enzima chamado de grupo prosttico .
Grupo prosttico : metal,cofator ou coenzima
Uma enzima completa cataliticamente ativa junto com a sua coenzima e/ou
ons metlicos denominada Haloenzima.
Apoenzima ou apoprotena : a parte proteica da enzima .
A enzima s com a parte proteica inativa .
As reaes no catalisadas tendem a ser lentas , a maioria das molculas
biolgicas muito estvel nas condies internas das clulas com pH neutro
,temperaturas amenas e ambiente aquoso. As reaes necessrias para digerir
alimentos ,enviar sinais nervosos ou contrair os msculos simplesmente no
ocorreriam em velocidades adequadas sem catlise .
Propriedade caracterstica das reaes catalisadas por enzimas : que a
reao ocorre confinada em um bolso da enzima denominado Sitio ativo
( regio onde ocorre a atividade cataltica ).
A superfcie do sitio ativo delimitada por resduos de aminocidos com grupos
nas cadeias laterais que ligam o substrato e que catalisam sua transformao
qumica. O sitio ativo engloba o substrato , sequestrando o da soluo. O
complexo enzima substrato fundamental para a catalise enzimtica .Ele
define o comportamento cintico das reaes catalisadas por enzimas e para a
descrio dos mecanismos das enzimas.

Substrato : a molcula que se liga no sitio ativo e sobre a qual a enzima

age.
Teoria da catlise
A + B C
No equilbrio da reao, as velocidades das reaes se igualam V1=V-1
As concentraes dos reagentes no se alteram mais, pode-se dizer que a
reao terminou .
Catalisador acelera as velocidades em ambos os lados das reaes .
Aumentam a velocidade das reaes por diminurem as energias de ativao .
O ponto de equilbrio atingido mais rpido e no se altera ,ou seja, as
concentraes de P e R no final da reao so as mesmas da reao no
catalisada .A termodinmica da reao no se altera .
O catalisador no consumido na reao.
Energia de ativao ou barreira energtica: quantidade de energia que
preciso fornecer aos reagentes para a reao ocorrer.
Estado de transio ou complexo ativado : forma molecular intermediaria entre
o reagente e o produto ,existe somente no alto da barreira energtica.
altamente instvel. o momento molecular transitrio no qual eventos como a
quebra de ligao , a formao de ligao ou o desenvolvimento de carga
ocorrem com a mesma probabilidade de seguirem tanto para formar
novamente o subtrato como para formar o produto. o curto perodo de tempo
em que o substrato esta no topo da curva de energia.
O ponto de partida tanto da reao direta quanto da reversa denominado
Estado fundamental. A contribuio que uma molcula medica (S ou P) d para
a energia livre do sistema.
Um catalisador diminu a barreira energtica criando percursos alternativos da
reao para formao do estado de transio .
O papel da enzima acelerar a interconverso entre S e P. A enzima no
gasta no processo e o ponto de equilbrio no afetado.
A energia de ativao uma barreira energtica para as reaes qumicas. A
velocidade na qual uma molcula sofre uma determinada reao diminui
medida que a barreira da reao aumenta .Sem estas barreiras energticas as
macromolculas complexas poderiam reverter espontaneamente para formas
moleculares mais simples e as estruturas complexas e altamente ordenadas
poderiam no existir .Durante o curso da evoluo ,as enzimas desenvolveram-

se para diminuir seletivamente as energias de ativao das reaes

necessrias para a sobrevivncia celular.
Equao geral de uma reao enzimtica :
E + S

ES

P + E

ES representa o estado de transio ;

Que diferenas existem entre catalisadores inorgnicos, como ons
metlicos, e as enzimas ?

enzimas so mais eficientes: podem acelerar reaes at 10 14 vezes

contra
102 103 vezes dos catalisadores inorgnicos;

enzimas so especficas: catalisam reaes envolvendo s vezes

apenas um nico tipo de reagente;

enzimas so estereo-especficas e no produzem sub-produtos

reacionais;

enzimas operam em condies amenas de temperatura, presso e pH;

enzimas podem ser altamente reguladas atravs de fatores

extrnsecos reao, tanto por ativadores como por inibidores.

