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UNIVERSIDAD NACIONAL PEDRO RUIZ GALLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS

I I INFORME DE INVESTIGACION
CDIGO DEL PROYECTO.
Palabras claves:
Mortalidad - Prodiplosis - Heterorhabditis

I. ASPECTO INFORMATIVO
I.1. Ttulo del Proyecto :
Mortalidad de pupas de Prodiplosis longifila Gagn mosquilla de los
brotes (Dptera Cecidomyiidae), por el parasitismo de Heterorhabditis
sp (Nematoda: Rhabditidae) en el cultivo de Lycopersicon esculentum
Mill tomate en Lambayeque.
2.0. Personal Investigador:
2.1. Autor : Dra. Carmen Caldern Arias
Docente Principal del Centro de investigacin de la FCCBB
Telfonos: 074-224499- 995702150
Email: Carmen cal_2@hotmail.com
2.2. Colaboradores: Mara Elena Neyra y Darwin Prez de la Estacin
Experimental Agraria Vista Florida del Instituto Nacional de Innovacin
Agraria (INIA) . Lambayeque. Denis Pacheco, alumno de la FCCBB
3.0. Resolucin de Aprobacin:
4.0. Tipo de Investigacin:
4.1. De acuerdo al fin que se persigue
: Aplicada
4.2. De acuerdo al diseo de investigacin
: Experimental
5.0. Rgimen de Investigacin:
5.2. Orientada
rea
: Desarrollo Agrcola.
Lnea
: Sanidad vegetal (Entomologa Agrcola)
Programa : Prevencin, diagnstico, tratamiento y control de plagas.
6.0. Localidad e institucin donde se desarrollar el proyecto:
6.2. Institucin: Laboratorio de Ciencias Ambientales de la FCCBB UNPRG.
Laboratorio de la Estacin Experimental Agraria Vista Florida del
Instituto Nacional de Innovacin Agraria (INIA). Lambayeque.
7.0. Duracin del Proyecto
: 12 meses
8.0. Fecha de Inicio
: 15 Marzo del 2014
9.0. Fecha de trmino
: 15 de Marzo del 2015

I.- INTRODUCCION
El cultivo Lycopersicon esculentum Mill tomate, es la verdura de mayor
consumo en el mundo, con una produccin mundial al ao que llega a los 130
millones de toneladas. (FAO, 2011)). En aos recientes, la demanda de tomate
est creciendo aceleradamente no solamente en los pases desarrollados sino
tambin en los pases emergentes y en vas de desarrollo, porque los valores
nutritivos del tomate (minerales, licopeno, entre otros) estn llamando la atencin
del mundo (FAO, 2011).
En el Per, la produccin de tomate est en alrededor de 160 mil t, en una
superficie de 5 mil ha. El rendimiento promedio nacional se mantiene en alrededor
de 30 t/ ha, pero vara mucho entre regiones: en Ica, por ejemplo, se alcanza
rendimientos de 80 t/ha (Ica y Lima concentran cerca del 70% de la produccin de
tomate).Las mayores zonas de produccin de tomate en el Per son: Lima
(Rmac, Chilln, Lurn), La Libertad, Ica, Huaral-Chancay, Barranca, Huacho,
Caete, Arequipa y Lambayeque. El manejo de sus plagas, es de mucha
importancia para poder obtener los rendimientos deseados, ya que un descuido
en el control de las poblaciones, puede llegar a causar daos econmicos
irreparables (Valarezo et al., 2003).
Prodiplosis longifila mosquilla de los brotes (Dptera Cecidomyiidae), es
un insecto plaga que desde sus primer reporte en 1986 fue considerado problema
entomolgico de cuidado y desde entonces se ha convertido en una limitante para
el desarrollo del cultivo de tomate (Lycopersicon esculentum Mill) ya que en
muchas zonas, es el principal problema entomolgico, pudiendo ocasionar
prdidas hasta del 100% de la produccin (Valarezo et al., 2003). Su complejidad
es tal, que para su control utilizan indiscriminadamente productos qumicos que
promueven el alto grado de contaminacin del ambiente y de los alimentos,
deterioro del equilibrio biolgico, desarrollo de resistencia y frecuentemente la
prdida de rentabilidad que induce inclusive al abandono del cultivo (INIAP,
1989).
En el Per se reporta a Prodiplosis longifila mosquilla de los brotes desde
1979, afectando frutos de tomate, alfalfa y papa (Daz,1981). Posteriormente en
el valle de Caete, se observ resistencia por el uso indiscriminado de
insecticidas que se utilizaba para el control de mosca minadora en papa . A
partir de este momento, la mosquilla de los brotes tom mucha importancia, y se
convirti en un insecto plaga muy daino en los cultivos de alfalfa, papa,
marigold y esprrago; ubicndose en toda la costa de Tacna a Tumbes ( Bayer,
1995).
Se han realizado diversos estudios
mosquilla de los brotes; sin embargo,

sobre Manejo Integrado de esta


debido al uso indiscriminado de

insecticidas, su control an sigue siendo difcil. Mujica y Cisneros (1997) ,


sealan, que la proteccin de los controladores biolgicos, debe ser una labor
integral y prioritaria dentro de un Programa de Manejo Integrado
para
Prodiplosis longifila ; indican as mismo, que se deben realizar trabajos
orientados a la bsqueda de parasitoides u otros controladores biolgicos con
posibilidades de crianza masiva, as como a la proteccin de los enemigos
naturales para evitar el uso indiscriminado d de insecticidas de amplio espectro.
Los nemtodos entomopatgenos de las familia Heterorhabditidae podran
constituir una alternativa ecolgica importante para el control de Prodiplosis
longifila ya que son considerados agentes importantes de control biolgico de
muchas plagas por varios aspectos: Sus larvas infectivas juveniles del tercer
estadio (J3 o IJ) buscan activamente insectos hospederos en el suelo (Dix et
al.1991). Son los nicos evolucionados que han desarrollado la capacidad de
relacionarse con una bacteria simbionte que mata al hospedero rpidamente.
Presentan alta virulencia, facilidad para ser reproducidos masivamente ya sea in
vivo e in vitro (Quinteros 2003; CENICAA 2004). Atacan a varias especies de
los rdenes Thysanura, Coleptera, Lepidptera, Orthptera y Dptera (Kaya &
Gaugler 1990).

Los reportes sobre control de


Prodiplosis longifila Gagn mosquilla de los
brotes con los nematodos Heterorhabditis sp ,son escasos . Castillo (2001),
en su trabajo sobre Manejo Integrado de Prodiplosis longifila en el cultivo de
Asparagus officinalis, en CHAVIMOCHIC- TRUJILLO, reporta a Heterorhabditis
parasitando a Prodiplosis lognifila, pero no existen datos consistentes, referente a
este trabajo.
En el Departamento de Lambayeque, en la zona de Monsef, Callanca y
Reque se cultiva tomate para abastecer a los mercados de todo el Departamento.
Los agricultores realizan hasta 15 aplicaciones por campaa (Caldern, 2010)
para el control de plagas en tomate, siendo Prodiplosis longifila Gagn mosquilla
de los brotes o caracha , una de las de mayor importancia econmica. El
nemtodo entomopatgeno Heterorhabditis sp. presente, en nuestros campos
agrcolas de Lambayeque, podra constituir una alternativa ecolgica promisoria
para el control de esta plaga por lo que es importante investigar al respecto.
Esta problemtica , nos llev a plantearnos la siguiente hiptesis y los siguientes
objetivos especficos:
Hiptesis:
Heterorhabditis sp (Nematoda: Rhabditida) por su parasitismo, s produce la
mortalidad de pupas de Prodiplosis longifila mosquilla de los brotes (Dptera
Cecidomyiidae) en el cultivo de Lycopersicon esculentum Milltomate , en

condiciones de laboratorio de la Estacin Experimental Agrcola Vista Florida- INIA


. Lambayeque.
Objetivos especficos:
1.-Recoleccin de larvas y pupas estaba crianza de Prodiplosis longifila
mosquilla de los brotes (Dptera Cecidomyiidae) en el cultivo de Lycopersicon
esculentum Milltomate para obtener la poblacin de pupas en condiciones de
laboratorio de la Estacin Experimental Agrcola Vista Florida- INIA. Lambayeque.
2.-Evaluar si la mortalidad de pupas de Prodiplosis longifila mosquilla de los
brotes (Dptera Cecidomyiidae) son ocasionadas por el parasitismo de
Heterorhabditis sp (Nematoda: Rhabditida) en condiciones de laboratorio de la
Estacin Experimental Agrcola Vista Florida- INIA . Lambayeque.
mejorarlo

