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Farmacologa I

Guin de Prcticas

Facultad de Qumica, UNAM

Farmacologa I
Guin de Prcticas

Andrs Navarrete Castro


Liana Medina Cruz
Jos Luis Balderas Lpez

Facultad de Qumica, UNAM


Departamento de Farmacia
Clave de la materia 1408

Primera Edicin 2008


D.F. UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO
Ciudad Universitaria, Delegacin Coyoacn,
C.P. 04510, Mxico, Distrito Fedeal.
ISBN en trmite
Prohibida la reproduccin parcial o total por cualquier medio
sin autorizacin escrita del titular de los derechos patrimoniales.
Impreso y hecho en Mxico

Este material se desarroll con el apoyo del


Programa de Apoyo a Proyectos para la Innovacin y Mejoramiento de la
Enseanza (PAPIME) con la clave PE205306
Proyecto: Desarrollo de procedimientos para la enseanza de la Farmacologa
Experimental basada en el principio de las 3Rs: Reduccin, Refinamiento y
Reemplazo de animales de laboratorio.
El contenido de este material fue revisado por los profesores de Laboratorio de
Farmacologa I del semestre 2007-1.

ndice
Prcticas
1. Marco conceptual del laboratorio de Farmacologa............................................................9
2. Determinacin de la ventana de actividad biolgica y la dosis efectiva 50
en un sistema simulado........................................................................................... 13
3. Determinacin de la concentracin letal 50 (CL50)
del dicromato de potasio en Artemia salina..................................................................17
4. Determinacin de parmetros farmacocinticos en un modelo de vidrio................................. 23
5. Determinacin experimental de la dosis efectiva 50 (DE50) sedante en ratones....................... 29
6. Influencia de la va de administracin sobre la respuesta farmacolgica................................... 35
7. Excrecin renal de cido acetilsaliclico en voluntarios.......................................................39
8. Demostracin del efecto sinergista y antagonista en un sistema simulado................................ 43
9. Demostracin del efecto sinergista y antagonista en un sistema de rgano aislado..................... 49

Apndices
Apndice I. Tabla de conversin de proporcin a unidades Probit............................................57
Apndice II. Tcnicas de manejo e identificacin de animales de laboratorio (rata y ratn).............. 59
Apndice III. Formato de Consentimiento informado.............................................................65
Apndice IV. Instructivo para el uso del polgrafo Biopac System MP-100................................. 67

1.

Marco conceptual del laboratorio de Farmacologa

La Farmacologa es una ciencia experimental por excelencia. Los mtodos utilizados para evaluar la seguridad y la
eficacia de los frmacos utilizan sistemas biolgicos que van desde fragmentos celulares o macromolculas aisladas
hasta poblaciones enteras. En gran parte del proceso de investigacin farmacolgica se utilizan animales de
laboratorio ntegros. Sin embargo, la creciente sensibilidad respecto a la prctica de la experimentacin en
animales en la investigacin y en la enseanza de las Ciencias Biomdicas, y la bsqueda de enfoques nuevos
en los aspectos prcticos de la misma son parte de un debate actual (Jukes y Chiuia, 2003).
La utilizacin de animales de experimentacin en la enseanza de las prcticas de diferentes asignaturas de las
Ciencias Biomdicas y en especial de la Farmacologa, ha venido siendo la metodologa ms empleada por
todos los profesores de esta disciplina. Gracias a la utilizacin de estos animales, los estudiantes han podido
apreciar los diferentes efectos y los principios de la accin farmacolgica. Entre las prcticas clsicas que se han
realizado en la mayora de los laboratorios de Farmacologa, algunas de ellas tienen un componente importante de
crueldad y son de poca aceptacin por algunos de los estudiantes. Una de las prcticas que no se puede aceptar
es la determinacin de la dosis letal 50 (DL50) en ratas o ratones, cuya utilidad est en duda como parmetro
para estimar la seguridad de los frmacos y sustancias nuevas. Es obvio que el uso de animales era el nico
mtodo del que disponan los profesores hace algunos aos para ensear esta materia. Pero en los ltimos aos
el avance de la informtica, de las tecnologas de la imagen y la disposicin de lneas celulares ha permitido el
desarrollo de numerosas alternativas que no requieren el uso de los animales para lograr los objetivos docentes
que se plantean en las prcticas de laboratorio de Farmacologa (Van der Valk, et al., 1998; Vinardell,
2003; Eder et al., 2006).
Los mtodos utilizados en la investigacin, para la evaluacin de la seguridad y/o toxicidad y en la enseanza
estn en continuo progreso, ya que los cientficos estn en permanente bsqueda de posibles alternativas que
mejoren la calidad de su trabajo. Ello es debido, en parte, a la lgica evolucin de los conocimientos
cientficos y de sus aplicaciones tecnolgicas y, en parte, a consideraciones ticas, logsticas, econmicas,
sociopolticas y legales (Sterling y Rispin, 2002).
El nmero de animales utilizados en Europa con fines educativos es relativamente pequeo comparado con el
total empleado en investigacin y se ha venido reduciendo en los ltimos aos, pero a pesar de ello todava se
puede reducir ms. En Mxico, el uso de animales en docencia es alto, aunque no se cuenta con datos precisos
de cuntos se sacrifican en cada ciclo escolar. Por otro lado, la aplicacin de la Norma Oficial Mexicana
(NOM-062-ZOO-1999) ha sido lenta en los laboratorios de enseanza de las Ciencias Biomdicas. En
cambio, en el artculo 25 de la Convencin Europea para la Proteccin de los Animales Vertebrados utilizados
en Experimentacin y otros Fines Cientficos se especifica: aquellos procedimientos llevados a cabo con
fines educativos o de entrenamiento se deben restringir a los absolutamente necesarios para los fines relativos a
la enseanza y el entrenamiento y se permitirn nicamente si sus objetivos no pueden ser conseguidos por
mtodos audiovisuales u otros que sean suficientemente efectivos. En las legislaciones relacionadas con la
proteccin de los animales de todos los pases de la Comunidad Europea se considera fundamental aplicar el
principio de las 3Rs, promulgado por Russell y Burch en 1959 (Russell y Burch, 1959). Este principio indica

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la necesidad de Reemplazar los animales de experimentacin por otros mtodos, siempre que sea posible y que
el nuevo sistema aporte el mismo grado de informacin, de Reducir el nmero de animales de experimentacin
cuando su uso sea necesario y se presente como el nico mtodo vlido y, finalmente, de Refinar las tcnicas
empleadas con los animales, con el fin de mejorar su eficacia o disminuir el dolor o el grado de sufrimiento
infligido (Van der Valk, et al., 1998; Vinardell, 2003).
En el caso de la docencia, se plantea el reemplazo de los animales de experimentacin por otros mtodos. Entre
los procedimientos propuestos se pueden citar:

a) Modelos, maniques y simuladores mecnicos.