Porque a catalise por enzimas mais eficiente ?

1) Aumento da concentrao dos reagentes na superfcie da enzima:
atrao dos reagentes para interao com a enzima).
2) Orientao correta dos reagentes (substratos): parte da energia de
ativao representa o posicionamento adequado dos reagentes para
que haja contacto entre os tomos corretos. O sitio ativo da enzima
favorece o posicionamento correto dos reagentes.
3) Aumento da reatividade dos reagentes: as cadeias laterais (R) dos
aminocidos da enzima ou co-fatores e coenzimas podem interagir
diretamente com os substratos, dando-lhes carga eltrica ou
polarizando-os, tornando-os quimicamente mais reativos, ou ainda
cedendo ou transferindo certas funes qumicas.
4) Induo de deformao fsica no substrato, por contacto com as
cadeias laterais (R) dos aminocidos das enzimas, que desestabilizam a
molcula do substrato e facilitam o rompimento de laos covalentes
Coenzimas participam do ciclo cataltico das enzimas recebendo ou fornecendo
grupos qumicos para a reao;
Classificao das Enzimas:

1.Oxido- redutases (reao de oxido reduo) : Tranferncia de eltrons . Se

uma molcula se oxida a outra se reduz .
2.Transferases (transferncia de grupos funcionais ) :Grupos aldedos, acila,
glucosil , fosfatos (quinase)
3.Hidrolases (reaes de hidrolise) : transformam polmeros em monmeros.
Atuam sobre: ligao ster ,glicosdicas ,peptdicas e C-N.
4.Isomerases (reaes de isomerizao )
5.ligases (formao de laos covalentes com gastos de ATP) : entre C e :
O,S,N,C
O modelo Chave-fechadura no explica as interaes da enzima com seu
com inibidores e anlogos de substratos .
Ento descobriu-se o Modelo do encaixe induzido : no qual o contato com a
molcula do substrato induz mudanas conformacionais na enzima, que
otimizam as interaes com os resduos do stio ativo. Esse o modelo aceito
hoje em dia. O sitio Ativo da enzima complementar ao substrato em todos os
estgios do subtrato , at a formao do produto o que mais favorvel
energeticamente .
Em geral a enzima tambm sofre uma mudana na sua conformao quando o
substrato se liga induzindo mltiplas interaes fracas com o substrato
chamado de ajuste induzido .
Serino Proteinase : Trade cataltica : Ser-His-Asp
A mesma energia de ligao que fornece energia para a catalise tambm da as
enzimas sua especificidade, isto , a capacidade de discriminar entre um
subtrato e uma molcula competidora . Se o sitio ativo de uma enzima tiver
grupos funcionais organizados otimamente de modo a formar uma grande
variedade de interaes fracas com um determinado substrato no
correspondente estado de transio a enzima no ser capaz de interagir com
a mesma intensidade com nenhuma outra molcula .De uma maneira geral ,a
especificidade deriva da formao de muitas interaes fracas entre a enzima
e a molcula do substrato especifico .
Fatores que afetam a atividade enzimtica :
Condies do meio que afetam a atividade proteica : pH e temperatura
Tempo da reao; Concentrao dos reagentes ( a enzima,o substrato e o
cofator )

Fatores que controlam a atividade enzimtica :

