Determinacin de protenas en harina

de pescado por el Mtodo Dumas

INTEGRANTES
-KEISY ZAVALETA VILLANUEVA
-ALEX ESCOBEDO FLORES
-LEONARDO BARRENO GUERRERO
-RICARDO GONZLES CASTILLO
-JUNIOR QUISPE CIUDAD
-MARLON SALDAA OLGUN
DOCENTE
-ING. EUDES VILLANUEVA LOPEZ

CAPTULO I

I. GENERALIDADES
1.1. ESPECIALIDAD
ANALI
SIS

INSTRUMENTAL DE PRODUCTOS AGROINDUSTRIALES

1.2. TITULO.

ANALISIS INSTRUMENTAL DE PRODUICTOS

AGROINDUSTRIALES

DETERMINACIN DE PROTENAS EN HARINA DE

PESCADO POR EL MTODO DUMAS

1.3. OBJETIVO.
Aprender cmo se desarrolla un anlisis por el mtodo de dumas
Analizar protenas por el mtodo de dumas
Determinar si las protenas coinciden y los rangos de desviacin
sean eficientes.

1.4. INTRODUCCION.

El anlisis cuantitativo de nitrgeno y de protenas crudas juega un

rol muy importante, en particular para la evaluacin de productos
agrcolas. A diferencia de otras determinaciones de elementos que
hoy se efectan por medios espectroscpicos tales como Absorcin
Atmica o ICP, todava se utiliza ampliamente el tradicional mtodo
Kjeldahl de qumica hmeda para el importante anlisis de nitrgeno.
Pero, desde hace algunos aos, tiene cada vez ms xito el rpido,
preciso y totalmente automtico mtodo Dumas por combustin.

ANALISIS INSTRUMENTAL DE PRODUICTOS

AGROINDUSTRIALES

Despus de numerosos estudios cientficos realizados en diferentes

tipos de muestras, se demostr que ambos mtodos entregan
resultados de N total comparables y presentan una diferencia
insignificante, especialmente para tejidos vegetales y frutos, por lo
que no se justifica, a nivel de productor, una preferencia entre uno u
otro mtodo de anlisis.
Probablemente a nivel de laboratorio, se justifica la eleccin de uno u
otro mtodo, debido a que Dumas tiene menos riesgo de error y su
automatizacin implica mayor rapidez y menor costo del anlisis.

CAPTULO II

II. FUNDAMENTO TERICO

Las grasas animales y vegetales

son triglicridos o esteres de
glicerina y cidos grasos (cidos carboxlicos) desde elC6 hasta C26
saturados o insaturados, aunque los ms comunes son C 12 (lurico) al C18
(esterico).
Cuando en los triglicridos predominan los cidos grasos insaturados
tenemos lo que conocemos como aceites mientras que si predominan
cidos grasos saturados tenemos lo que conocemos como sebos y
mantecas.

ANALISIS INSTRUMENTAL DE PRODUICTOS

AGROINDUSTRIALES

Las Grasas y Aceites son productos altamente energticos y se diferencian

en si por su consistencia
1. GRASAS:

Materiales slidos a la temperatura ordinaria.

Compuestos orgnicos.
Compuestos de carbono, hidrgeno y oxgeno.
Son la fuente de energa en los alimentos.
Pertenecen al grupo de los lpidos.

2. ACEITES:
Son lquidos a temperatura ambiente.
Es un trmino genrico para nombrar lquidos grasos.
Tiene orgenes diversos.
No se disuelven en el agua.
Son menos densos que l est.
ESTRUCTURA QUMICA
Los cidos grasos consisten de tomos de carbono (C), hidrgeno, (H)
y oxgeno (O) organizados como una cadena de carbonos con un
grupo carboxilo (-COOH) en un extremo.
Existen dos tipos de grasa, la grasa animal y la grasa vegetal:

Grasa animal: Este tipo de grasa se encuentra en un estado slido

a temperatura ambiente. Ejemplos: manteca, grasa proveniente de
las carnes, tocino (piel y capas del cerdo) y la piel de pollo.