b) Pelculas y videos.
c) Simulaciones de ordenador y sistemas de realidad virtual.
d) Autoexperimentacin en el propio individuo.
e) Experimentos con vegetales, incluyndose hongos y algas.
f) Uso de material procedente de los rastros.
g) Estudios in vitro con lneas celulares, organismos inferiores como bacterias, nematodos, insectos o peces
en etapa temprana.
h) Aprovechamiento de animales muertos de forma natural o utilizados despus de un procedimiento
cientfico (Van der Valk, et al., 1998; Vinardell, 2003).
En el Laboratorio de Farmacologa I se plantea el desarrollo de procedimientos experimentales y actividades en los
que, bajo el principio de las tres erres, se reduzca, se reemplace y se refine el uso de animales de laboratorio para cubrir los objetivos de la enseanza experimental de la Farmacologa.
Considerando lo anterior, en el laboratorio de Farmacologa se realizarn actividades de distintos tipos:

1) Simulaciones. Se realizarn recreaciones en la computadora que permita a los estudiantes la comprensin


de aspectos que, sin la necesidad de repetir muchos experimentos, puedan comprender los conceptos
y los procedimientos para definir parmetros farmacolgicos.
2) Prcticas. Desarrollo de prcticas sencillas, con lo que se pretende conozcan tcnicas y hbitos del
laboratorio de Farmacologa.
3) Demostraciones. En esta categora se realizan experimentos, que debido a las siguientes razones no es
posible que la realicen los estudiantes en forma individual o en grupos pequeos:
a. El experimento requiere de cierta destreza que en una o dos sesiones no es posible que las aprenda
el estudiante.
b. La existencia de equipo de laboratorio en nmero reducido.
c. El tiempo limitado para la sesin de laboratorio.

4) Autoexperimentacin. Sin poner en riesgo en ningn grado la integridad y la salud de los estudiantes, se realizar
una prctica para observar algunos procesos farmacocinticos de un frmaco (cido acetilsaliclico).
Cualquiera que sea la modalidad que se realice, cada uno de ellos debe comprender las siguientes partes:

Manual de Farmacologa I. Guin de Prcticas

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familiarizacin, ejecucin y discusin del procedimiento.


Con ello se pretende:
Facilitar el aprendizaje de los aspectos fundamentales de la Farmacologa.
Familiarizar a los estudiantes con el mtodo cientfico en experimentos de esta disciplina.
Ensear tcnicas y hbitos del laboratorio de Farmacologa.
Motivar a los futuros farmacuticos hacia la investigacin y el estudio de la Farmacologa como rea

de desarrollo profesional.

Bibliografa
Eder C, Falkner E, Nehrer S, Losert U y Schoeffl H. (2006). Introducing the concept of the 3Rs

into tissue engineering research. Altex-Alternativen Zu Tierexperimenten. 23:17-23.

Jukes N, Chiuia M. (2003). From Guinea Pig to Computer Mouse. 2 Edicin. InterNICHE.

Londres.
Meyer B, Ferrigni N, Putnam J, Jacobsen L, Nichols D, McLaughlin J. (1982). Brine Shrimp:

A convenient general bioassays for active plant constituents. Planta Medica. 45:31-34.

Russell W, Burch R. (1959). The Principles of Humane Experimental Technique. Methuen,

Londres.
Tallarida R. (2000). Drug synergism and dose-effect data analysis. Chapman & Hall/CRC.

EUA.
Van der Valk J, Dewhurst D, Hughes I, Atkinson J, Balcombe J, Braun H, Gabrielson K, Gruber

F, Miles J, Nab J, Nardi J, Van Wilgenburg H, Zinko U y Zurlo J. (1998). Alternatives to


the use of animals in higher education. ATLA 27:39-52
Vinardell P. (2003). Alternativas al uso de animales de experimentacin en las prcticas de

fisiologa. Boletn de la Sociedad Espaola de Ciencias Fisiolgicas. 6 (1).

2.

Determinacin de la ventana de actividad biolgica


y la dosis efectiva 50 en un sistema simulado

Nmero de sesiones sugeridas: 1 sesin (ejecucin y anlisis).


Temas relacionados con el curso de teora de Farmacologa I: Farmacometra, curva dosis-respuesta cuantal.

I. Introduccin
Dentro de las Ciencias Biolgicas, entre ellas la Farmacologa, los animales muchas veces tienen un papel central
en las clases prcticas en el laboratorio. Cientos de millones son usados para experimentos o sacrificados para
su diseccin cada ao en todo el mundo.
La visin actual del uso de animales es una educacin completamente humana, donde los objetivos de la enseanza
son alcanzados usando mtodos alternativos, y donde la compasin, el respeto a la vida y el pensamiento crtico son
valorados y desarrollados. Es una visin donde los alumnos tienen libertad de conciencia y la relacin negativa con los
animales ha sido transformada al pensamiento positivo en lugar de hacer un uso daino (Jukes y Chiuia, 2006).
Un gran nmero de compuestos y frmacos cuenta con la determinacin experimental de los valores de
dosis efectiva 50 (DE50), dosis txica 50 (DT50) y dosis letal 50 (DL50). El clculo de este parmetro se
puede predecir mediante ecuaciones que explican el fenmeno farmacolgico (Tallarida, 2000). Utilizando
los valores descritos en la literatura es posible simular la adicin de diferentes dosis o concentraciones de
diferentes frmacos en un sistema en computadora, donde el alumno podr construir curvas dosis-respuesta y,
por lo tanto, determinar la DE50, sin el uso de animales de laboratorio.

II. Objetivos
Los objetivos de esta prctica son:
1. Determinar la ventana de actividad biolgica de frmacos mediante el uso de un sistema simulado.
2. Aprender el uso de un sistema simulado en computadora.
3. Calcular la DE50 de una serie de frmacos por medio de la ecuacin de Hill, con los datos obtenidos en
el sistema simulado.

III. Material
a) Software
Se utilizar el software SimCDR ver. 1.0 desarrollado ex profeso para la prctica por el M en C

Jos Luis Balderas, de la Facultad de Qumica de la UNAM.


El software puede ser descargado del siguiente vnculo:
http://www.paginasprodigy.com/luisbald
Este programa deber ser instalado en una PC o compatible con Microsoft Windows 98 o posterior.

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IV. Procedimiento
a) Manejo del software SimCDR ver. 1.0
Para el uso adecuado del software se dividir su manejo por procedimiento con referencia al esquema siguiente:

1) Inicio del programa y ejecucin de un nuevo experimento simulado.


a) Para iniciar el programa se deben oprimir los siguientes iconos:
b) En la casilla de Frmaco se selecciona el frmaco que se utilizar en la simulacin. En la ventana
Informacin del frmaco aparecern una breve descripcin del mismo, as como su actividad
farmacolgica ms importante.
c) Se selecciona el nmero de dosis as como las unidades que se emplearn, en las casillas Nm. de
dosis y Unidades, respectivamente.
d) Se llenan las casillas que aparecen en la ventana Dosis a probar y se oprime el botn Calcular el %
de efecto. Si alguna de las casillas anteriores est en blanco, aparecer un mensaje de error.
e) En la ventana Resultados aparecern las dosis que se administraron simuladamente y los porcentajes de
respuesta que daran.
f) Para iniciar un nuevo experimento simulado, se deber oprimir el botn Borrar datos o, si se prefiere,
cambiar los datos en las casillas correspondientes.

Manual de Farmacologa I. Guin de Prcticas

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V. Anlisis de Resultados
1. Con los datos obtenidos en los experimentos simulados:

a) Construir las curvas dosis-respuesta de los frmacos utilizados.


b) Calcular la DE50 para la actividad principal de los frmacos utilizados mediante la Ecuacin de Hill.

VI. Bibliografa
Tallarida R. (2000). Drug Synergism and Dose-effect Data Analysis. Chapman & Hall /CRC.

EUA.
Jukes N, Chiuia M. (2003). From Guinea Pig to Computer Mouse. 2 Edicin. InterNICHE.

Londres.

3.

Determinacin de la concentracin letal 50 (CL50)


del dicromato de potasio en Artemia salina

Nmero de sesiones sugeridas: 2 sesiones (ejecucin y anlisis)


Temas relacionados con el curso de teora de Farmacologa I: Farmacometra, curva dosis-respuesta cuantal.

I. Introduccin
Un bioensayo puede ser definido como cualquier prueba que involucra organismos vivos; a su vez, se puede
sealar como cualquier mtodo por medio del cual alguna propiedad de una sustancia o material, es medida en
trminos de la respuesta biolgica que produce. La relacin entre la respuesta biolgica y la dosis o la
concentracin de una sustancia activa se relaciona en la llamada curva dosis-respuesta. Esta vinculacin puede
darse de forma graduada o la respuesta puede ser de tipo todo o nada, tambin conocida como cuantal.
En esta prctica se realizar un experimento en que se analizar el segundo tipo de relacin curva dosisrespuesta, es decir, se analizar la curva dosis-respuesta cuantal, que debido a la forma en la que se realizar,
propiamente se debe referir como la curva concentracin-respuesta cuantal. Se utilizar como sistema biolgico
el crustceo Artemia salina en su forma adulta y como larva o nauplio, y como sustancia de prueba al
dicromato de potasio.

II. Objetivos
Los objetivos de esta prctica son:
1. Manejar un sistema biolgico alterno a los mamferos y roedores para la determinacin de una curva
concentracin-respuesta cuantal.
2. Realizar el clculo de la CL50 mediante el anlisis Probit.

III. Material
1. Utilizando Artemia salina adulta.

a) Material biolgico
De 100 a 200 ejemplares adultos de Artemia salina.

b) Materiales, cristalera y equipo


Un vaso de precipitado de 500 mL
Una pipeta graduada de 2 mL
Una pipeta volumtrica de 10 mL

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24 frascos viales marcados para un volumen de 5 mL


Una lmpara de escritorio.
Una Pipeta Pasteur con bulbo
Aereador con manguera y filtro

c) Reactivos
100 mL de disolucin de dicromato de potasio, K2Cr2O7 (50 mg/mL).

Disolver 5 g de dicromato de potasio en 50 mL de agua destilada, una vez disuelto aforar a un


volumen de 100 mL con agua destilada.
2. Utilizando nauplios de Artemia salina.

a) Material biolgico
Huevecillos liofilizados de Artemia salina.

b) Materiales, cristalera y equipo


Pecera de vidrio capacidad 2 L
Pecera de 500 mL
24 frascos viales marcados para un volumen de 2 mL
Pipetas de vidrio
Jeringas de 1 mL
Foco sumergible de 5 W
Termmetro para pecera
Matraz Erlenmeyer de 1 L
Vasos de precipitados de 100, 500 mL
Cinco Pipetas Pasteur con bulbo
Aereador con manguera y filtro

c) Reactivos
100 mL de disolucin de dicromato de potasio, K2Cr2O7 (50 mg/mL).

Disolver 5 g de dicromato de potasio en 50 mL de agua destilada, una vez disuelto aforar a un


volumen de 100 mL con agua destilada.
100 mL de disolucin de dicromato de potasio, K2Cr2O7 (12.5 mg/mL).

Disolver 1.25 g de dicromato de potasio en 50 mL de agua destilada, una vez disuelto aforar a
un volumen de 100 mL con agua destilada.
500 mL de agua de mar artificial.

Disolver 16 g de sal marina (o en su defecto cloruro de sodio, NaCl) en 500 mL de agua y


colocar dos gotas de anticloro. Dejar reposar por 10 minutos y filtrar si es necesario.
Anticloro (tiosulfato de sodio, Na2S2O3, al 1 %).

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Manual de Farmacologa I. Guin de Prcticas

IV. Procedimiento
1. Utilizando la Artemia salina Adulta.

a) Preparacin de la Artemia salina


1) Mantener a la Artemia salina en el vaso de precipitado con aeracin constante.
2) Por triplicado rotular los frascos viales con las siguientes concentraciones: 0, 4, 6, 8, 10, 12, 16 y
20 mg/mL y, coloque una marca a un volumen de 5 mL.
3) Colocar 10 artemias en cada vial con ayuda de la pipeta Pasteur como se muestra en la figura siguiente.
Utilice la luz de una lmpara como fondo para facilitar el conteo. La cantidad total de agua que resulta
de la adicin de las artemias debe ser de aproximadamente 1 mL, si es necesario retire el excedente.

Artemia Salina

b) Adicin del dicromato de potasio


1) Adicionar las siguientes cantidades de dicromato de potasio indicadas en la siguiente cuadro:
Concentracin (mg/mL)
0 (Control)
4
6
8
10
12
16
20

Volumen de la disolucin
de dicromato de potasio (mL)
0
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
1.6
2.0

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Dr. Andrs Navarrete Castro

2) Inmediatamente despus de la adicin de la solucin de dicromato de potasio se incorpora la cantidad


necesaria de la solucin de agua de mar para llegar a un volumen final de 5 mL.
3) Dejar durante una hora en exposicin bajo luz blanca.
c) Lectura de resultados
1) Al trmino del periodo de exposicin se contarn las artemias que sobrevivieron de la siguiente manera:
a. Las artemias que presentan movimiento, aunque sea mnimo, se consideran vivas.
b. Las artemias que permanecen inmviles, se consideran muertas.
2. Utilizando nauplios de Artemia salina.

a) Incubacin de los huevecillos de la Artemia salina


1. Se arma el dispositivo de incubacin como se muestra en la siguiente figura.

Pecera con dispositivos de incubacin (1), aeracin (2) e iluminacin (3).


