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EFECTODELATEMPERATURA
AlaumentarlaTseaceleran2procesosindependientes:lavelocidaddelareaccinylainactivacintrmicadelE.Es
decir,sibienesnecesariounaumentodeTparaquelaactividadenzimticaaumente,tendremospuntosptimosa
partirdeloscualeslaactividadenzimticadisminuir.
Laactividadenzimticaresideenlaestructuraterciaria,demodoquesiaumentamoslatemperaturaapartirdelpunto
ptimo,elEabsorbedemasiadaenerga,alterandolaestructuraterciariay,portanto,inhibiendolaactividad.
EFECTODELATSOBRELASKEQ
ElefectodelaTsobrelasconstantesdeequilibriodeunareaccin,vienedadoporlaecuacindeVantHoff:
ln
ln
La tambinpuedeobtenersede:
log
1
2,3
log
2,3
1
2,3
2,3
eslaconstantecataltica,aunquetambinpuedeemplearselavelocidadmxima.
Enestecaso
Conocidaslaentalpayentropa,hallamoslaenergalibredeGibbs:
Otromododehallarlaentalpayentropason:
log
Sihacemoslarepresentacinde
(10,32
2,3
10,32
2,3
VS tendremosunarectaconpendientenegativa(
)yunpuntobiguala
).
ECUACINDEARRHENIUSYEA
Porlateoradelascolisionestenemosqueunareaccinqumicade
pendedelasfrecuenciasdelascolisiones,ennuestrocasoentreSy
E.Adems,necesitaremosunaenergamnimaparaquetengalugar
unareaccin(superelamontaaenergtico),conocidacomoenerga
deactivacin( ).
Laconstantedevelocidaddeunareaccines:
Integrando:
log
Donde
2,3
log
Representandolog
1/ ,elpuntodecorteeslog ylapendientees
sentamoslavelocidadfrentea1/T,yobtenemosuna
.Generalmente,enelgrficorepre
,quetienemnimasvariaciones.
Qusucedeconladesnaturalizacindelenzima?Quenosaparecerndospendientes(generalmenteunapositivay
unanegativa),indicndonosqueladesnaturalizacindelenzimarequieredeunaenergadeactivacin(mspositiva
queladereaccin).Tambinsucedequehayenzimasquetienendosactividadesdiferentesenfuncindelatempe
ratura,loqueserepresentaendospendientes(con y ).
EFECTOSOBRELASVELOCIDADESDELASREACCIONESCATALIZADASPORENZI
MAS
PARMETROSAFECTADOSPORT
Cambiosenlaestabilidad
Solubilidaddelosgases
pHdeltampn
AfinidaddeEporlosligandos(S,AoI)
Reaccionesquecompitenentres
Ionizacindegruposprototrpicosdelsistema(ES)
AfinidaddelEyS
VelocidaddeconversindelSaP
GradodeasociacindeEmultipeptdicos
ESTABILIDADDELOSE
LaestabilidaddeunEestenfuncinde:
T
pH
Fuerzainicaynaturalezadeltampn
PresenciaoausenciadeS/cofactores(ThompsonySullivandijeronquelosStiendenaprotegeralosEdela
inactivacin)
[E]
Otrasprotenasdelsistema
Tiempodeincubacin
PresenciaoausenciadeIyA
Todosestosfactoreshandeestarcontroladosy,siemprequerealicemosalgnensayo,tendremosquemantenerlas
condicionesideales.
LosEsonmsestablesabajasTgeneralmente,aunquehayenzimasquesonmenosestablesa10Cquea30C.
Ejemplos:
Lacatalasadehgadodebueyesinestablea35C.
Laribonucleasaresistea100C.
Laadenilatokinasapuedehervirsesinperderactividad
Lafosfatasaalcalinaylaperoxidasavegetalsonmsestablesalcalor(estandoapH7).Estosenzimaseemplea
enproductoslcteos.