ANALISIS INSTRUMENTAL DE PRODUICTOS

AGROINDUSTRIALES

Grasa vegetal: Este tipo de grasas se encuentran en estado

lquido a temperatura ambiente. Ejemplos: aceite de oliva, aceite
de maz, aceite de canola, aceite de man, aceite de crtamo,
mayonesa y aderezo para ensaladas.

DETERIOROS MS COMUNES
Hidrlisis: Las grasas se pueden Hidrolizar hirvindolas con lcalis,
con lo que se forma la conocida Glicerina y Jabones.
Oxidacin: Los cidos grasos no saturados se oxidan, con facilidad
el carbono Adyacente al doble enlace formando hiperoxido que
pueden romperse formando aldehdos y cetonas.
Antioxidante: Hay sustancias que poseen

capacidades

Antioxidante, por ejemplo: Los fenoles, Quinonas, Tocoferoles, ac.

glico y galato
Hidrogenacin: Este proceso permite tener de los aceites de los
vegetales que consiste para la fabricacin de las margarinas por
eso es tiene mucha importancia comercial.
SOLUBILIDAD & DENSIDAD
Las grasas y aceites son generalmente solubles en solventes
orgnicos no polares.
A temperaturas superiores a sus puntos de fusin, tanto las grasas
como los cidos grasos se pueden mezclar con una gran variedad de
hidrocarburos, steres, teres, cetonas, entre otros.
La densidad de los glicridos aumenta a medida que disminuye su
peso molecular y al aumentar su grado de instauracin.
GRASAS SATURADAS
Los cidos grasos saturados se encuentran principalmente en la
grasa animal, existen tambin productos vegetales saturados como
la crema de cacao Estos se encuentra en las carnes rojas,
mantequilla, en el coco y en los cacahuetes.Nuestro cuerpo usa
este tipo de grasa, bsicamente, para producir energa, pero
cuando se consumen en exceso pueden dar origen a problemas
cardiovasculares, entre muchos otros.
ANALISIS INSTRUMENTAL DE PRODUICTOS
AGROINDUSTRIALES

 GRASAS INSATURADAS
Las grasas insaturadas son las que ayudan a bajar el colesterol en
la sangre, siempre que se utilizan en lugar de las grasas saturadas.
Sin embargo, las grasas insaturadas tienen muchas caloras, de tal
manera que es necesario limitar su consumo.
EL BIODISEL
El biodisel (biocombustible) es un lquido que se obtiene a partir de
lpidos naturales como aceites vegetales o grasas animales, con o sin
uso previo,1 mediante procesos industriales de esterificacin y
transesterificacin, y que se aplica en la preparacin de sustitutos
totales o parciales del petrodisel o gasleo obtenido del petrleo.

METODO FAMES
Este mtodo no proporciona informacin sobre la abundancia relativa
de las diferentes clases de lpidos, pero se puede ampliar para separar
clases de lpidos entre s.
El mtodo se basa en una secuencia de disrupcin mecnica celular,
extraccin de lpidos a base de disolvente, transesterificacin de los
cidos grasos a steres metlicos de cidos grasos (FAMEs), y la
cuantificacin e identificacin de FAME, usando la cromatografa de
gases (GC-FID). Una norma interna TAG (tripentadecanoin) se aade
antes del procedimiento analtico para corregir las prdidas durante la
extraccin y transesterificacin incompleta.

ANALISIS INSTRUMENTAL DE PRODUICTOS

AGROINDUSTRIALES

CAPTULO III

III. EXPERIMENTACIN.

3.1.

MATERIALES.

a.

Materiales, equipos e instrumento:

Cromatgrafo de gases equipado con detector FID, muestreador

b.

automtico e hidrgeno como gas carrier.

Balanza de precisin 0.001 g
Agitador mecnico de tubos
Micropipetas de 1000 mL
Viales con tapa de 2 mL para autosampler
Columna capilar DB-23 fase reversa, 60 m, 0.25 mm i.d., 0.25

mm de film.
Tubo de vidrio tapa rosca de 10 mL

Reactivos:
ter de petrleo p.a.
Solucin de hidrxido de potasio en metanol 2 M
Estndar Supelco, mezcla de 37 steres metlicos de cidos
grasos.

c.