2. Se colocan 300 mL de agua de mar artificial en la pecera de incubacin.
3. Colocar una cantidad de agua corriente en la pecera mayor, aproximadamente a una temperatura de 2628C y dejar que alcance el equilibrio con el agua de la pecera de incubacin.
4. Conectar los dispositivos de aeracin y luz.
5. Adicionar los huevecillos en la pecera de incubacin con una esptula limpia y seca (aproximadamente
10 g de huevecillos), colocar en la zona obscura de la pecera de 500 mL. Dejar incubar durante 48 h.

b) Preparacin de los viales y realizacin del experimento.


A partir de este momento se seguirn los pasos a), b) y c) del experimento llevado a cabo con
artemias adultas, colocando en lugar de stas a los nauplios. Utilizar la disolucin de 12.5 mg/mL
de dicromato de potasio, las concentraciones finales sern 0, 1.5, 2, 2.5, 3, 4, y 5 mg/mL
respectivamente.

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Manual de Farmacologa I. Guin de Prcticas

V. Anlisis de resultados
1. Se tabulan los datos obtenidos en el siguiente cuadro:
REPETICIONES DEL EXPERIMENTO
CONCENTRACIN
(mg/mL)

ni

ri

ni

DATOS FINALES

ri

ni

ri

ni

ri

pi

yi

CONTROL

ni = nmero de artemias utilizadas por concentracin por cada repeticin

ni = nmero de artemias totales utilizadas por concentracin

ri = nmero de artemias muertas por concentracin por cada repeticin

ri = nmero de artemias totales muertas por concentracin

pi = probabilidad por concentracin (pi = ri / ni)

yi = unidad probit calculada por tablas a partir de pi

Nota: Recuerde que las concentraciones utilizadas varian de acuerdo al estado de madurez de la artemia utilizada.

2. Con los resultados obtenidos:


Construya la curva concentracin-respuesta cuantal para el dicromato de potasio.
Calcule la CL50 y sus lmites de confianza del dicromato de potasio por medio del anlisis Probit.

Utilice la tabla de conversin de proporcin a unidades Probit del Apndice I.

3. Con la grfica realizada y los valores calculados analice:


Los datos encontrados con respecto a los datos informados en la literatura.
Las ventajas y desventajas de los bioensayos con respecto a los ensayos con organismos superiores.

VI. Bibliografa
Infante S y Caldern L. (1994). Manual de anlisis probit. Colegio de Posgraduados. Mxico.
McLaughlin J. (1991). Crow gall tumors on potato disc and Brine Shrimp lethality; two simple

bioassay for higher plant screening and fractionation. Methods in Plant Biochemistry. Volume 6.
Assay for bioactivity. Academic Press Limited, EUA: 1-30.

Tallarida R. (2000). Drug Synergism and Dose-effect Data Analysis. Chapman & Hall /CRC.

New York.

4.

Determinacin de parmetros farmacocinticos


en un modelo de vidrio

Nmero de sesiones sugeridas: 2 sesiones (ejecucin y anlisis)


Temas relacionados con el curso de teora de Farmacologa I: Farmacocintica, clculo de parmetros farmacocinticos

I. Introduccin
La Farmacocintica es la rama de la Farmacologa que estudia el curso temporal de los frmacos a travs del
organismo. Comprende los procesos de absorcin, distribucin y eliminacin de los frmacos. Este ltimo, a
la vez, comprende los procesos de excrecin y biotransformacin.
La curva de concentracin en funcin del tiempo se utiliza para determinar los parmetros farmacocinticos. La
forma de la curva concentracin-tiempo y los indicadores que se calculan a partir de ella, dependen de la va de
administracin y del fluido biolgico en el que se lleve a cabo el muestreo y anlisis del frmaco. Despus
de una administracin intravenosa es posible determinar los parmetros farmacocinticos: constante de eliminacin
(k), volumen aparente de distribucin (Vd), concentracin plasmtica al tiempo cero (Cp), depuracin total
(ClT), rea bajo la curva (ABC) y el tiempo de vida media (t). Para cuando el frmaco se administra por
una va que requiere de un proceso de absorcin, es decir, el paso del sitio de aplicacin a la circulacin general,
se pueden calcular los parmetros farmacocinticos: constante de absorcin (ka), concentracin plasmtica
mxima (Cpmax), tiempo al que se alcanza la concentracin plasmtica mxima (tmax), adems de k, t y ABC.
En esta prctica, mediante el uso de un modelo de vidrio es posible hacer una simulacin de la administracin
del frmaco por va intravenosa o por otra que requiere de un proceso de absorcin. Tambin es posible simular
la toma de muestras en sangre y en orina y, con ello, realizar los clculos de los parmetros farmacocinticos
correspondientes a dichas simulaciones.

II. Objetivos
Los objetivos de esta prctica son:
1. Utilizar un modelo de vidrio para simular la administracin de frmacos por las vas intravascular y extravascular.
2. Calcular los parmetros farmacocinticos para la administracin intravascular y extravascular.
3. Comparar el comportamiento cintico del frmaco en funcin de la va de administracin.

III. Material
a) Materiales, cristalera y equipo
Dos vasos de precipitado de 500 mL con brazo recto
Pipeta graduada de 5 mL

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Dr. Andrs Navarrete Castro

Perilla
Dos vasos de precipitado de 500 mL
Un vaso de precipitado de 100 mL
Seis matraces volumtricos de 10 mL
Un matraz volumtrico de 25 mL
Una pipeta volumtrica de 1 mL
Dos placas de agitacin
Dos soportes universal
Dos pinzas con nuez
Un embudo de separacin de 1 L
Un anillo para soporte universal
Dos matraces Erlenmeyer de 250 mL
Un cronmetro
24 Tubos de ensayo
Cuatro litros de agua corriente
Dos barras magnticas de agitacin
Dos agitadores magnticos
Balanza analtica
Espectrofotmetro

b) Reactivos
Disolucin de Rojo Congo (4 mg/mL)

Disolver 100 mg del colorante Rojo Congo en 15 mL de agua y aforar a un volumen de 25 mL


con agua destilada.

