PREGUNTAS:

a) Explique
claramente
porque
la
titulacion final debe realizarse con HCl
y no con NaOH.
R: La titulacion debe hacerse con HCl para
que este reaccion con el ion borato que esta
en solucion, el cual es proporcional a la
cantidad de amoniaco presente ya asi poder
cuantificarlo.

porcentaje de nitrgeno o, por medio de un

factor de conversin emprico, el contenido
de protena cruda (considerando el peso de
la muestra).

Ventajas:
Seguridad:
permite
eliminar
la
necesidad de exponer a su personal al
manipuleo de cido sulfrico y base
concentrado, y el monitoreo de cido
b) Si el amoniaco proviens de 1.50 g de
hirviendo en recipientes de vidrio que
una muestra que contiene 8.5% p/p de
con frecuencia se rompen durante el
N, se recibe en HCl 0.1 M, Cual debe
anlisis o la transferencia.
ser el minimo volumen del cido a
No Necesita Productos Qumicos Para
utilizarse para garantizar que el analisis
La Digestin: Dumas requiere agentes
es correcto?
reductores no agresivos ni venenosos
R: El volumen minimo de HCl necesario
como cobre u xido de cobre y
para garantizar que el analisis es correcto es
tungsteno as como gases como helio o
de 91 mL a 0.1 M.
CO2 y una cierta cantidad de oxgeno.
No hay peligro en su manipulacin, ni
M8,5 g N
1 Mol N
hay una costosa disposicin de residuos
100 g M
1 Mol HCl
contaminantes.
14 g M
1000
mL
Significativos Ahorros De Tiempo:
1 Mol N
1,50 g
=91 mL
Desde
que llega la muestra hasta la
0,1 Mol HCl
impresin de los resultados analticos,
un analizador Dumas moderno solo
La pregunta adicional del informe es:
requiere unos pocos minutos.
Completa Automatizacin: Luego de
Mencione y explique otros mtodos
pesar 39 muestras o ms, y llenar el
analticos (mnimo dos y mximo 4) que
carrousel de muestras, el anlisis es
pueden utilizarse en la determinacin de
totalmente automtico y sin atencin,
nitrgeno en muestras de alimentos y
an durante las horas de la noche. A la
cuales son las ventajas de estos frente al
maana siguiente tiene Ud. disponible
mtodo usado en la prctica.
el protocolo analtico de todas las
muestras. No hay que rellenar, recargar
Metodo Dumas:
ni limpiar los viales de digestin para
cada muestra.
Para la determinacin de nitrgeno por el
Bajo Costo por Anlisis: Los ahorros en
mtodo de Dumas modificado, la muestra
tiempo de anlisis, productos qumicos,
es calentada a alrededor de 1000 C en
equipamiento
de
laboratorio,
atmsfera de oxgeno. El nitrgeno de los
requerimientos de instalacin y la
compuestos (aminocidos) ser convertido
disposicin final de los residuos,
a xido de nitrgeno y nitrgeno molecular.
agregarn una ventaja de costos
Luego de la post oxidacin cataltica,
significativa, particularmente cuando se
secado y limpieza del gas carrier, todos los
lo compara con el costo del Kjeldahl.
xidos de nitrgeno son reducidos a
Resultados Analticos Exactos: El
nitrgeno molecular en el agente reductor
mtodo Dumas con un instrumento
(cobre o tungsteno) y transportado por el
Elementar provee el 100% de
gas carrier a la celda de conductividad
recuperacin
del
nitrgeno
(TCD) para la determinacin cuantitativa.
independientemente de su composicin
La computadora calcula automticamente el
qumica (la nica excepcin: algunos

nitruros). Los resultados del Kjeldahl

dependen mucho del compuesto a ser
analizado o del catalizador utilizado
para la digestin, por Ej. algunos
compuestos heterocclicos, nitratos,
nitrosos, compuestos nitro- y azo no
son digeridos o no lo son
completamente.
Metodo de Biuret:
El mtodo comprende un ensayo
calorimtrico de un paso donde se
cuantifica la formacin de un complejo
estable entre protenas y cobre (II). El
complejo presenta un color violeta
caracterstico, que se puede observar a
310nm o 540-560nm, el cual se da por la
coordinacin de un tomo de cobre con
cuatro tomos de nitrgeno. El complejo se
basa en la desprotonacin de los grupos
amida para formar el enlace con el cobre
(II) o por el establecimiento de un enlace
coordinado entre el metal y los pares de
electrones libres de los tomos de oxigeno y
de nitrgeno del pptido. Despus de la
adicin del reactivo de cobre se requiere de
tiempo para desarrollar una coloracin de
Biuret estable; es necesario considerar la
posible influencia de aminocidos libres
que forman buffer en configuracin tris y
amoniaco. (Nollet, 1996)

Ventajas:
No hay interferencia de aminocidos
libres.
Pequea influencia de la composicin
del aminocido en el desarrollo de
color.
La operacin es simple y se puede
manejar numero grande de muestras.

Metodo de Lowry:
Se basa en la reduccin del reactivo de
Folin-Ciocalteau que es una mezcla de
cidos fosfomolibdico y fosfotungstico por
la oxidacin de tirosina, triptofano, cisterna,
cistina de las cadenas polipeptdicas. El
proceso de oxido-reduccin se acompaa de
la formacin de un color azul caracterstico.
Quelatos de cobre en la estructura del

pptido facilitan la transferencia de

electrones de los grupos funcionales amino
al cromgeno cido. Este mtodo es til
para determinar pequeas cantidades de
protena en una disolucin. El desarrollo de
color es dependiente en gran cantidad del
pH, que se debe mantener entre 10 y 10.5.
(Nollet, 1996)

Ventajas:
Alta sensibilidad
Fcil de operar
Fcil de manejar un gran numero de
muestras.

Metodo de Bradford
Se basa en la unin de un colorante,
Comassie Blue G-250 (tambinServa Blue)
a las protenas. El colorante, en solucin
cida, existe en dosformas una azul y otra
naranja. Las protenas se unen a la forma
azul paraformar un complejo protenacolorante con un coeficiente de extincin
mayorque el colorante libre.

Ventajas:
Este mtodo es sensible (1-15 g),
simple, rpido, barato y pocas
sustancias
interfieren
en
su
determinacin.
Entre las sustancias que interfieren
estn los detergentes y las soluciones
bsicas.

CONCLUSIONES:
La eficiencia del metodo Kjeldahl ha
sido considerablemente reducida a
traves del tiempo del tiempo por la
necesidad de reemplazar reactivos de
alto grado contaminante o de toxicidad.

El mtodo Dumas es poco conocido

pero es mucho mas eficiente, preciso y
rapido que Kjeldahl. Es mas economico
que un analizador Kjeldahl semiautomatico.

BIBLIOGRAFIA:

Metodo
Dumas
http://www.coasin.com.ar/notas/7/a
nalisis-de-proteinas-por-el-metododumas-por-combustion
Metodo
Bradford
http://www.academia.edu/7046323/
DETERMINACI
%C3%93N_DE_PROTE

%C3%8DNAS_EN_ALIMENTOS
_CON_EL_M
%C3%89TODO_DE_BIURET
Metodo de Lowry y Metodo de
Biuret
http://www.fbioyf.unr.edu.ar/evirtu
al/pluginfile.php/124179/mod_reso
urce/content/1/QA-2015PROTEINAS-METODOS.pdf