Metodologa:

ANALISIS INSTRUMENTAL DE PRODUICTOS

AGROINDUSTRIALES

METODO DE FAMES EN DETERMINACION DE ACIDOS

GRASOS:
La cromatografa es una tcnica de separacin. Por su gran
versatilidad y fcil manejo, su uso se ha difundido en diversos
campos de la investigacin cientfica y en la industria, es una
herramienta fundamental para determinar la calidad de materias
primas y productos lanzados al mercado.

Debido a la complejidad

de la estructura de

los cidos grasos y a la

dificultad

de

determinar
exactamente

la

composicin de una grasa mediante los

anlisis tradicionales, la cromatografa
de gases se ha convertido en una
herramienta indispensable para establecer el perfil de cidos
grasos. La cromatografa de gases es una tcnica en la que la
muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna
cromatogrfica, la cual e s un tubo empacado con algn polmero
lquido.
3.2.

PRODECIMIENTO

Doblar el papel de estao

con el objeto de contener
la muestra
Pesar
1g
de
nuestra
homogeneizada sobre un papel de
estao (tin foil) o cpsula de gel.

ANALISIS INSTRUMENTAL DE PRODUICTOS

AGROINDUSTRIALES

Colocar la muestra dentro del

horno de combustin y presionar
el botn ANALISIS.

Identificar la muestra en
la computadora e
ingresar tambin el peso.

El resultado del contenido de protena

se mostrar automticamente en el
software del equipo
CAPTULO IV

IV. CLCULOS, RESULTADOS Y DISCUSIN

4.1. CLCULOS Y RESULTADOS
#
1

2
3
4

5
6

7
8
9
1
0
1

Estndar

Masa

Certific
ado
5,5100

Calcul
ado
5,2965

EDTA LOT
1060

0,0503
00

EDTA LOT
1060
EDTA LOT
1060
EDTA LOT
1060

0,0503
00
0,0502
00
0,1000
00

5,5100

5,5856

5,5100

5,5679

5,5100

5,4870

EDTA LOT
1060
EDTA LOT
1060

0,1004
00
0,1500
00

5,5100

5,6045

5,5100

5,5044

EDTA LOT
1060
EDTA LOT
1060
EDTA LOT
1060
EDTA LOT
1060
EDTA LOT

0,1500
00
0,2003
00
0,2002
00
0,2001
00
0,2501

5,5100

5,5420

5,5100

5,5223

5,5100

5,5398

5,5100

5,5428

5,5100

5,4987

ANALISIS INSTRUMENTAL DE PRODUICTOS

AGROINDUSTRIALES

Error
%
3,8748
0
1,3722
0
1,0499
0
0,4171
9
1,7460
0
0,1022
5
0,5809
5
0,2234
2
0,5402
2
0,5949
3
-

Pico

rea de
pico
0,26577

En
peso
3,608
1

278,6
1
276,0
8
557,7
5

0,28074

3,608
1
3,615
3
1,814
9

574,7
6
852,7
1

0,57071

858,5
4
1146,
80
1151,
00
1150,
30
1424,

0,84717

260,5
2

0,27925
0,55631

0,84136

1,13000
1,13300
1,13310
1,40700

1,807
7
1,209
9
1,209
9
0,906
08
0,906
53
0,906
99
0,725

1060

00

1
2

EDTA LOT
1060

0,2501
00

5,5100

5,4286

0,2044
7
1,4775
0

80
1409,
50

66
1,38890

- Para la curva de calibracin de Hidrgeno:

1. Tomaremos el rea de pico para el eje x.
x= readepico
2. Para nuestro eje y tomaremos el producto de la masa con el calculado y
10 para obtenerlo en miligramos
y=MasaCalculado10
3. Obteniendo la siguiente tabla

HIDRGENO

x
rea de
pico
0.26577
0.28074
0.27925
0.55631
0.57071
0.84136
0.84717
1.13000
1.13300
1.13310
1.40700
1.38890

ANALISIS INSTRUMENTAL DE PRODUICTOS

AGROINDUSTRIALES

y
Masa*
Calculado*10
2.66413950
2.80955680
2.79508580
5.48700000
5.62691800
8.25660000
8.31300000
11.06116690
11.09067960
11.09114280
13.75224870
13.62578600

0,725
66

4.