IV. Procedimiento
1. Va intravascular

a) Colocar el material de acuerdo al siguiente esquema:

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Manual de Farmacologa I. Guin de Prcticas

b) Colocar agua corriente en el embudo de separacin, mantener el mismo volumen durante todo el
experimento.
c) Mantener la agitacin constante en el vaso de precipitado A.
d) Medir la velocidad de flujo del goteo y llevarla a un flujo constante de 20 mL/min.
e) Adicionar agua corriente al vaso de precipitado A, llevndolo a un volumen muy cercano para que se
inicie el goteo.
f) Adicionar 5 mL de la disolucin del colorante al vaso de precipitado A. El momento en que inicia el
goteo del vaso se toma como referencia para la toma de muestras.
g) Cuando inicia el goteo, inmediatamente se toma una muestra de 2 mL del vaso A.
h) Se deja correr el experimento y se toman muestras de 2 mL del vaso A de acuerdo a los tiempos
indicados en el siguiente cuadro.

Tiempo
(min)
Control
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
60
75
90
120

Va intravascular
Vaso A
Absorbancia
Concentracin (mg/mL)

2. Va extravascular
a) Colocar el material de acuerdo al siguiente esquema:

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Dr. Andrs Navarrete Castro

b) Colocar agua corriente en el embudo de separacin, mantener el mismo volumen durante el experimento.
c) Mantener la agitacin constante en los vasos de precipitado.
d) Medir la velocidad de flujo del goteo y llevarla a un flujo constante de 20 mL/min.
e) Adicionar agua corriente a los vasos de precipitado, llevndolos a un volumen muy cercano para que
inicie el goteo.
f) Agregar 5 mL de la solucin del colorante al vaso de precipitado A. La hora en que inicia el goteo
del vaso A al B se toma como referencia para la toma de muestras.
g) Cuando inicia el goteo se toma una muestra de 2 mL del vaso A y del B.
h) Se deja correr el experimento y se toman muestras de 2 mL del vaso A y B de acuerdo al cuadro siguiente.
Va intravascular
Tiempo
(min)

Vaso A
Absorbancia

Vaso B
Concentracin
(mg/mL)

Absorbancia

Concentracin
(mg/mL)

Control
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
60
75
90
120

3. Determinacin de las concentraciones del colorante

a) Realizar una curva estndar del pesando 1 mg del colorante, disolverlo en agua destilada, aforar a 10
mL y continuar como se indica en el esquema siguiente:

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Manual de Farmacologa I. Guin de Prcticas

b) Leer las absorbancias de la curva estndar y de las muestras obtenidas en los experimentos en el
espectrofotmetro a una longitud de onda de 490 nm.

Tubo
Blanco
1
2
3
4
5
6

Curva estndar de rojo congo


Concentracin
(mg/mL)
0
3.125
6.25
12.5
25
50
100

Absorbancia

c) Determinar la concentracin de las muestras interpolando el valor de las lecturas en la curva estndar.

V. Anlisis de resultados
1. Elaborar una grfica por cada va de administracin, considerando el logaritmo natural de la concentracin
[g/mL] contra tiempo [min].
2. Calcular los parmetros farmacocinticos t, Vd, k, ka, ClT, Cpmax, tmax ABC; segn la va de administracin
simulada.
3. Analizar la importancia de los modelos farmacocinticos in vitro y de los parmetros farmacocinticos
calculados

VI. Bibliografa
Gumtow R, Proudfoot J y Talada A (1989). An in vitro pharmacokinetic system for use in the

undergraduate pharmaceutics laboratory: a one- and two-compartment pharmacokinetic Bench


Model; the glassman patient. Revista Mexicana de Ciencias Farmacuticas, 20(3):25-30.
Rowland M y Tozer T (1995). Clinical pharmacokinetics 3rd Ed. Lea and Febiger. EUA.
Shargel L, Wu-Pong S y Yu A (2004). Applied biopharmaceutics and Pharmacokinetics. 5th

Edition. McGraw-Hill Medical, EUA.

5.

Determinacin experimental de la dosis efectiva


50 (DE50) sedante en ratones

Nmero de sesiones sugeridas: 2 sesiones (ejecucin y anlisis)


Temas relacionados con el curso de teora de Farmacologa I: Farmacometra y Farmacodinamia.

I. Introduccin
En esta prctica se utilizar un modelo sencillo basado en el comportamiento de los roedores al explorar un
ambiente extrao. El nmero de levantamientos sobre sus extremidades traseras est relacionado con un estado
de alerta. La disminucin en esta conducta por la accin de un frmaco est relacionado con una actividad
tranquilizante y en varios trabajos de investigacin se ha utilizado para medir el efecto sedante de los depresores
del Sistema Nervioso Central (Oliva et al., 2004; Ugalde et al., 2005; Gonzlez-Trujano et al., 2006).
En esta prctica se contempla determinar la DE50 sedante de pentobarbital sdico y del etanol, utilizando el
modelo de Cilindro de Exploracin en ratones.

II. Objetivo
El objetivo de esta prctica es:
1. Determinar la DE50 para el efecto sedante del pentobarbital y etanol en ratn, utilizando el modelo del
Cilindro de Exploracin.

III. Material
a) Material biolgico
Ratones ICR CD1 machos de 25-30 g de peso

b) Materiales, cristalera y equipo


Cilindro de exploracin (cilindro de vidrio de 11 cm de dimetro interno por 30 cm de altura)
Jeringas de 1 mL con aguja del nmero 27
Balanza para pesar animales
Marcador de tinta indeleble
Papel
Cronmetro
Contador manual
Matraz volumtrico de 10 mL
Seis frascos viales de 10 mL

32

Dr. Andrs Navarrete Castro

c) Frmacos y reactivos
Anestesal (pentobarbital sdico 6.3 g/100 mL, uso veterinario). Pfizer.
Disolucin de Pentobarbital sdico 3 mg/mL.

Transfiera 0.47 mL de Anestesal a un matraz volumtrico de 10 mL y llvelo al aforo con disolucin


salina.
Etanol absoluto.
Disolucin salina fisiolgica (0.9%).
Solucin hidroalcohlica al 10%.

Transfiera 50 mL de etanol a un vaso de precipitados y llvelo a un volumen de 500 mL.

IV. Procedimiento
A. Efecto sedante de pentobarbital

a) Pesado y marcaje de animales


Cada grupo de trabajo recibir seis ratones. Marque a sus animales con el marcador de tinta indeleble
en la base de la cola, pselos y registre el peso de cada animal.

b) Preparacin de las disoluciones de pentobarbital sdico


Rotule seis frascos viales con las siguientes leyendas 0, 2.5, 5, 10, 15 y 30 mg/kg. Agregue la cantidad
indicada en el cuadro siguiente de la disolucin de pentobarbital de 3 mg/mL y de disolucin salina al
0.9%(p/v):

Frasco vial

Dosis
(mg/kg)

Volumenes a agregar (mL)

Concentracin
(mg/kg)

Pentobarbital
(mg/kg)

Disolucin
salina

CONTROL

2.5

0.25

2.75

0.25

0.5

0.5

0.5

10

15

1.5

1.5

1.5

30

c) Administracin del frmaco


Asigne aleatoriamente las dosis que recibir cada ratn. Administre por va intraperitoneal 0.1 mL de
la disolucin correspondiente del frmaco o de la disolucin salina por cada 10 g de peso del animal
y registre el tiempo al que lo administr.

33

Manual de Farmacologa I. Guin de Prcticas

d) Desarrollo del experimento

Cilindro utilizado en la prueba de exploracin.

1) Cercirese de que el cilindro de vidrio est seco y limpio.


2) Coloque el cilindro sobre un trozo de papel mayor al dimetro del cilindro (pueden ser hojas
recicladas).
3) Treinta minutos despus de haber administrado el frmaco o la solucin salina introduzca al animal en el
cilindro de exploracin.
4) Ponga a funcionar el cronmetro y registre el nmero de levantamientos que realiza el animal en un perodo de
5 minutos. Slo una persona deber cuantificar esta conducta para que sean analizados bajo el mismo
criterio.
5) Limpie con la solucin hidroalcohlica el interior del cilindro y cambie el papel.
6) Contine con el mismo procedimiento para los cinco animales restantes. No olvide limpiar el cilindro entre
cada prueba.
7) El animal que recibi la solucin salina se toma como control.
Ratn

Peso (g)

Dosis
(mg/kg)

1
2
3
4
5
6

Admn.
0
6
12
18
24
30

Tiempo (h:min)
Inicio
Final
30
35
36
41
42
47
48
53
54
59
01:00
01:05

Nm. de
levantamientos

B. Efecto sedante de etanol


a) Preparacin de las soluciones de etanol absoluto
Rotule seis matraces aforados de 10 mL con las siguientes leyendas 0, 500, 1000, 2000, 2500 y 3000
mg/kg. Agregue la cantidad indicada en el cuadro siguiente de etanol absoluto y afore con solucin salina al
0.9% (p/v):

34

Dr. Andrs Navarrete Castro

Frasco vial

Dosis
(mg/kg)

1
2
3
4
5
6

Control
500
1000
2000
2500
3000

Volmenes a agregar (mL)


Etanol absoluto Disolucin salina
0
10
0.63
9.37
1.26
8.74
2.52
7.48
3.16
6.84
3.8
6.2

Concentracin
(mg/mL)
0
50
100
200
250
300

b) Administracin del frmaco


Asigne aleatoriamente las dosis que recibir cada animal. Administre por va intraperitoneal 0.1mL de la
solucin correspondiente del frmaco o de la solucin salina por cada 10 g de peso y registre el tiempo al que
lo incorpor.

c) Desarrollo del experimento


1) Cercirese de que el cilindro de vidrio est seco y limpio.
2) Coloque el cilindro sobre un trozo de papel mayor a su dimetro (pueden ser hojas recicladas).
3) Cinco minutos despus de haber administrado el frmaco o la solucin salina introduzca al ratn en el
cilindro de exploracin.
4) Registre el nmero de levantamientos que realiza el animal en un perodo de 5 minutos. Slo una persona
deber cuantificar esta conducta para que sean analizados bajo el mismo criterio.
5) Limpie con la solucin hidroalcohlica el interior del cilindro y cambie el papel.
6) Contine con el mismo procedimiento para los cinco ratones restantes. No olvide limpiar el cilindro entre cada
prueba.
7) El animal que recibi la disolucin salina se toma como control.

Ratn
1
2
3
4
5
6

Peso (g)

Dosis (mg/kg)

Admn.
0
6
12
18
24
30

Tiempo (h:min)
Inicio
5
11
17
23
29
35

Final
10
16
22
28
34
40

Nm. de
levantamientos

35

Manual de Farmacologa I. Guin de Prcticas

V. Anlisis de resultados
a) Clculo de la DE50
1) Calcule el porcentaje de efecto por cada dosis, considerando que el nmero de levantamientos
promedio de los ratones control es igual al 0% de efecto.
2) Determine el modelo que siguen los datos obtenidos.
3) Calcule la DE50 para el efecto sedante de acuerdo al modelo determinado.
b) Clculo de la potencia relativa
1) Calcule la potencia relativa del efecto sedante entre etanol y pentobarbital. Con la relacin:
Potencia relativa del Etanol(Pr EtOH)=

DE 50 Pentobarbital
DE 50 Etanol

VI. Bibliografa
Gonzlez-Trujano M, Martnez A, Reyes A, Reyes B y Navarrete A. (2006). Palmitote isolated

from Annona diversifolia induces an anxiolytic-like effect in mice. Planta Medica. 72(8):703707

Oliva I, Gonzlez-Trujano M, Arrieta J, Enciso-Rodrguez R y Navarrete A. (2004).

Neuropharmacological profile of hydroalcoholic extract of Valerina edulis ssp. procera roots in


mice. Phytotherapy Research. 18(4):290-296.

Tallarida R. (2000). Drug Synergism and Dose-effect Data Analysis. Chapman & Hall /CRC.

New York.
Ugalde M, Reza V, Gonzlez-Trujano M, Avula B, Khan I y Navarrete A. (2005). Isobolographic

analysis of the sedative interaction between six central nervous system depressant drugs and Valeriana
edulis hydroalcoholic extract in mice. Journal of Pharmacy and Pharmacology. 57:631-639.

6.

Influencia de la va de administracin
sobre la respuesta farmacolgica

Nmero de sesiones sugeridas: 2 sesiones (ejecucin y anlisis)


Temas relacionados con el curso de teora de Farmacologa I: Farmacocintica, vas de administracin de frmacos.

I. Introduccin
La respuesta farmacolgica se puede ver modificada en funcin de la va por la cual se administra el frmaco.
Esta transformacin puede consistir en un simple retraso en la accin y, en otros casos, puede cambiar o anular
totalmente el efecto. Algunos pueden sufrir alteraciones en el sitio de aplicacin, dando origen a nuevas
molculas que no necesariamente van a presentar la misma reaccin o van a seguir la misma farmacocintica.
En otros casos, debido a las propiedades fisicoqumicas, no es posible administrarlo por una va determinada,
por ejemplo, un frmaco no soluble en soluciones acuosas no es posible administrarlo por va intravenosa. Los
frmacos irritantes tambin limitan su aplicacin por alguna va determinada, as que la eleccin de la forma
de administracin ms adecuada es importante para lograr que se consiga el efecto deseado a una velocidad
y a una intensidad idneas.
En esta prctica se evaluar la forma en la cual la va de administracin modifica la respuesta de un frmaco
bien caracterizado como el pentobarbital, para el cual se medirn el perodo de latencia y la duracin del
efecto cuando se administra por distintos puntos.

