SIMPOSIO EUROPEO SOBRE ENTERISOL ILEITIS | 13-15 DE OCTUBRE DE 2005 | BARCELONA

Steven McOrist, Connie Gebhart

El descubrimiento de Lawsonia intracellularis

Dr. Steven McOrist

QAF Industries, Corowa, NSW 2646, Australia
Dr. Connie Gebhart
Facultad de Veterinaria, Universidad de Minnesota, St. Paul, EE.UU

abcd

Introduccin

observados en el intestino de los cerdos mediante microscopa electrnica y tcnicas de tincin especiales.

El agente etiolgico de la enteropata proliferativa porcina

(EP, iletis) es la bacteria intracelular obligada Lawsonia
intracellularis, que crece preferentemente en el citoplasma
de las clulas epiteliales del intestino. El crecimiento de
esta bacteria se ve acompaado invariablemente por la
proliferacin localizada de las clulas inmaduras de las
criptas que son infectadas. Hasta el momento no se ha
logrado cultivar a Lawsonia en un medio sin clulas, probablemente porque depende de los trifosfatos sintetizados en las mitocondrias celulares o de una fuente de
energa similar localizada en la clula hospedadora para
satisfacer sus necesidades metablicas. Este fenmeno de
parasitismo energtico es similar al de otras bacterias
intracelulares obligadas como algunas especies de clamidias y rickettsias, aunque Lawsonia no est emparentada
con dichas bacterias.

Historia de la investigacin de la iletis

Harry Biester y otros investigadores del Veterinary Medical
Research Institute de Ames, Iowa, EE.UU., fueron los primeros en describir all por los aos treinta las lesiones de la
enteropata proliferativa en los cerdos. Sus trabajos facilitaron una descripcin anatomopatolgica de las lesiones y
planteaban la hiptesis de que podan estar asociadas con
las dietas ricas en grano y pobres en vitaminas, comunes en
la poca. Los trabajos publicados a partir de entonces y
hasta la dcada de 1950 aportaron una serie de descripciones de casos en Escandinavia y otros lugares, tambin centrados en los aspectos anatomopatolgicos. A finales de la
dcada de los aos sesenta, los mtodos de explotacin
intensiva irrumpieron con fuerza en la industria porcina y
con ellos los antibiticos incorporados en el pienso como
la tilosina, cambios que probablemente propiciaron un
aumento del contagio de Lawsonia y la aparicin de poblaciones de cerdos sensibles a ella. Esto potenci un mayor
nmero de descripciones clnicas y anatomopatolgicas,
fruto de los trabajos de
varios investigadores de la
Universidad de Edimburgo,
Allan Rowland, Giles
Rowntree y Gordon Lawson,
que investigaban los grandes brotes acontecidos en el
Reino Unido. Como parte de
esta labor, dichos investigadores desarrollaron un programa de investigacin
productiva y examinaron los
cambios proliferativos
Allan Rowland
3