CURVA DE CALIBRACIN PARA HIDRGENO

16.00
14.00
12.00
10.00
Calculado (miligramos)

8.00
6.00
4.00
2.00
0.00
0.2

0.4

0.6

0.8

1.0

rea de pico

Graficamos:

5. Obteniendo la ecuacin de calibracin:

y=+0.971603 x +0.00818845

ANALISIS INSTRUMENTAL DE PRODUICTOS

AGROINDUSTRIALES

1.2

1.4

1.6

CARBONO

Estndar

Masa

Certific
ado
41.020

Calcul
ado
40.961
0

EDTA LOT
1060

0.0503
00

EDTA LOT
1060
EDTA LOT
1060
EDTA LOT
1060

0.0503
00
0.0502
00
0.1000
00

41.020

41.287
0
41.178
0
40.979
0

EDTA LOT
1060

0.1004
00

41.020

40.867
0

EDTA LOT
1060

0.1500
00

41.020

40.832
0

EDTA LOT
1060

0.1500
00

41.020

40.772
0

EDTA LOT
1060
EDTA LOT
1060

0.2003
00
0.2002
00

41.020

41.021
0
41.010
0

3
4

41.020
41.020

41.020

ANALISIS INSTRUMENTAL DE PRODUICTOS

AGROINDUSTRIALES

Error
%
0.1440
6
0.6505
3
0.3856
9
0.1006
0
0.3737
5
0.4585
2
0.6040
9
0.0031
2
0.0232
4

Pico

rea de
pico
1.85680

En
peso
0.4846
6

3794.2
0
3771.0
0
7699.3
0

1.87190

0.4846
6
0.4856
2
0.2437
8

7723.2
0

3.74260

0.2428
1

11487.
00

5.60920

0.1625
2

11481.
00

5.60090

0.1625
2

15556.
00
15534.
00

7.54040

0.1217
1
0.1217
7

3756.4
0

1.86300
3.73790

7.53460

1
0
1
1
1
2

EDTA LOT
1060
EDTA LOT
1060
EDTA LOT
1060

0.2001
00
0.2501
00
0.2501
00

41.020
41.020
41.020

41.036
0
41.142
0
41.155
0

0.0387
6
0.2970
9
0.3290
8

15518.
00
19521.
00
19575.
00

7.53550
9.45430
9.45730

- Para la curva de calibracin de Carbono:

1. Tomaremos el rea de pico para el eje x.
x= rea de pico
2. Para nuestro eje y tomaremos el producto de la masa con el calculado y
10 para obtenerlo en miligramos.
y=MasaCalculado10
3. Obteniendo la siguiente tabla
X
rea de
pico
1.85680
1.87190
1.86300
3.73790
3.74260
5.60920
5.60090
7.54040
7.53460
7.53550
9.45430
9.45730

y
Masa*Calculado*1
0
20.603383
20.767361
20.671356
40.979000
41.030468
61.248000
61.158000
82.165063
82.102020
82.113036
102.896142
102.928655

4. Graficamos

ANALISIS INSTRUMENTAL DE PRODUICTOS

AGROINDUSTRIALES

0.1218
3
0.0974
74
0.0974
74

CURVA DE CALIBRACIN PARA EL CARBONO

120
100
80
Certificado *10 (miligramos)

60
40
20
0
1.0

2.0

3.0

4.0

5.0

6.0

rea de pico

5. Obteniendo la ecuacin de calibracin

y=+1.08315 x+0.0491821

ANALISIS INSTRUMENTAL DE PRODUICTOS

AGROINDUSTRIALES

7.0

8.0

9.0 10.0

NITRGENO
# Estndar

Masa

Certifi
cado
9.560

EDTA LOT 0.050

1060
300

EDTA LOT 0.050

1060
300
EDTA LOT 0.050
1060
200

9.560

EDTA LOT 0.100

1060
000
EDTA LOT 0.100
1060
400
EDTA LOT 0.150
1060
000

9.560

EDTA LOT 0.150

1060
000

9.560

EDTA LOT 0.200

1060
300
EDTA LOT 0.200
1060
200

9.560

1
0
1
1

EDTA LOT 0.200

1060
100
EDTA LOT 0.250
1060
100

9.560

1
2

EDTA LOT 0.250

1060
100

9.560

4
5
6

9.560

9.560
9.560

9.560

9.560

Calcul Error
ado
%
9.5176 0.443
74
9.5836 0.247
17
9.5539 0.063
82
9.5857 0.269
32
9.5901 0.314
61
9.5292 0.322
10
9.5455 0.151
32
9.5662 0.064
55
9.5559 0.043
18
9.5821 0.230
72
9.5438 0.169
72
9.5665 0.067
51