II. Objetivos
Los objetivos de esta prctica son:
1. Determinar la influencia de la va de administracin en la accin farmacolgica del pentobarbital.
2. Explicar el significado del perodo de latencia de la accin farmacolgica del pentobarbital.

III. Material
a) Material biolgico
Cuatro ratas Wistar machos de 200-250 g de peso

b) Materiales, cristalera y equipo


Jeringas de 1 y 3 mL
Cnula para administracin esofgica
Balanza para pesar animales
Cronmetro

38

Dr. Andrs Navarrete Castro

c) Frmacos y reactivos
Anestesal (pentobarbital sdico 6.3 g/100 mL, uso veterinario). Pfizer.
Disolucin de Pentobarbital sdico 40 mg/mL.

Transfiera 6.35 mL de Anestesal a un matraz volumtrico de 10 mL y llvelo al aforo con


disolucin salina. En el invierno use una disolucin de 30 mg/mL: Transfiera 4.76 mL de Anestesal
a un matraz volumtrico de 10 mL y llvelo al aforo con disolucin salina.
Disolucin salina fisiolgica (0.9%).

IV. Procedimiento
1) Pesado y marcaje de animales
Cada grupo de trabajo recibir cuatro ratas. Marque a sus animales con el marcador de tinta indeleble,
pselos y registre el peso de cada uno.

2) Desarrollo del experimento


a) Asigne aleatoriamente el tratamiento que recibir cada animal: va oral, intraperitoneal, subcutnea o
intramuscular y antelo en el cuadro de abajo. Administre 0.1 mL por cada 100 g de peso de la solucin
del frmaco por la va de administracin que le corresponde a cada animal y registre el tiempo en el
cuadro de abajo.
b) Registre el tiempo en el cual el animal pierde el reflejo de enderezamiento, que se caracteriza por el
hecho que al ponerlo sobre su dorso no presenta resistencia para intentar volver a su posicin natural.
Este tiempo se denomina Latencia.
c) La duracin del efecto corresponde al tiempo entre la prdida del reflejo de enderezamiento y el lapso
en el cual el animal vuelve a su posicin natural.
d) Cubra al animal con un lienzo de franela para reducir la hipotermia producida por el frmaco.
e) Registre sus datos en el cuadro siguiente.

Rata
Nm.
1
2
3
4

Peso
(g)

Volumen a
Tiempo de
Tiempo de
Va de
administracin administracin administracin
administracin
(mL)
(min)
(min)

Efecto
Inicio
(min)

Trmino
(min)

Duracin
(min)

Manual de Farmacologa I. Guin de Prcticas

39

V. Anlisis de resultados
a) Construya una grfica para el perodo de latencia y otro para la duracin del efecto en funcin de la
va de administracin.
b) Realice el anlisis estadstico correspondiente para indicar si hay o no influencia de la va de administracin
en el efecto del pentobarbital.

VI. Bibliografa
Rowland M y Tozer T. (1995). Clinical pharmacokinetics. 3rd Edition. Lea and Febiger, EUA.
Shargel L, Wu-Pong S y Yu A. (2004). Applied biopharmaceutics and Pharmacokinetics. 5th

Edition. McGraw-Hill Medical, EUA.

7.

Excrecin renal de cido acetilsaliclico en voluntarios

Nmero de sesiones sugeridas: 2 sesiones (ejecucin y anlisis)


Temas relacionados con el curso de teora de Farmacologa I: Farmacocintica, excrecin de frmacos

I. Introduccin
La eliminacin de frmacos comprende dos procesos: la excrecin y la biotransformacin. La excrecin
renal es la principal va como se desecha gran cantidad de frmacos. Cuando existe una disminucin en la
eliminacin por esta forma puede tener complicaciones importantes, ya que se debe modificar el esquema de
dosificacin y la dosis.
En esta prctica se determinar la eliminacin de un frmaco comn, el cido acetilsaliclico, cuantificando en
la orina la cantidad de salicilatos totales excretados despus de la administracin de dos tabletas de 500 mg
de este frmaco en voluntarios sanos.

II. Objetivos
Los objetivos de esta prctica son:
1. Identificar a la excrecin renal como uno de los procesos principales de la eliminacin de frmacos.
2. Determinar la eliminacin por excrecin renal del cido acetilsaliclico en voluntarios sanos, as como
identificar los factores que influyen en la misma.

III. Material
a) Sujetos de estudio
Criterios de inclusin: Voluntarios adultos jvenes sanos, de 18 a 20 aos de edad, de 55-65 kg
de peso, preferentemente del gnero masculino.
Criterios de exclusin: No entrarn en el grupo personas con problemas gastrointestinales (lcera
gastroduodenal, gastritis), historia de alergias, problemas en su funcin renal o intolerancia a salicilatos,
mujeres con problemas de hemorragias menstruales, ni sujetos que hayan tomado salicilatos en las
ltimas 24 horas. Cualquiera de estas contingencias debe ser informada al profesor.
Todos los voluntarios debern contar con el formato de Consentimiento informado, firmado por
el voluntario, un testigo y los profesores de laboratorio. El original lo entregarn a su profesor y
conservarn una copia (ver Apndice III).

42

Dr. Andrs Navarrete Castro

b) Materiales, cristalera y equipo


Un matraz Erlenmeyer de 100 mL
Cinco matraces Erlenmeyer de 50 mL
Una gradilla
10 tubos de ensayo de 10 mL
Una pipeta graduada de 5 mL
Una pipeta graduada de 1 mL
Una pipeta graduada de 10 mL
Una probeta de 500 mL
Dos vasos de precipitado de 50 mL
Dos vasos de precipitado de 250 mL
Un vaso de precipitado de 500 mL
Un matraz volumtrico de 25 mL
Seis matraces volumtricos de 10 mL
Placa de calentamiento
Cronmetro
Espectrofotmetro
Potencimetro

c) Frmacos y reactivos
Agua potable
Tabletas de cido acetilsaliclico de 500 mg
Salicilato de sodio
Reactivo de Trinder para salicilatos

Se disuelven 10 g de cloruro mercrico en 200 mL de agua destilada caliente. Cuando la disolucin


es completa, se enfra y se aaden 30 mL de cido clorhdrico 1 N. Posteriormente se disuelven 10 g de
nitrato frrico en la disolucin y se afora a 250 mL con agua destilada.
Amoniaco acuoso (hidrxido de amonio)
Disolucin de cido clorhdrico 0.1 N

IV. Procedimiento
a) Preparacin y toma de muestras
Rotular cinco matraces Erlenmeyer (donde se colocarn las muestras de orina) y cinco tubos de ensayo
con los tiempos 0, 40, 60, 80 y 100 minutos. Anotar en el cuadro adjunto la hora en la cual se
realizarn cada una de las tareas.
Obtencin de la muestras se realizar de acuerdo con el cuadro siguiente.

