La electroforesis es una tcnica para la separacin de molculas segn la movilidad de stas en un campo

elctrico.1 La separacin puede realizarse sobre la superficie hidratada de un soporte slido (p. ej.,
electroforesis en papel o en acetato de celulosa), a travs de una matriz porosa (electroforesis en gel), o bien
en disolucin (electroforesis libre). Dependiendo de la tcnica que se use, la separacin obedece en distinta
medida a la carga elctrica de las molculas y a su masa.
La electroforesis se usa en una gran mayora en la materia del ADN recombinante ya que nos permite saber la
carga que poseen los polipptidos, y separar los diferentes polipeptidos resultantes de las variaciones del
experimento del ADN recombinante. La variante de uso ms comn para el anlisis de mezclas de protenas o
de cidos nucleicos utiliza como soporte un gel, habitualmente de agarosa o de poliacrilamida. Los cidos
nucleicos ya disponen de una carga elctrica negativa, que los dirigir al polo positivo, mientras que las
protenas se cargan al unirse con sustancias como el SDS (detergente) que incorpora cargas negativas de una
manera dependiente de la masa molecular de la protena. Al poner la mezcla de molculas y aplicar un campo
elctrico, stas se movern y debern ir pasando por la malla del gel (una red tridimensional de fibras
cruzadas), por lo que las pequeas se movern mejor, ms rpidamente. As, las ms pequeas avanzarn ms
y las ms grandes quedarn cerca
Electroforesis Capilar (CE)
La electroforesis capilar es una tcnica alternativa de la electroforesis convencional y surge debido a que la
velocidad de separacin y resolucin de los compuestos mejora a medida que aumenta el campo elctrico
aplicado. Esta afirmacin no nos permite aumentar el potencial, aun sabiendo que existe una dependencia
directa de ste con el campo elctrico. Esto se debe a que el calentamiento de Joule aumenta hasta afectar la
calidad de la separacin. Para solucionar esta dificultad es que se realiza la electroforesis en un tubo capilar
con un dimetro interno inferior a 0,1 mm y una longitud de 50 cm a 1 m. Esta tcnica est representada en el
siguiente esquema
:
El mecanismo de separacin est basado en las relaciones carga/masa de los analitos. Su utilidad est en la
separacin de protenas y pptidos entre otras sustancias.
Entre las ventajas que ofrece la electroforesis capilar se puede apuntar que da lugar a separaciones con
volmenes de muestra extraordinariamente pequeos (de 0,1 a 10 nL), en contraste con la electroforesis
convencional en la cual se emplean volmenes de muestra en el orden de los L, con una elevada resolucin y
rapidez. Ofrece adems mayor facilidad y velocidad que la cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC).
Esta tcnica elimina el problema de los solventes de la HPLC, la toxicidad de los mismos y su costo, pues
emplea soluciones acuosas en su gran mayora con muy baja concentracin inica, incorpora los principios de
la automatizacin a travs de un hardware creado especialmente con un software altamente optimizado,
aunque
la
reproducibilidad
en
el
anlisis
cuantitativo
es
peor.
Como las especies separadas eluyen de uno de los extremos del capilar, se pueden utilizar detectores
cuantitativos como los empleados en HPLC. Como resultado se obtiene un electroferograma con picos
caractersticos de cada compuesto separado. En realidad ambas tcnicas son complementarias al basarse en
mecanismos de separacin diferentes.
Podemos
diferenciar
varios
tipos
de
electroforesis
capilar:
La electroforesis capilar en gel combina la tcnica de electroforesis con la cromatografa de reparto. Permite la
separacin en funcin de la migracin electrofortica y tambin en funcin del peso molecular de las
muestras. Se lleva a cabo en una matriz polimrica con estructura de gel poroso, cuyos poros contienen una

mezcla tampn donde ocurre la separacin. Estos geles estn contenidos en un tubo capilar. Los geles
utilizados
son
tambin
de
agarosa
y
poliacrilamida.
Electroforesis capilar de zona: es una de las tcnicas ms importantes y ms utilizada debido, probablemente a
su simplicidad y elevado poder de separacin. Est basada en la separacin de los analitos segn la relacin
carga/tamao.
En esta tcnica la composicin del tampn es constante en toda la zona de separacin. El potencial aplicado
hace que los diferentes componentes inicos de la mezcla migren cada uno segn su propia movilidad y se
separen en zonas que puedan estar completamente resueltas o parcialmente solapadas. Entre las zonas
completamente resueltas hay huecos ocupados por el tampn. Su principal inconveniente es que no permite
separar los compuestos neutros.
Enfoque isoelctrico: la diferencia de los puntos isoelctricos de las protenas se aprovecha para separarlas por
el mtodo de isoelectroenfoque. Este mtodo se basa en establecer un gradiente de pH estable en una
disolucin o gel. Este gradiente se establece por un conjunto de tampones especiales llamados anfolitos que
migran por s mismos hasta que alcanzan sus puntos isoelctricos. Cuando al gradiente de pH se le introduce
una protena, cada zona intercambia protones con la muestra proteica, generando una separacin isoelctrica
conocida
como
electroenfocado.
La isotacoforesis significa electroforesis a velocidad uniforme. Esto significa que el tiempo de recorrido en el
capilar bajo condiciones isotacoforticas es independiente de la velocidad. Es una tcnica de separacin por
desplazamiento.
Antes de iniciar la corrida, el capilar se debe llenar con un electrolito lder o gua en un extremo. Este debe
tener una gran movilidad y debe ser mayor que la de los componentes a separar. Luego se introduce la muestra
seguida del electrolito terminal o cola, cuya movilidad debe ser menor que cualquiera de los componentes de
la muestra. La seleccin de los electrolitos guas y terminales depende del conocimiento de los valores de las
movilidades
y
del
pKa
para
todos
los
componentes
de
la
muestra.
En la isotacoforesis las bandas siempre estn en contacto con la zona adyacente. Esta caracterstica es
necesaria para mantener la continuidad elctrica a lo largo del sistema, dado que no hay un electrolito de
soporte.
Esta tcnica puede ser utilizada para determinar cationes y aniones. Se requiere usualmente corridas separadas
para determinar cada forma inica.
La electrocromatografa capilar es un hbrido entre la HPLC y la CE donde se renen algunas de las mejores
caractersticas de cada tcnica por separado, por lo que tiene ventajas sobre ellas. De esta manera la
electrocromatografa capilar puede usarse para la separacin de especies no cargadas. Proporciona una elevada
eficacia en las separaciones de microvolmenes de disolucin de muestra, sin necesidad de aplicar un bombeo
de alta presin.
En la electrocromatografa capilar la fase mvil se transporta a travs de la fase estacionaria por el bombeo
ejercido por el flujo electroosmtico y no por un bombeo mecnico, lo que simplifica significativamente el
equipo.
Se diferencian dos tipos de electrocromatografa capilar:

Electrocromatografa rellena, en la cual un disolvente polar se conduce por el flujo electroosmtico a

travs de un capilar que contiene un relleno tpico de HPLC en fase inversa. Las separaciones
dependen de la distribucin de los analitos entre la fase mvil y la fase estacionaria lquida retenida
por el relleno.

Cromatografa capilar electrocintica micelar. Esta tcnica requiere la utilizacin de un tensoactivo en

un nivel de concentracin en el cual se formen micelas. Estas micelas son capaces de alojar
compuestos no polares en su interior. La interaccin de las micelas y los solutos es la que produce la
separacin.