2
Existeunarelacinentreeltamao,complejidadysusceptibilidadalcalordelenzima.Porejemplo,enzimasdePM
bajo(1250kDa)suelentenerunacadenapolipeptdicaysuelensermsresistentesaltratamientoporcalor;mien
trasqueenzimasdeestructuramsgrandeycomplejasonmenosresistentealcalor.
Adems,cuandoelenzimaseencuentraenextractocrudoesmuchomsestablequeestandopura,yaquelaconcen
tracindeenzimatotaldisminuye.Generalmente,cuandolaprotenaestyapurificada,sueleaadirsealgunapro
tenainerte,comolaBSAogelatinascomerciales,queaumentansuproteccin.
EFECTODELATENLAESTABILIDAD
Generalmente,apartirdeuntiempodeterminado,elenzimapierdelaactividad.Porello,definimoslavidamediadel
enzimacomoeltiempoqueelenzimatardaenperderel50%delaactividadmxima.Paraello,realizamoselsiguiente
experimento:trabajandoaaltastemperaturas,disminuimosla[E]activay,portanto,tendremosmenoractividad.Por
tanto,medimoslaactividadenzimticaenfuncindeltiempo(medira5y30,porejemplo)adiferentestemperatu
ras.
Sitrabajamosatiemposbajos,observaremosqueapartirdeunpunto,laactividadserlinealconeltiempo,peroa
partirdeunpuntodeT,observaremosunasvelocidadesinicialesaltas,peroenmuypocotiempolaactividaddismi
nuir.EstoesporquedisminuyelacantidaddelenzimaaldesnaturalizarseporlaTyeltiempo.
LaenergadeactivacinparatransformardeSaPvaraentre6000y15000cal/mol;mientrasquelasdedesnaturali
zacinoscilanentre50000y150000cal/mol.Otrodatoimportanteesqueaunqueelenzima,porejemplo,tengala
actividadmximaa30C,sesueletrabajara25o27C,porquelavelocidaddedesnaturalizacinesmuchsimomayor
a30quea25C.
OtroensayoquesiempresehaceesincubarelenzimaconelSavariastemperaturas.Seobservalaactividaddel
enzimaconeltiempo.Generalmente,aunrangobajodetemperaturaslaestabilidadesdel100%y,apartirdeun
punto,lapendienteconlaquecaelaestabilidadaumentarpidamente.
INACTIVACINREVERSIBLEDELE:
Paramostrarsielenzimasufreinactivacinreversible,calentamoselenzimaaunatemperaturamoderadamentealta,
ymedimoslavelocidaddereaccin.Acontinuacin,guardamosatemperaturasmsbajasymedimoslaactividadala
T ptima. Si la inactivacin fuera irreversible, la velocidad debera ser la misma que cuando se calent el enzima,
mientrasquesifuerareversible,laactividaddeberasermayorquealdesnaturalizarla.
Sinembargo,hayquetenerencuentaque,independientementedelareversibilidaddelenzima,siaumentamosde
masiadolatemperatura,tendremosinhibicinreversible.
CAMBIOSENLASOLUBILIDADDELOSGASESCONLAT
Lapolifenoloxidasa,lipooxigenasayglucosaoxidasatienencomosus
tratodelareaccinelO2.Siaumentamoslatemperaturadelamez
cla,alteramoslasolubilidaddelO2enelagua,yseinactivalareaccin.
EFECTODELATSOBRELAVELOCIDADDELAREACCIN
UnmododemedirlaactividadenzimticaeslaQ10,queeselcoefi
cienteconelquelavelocidaddelareaccinaumentacondiezgrados
msdetemperatura.Generalmenteestecoeficientees2enmuchos
enzimas,esdecir,quelaactividadseduplicacuandoaumentamosla
temperaturaen10grados.Sinembargo,cuandopasemoslaTptima,
elcoeficientedecrecer.
Estecoeficientevienedeterminadoporlafrmula: