IMPORTANCIA

Las pruebas bioqumicas nos indican una serie de caractersticas metablicas

que, en conjunto, nos permitirn diferenciar unas bacterias de otras). Existe un
gran nmero de estas pruebas, por lo que en un problema concreto nos
decantaremos por la realizacin de una u otra prueba bioqumica basndonos en:
* Origen de la cepa: de dnde la hemos aislado. * Condiciones bajo las que ha
sido aislada. * Morfologa. * Tincin, especialmente la de Gram. * Posibilidad de
formacin de esporos. * Posibilidad de formacin de cpsula. Segn los
resultados obtenidos de la observacin de estos parmetros, una vez consultada
la bibliografa sobre taxonoma bacteriana, el amplio espectro bacteriano, va a
quedar restringido a unos pocos gneros, por lo que el siguiente paso ser
realizar las pruebas bioqumicas que nos ayuden a quedarnos con uno solo de
ellos, y posteriormente llegar a la determinacin de especie. Es muy importante
comprender que estas pruebas no han sido elegidas al azar, sino siguiendo una
pauta detallada con objeto de escoger aquellas que nos van a llevar a la
identificacin de especie lo ms rpidamente posible. Son muchas las pruebas
bioqumicas descritas, y es evidente que en cada caso intentaremos realizar las
menos posibles, siempre y cuando stas nos lleven a una completa y segura
identificacin. En la realizacin de pruebas bioqumicas hay que tener en cuenta
que no todos los miembros de una determinada especie bacteriana reaccionarn
de la misma manera: Se producen variaciones, y esto habr que recordarlo
cuando se interpreten los cuadros para identificacin de bacterias. Al comparar
los resultados obtenidos con un grupo tabulado de resultados patrn, se debe
utilizar el criterio de "aproximacin mxima": si un microorganismo se desva de
lo normal en uno o dos resultados de una batera de pruebas segn la tabla
patrn, ello no supone que necesariamente haya que descartarlo de esa especie.

Herbert Caldern Prez

OBJETIVOS

Conocer los procedimientos de identificacin bioqumica de las principales

bacterias gram negativas.

Interpretar los resultados de las pruebas bioqumicas y correlacionarlas con

las diferentes especies de bacterias gram negativas.

DISCUSIN MARCO TEORICO

Medios diferenciales

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Son empleados para detectar reacciones bioqumicas, con carcter diferencial de

grupos, gneros o especies microbianas, mediante el viraje de color del indicador
presente en el medio, demostrando algunas de sus caractersticas.
Estos medios son el TSI, Citrato de Simmons, SIM y Caldo rea.
TSI (Triple Sugar Iron)

CARACTERSTICAS:
COLOR: Rojo ladrillo.
INHIBIDORES: No tiene.
INDICADOR: Rojo fenol.
SUSTRATOS PRINCIPALES: Lactosa, sacarosa y glucosa.
SUSTRATOS SECUNDARIOS: Tiosulfato sodico, peptona, citrato frrico
amoniacal y extractos.
Siembra: Puncin profunda con asa y luego estras en la parte de arriba.
En este medio se busca determinar la capacidad de la bacteria para degradar los
azucares, formacin de gas y sulfuros de hidrgeno.
La fermentacin aerobica se produce en la parte de arriba del tubo y la
anaerobica en el fondo del tubo. La presencia de gas se debe al CO2 producto de
la fermentacin.
La degradacin de la lactosa ocurre en la parte superior, la de la sacarosa en la
parte intermedia y de la glucosa en la parte profunda producindose un viraje de
rojo a amarillo.
El tiosulfato es reducido a sulfuro de hidrgenos quien reacciona con el citrato
frrico amoniacal para dar formacin a sulfuro de hierro que es de color negro.

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MEDIO SIM (Sulfuro-Indol-Motilidad)

CARACTERSTICAS:
COLOR: Crema.
INDICADOR: No tiene.
INHIBIDOR: No tiene.
SUSTRATO PRINCIPAL: Peptona.

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SUSTRATO SECUNDARIO: Tiosulfato sdico, hierro y amonio.

Este medio se utiliza para comprobar la motilidad, formacin de sulfuros de
hidrgeno y la produccin de indol por parte de la bacteria.
Siembra: por puncin.
A. Motilidad

B. Hidrgeno sulfurado
Estudia el metabolismo de la cisteina que posee dos molculas de azufre (S) que
sern liberados como H2S por accin de la cisteinasa y con la presencia de sales
ferrosas formaran S2Fe que le dar un precipitado de color negro.

C. INDOL

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Se usa el reactivo de Kobacs, que manifiesta la degradacion del triptofano por la

enzima triptofanasa en indol, que se combina con el aldehdo(dimetil
benzaldehdo) presente en el reactivo de Kobacs, para producir un color rojo.

CITRATO DE SIMMONS

CARACTERSTICAS:
COLOR: Verde.
INHIBIDORES: No tiene.
INDICADOR: Azul de bromocresol.
SUSTRATO PRINCIPAL: Citrato de sodio.
SUSTRATO SECUNDARIOS: Fosfato dipotasico, cloruro de sodio, sulfato de
magnesio y fosfato monoamonico.
Siembra: Por estras.

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Este medio nos permite comprobar la capacidad de la bacteria de utilizar el

citrato como unica fuente carbono.
La degradacion del citrato conlleva a la alcalinizacion del medio y el viraje del
indicador de verde a azul prusia.
Con este medio podemos diferenciar entre las coliformes fecales y citrobacter
como algunas especies de Salmonella.

A. Citrato positivo

B. Citrato negativo

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CONCLUSION

Se logr determinar la presencia de determinados microrganismos capaces

de fermentar azucares o no por medio de TSI o LIA.

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A partir de otras pruebas bioqumicas (SIM) se pudo determinar que la

muestra incgnita podra ser indol positivo o negativo, capaz de producir

cido sulfhdrico, y si tena motilidad.

Todas estas pruebas bioqumicas, ayudan en la asertividad de diagnstico,
determinando la identidad del agente patgeno, a travs de sus
propiedades bioqumicas, y facilitarnos dar un tratamiento efecto contra
este mismo.

ANEXOS METODO AUTOMATICO

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BIBLIOGRAFIA LINKOGRAFIA
http://www.danival.org/microclin/antibiot/_madre_antibiot.html

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 Sham D. The role of clinical microbiology in the control and

surveillance of antimicrobial resistance. ASM News. 1996;62:259
Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI). Performance
standards for antimicrobial susceptibility testing; eighteenth
informational supplement. CLSI document M100-S19. Wayne, PA:
CLSI; 2009.
European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing

(EUCAST): Expert rules in antimicrobial susceptibility testing, 2008.

Disponible en: http:// www.srga.org/eucastwt/MICTAB/index.html

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