II.- MARCO TERICO

2.1. Antecedentes del Problema


Desde hace muchos aos, se han realizado estudios importantes en todo el
mundo utilizando nematodos como una alternativa para reducir el uso de
plaguicidas. Lindegren y Vail en 1986, analizaron la susceptibilidad de la mosca
de la fruta Ceratitis capitata, D. curcubitae y de la mosca oriental de la fruta D.
dorsalis a Steinernema feltiae, en condiciones de laboratorio y encontron una
mortalidad de larvas que vari del 92% al 9% para Ceratitis capitata, 85% para D.
curcubitae y de 86 % para D. dorsalis. As mismo, Lindegren et. al. (1990), bajo
condiciones de campo encontraron una mortalidad significativa al evaluar el
parasitismo causado por S. feltiae en prepupas de Ceratitis capitata usando
concentraciones de 5000, 1500, 500 y 150 juveniles infectivos por cm 2, teniendo
como resultado una CL50 de 38 nematodos / cm 2 en un rea superficial del
suelo.
Hara et al. ( 1993) , investigaron tambin bajo condiciones de laboratorio
con 20 especies de Esteinermatidos y Heterorhabditidos contra la larva de la
mosca minadora, Liriomyza trifolii (Burgess) Agromyzidae. En los resultados
obtuvieron un control que vari de 48 a 98 % donde carpocapsae mostr ser el
nematodo ms patgeno.Esta forma de control se plantea como una opcin para
prevenir la resistencia de Liriomyza trifolii a los plaguicidas.

Resultados similares fueron obtenidos por LebecK et al. , (1993), quienes


sealan que S. carpocapsae caus el 93.3% de mortalidad de Liriomyza Trifolii,
adems mencionan que a excepcin de la tercera etapa larvaria, en todas las
etapas de la plaga, S. carpocapsae fue capaz de reproducirse.
En el Per debido a la resistencia de las plagas a los plaguicidas se siguen
buscando alternativas ecolgicas que permitan reducir las prdidas econmicas
por los daos ocasionados. Alczar et. al (2013
) , han realizado trabajos
utilizando nematodos Heterorhabditis indica, resultando patognico a larvas de
mosca minadora Liriomyza huidobrensis en laboratorio, invernadero y campo. Sin
embargo es importante conocer tambin su efecto sobre parasitoides de la mosca
minadora. En los estudios realizados en el Centro Internacional de la Papa .Lima
se encontr que la la aplicacin de nematodos redujo la poblacin de mosca en
un 98%, Chysocharis flacilla pudo parasitar larvas de la mosca despus de la
aplicacin de nematodos y la proporcin del parasitismo no se vio afectada por la
aplicacin de nematodos para el control de mosca minadora en papa.
Castillo (2006), en su trabajo sobre Manejo Integrado de Plagas en el
cultivo de esprrago registra a Heterorhabditis atacando a la plaga de Prodiplosis
lognifila Gagnen en la Irrigacion de CHAVIMOCHIC de la Libertad, sin
embargo en el departamento de Lambayeque no existen registros de control de
Prodiplosi lognifilla con Heterorhabditis.
2.2. Base Terica
Los nemtodos entomopatgenos de las familias Heterorhabditidae y
Steinernematidae son considerados agentes importantes de control biolgico por
varios aspectos: Sus larvas infectivas juveniles del tercer estadio (J3 o IJ) buscan
activamente insectos hospederos en el suelo (Dix et al.1991). Son los nicos
evolucionados que han desarrollado la capacidad de relacionarse con una
bacteria simbionte que mata al hospedero rpidamente. La bacteria pertenece a la
familia
Enterobacteriacea y se
conocen principalmente dos gneros
Xenonorhabdus en asociacin con Steinernematidae y Photo-rhabdus con
Heterorhabditidae.
Presentan alta virulencia, facilidad para ser reproducidos masivamente ya
sea in vivo e in vitro (Quinteros 2003; CENGICAA 2004).
Las especies y cepas nativas de Heterorhabditidos y Steinernematidos han
sido aisladas del suelo y de insectos infestados en muchas partes del mundo tales
como los pases de Mxico, Colombia, Estados Unidos y ocho pases del
continente europeo.
Gonzles (1998) desarrollaron el mtodo para recuperar nematodos
parsitos de insectos de muestras de suelo, con larvas de la polilla mayor de la
cera G. mellonella. Los resultados de extensas inspecciones utilizando ste