1.Fatores que afetam a estabilidade proteica das enzimas : variaes de pH
O pH timo de uma enzima reflete variaes no estado de ionizao de
resduos de aminocidos do stio ativo. A enzima est pelo menos parcialmente
desnaturada em pHs afastados do pH timo. Quando o substrato uma
molcula ionizvel, o pH timo da enzima tambm reflete o seu estado de
ionizao .
Depois do pH timo ela perde sua atividade enzimtica , quando altera o pH
diminui a interao do substrato com a enzima. Ela sofre mudana
conformacional drstica.
Variaes de temperatura ( temperatura tima)
A enzima se desnatura em temperaturas acima da temperatura tima .
Tempo da reao e concentrao da enzima,substrato e cofatores
A [substrato] cai na mesma razo em que a [produto] aumenta em funo do
tempo.
A enzima existe sob duas formas: enzima livre E e complexo enzima-substrato
ES. No incio da reao, a [E] livre cai e a do complexo [ES] aumenta e atinge
um mximo, em que no h mais [E] livre no meio. Nessa situao, diz-se que
a enzima est saturada (s existe no complexo ES). A velocidade da reao a
mxima.
A combinao de uma enzima com o substrato formando um complexo ES
uma etapa necessria para a catalise enzimtica .Esta ideia foi ampliada por
Michaelis e Menten formularam as bases da cintica enzimtica, para explicar
como a concentrao do substrato [S] afeta a velocidade da reao v , eles
postularam que a enzima primeiramente combina-se de modo reversvel com o
subtrato ,formando um complexo enzima substrato em uma etapa reversvel e
rpida : E + S
ES
Ento o complexo ES rompido em uma segunda etapa que mais lenta
,fornecendo enzima livre e o produto P : ES
E+P
A velocidade inicial mxima de uma reao catalisada ocorre quando quase
toda a enzima estiver presente como complexo ES e [E] desprezvel .
O
grfico mostra um conjunto de reaes que esto acontecendo
simultneamente, conforme as equaes abaixo:

parte a: v aumenta proporcionalmente com aumentos de S.

parte b: v aumenta no proporcional-

parte c: v no aumenta mais, tendendo a um valor mximo (Vmax),

sendo independente da [S]

Para se chegar equao da hiprbole quadrada do grfico V x S, o

grfico de Michaelis Menten, considera-se que o conjunto de reaes
est em equilbrio, ou seja, a [ES] constante e o sistema tem a sua
velocidade mxima, Vmax.

Quando [ES] constante, as velocidades de formao (Vf) e de

desdobramento (Vd) do complexo ES so iguais:

Vf formao ES = Vd desdobramento ES

Igualando-se Vf = Vd e resolvendo para V, chega-se Equao de

Michaelis-Menten:

mente com aumentos de S.

Km= constante de Michaelis Menten

um parmetro cintico que traz
informaes sobre a afinidade que a enzima tem pelo substrato.
K-1+K2 /K1

Considerando
a baixa
afinidade
da E pelo
seu
temos 2 casos:
Epor
tem
altaS,afinidade
por S
E
tem
afinidade
S
1.
2.
Quando
Vd

mais
alta
do
que
Vf
Quando
Vf

mais
alta
do
que Vd
k-1k+ k2 == grande
Km alto
k-1k+ k2 = grande
pequeno
Km baixo
pequeno
1

K1: determina a afinidade

Grfico dos duplos recprocos : aplicou-se o inverso em ambos os lados da
equao de Michaelis e Menten e determinou-se uma equao linear
( equao da reta) proporcionando aos bioquimicos uma forma mais fcil e
exata de determinar a Vmax.
A atividade enzimtica pode ser regulada por diferentes mecanismos, que
muitas vezes atuam em conjunto na mesma enzima.
Entre estes mecanismos, destacam-se:
1. Inibidores: irreversveis: no proticos e proticos . Reversveis:
competitivo, no competitivo ou misto, incompetitivo
2. Alosteria:ativadores e inibidores e cooperatividade
3. Modulao covalente : Ativao de zimognios e Fosforilao e
defosforilao
Inibidores Irreversveis : Ligam-se covalentemente com ou destroem um
grupo funcional da enzima que essencial para a atividade da enzima ou ento
forma uma associao no covalente estvel .Os inibidores irreversveis
constituem-se em outra ferramenta til para estudar mecanismos de reao
.Algumas vezes e possvel identificar aminocidos com funes chaves no sitio
ativo determinando quais os resduos que se ligam covalentemente ao inibidor
depois que a enzima inativada .
Compostos orgnicos clorados ou fosforados so bons exemplos de inibidores
enzimticos irreversveis, pois reagem com o resduo S1 de serino-enzimas,
formando um complexo irreversvel. Uma das enzimas altamente sensvel a
esses compostos a acetilcolinesterase, responsvel pela metabolizao do
neurotransmissor acetilcolina em neurnios centrais e perifricos. Este o
mecanismos de ao dos inseticidas organofosforados, como o malathion e o
parathion.
Inibidores Proteicos : de enzimas proteolticas desempenham importantes
papis fisiolgicos. Entre esses esto as serpinas, inibidores de serinoproteinases, e as cistatinas, inibidores de cisteno-proteinases. Em ambos os
casos, os inibidores funcionam como falsos substratos, sendo reconhecidos e
clivados pelas enzimas, que ficam aprisionadas num complexo com o inibidor.
A serpina e a enzima inicialmente formam um complexo no covalente (EI),
complexo de Michaelis. Em seguida, a clivagem da ligao peptdica na ala
reativa forma em um intermedirio acil-enzima (EI*), que pode resultar em
transposio e insero da ala da serpina na enzima, bloqueando-a
permanentemente, ou em certas circunstncias, na liberao da serpina clivada
e da enzima livre.