BOEHRINGER INGELHEIM | EUROPEAN ENTERISOL

ILEITIS SYMPOSIUM

Rowland, Rowntree y Lawson descubrieron la presencia

habitual de pequeas bacterias curvas en el interior de las
clulas proliferativas anmalas al examinar la ultraestructura
de las lesiones o emplear tinciones de plata (ver Rowland y
Lawson 1974). Estas bacterias eran bacilos vibrioides gramnegativos, curvados o rectos, de extremos puntiagudos o
romos, y 1,25-1,75 m de largo y 0,25-0,43 m de ancho.
Las bacterias permanecan normalmente libres en el citoplasma apical de las clulas epiteliales infectadas y no aparecan unidas a la membrana durante las etapas principales
de la infeccin. Un primer experimento de transmisin con
mucosa homogeneizada afectada por la enteropata proliferativa, extrada de un caso natural y administrada como un
inculo oral, arroj resultados positivos (ver Roberts et al
1977), indicando que dichas bacterias eran los agentes causantes de las lesiones. Sin embargo, posteriores intentos
para repetir el experimento, incluso con el mismo inculo
por parte de los citados investigadores, resultaron infructuosos. Este problema de inculos fallidos, recurrente en varios
estudios posteriores realizados en el marco de la enteropata
proliferativa en EE.UU., Australia y otros lugares, se atribuy
a la prdida de ttulo infeccioso durante la permanencia en
los contenedores de muy baja temperatura de la poca.
Algunos de estos primeros trabajos citan a la bacteria intracelular como organismo afn a Campylobacter, una designacin basada exclusivamente en la similitud morfolgica con
este gnero. A lo largo de muchos aos de trabajo, diversas
especies de Campylobacter, en particular C. mucosalis, C.
hyointestinalis, C. jejuni, C. hyoilei (despus considerada
una variante de C. jejuni) y C. coli, fueron aisladas de las
lesiones proliferativas en cultivos puros por distintos grupos
de investigacin que perseguan la identificacin del presunto agente causal. Las lesiones proliferativas caractersticas o
la colonizacin intracelular, empero, no aparecan tras inocular estas bacterias a los cerdos. Todos los ensayos realizados con una amplia gama de cerdos (de distintas edades,
individuos gnotobiticos, libres de patgenos especficos,
etc.) y de tcnicas de exposicin a las bacterias no produjeron resultados significativos. Esta larga cadena de experimentos fallidos se prolong durante los aos setenta y
ochenta y dio rienda suelta a hiptesis sobre la implicacin
de virus, especies de Chlamydia o agentes infecciosos
dobles. En realidad, las especies de Campylobacter eran
agentes secundarios oportunistas que aprovechaban las
condiciones alteradas del intestino para colonizarlo, de ah
su aumento en las lesiones de la enteropata proliferativa.
Este fenmeno de colonizacin por bacterias oportunistas
no es exclusivo de la enteropata proliferativa y puede observarse en otras enfermedades intestinales que afectan al
cerdo como la disentera porcina.

El descubrimiento de la bacteria intracelular en el marco de

la enteropata proliferativa porcina condujo a los investigadores a detectar la presencia de agentes infecciosos afines
en lesiones similares de la iletis proliferativa observada en
hmsters de laboratorio en EE.UU. (ver Frisk y Wagner 1977).
Los estudios de exposicin subsiguientes realizados en
hmsters culminaron con xito. Los hmsters eran afectados
por las bacterias intracelulares obtenidas de las lesiones
provocadas por la enteropata proliferativa tanto en cerdos
como en individuos de su propia especie, un claro indicio de
que ambos hospedadores se vean afectados por el mismo
agente causal. Por desgracia, los estudios de cultivo y de
otro tipo realizados con estos roedores durante los aos
setenta y ochenta y destinados a identificar el microorganismo correcto, Lawsonia, resultaron tan infructuosos como los
estudios realizados en cerdos.

El descubrimiento de Lawsonia intracellularis

Los estudios de antgenos y los estudios de exposicin fallidos de finales de los aos ochenta descartaron que la bacteria intracelular causante de la enteropata proliferativa
fuera una especie de Campylobacter de vida libre. El claro
ciclo de vida intracelular que mostraba el microbio llev a
pensar en la posibilidad de que se tratara de una bacteria
intracelular obligada, con ciertas semejanzas con algunas
especies de rickettsias, una hiptesis que se materializ en
diversos intentos de cultivar las bacterias intracelulares en
clulas de cultivo a partir de inculos obtenidos de las
lesiones de la enfermedad. El primer informe de cocultivo
de Lawsonia en una estirpe celular cultivada se remonta a
1978, en concreto al grupo de Robert Jacoby, que investigaba la enteropata proliferativa en hmsters. Despus del fracaso de los trabajos con Campylobacter de los aos
ochenta, este trabajo pionero de cultivo celular fue redescubierto y retomado a principios de los noventa por Hal Stills
y Connie Gebhart en EE.UU. y por Gordon Lawson y Steven
McOrist en Escocia. Stills public la primera descripcin de
un cultivo de bacterias Lawsonia a partir de casos de enteropata proliferativa en hmsters en 1991, pero por desgracia una clamidia no patgena sin ninguna relacin con el
patgeno de inters contamin los cultivos, por lo que no
se pudieron practicar inoculaciones a los animales y realizar
los trabajos taxonmicos con el autntico agente causal. La
identidad de la bacteria y su papel etiolgico en la enteropata proliferativa porcina se resolvieron finalmente en
1993 gracias al cultivo del microorganismo intracelular en
clulas cultivadas y a la reproduccin de la enfermedad en
cerdos mediante un cultivo puro de este agente infeccioso
(ver Lawson et al. 1993, y McOrist et al. 1993). Ese mismo
ao se dilucid tambin su posicin taxonmica (ver
Gebhart et al. 1993), la bacteria recibi el nombre de

Artculo publicado en Nature en

1973.
Bacteria intracelular y de morfologa curva asociada a la proliferacin de las clulas epiteliales en la
enteropata proliferativa.