Pico
3.30
6

rea de En
pico
peso
0.49239 2.07
96

3.33
5
3.31
2

0.49583

6.58
6
6.63
0
9.83
1

0.98848

9.85
3

1.47780

0.69
735

13.1
85
13.1
67

1.97840

0.52
223
0.52
249

13.1
87
16.4
02

1.97970

16.4
75

2.47100

0.49329

0.99289
1.47520

1.97530

2.46520

2.07
96
2.08
37
1.04
6
1.04
19
0.69
735

0.52
275
0.41
824
0.41
824

- Para la curva de calibracin de Carbono:

1. Tomaremos el rea de pico para el eje x.
x= reade pico
2. Para nuestro eje y tomaremos el producto de la masa con el calculado y
10 para obtenerlo en miligramos.
y=MasaCalculado10
3. Obteniendo la siguiente tabla
x

ANALISIS INSTRUMENTAL DE PRODUICTOS

AGROINDUSTRIALES

rea de
pico
0.49239
0.49583
0.49329
0.98848
0.99289
1.47520
1.47780
1.97840
1.97530
1.97970
2.46520
2.47100

Masa*Calculad
o*10
4.7873528
4.8205508
4.7960578
9.5857000
9.6284604
14.2938000
14.3182500
19.1610986
19.1309118
19.1737821
23.8690438
23.9258165

4. Graficamos

CURVA DE CALIBRACIN PARA EL NITRGENO

30.0
25.0
20.0
Calculado (miligramos)

15.0
10.0
5.0
0.0
0.00

0.50

1.00

1.50

rea de pico

5. Obteniendo la ecuacin de calibracin para el nitrgeno

y=+0.967244 x +0.00247172
ANALISIS INSTRUMENTAL DE PRODUICTOS
AGROINDUSTRIALES

2.00

2.50

3.00

HARINA DE
PESCADO
Analizado por el equipo Dumas:
MUESTRA

MASA

C%

N%

15100156
(T1)
15100156
(T2)
15100156
(T3)
15100184
(T1)
15100184
(T2)
15100184
(T3)
15100227
(T1)
15100227
(T2)
15100227
(T3)
15100228
(T1)
15100228
(T2)
15100228
(T3)
15100236

0.2004

39.4690

10.814

PROTENA
S%
67.585

0.2003

39.375

10.828

67.676

0.2005

39.456

10.808

67.55

0.2002

39.151

10.785

67.407

0.2003

39.121

10.773

67.333

0.2002

38.966

0.739

67.122

0.2001

39.469

10.784

67.402

0.2002

39.579

10.907

67.168

0.2000

39.502

10.854

67.835

0.2000

39.748

10.855

67.842

0.2003

39.579

10.823

67.643

0.2000

39.588

10.846

67.786

0.2002

40.51

11.062

69.136

ANALISIS INSTRUMENTAL DE PRODUICTOS

AGROINDUSTRIALES

(T1)
15100236
(T2)
15100236
(T3)
15100237
(T1)
15100243
(T1)
15100243
(T2)
15100243
(T3)

0.2005

40.512

11.042

69.014

0.2000

40.213

10.982

68.637

0.2000

40.231

11.046

68.999

0.2001

39.026

10.867

67.922

0.2000

39.024

10.886

68.036

0.2004

39.183

10.904

68.148

Tabla resumen:

Masa
Nitrgeno
%
Protena %
Carbn %

Promed
io

Desviacin
estndar

0.2002
10.905

0.0002
0.1062

68.158
39.595

0.6641
0.4798

4.2. DISCUSIN

En 1989, la Heraeus Analytical Divisin en Hanau, Alemania,

predecesora de ELEMENTAR Analysensysteme, desarroll el primer
analizador por combustin en el rango de gramos. Ese fue el comienzo
del desarrollo del mtodo Dumas en los procedimientos instrumentales
estndar, tambin para la determinacin de protenas en alimentos y
forraje, material de plantas y suelos.
El mtodo Dumas (1833) es ms antiguo que el tradicional mtodo
Kjeldahl. Johan Gustav Christoffer Thorsager Kjeldahl, un cientfico
dans, describi en 1883 el mtodo de digestin de la muestra con cido

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AGROINDUSTRIALES

sulfrico caliente y concentrado seguido por una destilacin por vapor de

agua y la titulacin del amonaco formado.

