Pontificia Universidad Catlica de Chile

Facultad de ciencias biolgicas

Bio136c
Integrantes: Alexandra Gatica; Camila Pacheco; Martina Prez;
Begoa Royo; Vanessa Vsquez

Deteccin de virus por PCR

En la actualidad existen diversos mtodos de estudio de las
macromolculas. En el caso de los cidos nucleicos, se encuentra la tcnica del
PCR. Entre los usos de este mtodo se encuentran la identificacin de mutaciones
genticas y la deteccin de virus como el VIH (SIDA) y el VHC (hepatitis C).
La reaccin en cadena de la DNA polimerasa o PCR (polymerase chain
reaction) es una tcnica utilizada con el fin de amplificar un segmento especfico
de DNA. De esta forma permite obtener millones de copias de la secuencia de
DNA especificada (Rodriguez & Barrera, 2004), que se pueden utilizar para
clonacin, secuenciacin y mutagnesis (Madigan et al, 2003). El proceso ocurre
mediante tres ciclos de variacin de temperatura. Para poder llevar a cabo el
proceso, es necesario contar con un fragmento de DNA (el que ser amplificado
para
su
posterior
estudio),
DNA polimerasa,
cebadores,
dNTPs
(desoxirribonucletidos trifosfatados), magnesio, una solucin buffer, agua y un
termociclador.
De acuerdo a Rodrguez & Barrera (2004), la reaccin consta en ciclos
repetitivos conformados cada uno por:
1. Desnaturalizacin del DNA (separacin de las hebras de DNA).
2. Alineamiento de partidores (unin del partidor con la hebra que da inicio a
la sntesis)
3. Extensin (sntesis del fragmento deseado, por medio de la DNA
polimerasa).
Suelen hacerse alrededor de 20-30 ciclos, incrementando as entre 10 6 y
10 veces la cantidad original de DNA disponible en un principio (Madigan et al,
2003).
Una de las principales caractersticas que hacen que este mtodo pueda
ser aplicado en diversos procedimientos, tales como la gentica, la microbiologa,
la criminalstica y hasta en el mismo desarrollo de la ciencia clnica es que otorga
una respuesta rpida y eficaz (Carrillo et al, 2012). Por medio de este mtodo se
puede obtener un sistema libre de clulas en pocas horas, comparado con el
sistema estndar de clonacin que requiere de varios das.
Entre sus usos ms comunes se encuentra la aplicacin de esta tcnica en
la medicina forense, en la que la PCR permite la identificacin de la huella
dactilar gentica de un individuo a partir de nfimas muestras de sangre o tejidos
(Alberts et al, 2010), lo que demuestra la sensibilidad de la tcnica. Por otro lado,
10

permite reconocer fragmentos de DNA sin importar la data de edad que estos
posean e inclusive notar cuando existe una mutacin en el material gentico
analizado.
Sin embargo, uno de sus usos ms importantes y destacados es que otorga
la posibilidad de monitorear e identificar infecciones virales y bacterianas.
Permitiendo la deteccin de enfermedades virales como el VIH, hepatitis B y C o
microbianas como lo es la meningitis.
En el caso del VIH, el PCR otorga una alternativa bastante sensible para su
deteccin. En este caso, el proceso se lleva a cabo a partir de muestras que, al
momento de ser amplificadas, requieren de la utilizacin de dos sets de primer.
Dichos cebadores son necesarios para poder reproducir una secuencia altamente
conservada del gen gag del VIH-1 (Universidad de Concepcin, s.f.).
En contraposicin al PCR, encontramos el enzimoinmunoanlisis de
adsorcin o comnmente llamado Test de Elisa el que tambin es utilizado como
un mtodo de deteccin de enfermedades infectocontagiosas, como es caso del
SIDA.
Tanto este test como el PCR, son las tcnicas clsicas utilizadas para la
deteccin del virus, sin embargo la diferencia radica en el mtodo utilizado.
En el Test de Elisa, la muestra de sangre extrada se enva a un laboratorio
donde se vincula el anticuerpo o antgeno objeto de estudio a una enzima. Si la
sustancia a estudiar est presente en la muestra, la solucin de la prueba se torna
de un color diferente (MEDLINEplus, 2012).
En resumen, el Test de Elisa detecta los anticuerpos del virus presente en
la sangre gracias a una enzima, y el PCR utiliza el mtodo de amplificacin de las
secuencias correspondientes al VIH.
En conclusin, la tcnica del PCR resulta bastante til en varios aspectos.
No slo permite amplificar secuencias de DNA, sino que tambin es posible la
aplicacin de este mtodo en beneficio de la salud humana, tal es el caso de la
deteccin de enfermedades que pueden afectar a un organismo. Es un proceso
rpido que cuenta con una variabilidad de usos.
Referencia Bibliogrficas
ALBERTS, Bruce, et al. Biologa molecular da clula. Artmed, 2010.
CARRILLO BONILLA, Lina Mara et al. Implementacin de un mtodo basado en PCR,
para el diagnstico de Ehrlichia spp., en caninos de Medelln (Colombia). Ces. Med. Vet.
Zootec. [online]. 2012, vol.7, n.2 [consultado el 2015-09-09], pp. 38-46 . Disponible en
http://www.scielo.org.co/scielo.php?pid=S1900-96072012000200005&script=sci_arttext
.
MADIGAN, M., MARTINKO, J., PARKER, J., BROCK,T., RODRGUEZ, C. & SNCHEZ,
M. Brock: Biologa de los Microorganismos. Captulo 10: Gentica Bacteriana, 10.17
Amplificacin del DNA: La Reaccin en Cadena de la Polimerasa. 10 Ed. Editorial
Pearson.312-314.
MEDLINEplus. ELISA/ inmunotransferencia para VIH/ ELISA [en lnea]. Actualizada: 14
octubre 2012. [Fecha de consulta: 5 septiembre 2015]. Disponible en:
https://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003332.htm

RODRGUEZ SNCHEZ, Iram Pablo; BARRERA SALDAA, Hugo A. La reaccin en

cadena de la polimerasa a dos dcadas de su invencin. Ciencia UANL, 2004, vol. 7, no 3
UNIVERSIDAD DE CONCEPCIN. Virus Inmunodeficiencia Humana VIH-1 por Nested
PCR [en lnea].Actualizada: s.f. [ Fecha de consulta: 6 septiembre 2015]. Disponible en:
http://www.diagmolecular.udec.cl/files/vih.pdf