Resea de uno de los primeros trabajos

Lawsonia intracellularis y fue incluida en la familia

Desulfovibrionaceae (ver McOrist et al., 1995). El nombre de
Lawsonia se escogi para honrar la labor y la perseverancia
del veterinario escocs Gordon Lawson, cuya contribucin
result fundamental para su descubrimiento. El desarrollo
del cocultivo de Lawsonia exigi especial precaucin en la
localizacin de la fuente del material de enteropata proliferativa y en las tcnicas de extraccin, as como en la atmsfera y las tcnicas de mantenimiento, las tcnicas de pase y
la reduccin de contaminaciones en el cultivo celular, amn
de muchos otros detalles. El desarrollo de los estudios de
exposicin requiri considerar detalladamente el origen de
los cerdos y de su flora bacteriana, etc. Y dada la naturaleza
endmica del agente infeccioso entre las piaras que podan
utilizarse como fuente de los cerdos de los estudios, los
ensayos de exposicin tuvieron que realizarse bajo un control minucioso para detectar los casos espontneos de
enteropata proliferativa entre los controles negativos.

Caractersticas de Lawsonia intracellularis

Lawsonia intracellularis presenta una morfologa bacilar
vibrioide, curva o recta, con extremos puntiagudos o
romos, y mide 1,25 1,75 m de largo y 0,25-0,43 m de
ancho. La pared celular trilaminar es tpica de las bacterias
gramnegativas y no se han observado fimbrias o esporas.
Algunas cepas cultivadas en estirpes celulares presentan un
nico flagelo polar, largo y de motilidad pulstil, pero slo
cuando la bacteria se encuentra en el medio extracelular.
Lawsonia tiene un solo cromosoma circular de pequeo
tamao y tres megaplsmidos que suman un total de 1,72
millones de pares de bases de ADN y 1324 marcos de lectura abiertos (genes funcionales). El pequeo tamao del
genoma, la respiracin dependiente de la clula hospedadora (parsito energtico) y el bajo cociente G+C de su

BOEHRINGER INGELHEIM | EUROPEAN ENTERISOL ILEITIS SYMPOSIUM

La explosin de la investigacin sobre la

enteropata proliferativa
Una vez identificado el agente causal de la enteropata proliferativa a mediados de los aos noventa, los grupos citados
y muchos otros grupos de investigacin europeos y norteamericanos comenzaron a trabajar con celeridad en aspectos
ms prcticos de la enfermedad para la industria porcina.
Cuestiones como la sensibilidad de Lawsonia a diferentes
antibiticos, su epidemiologa dentro y entre las explotaciones porcinas y los mtodos de diagnstico en cerdos, por
citar algunas, fueron objeto de investigacin (ver Knittel et
al, 1998). En 1994 se iniciaron los trabajos para disear una
vacuna contra la iletis que desembocaron en el registro de
la primera vacuna (Enterisol Ileitis, Boehringer Ingelheim)
siete aos despus. Hoy esta eficaz vacuna est registrada
en un gran nmero de pases y se utiliza en todo el mundo
(ver Guedes y Gebhart 2003, y Kroll et al. 2004). El rpido
desarrollo de la vacuna contra la iletis contrasta con el lento
ritmo de desarrollo de otras vacunas destinadas a importantes enfermedades intestinales del ganado porcino como la
disentera y la colibacilosis porcina.

Fotografa obtenida con microscopa electrnica de transmisin de Lawsonia

intracellularis en el interior de una clula cultivada del epitelio intestinal. Se
observa la pared celular tpica de una bacteria gramnegativa y la morfologa de
bacilo vibrioide.

