UNIVERSIDAD AUTNOMA DE GUERRERO

UNIDAD ACADMICA DE CIENCIAS QUMICO BIOLGICAS

PLAN EDUCATIVO: QUMICO BILOGO PARASITLOGO
Inmunologa aplicada (Optativa)
Prctica No. 10
Pruebas de compatibilidad cruzada

Responsable:
Dra. Gloria Fernndez Tilapa
Elaborado por:
Guillermo Fabin Luis Enrique
Rivera Romero Jos Jovany
Vzquez Cruz Natalio

Grupo: 801

Chilpancingo, Guerrero a 14 de Marzo de 2016.

Prctica 10. Pruebas de compatibilidad cruzada

Introduccin
Cuando se ordena una transfusin, se enva al laboratorio 10 a 20 ml de sangre
(preferiblemente coagulada) del paciente, con la informacin apropiada. Antes de
proceder a la etapa final de compatibilizar el suero del paciente con las clulas del
ordenador, se debe llevar a cabo 3 pruebas con la sangre del donador (Salinas, 2010).

Determinacin de ABO
Determinacin de Rho (D)
Prueba directa de antiglobulinas

Por igual se debe verificar que se dispone de una unidad del mismos grupo ABO que el
del receptor. Las pruebas de compatibilidad cruzada, para asegurar en cada caso, que no
haya incompatibilidad entre la sangre elegida y la del futuro receptor. Lo ms importante
es asegurar que el suero del receptor no contiene isoanticuerpos capaces de reaccionar
con los hemates transfundidos, lo cual se hace en las pruebas cruzadas mayores. En
segundo lugar, pero a veces de gran importancia, comprobar mediante las pruebas
cruzadas menores, la ausencia en el plasma transfundido de isoglutininas capaces de
reaccionar con los hemates del receptor. Es esencial que las pruebas tengan capacidad
para detectar los anticuerpos IgM e IgG (Salinas, 2010).
Las pruebas cruzadas de sangre son el mejor estudio para detectar anticuerpos, y as
evitar reacciones postransfusionales mortales. Estas ltimas reacciones pueden seguir
cuando la sangre del receptor forma anticuerpos contra los antgenos presentes en la
sangre recin transfundida del donador; en raras situaciones tales reacciones surgen
cuando los anticuerpos de la sangre del donador atacan a los propios antgenos del
receptor. El tipo de reaccin es ms comn y ms grave, porque los anticuerpos de la
sangre del receptor que estn en mayor nmero superan al nmero de antgenos en la
sangre del donador. Las pruebas cruzadas entre los eritrocitos del donador y el suero del
receptor (prueba cruzada mayor), son de importancia mayor que la prueba cruzada entre
el suero del donador y los eritrocitos del receptor (prueba cruzada menor); por tal razn,
dado que el estudio de identificacin de anticuerpos se hace siempre en todos los
donadores de sangre, a menudo se omite la prueba cruzada menor (Arbelez-Garca,
2009; Salinas, 2010).
Existen varios mtodos para realizar la prueba de compatibilidad cruzada mayor y son los
siguientes:
1. Prueba indirecta de antiglobulinas
2. Prueba con albmina y antiglobulina
3. Prueba con papana activada
4. Prueba con bromelina

Dentro de stas las ms utilizadas son la prueba con albmina y antiglobulina y la prueba
con bromelina. En la prueba con albmina y antiglobulina, algunos anticuerpos IgG
pueden producir aglutinacin en presencia de albmina, mientras otros solamente sern
detectados despus de la aplicacin de la prueba de antiglobulinas. Una incubacin de los
hemates a los que se les ha aadido albmina puede, segn algunos autores, aumentar
la sensibilidad de esta prueba (Arbelez-Garca, 2009).
Si la prueba con bromelina resulta positiva, se indica una incompatibilidad causada por
anticuerpos IgM IgG. Esta prueba es ms sensible que la prueba indirecta de
antiglobulinas para detectar indicios de anticuerpos Rh-Hr, y que puede ser sometido a
sta despus del perodo de incubacin para revelar as los anticuerpos anti-Kelly y
algunos, pero no todos, anti-Duffy (Arbelez-Garca, 2009).
Se recomienda el uso rutinario de la prueba cruzada menor en las pruebas de
compatibilidad adems de la seleccin de anticuerpos, pues sirve de control adicional
capaz de detectar eventuales errores en cuanto a la fijacin de grupos ABO del donador y
del receptor. Mediante esta prueba se puede descubrir la presencia de aglutininas IgM e
IgG y sobre todo anticuerpos anti-Rh, en los sueros de los donadores (Medcigo et al.,
2013).
Una prueba de compatibilidad cruzada no asegura supervivencia normal de los glbulos
rojos despus de transfundir la unidad. Los pacientes pueden tener anticuerpos muy
dbiles (concentracin menor del nivel de deteccin) en el momento de la
compatibilizacin cruzada. Cuando se le desafa con el correspondiente antgeno en los
glbulos rojos transfundidos, el anticuerpo reaparece a menudo con ttulo y avidez an
mayores. Esto se llama respuesta anamnsica. Un paciente puede tener un anticuerpo
dbil que reacciona nicamente con clulas homocigticas y parece ser compatible con
una unidad de sangre que contiene una sola dosis de un antgeno, pero la supervivencia
de glbulos rojos se acorta despus de haberse efectuado la transfunsin (Yazdanbakhsh
et al., 2012).
Las pruebas cruzadas no detectan todos los errores ABO. No detecta tampoco errores
Rho (D), a menos que un paciente Rho (D) negativo tenga anti-Rh (D). Tampoco aseguran
que no se ha producido un error tcnico tal que pas por alto una prueba cruzada
incompatible (Milkins et al., 2013).
Existen causas posibles de pruebas cruzadas falsamente negativas como son, uso tanto
de plasma o suero viejo en el procedimiento cruzado como de una suspensin celular
densa (recomendada: 2-5%); o bien el uso de clulas de un donador equivocado en el
procedimiento de pruebas cruzadas (Arbelez-Garca, 2009).
Centrifugas mal calibradas, incubar a temperaturas inapropiadas, uso de reactivo de
antiglobulina inactivado, que no contiene anticomplemento o que no se agrega a la prueba
son tambin condiciones que pueden dar un resultado falso negativo (Arbelez-Garca,
2009).