Inibio Reversvel
Inibio competitiva :Compete com o substrato pelo sitio ativo da enzima ,
medida que o inibidor ocupa o sitio ativo ele impede que o substrato se ligue a
enzima .Muitos inibidores competitivos tem a estrutura similar a estrutura do
subtrato e combinam-se com a enzima formando um complexo EI,mas sem
levar a catlise. Com aumento da [substrato], ocorre diminuio da inibio
caracterizando uma competio entre S e I.
Inibio no competitiva ou mista : inibidor no anlogo estutural do
substrato - no se liga ao stio ativo , se liga a uma regio distinta

inibidor se liga E e ao ES

aumento da [substrato] no diminue a inibio - no h competio

Km aumenta e Vmax diminu

Inibio Incompetitiva : inibidor anlodo do estado de transio e se liga

somente ao complexo ES

Km aumenta e Vmax diminu

Alosteria

Enzimas alostricas : agem por meio de ligaes reversveis e no covalentes

com compostos regulatrios denominados moduladores alostricos ou
efetores alostricos que geralmente so metablitos pequenos ou
cofatores .Enzimas alostricas possuem uma regio diferente do stio ativo ao
se liga um efetor ou modulador alostrico. A mudana conformacional
decorrente da ligao do efetor alostrico se propaga pela molcula e afeta o
stio ativo, ativando-o ou inibindo-o.
Modulao covalente : Fosforilao e defosforilao
Ao contrrio da alosteria, em que os efetores ligam-se enzima apenas por
ligaes fracas, na modulao covalente a enzima modificada
covalentemente por duas outras enzimas: uma quinase fosforila a enzima s
custas de ATP, e uma fosfatase remove o grupo fosfato da enzima fosforilada.
A modulao covalente energticamente cara, pois necessita duas outras
protenas e ATP para regular a atividade de uma enzima. Ao contrrio, na
alosteria a enzima controlada pelas concentraes relativas
de seus efetores e a afinidade da enzima por estes.
A ligao de grupos fosforil a resduos de aminocidos especficos de protenas
catalisada por protena cinases , e a remoo de grupos fosforil catalisadas
por protenas fosfatases .

Ativao de Zimognios
Ativao de zimognios um caso especfico de modulao covalente
exclusivo de alguns tipos de enzimas proteolticas.

zimognios: as proteases so sintetizadas numa forma inativa por estar

em uma conformao desfavorvel, com bloqueio ou desalinhamento
dos resduos do stio cataltico.

conformao desfavorvel resulta de pores adicionais da cadeia polipeptdica, que devem ser retirados para que a protena assuma a forma
ativa.

podem acontecer duas situaes, combinadas ou no:

- zimognio tem uma extenso N-terminal (pro-segmento) que precisa
ser retirada. Pro-segmentos podem ter de 2 a 150 resduos a.a.
- zimognio tem cadeia polipeptdica nica, que precisa ser clivada
(protelise limitada) para formar duas ou mais subunidades.

converso do zimognio protease ativa pode resultar da ao

proteoltica de outra protease, ou de alterao do pH ou temperatura do
meio, ou ainda, da adsoro do zimognio uma superfcie negativa.
Esses eventos determinam mudana conformacional e/ou auto-hidrlise
pela prpria protease. A
ativao irreversvel, e por isso,
energeticamente cara para o organismo