Materiales

Bandeja plstica formadora del gel con su respectivo peine : para crear un molde y
el peine en el molde de gel para crear los pocillos.

Micropipetas y sus puntas: para succionar y transferir pequeos volmenes de

lquidos y permitir su manejo en las distintas tcnicas analticas.

Guantes: medida de prevencin primaria frente al riesgo biolgico.

Equipo
Tanque de electroforesis horizontal submarino tipo mini gel: disuelve la muestra y
mantiene el contacto elctrico.

Generador de electricidad con capacidad de 500V: dispositivo capaz de mantener

una diferencia de potencial elctrica entre dos de sus puntos, transformando la
energa mecnica en elctrica.

Transiluminador UV: Su superficie permite la visualizacin por medio de

fluorescencia de geles con corridos de protenas y cidos nucleicos.

Reactivos
Agarosa al 1.5% en TBE 0.5X: oponen mayor resistencia al trnsito de los cidos
nucleicos y por ende permiten lograr mayor resolucin.

Buffer TBE 10X: para separar cidos nucleicos.

Bromuro de etidio 10mg/mL: agente qumico muy usado en tcnicas de biologa

molecular para teir nuestros geles de agarosa y poder apreciar nuestras bandas
de ADN.

Buffer de cargada del gel 6X: facilitan la visualizacin y sedimentacin del

producto de PCR o de cidos nucleicos en los pozos para lo cual emplean
distintos tipos de colorantes.

Material Biolgico
Muestras de ADN extradas anteriormente

Procedimiento:
1. Tape los extremos de la bandeja con cinta aislante. Colquela en una
superficie plana y horizontal.
2. Prepara suficiente tampn TBE 0.5X (150 mL) para llenar el tanque
electrofortico. Asegrese que sea el mismo utilizado para preparar el gel.

3. Para preparar en gel de agarosa se lleva a ebullicin, dejar enfriar a 60C.

agrguele bromuro de etidio (concentracin final de 0.5 ug/mL), mezcle
bien.
4. Coloque el peine 0.5-1.0mm arriba del fondo de la bandeja y vierta la
agarosa. Dejar solidificar a temperatura ambiente. El gel debe tener de 3-5
mm de grosor.

5. Una vez solidificado retire la cinta aislante, sumerja el gel en el tanque

electrofortico y retire el peine.

6. Agregue suficiente tampn TBE 0.5X para cubrir el gel aproximadamente

1mm.

7. Prepare las muestras de ADN a analizar agregndoles el buffer de carga.

Algunas de las muestras de ADN las colocaremos sobre el vrtex para
causar rompimiento de las cromatidas y poder observar hebras de ADN
daadas por causa de un medio fsico.
8. Aplique en cada pocito del gel sumergido 10 uL de las muestras
preparadas.

9. Tape el tanque electrofortico y conecte los electrodos de manera que el

ADN migre hacia el nodo (terminal roja) aplique un voltaje de 1-5 V/cm.
Para los mini geles se aplican 100V por 30 min. El azul de bromofenol en la
solucin de cargada marca el frente de la electroforesis.

10. Desconecte la fuente de poder. Saque el gel de la bandeja y obsrvelo con

el transiluminador UV, usando gafas protectoras.