Habilidades
Conocer y desarrollar la metodologa de las pruebas compatibilidad cruzada mayor
y menor.
Maneja responsablemente las muestras del paciente y sigue las normas de
bioseguridad en el laboratorio.
Sigue correctamente un protocolo para asegurar la confiabilidad del resultado.
Material y mtodos
A) Equipo
Centrfuga
Agitador mecnico
Estufa bacteriolgica a 37 C
B) Material
Aplicadores de madera limpios
Torniquete
Jeringa de 5 ml
Placa
Torundas
Tubos con anticoagulante (EDTA)
Tubos de ensaye de 10 X 75 mm
Gradilla para tubos de ensaye
Micropipeta automtica de 2 a 20 l
Micropipeta automtica de 200 a 1000 l
Puntas para micropipetas
C) Soluciones y reactivos
Solucin isotnica al 0.9%
Kit comercial para grupo sanguneo
Albmina bovina al 22 o al 30 %
Antiglobulina humana (suero de Coombs)
Etanol
D) Muestras biolgicas
Sangre completa del donador
Sangre completa del receptor
Eritrocitos sensibilizados

Procedimientos
Prueba cruzada mayor y menor con antiglobulina
Para la prueba mayor enumerar los tubos como I (R) y II (R), para la prueba menos como
I (D) y II (D), y para el autotestigo como AT, y continuar con lo indicado en el cuadro
siguiente.

1. Preparar 1ml de globulos rojos al 5%

Prueba mayor
IgG
IgM
I (R)
II (R)
Gotas de
suero del
receptor

IgG
I (D)

Suero del
donador

Eritrocitos
del
receptor al
5%

Eritrocitos
del
donador al
5%

Albmina
bovina

Prueba menor
IgM
IgG
II (D)
I AT

IgM
II AT

2. Centrifugar a 3400 rpm por 15 segundos o 50 segundos a 1000 rpm observar si hay
aglutinacin y anotar resultados.
3. Incubar por 30 minutos; los tubos II (R), II (D) y I AT a 18 C (temperatura ambiente);
los tubos restantes I (R), I (D) y I AT) a 37 C.
4. Centrifugar todos los tubos a 3400 rpm por 15 segundos; observar si hay aglutinacin
y anotar resultados. Si la aglutinacin es negativa:
5. Lavar los tubos I (R), I (D) y I AT, con solucin isotnica 4 veces. Separar la solucin
isotnica por centrifugacin y eliminarla con pipeta Pasteur. Agregar 2 gotas de
antiglobulina humana a los glbulos rojos secos.
6. Centrifugar, observar y anotar resultado.
7. A todos los tubos que no aglutinen agregar una gota de eritrocitos sensibilizados.
8. Centrifugar, observar y anotar resultado.

Lectura de los resultados

Prueba positiva: Indica compatibilidad sangunea, se establece por la ausencia de
aglutinacin en todas las pruebas realizadas.
Prueba negativa: La presencia de aglutinacin en la prueba mayor o menor india
incompatibilidad.
Nota: Si el autotestigo presenta aglutinacin investigar la causa.
Tipificacin de grupo sanguneo en el sistema ABO
Siga las instrucciones del inserto que acompaa al kit de reactivo Grupos sanguneos
para la determinacin cualitativa de antgeno A y/o B en hemates humanos que se usar
en esta prueba.
Lectura de resultados
Prueba positiva: La aglutinacin constituye un resultado positivo y dentro de las
limitaciones aceptadas para el procedimiento de la tcnica, indica la presencia apropiada
de antgeno ABO en los hemates.
Prueba negativa: La ausencia de aglutinacin de hemates constituye un resultado
negativo y dentro de las limitaciones aceptadas para el procedimiento de la tcnica, indica
la ausencia del antgeno apropiado ABO en los hemates.
Determinacin cualitativa de antgeno D en hemates humanos
Siga las instrucciones del inserto que acompaa al kit de reactivo Grupos sanguneos
para la determinacin cualitativa de antgeno D en hemates humanos que se usar en
esta prueba.
Lectura de resultados
Prueba positiva: La aglutinacin constituye un resultado positivo, indica la presencia del
antgeno D en los hemates.
Prueba negativa: La ausencia de aglutinacin de hemates constituye un resultado
negativo, indica la ausencia del antgeno D en los hemates.