ADN, as como la expresin significativa de protenas de

choque trmico gro EL, son caractersticas que comparte
con otras bacterias intracelulares obligadas y simbiontes. El
anlisis genmico ha permitido localizar varios genes que
codifican para el flagelo, genes de biosntesis de folato y
otros genes bioqumicos bacterianos habituales. Los grandes megaplsmidos se han descrito en otras bacterias
intracelulares, como algunas especies de Brucella. A pesar
de su inclusin en la familia Desulfovibrionaceae, realizada
a partir del anlisis de la secuencia de ADN, no parece
poseer capacidad sulfatorreductora. Un hecho destacable es
que, a diferencia de las especies del gnero Desulfovibrio,
parece haber adquirido un mecanismo activo de entrada en
la clula y otro mecanismo para actuar sobre las clulas
hospedadoras diana in vivo. Las colonias de L. intracellularis
aisladas en cerdos y las de otros orgenes y especies hospedadoras (hmster, caballo, crvidos) muestran un alto grado
de semejanza (>98%) en las secuencias de ADN de regiones
de importancia taxonmica clave y en las protenas de la
pared celular, lo que hace factible la existencia de una sola
cepa homognea de L. intracellularis. Estos rasgos indican
que los considerables cambios genticos producidos a partir de Desulfovibrio o de otros antepasados bacterianos han
tenido lugar recientemente, porque la aparicin de distintas
cepas requiere cierto tiempo para desarrollarse y ser
detectada.

BOEHRINGER INGELHEIM | EUROPEAN ENTERISOL ILEITIS SYMPOSIUM

La bacteria
Lawsonia intracellularis

Referencias seleccionadas
Frisk, C. S. and Wagner, J. E. (1977):
Experimental hamster enteritis: An electron microscopic study.
Am J Vet Res 38: 18611868.
Gebhart, C. J.; Barns, S. M.; McOrist, S.; Lin, G.-F. and Lawson, G. H. K.
(1993):
Ileal symbiont intracellularis, an obligate intracellular bacterium of porcine intestines showing a relationship to Desulfovibrio species.
Int J Syst Bacteriol 43: 533 538.
Guedes, R. M. C. and Gebhart, C. J. (2003):
Onset and duration of fecal shedding, cell-mediated and humoral
immune responses in pigs after challenge with a pathogenic isolate or
attenuated vaccine strain of Lawsonia intracellularis.
Vet Microbiol 91: 135 145.
Knittel, J. P.; Jordan, D. M.; Schwartz, K. J.; Janke, B. H.; Roof, M. B.;
McOrist, S. and Harris, D. L. (1998):
Evaluation of antemortem polymerase chain reaction and serologic
methods for detection of Lawsonia intracellularis-infected pigs.
Am J Vet Res 59: 722 726.
Kroll, J.; Roof, M. B.; and McOrist, S. (2004):
Evaluation of protective immunity in pigs following oral administration
of an avirulent live vaccine of Lawsonia intracellularis.
Am J Vet Res 65: 559 - 565.
Lawson, G. H. K.; McOrist, S.; Sabri, J. and Mackie, R. A. (1993):
Intracellular bacteria of porcine proliferative enteropathy: Cultivation
and maintenance in vitro.
J Clin Microbiol 31: 1136 1142.

McOrist, S.; Jasni, S.; Mackie, R. A.; MacIntyre, N.; Neef, N. and
Lawson, G. H. K. (1993):
Reproduction of porcine proliferative enteropathy with pure cultures of
ileal symbiont intracellularis.
Infect Immun 61: 4286 4292.
McOrist, S., Gebhart, C. J.; Boid, R. and Barns, S. M. (1995):
Characterization of Lawsonia intracellularis gen. nov., sp. nov., the obligately intracellular bacterium of porcine proliferative enteropathy.
Int J Syst Bacteriol 45: 820 825.
Roberts, L.; Rowland, A. C. and Lawson, G. H. K. (1977):
Experimental reproduction of porcine intestinal adenomatosis and
necrotic enteritis.
Vet Rec 100: 12 13.
Rowland, A. C. and Rowntree, P. G. M. (1972):
A haemorrhagic bowel syndrome associated with intestinal adenomatosis in the pig.
Vet Rec 91: 235 241.
Rowland, A. C. and Lawson, G. H. K. (1974):
Intestinal adenomatosis in the pig: Immunofl uorescent and electron
microscopic studies.
Res Vet Sci 17: 323 330.
Stills, H. R. (1991):
Isolation of an intracellular bacterium from hamsters (Mesocricetus
auratus) with proliferative ileitis and reproduction of the disease with a
pure culture.
Infect Immun 59: 3227 3236.

BOEHRINGER INGELHEIM | EUROPEAN ENTERISOL ILEITIS SYMPOSIUM

Boehringer Ingelheim Espaa, S.A.

Divisin Veterinaria
Prat de la Riba s/n - Sector Tur Can Matas.
08173 Sant Cugat del Valls
www.boehringer-ingelheim.es/veterinaria
e-mail: veterinaria@boehringer-ingelheim.es