mtodo, han demostrado que estn ampliamente distribuidos y son comunes en


todos los continentes (Poinar 1990).
Segn, Timper et al.,1988;Kaya y Gaugler,1993; YKaya,1993, los nematodos
de las familias Steinernematide y Heterorhabditidae, poseen los atributos de un
agente de control biolgico ideal,teniendo en cuenta que no afectan
adversamente a los animales, organismos no objetivos, plantas y tampoco
contaminan el ambiente.Por su distribucin geogrfica, Heterorhabditis es ubicuo
y sus especies se encuentran presentes en todo el mundo .Por el rango de
hospederos, atacan a varias especies de ordenes Thysanura, Coleptera,
Lepidptera, Ortptera y Dptera (Gaugler y Kaya, 1990; Kaya,1990); adems,
slo en Amrica Latina alrededor de 100 especies de 11 rdenes de insectos son
susceptibles a estos nematodos (Poinar,1979).Las larvas del tercer estadio juvenil
constituyen una forma especializada para sobrevivir, dispersarse e invadir al
hospedero(Kaya y Gaugler,1993). Estos nematodos pueden ser producidos en
masa, aplicados con un equipo convencional, y son tambin compatibles con el
uso de insecticidas qumicos (Grewal et al, 2001)

III.-

METODOLOGIA.-

La metodologa se ha diseado, de acuerdo a los objetivos trazados en la


presente investigacin y en esta primera parte del desarrollo del proyecto se ha
est cumpliendo con el desarrollo de la metodologa del primer objetivo que es:

3.1. Crianza masiva de Prodiplosis longifila mosquilla de los brotes


(Dptera Cecidomyiidae) en el cultivo de Lycopersicon esculentum
Milltomate para obtener la poblacin de pupas en condiciones de
laboratorio de la Estacin Experimental Agrcola Vista Florida- INIA.
Lambayeque
La crianza de la plaga de Prodiplosis lognifila se est realizando en el laboratorio
de Biotecnologa de la Universidad Pedro Ruiz Gallo Lambayeque para lo cual se
estn obteniendo los siguientes resultados:
RESULTADOS.Las muestras de larvas de Prodiplosis longifila caracha , se colectaron de
diferentes campos de cultivo del distrito de Reque, Lambayeque (Figura 1), siendo
su ubicacin geogrfica 065200 latitud Sur y 794927 longitud Oeste . Estos
campos, estn sembrados con Lycopersicum sculentum tomate (fig: 2), de

donde se han obtenido las larvas para ser transportadas al laboratorio


biotecnologa y control integrado de plagas de la

Universidad Nacional Pedro

Ruiz Gallo en Lambayeque.


En la figura 3, se presentan los frutos de tomates infestados por larvas de la
caracha , en donde se puede observar el dao ocasionado por este insecto.

Figura 1. Ubicacin geogrfica de Reque Lambayeque Per

Figura 2. Campo cultivado con Lycopersicon sculentum tomate en


Reque, donde se colectaron larvas
de Prodiplosis lognifilia Caracha.

Figura 3 a.- Frutos de Lycopersicon sculentum tomate en donde se


observan las larvas
de Prodiplosis lognifilia Caracha.

. REPRODUCCIN DEL NEMTODO ENTOMOPATGENO Heterorhabditis


bacteriophora EN LABORATORIO.
Para la aplicacin de los nematodos en campo, se tuvo que realizar
primero, la reproduccin de estos NEP en Laboratorio, siendo este el Laboratorio
de crianza de la Estacin Experimental Vista Florida del Instituto Nacional de
Innovacin Agraria (INIA) - Chiclayo; para lo cual, se inici la produccin con la
cepa de Nemtodos Entomopatgenos (NEP) Santa Rosa, a la cual llamaremos
solucin madre, otorgada por SENASA - Lambayeque (originalmente de HuaralLima), siguiendo la metodologa de la Figura 6

Tcnica in vivo para obtener Nemtodos Entomopatgenos

La Tcnica in vivo fue propuesta por Kaya & Stock (1997) que a la vez
se modific en la presente investigacin con referencia a la metodologa utilizada
por Casusol & Neira, 2011.
Se coloc en la base de un taper plstico BASA N5 dos hojas de
papel toalla, con la ayuda de una jeringa hipodrmica de 20 mL, se esparci
uniformemente el 50% de la solucin madre (con unos 20,000 NEP) (Figura 7. a);
luego se colocaron 500 larvas del ltimo estado de Galleria mellonella
(brindadas por el Laboratorio de Insectos tiles de la Estacin Experimental Vista
Florida INIA-Chiclayo) (Figura 7. b), las mismas que fueron cubiertas por otras 2
hojas de papel toalla y finalmente se esparci el 50% de la solucin madre
restante (Figura 7. c).

Finalmente se tap hermticamente el taper (Figura 7. d) y se


acondicion a temperatura ambiente (25C y 85%HR recomendadas por Kaya
&Stock, 1997); a partir del quinto da se observ la infestacin de las larvas de G.
mellonela por NEP de acuerdo al cambio de color de las larvas de cremoso a
color rojo o marrn rojizo. Como se puede observar en la Figura 8, el cambio de
color de Galleria mellonella por la presencia de los Nemtodos Entomopatgenos
(NEP) en su interior.