CHILPANCINGO, GRO; A 06 DE MARZO DEL 2016.

NOMBRE
:

LUIS ENRIQUE GUILLERMO

FABIAN

EDAD:

20 aos

REGISTR
O:

01070316

DOMICILIO: C. ANGEL DEL CASTILLO COL. LOS ANGELES

TELEFONO: 7471443177
ESTUDIOS SOLICITADOS:
MEDICO:

PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD
CRUZADA

A QUIEN CORRESPONDA.

Nombre del donador: Diana Soto Ramrez Edad: 22 Aos Sexo: Femenino
Nombre del receptor: Luis Enrique Guillermo Fabian Edad: 21 Aos Sexo: Masculino

INMUNOLOGIA
PRUEBAS

DE

COMPATIBILIDAD

PRUEBA MAYOR: (COMPATIBLE)

PRUEBA MENOR: (COMPATIBLES)
PRUEBA AUTOTESTIGO: (COMPATIBLES)

(GRUPO SANGUNEO Y FACTOR Rh.)

GRUPO SANGUNEO:
FACTOR Rh:

POSITIVO.

ATENTAMENTE:

ATENTAMENTE.
Q. B .P. LUIS ENRIQUE GUILLERMO
FABIAN
MATRICULA 10124594

ATENTAMENTE.
Q. B .PS. NATALIO VAZQUEZ CRUZ
MATRICULA 10124594

ATENTAMENTE.
Q. B .P. JOS JOVANY RIVERA ROMERO
MATRICULA 1012459

Observaciones
Durante el desarrollo de la prctica se cumpli con el protocolo de la prctica, para ello los
volmenes medidos fueron exactos, teniendo ambas muestras de grupo y Rh O Rh

positivo, tanto la separacin del suero, y la obtencin de la sangre total fueron

adecuados, no presentaba hemolisis. Y el tiempo de incubacin que es muy importante ya
que de esto dependern los resultados que se obtendrn.
Anlisis de los resultados
No existi ningn factor que pudiese afectar en los resultados. Tal como se esperaba, los
resultados son compatibles, as que el receptor que es de grupo sangunea O Rh
positivo, pueden transfundirle sangre del receptor que tambin en de grupo sanguneo O
Rh positivo ya que en ninguno de los tubos hubo aglutinacin.
Interpretacin de resultados

La existencia de aglutinacin en la prueba mayor nos indica la presencia de anticuerpos

que aglutinan a los eritrocitos del donador, la existencia de aglutinacin en la prueba
menor es indicativa de anticuerpos en el plasma del donador y que aglutinan a los
antgenos del receptor. Pero en ninguna de las pruebas existi aglutinacin, lo que quiere
decir que la sangre en del donador con el receptor son 100% compatibles, lo cual no hay
oposicin alguna para que le sea trasfundida.
Conclusiones
Al trmino de la prctica, en todos los pasos no existi aglutinacin o hemlisis, las
pruebas son 100% compatibles y la sangre puede transfundirse. Tras la incubacin y al
estar en contacto los Glbulos Rojos del donador y el suero del receptor, y los glbulos
rojos del receptor con el suero del donador, no hubo presencia de aglutinacin, por lo cual
se concluye que la sangre a trasfundir es 100% compatibles para el receptor, lo cual no
traer problemas si se le trasfunde este tipo de sangre.
Referencias
Arbelez-Garca, C. (2009). Fundamentos de gentica e inmunologa para bancos de
sangre y medicina transfusional. Medicina y laboratorio, 15 (1 y 2) pp. 37-68.
Milkins, C., Berryman, J., Cantwell, C., Elliott, C., Haggas, R., Jones, J., & Win, N. (2013).
Guidelines for pretransfusion compatibility procedures in blood transfusion
laboratories. Transfusion Medicine, 23(1), pp. 3-35.

Medcigo L. A. L, Czares T. R., Prez C. F. & Daz O. C. (2013). Prevalencia de

disponentes de plaquetas con ttulos altos de anti-A y anti-B. Revista Latinoamericana
Patologa Clnica Medicina Laboratorio, 60(4), pp. 230-234.
Salinas, C.M.C. (2010). La inmunologa en la salud y la enfermedad. . 1 Edicin. Mxico:
Editorial Medica panamericana, pp. 183-193.
Yazdanbakhsh, K., Ware, R. E., & NoizatP. F. (2012). Red blood cell alloimmunization in
sickle
cell
disease:
pathophysiology,
risk
factors,
and
transfusion
management. Blood, 120(3), pp. 528-537.