Heraeus,

en

instrumentacin

Hanau, Alemania
analtica

su

ELEMENTAR

sucesor

directo

Analysensysteme

para

la

GmbH,

desarrollaron en 1989 el primer analizador Dumas por combustin para

macro muestras en el rango de gramos, y tendieron las bases para este
desarrollo. Para la determinacin de nitrgeno por el mtodo de Dumas
modificado, la muestra es calentada a alrededor de 1000 C en
atmsfera de oxgeno.
El nitrgeno de los compuestos (aminocidos) ser convertido a xido
de nitrgeno y nitrgeno molecular. Luego de la post oxidacin cataltica,
secado y limpieza del gas carrier, todos los xidos de nitrgeno son
reducidos a nitrgeno molecular en el agente reductor (cobre o
tungsteno) y transportado por el gas carrier a la celda de conductividad
(TCD) para la determinacin cuantitativa. La computadora calcula
automticamente el porcentaje de nitrgeno o, por medio de un factor de
conversin emprico, el contenido de protena cruda (considerando el
peso de la muestra).

Otros autores han evaluado los resultados obtenidos a lo largo de los

aos en los ensayos de aptitud de laboratorios. mediante los cuales se
obtienen las certificaciones de calidad analtica, y han demostrado que el
mtodo Dumas supera en un mximo de 1,4% el valor de Kjeldhal
(Thompson et al 2002).
Las pequeas diferencias entre los resultados obtenidos por distintos
autores, tienen relacin al tipo de muestras. Simonne et al (1997),
evaluaron ms de 100 tipos de muestras y concluyen que el mtodo
Dumas puede reemplazar al mtodo Kjeldahl para la determinacin
de nitrgeno total, entregando ambos mtodos, un valor confiable
de N total. Adicionalmente indican que para estimar el nitrgeno
Kjeldahl.Por su parte la AOAC, organismo internacional encargado de
desarrollar los mtodos oficiales de anlisis de laboratorio, public los

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AGROINDUSTRIALES

estudios de Miller et al (2007), quienes indican que el mtodo Dumas

entrega un 0,99% ms que el mtodo Kjeldahl.
4.3. CONCLUSIONES

Se llega a la conclusin que por el mtodo de DUMAS se obtiene

valores ms altos y precisos, tambin es ms rpido, menos
contaminante y ms fiable que por el mtodo de Kjeldahl.

La determinacin de protenas se realiza de una manera exitosa por el

mtodo de DUMAS ya que el contenido de nitrgeno estima a las
protenas.

Dumas requiere agentes reductores no agresivos ni venenosos como

cobre u xido de cobre y tungsteno, as como gases como helio o CO2 y
una cierta cantidad de oxgeno. No hay peligro en su manipulacin, ni
hay una costosa disposicin de residuos contaminantes.

Un sistema Dumas completo y totalmente automtico no es ms costoso

que un analizador Kjeldahl semi-automtico. Teniendo en cuenta el costo
de los bloques de digestin, campanas de extraccin, stock de
productos qumicos y la disposicin de residuos que deben ser
agregados al instrumento Kjeldahl para una productividad elevada, el
analizador Dumas cuesta an menos.

4.5 REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

https://bioquibi.webs.ull.es/practicas/2.pdf
http://jarevalo.webs.ull.es/guion.pdf
https://www.uam.es/docencia/qmapcon/QUIMICA_GENERAL/Practica_4
_Colorimetria_Ley_de_Lambert_Beer.pdf
https://es.wikipedia.org/wiki/Colorimetr%C3%ADa
https://lalitotowers.wordpress.com/color-colorimetria-y-ley-del-color/

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