Mtodo estndar para colectar juveniles infectivos (JI)


Despus de 11 das las larvas de Galleria mellonella muertas fueron

separados y acondicionados en trampas White (modificadas Casusol & Neira,

2011). Estas trampas consistieron

de un taper BASA N5con un soporte de

plstico en el fondo de ste, sobre el cual se coloc una rejilla de plstico, y


encima de sta las larvas infestadas por NEP, adems se agreg 150 mL de agua
destilada en el fondo del taper. Los juveniles infectivos decantaron en el agua
destilada y fueron colectados para su posterior conteo (Figura 9).

2.3.5.3.1. Multiplicacin de los Nematodos Heterorhabditis sp.


Crianza de Galleria mellonella
Se realizar la crianza de Galleria mellonella Polilla de la cera con el
propsito de disponer de larvas en las cuales se realizar el aislamiento y
multiplicacin de los Nemtodos Entomopatgenos (Bedding & Akhurst,
1975; Kaya & Stock, 1997).
Aislamiento y multiplicacion del nematodo entomopatgeno
Heterorhabditis sp.
Los nematodos aislados estn representados
por nematodos
entomopatgenos nativos del Gnero Heterorhabditis (Heterorhabditis sp)
aislado del Distrito de Reque, Provincia de Chiclayo, Departamento de
Lambayeque. Se podr trabajar con estos nematodos gracias al apoyo de la
Ing. Mara Elena Neyra Espejo y al bilogo Edgar Darwin Prez Tesn del
Instituto Nacional de Innovacin Agraria-Estacin Experimental Agraria Vista
Florida-Lambayeque, Per (INIA-EEA Vista Florida).
Las larvas de Galleria mellonella afectadas por el nematodo de gnero
Heterorhabditis se distinguen por presentar una coloracin rojiza oscura
(Bedding & Akhurst, 1975). Los nematodos seleccionados para la realizacin
del presente trabajo sern producidos en larvas de ultimo instar de Galleria
mellonella a 23 C, luego cada larva afectada por nematodos se lavar con
agua destilada y se recuperarn los nematodos en trampas White de
acuerdo a la metodologa descrita por Kaya & Stock (1997).Los juveniles
infectivos sern almacenados en agua con formaldehido al 0.01% a 10 C
durante 5-7 das y un da antes de su inoculacin sern aclimatadas a 23 C.
Cuantificacin de Nematodos y Conservacin
Para el contaje de los nematodos se utilizar el mtodo de la dilucin
volumtrica de Lecuona , citado por Mayta, 2008.Se colocar con una
micropipeta 10 l de la suspensin inicial en una placa de Petri (5cm de
dimetro) rayada o dividida y se realizar el conteo directo de los nematodos
al estereoscopio. Este procedimiento se repetir tres veces. La
concentracin de nematodos se determinar mediante la siguiente formula:
A=V.a/v
Donde:

A = numero de nematodos en la solucion


a = numero de nematodos en la muestra
V = volumen de la solucin
v= volumen de la muestra
Respecto al almacenamiento de los nematodos,los juveniles infectivos
obtenidos en las trampas White sern vaciados en un vaso de precipitacin y
luego se agregar agua destilada.Luego los JI concentrados en agua
destilada sern absorbidos por esponjas rectangulares y almacenados en
bolsas de polietileno.

Figura 3 b.- Frutos de Lycopersicon sculentum tomate en donde se


observa el dao
por Prodiplosis lognifilia Caracha.

Las larvas colectadas en el campo, posteriormente fueron trasladadas al


laboratorio y fueron acondicionadas en jaulas (figura 4), para su posterior
recuperacin como pupas, que luego transformadas en adultos logren la
oviposicin.

No se pudo lograr la cpula en laboratorio, quizs porque las condiciones


ambientales no fueron las adecuadas, por eso hemos optado por trabajar a
campo abierto en donde reciban directamente los rayos solares, este trabajo se
sigue realizando y se presenta en la figura 5

Figura 4 .- Larvas de Prodiplosis lognifilia Caracha acondicionadas en


el laboratorio

Figura 4 .- Plntulas de Lycopersicon sculentum acondicionadas en campo


abierto.

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Tesis para obtener el Grado de Ingeniera Agrnoma. Facultad de Ciencias Agrarias
de la Universidad de Guayaquil.

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