43

Manual de Farmacologa I. Guin de Prcticas

Tiempo
(min)

Hora

Actividad a realizar
Desechar la primera orina.
Tomar 750 mL de agua potable.
Colectar la orina (mnimo 100 mL). sta ser la orina basal.
Medir su volumen y anotarlo.

Tomar dos tabletas de cido acetilsaliclico de 500 mg en un volumen de agua igual al


orinado.

a) Poner 30 mL de esta muestra en un vaso de precipitados. Ajustar el pH a 7


0.5 con Amoniaco acuoso y/o HCl al 0.1 N.
b) De esta muestra pasar 0.5 mL al tubo de ensayo correspondiente a los cero
minutos.
Colectar la orina, medir su volumen y anotarlo.

40

Repetir procedimiento anterior (incisos a y b) utilizando el tubo etiquetado con 40


minutos.
Colectar la orina, medir su volumen y anotarlo.

60

Repetir procedimiento anterior (incisos a y b) utilizando el tubo rotulado con 60


minutos.
Colectar la orina, medir su volumen y anotarlo.

80

Repetir procedimiento anterior (incisos a y b) utilizando el tubo etiquetado con 80


minutos.
Colectar la orina, medir su volumen y anotarlo.

100

Repetir procedimiento anterior (incisos a y b) utilizando el tubo rotulado 100


minutos.

b) Anlisis de salicilato en orina


Para cada muestra de orina se cuantifica la cantidad de salicilatos excretados de acuerdo al siguiente
procedimiento.

1) Calentar a ebullicin los tubos de ensayo con las muestras durante 10 minutos.
2) Enfriar los tubos con agua fra
3) Aadir al tubo 2.5 mL de reactivo para salicilatos. La reaccin da un color cuantificable por
espectrofotometra a 525 nm.
4) Realizar una curva estndar pesando 10 mg de salicilato de sodio, disolverlo en agua destilada, aforar a
10 mL y continuar como se indica en el cuadro siguiente, utilizando matraces volumtricos de 10 mL:

44

Dr. Andrs Navarrete Castro

Tubo nm.

Volumen (mL) de disolucin


stock de salicilato de sodio
(1 mg/mL)

Concentracin
(g/mL)

0.25

25

0.5

50

100

200

300

Absorbancia

5) La muestra a tiempo cero ser utilizada como blanco.


6) Interpolar los valores de absorbancia de las muestras en la curva estndar para obtener la
concentracin de salicilatos en la muestra.
7) Los resultados obtenidos se anotarn en el siguiente cuadro.

Muestra

Tiempo
(min)

Blanco

40

60

80

100

pH

Volumen
(mL)

Absorbancia

Concentracin
(g/mL)

Cantidad excretada
de salicilatos (g)

Cantidad excretada
acumulada de
salicilatos (g)

V. Anlisis de resultados
1) Construya una grfica de cantidad excretada acumulada de salicilatos contra el tiempo y calcule la constante
de excrecin.
2) Calcule el porcentaje de frmaco excretado por orina en 100 minutos y comprela con la de otros
voluntarios.

VI. Bibliografa
Rowland M y Tozer T. (1995). Clinical pharmacokinetics. 3rd Edition. Lea and Febiger. EUA.
Shargel L, Wu-Pong S, y Yu A. (2004). Applied biopharmaceutics and pharmacokinetics. 5th

Edition. McGraw-Hill Medical, EUA.

8.

Demostracin del efecto sinergista


y antagonista en un sistema simulado

Nmero de sesiones sugeridas: 1 sesin (ejecucin y anlisis)


Temas relacionados con el curso de teora de Farmacologa I: Farmacodinamia, agonistas y antagonistas;
Farmacometra, relacin dosis-respuesta gradual.

I. Introduccin
Las lecciones prcticas son una parte importante de la enseanza de la Farmacologa en diversas reas como la
Medicina, la Enfermera y la Farmacia. Los experimentos in vivo e in vitro han sido ampliamente utilizados en
las lecciones prcticas para ayudar a los estudiantes a adquirir habilidades en los experimentos farmacolgicos,
reforzando su conocimiento aprendido con las clases tericas y los libros.
Aunque los experimentos tradicionales en animales vivos son invaluables, tienen desventajas: alto consumo de
tiempo, dinero y sacrificio de ejemplares; slo puede probarse un nmero limitado de frmacos en un tiempo
y requieren frecuentemente de un trabajo constante e intenso.
Una variedad de software ha sido desarrollado para la enseanza de la Farmacologa en pregrado y posgrado.
Evidencia previa ha mostrado que esta tcnica innovadora de enseanza, junto con los mtodos de enseanza
tradicionales, facilita al estudiante el aprendizaje y mejora su desempeo en esta disciplina.
En esta sesin, se utilizar un sistema de simulacin para construir curvas concentracin-respuesta de agonistas,
tal y como se realizaran en un modelo de rgano o tejido aislado.

II. Objetivo
Los objetivos de esta prctica son:
1. Demostrar el efecto concentracin dependiente de la Histamina y Carbacol en un sistema simulado.
2. Determinar el tipo de interaccin farmacolgica de la Atropina, Mepiramina y Tubocurarina sobre la
actividad de la Histamina y Carbacol en un sistema simulado.

III. Material
a) Software
Se utilizar el software Organ Bath Simulation 2006 ver. 1.2 desarrollado por la Universidad

de Strathclyde, Escocia.

46

Dr. Andrs Navarrete Castro

El software puede ser descargado del siguiente vnculo:

http://spider.science.strath.ac.uk/sipbs/media/2/OBSim%20V1.2%20Setup.exe
El software deber ser instalado en una PC o compatible con Microsoft Windows 98 posterior.

IV. Procedimiento
A) Manejo del software Organ Bath Simulation 2006 ver. 1.2
Para el uso adecuado del software se dividir su manejo por procedimiento con referencia al esquema siguiente:

1. Inicio del programa y comienzo de un nuevo experimento


Para iniciar el programa se debe oprimir el siguiente icono:

Para comenzar un nuevo experimento:

a) Seleccione en Tissue type, el tejido Guinea Pig Ileum. Este tejido es el que ser colocado dentro de
la cmara de rgano aislado.
b) Oprima el botn New Experiment.
c) Oprima el botn Record, para comenzar la lectura dentro del rea de registro.
d) Seleccione y aplique frmacos de la lista de agonistas o antagonistas como se indica a continuacin.

Manual de Farmacologa I. Guin de Prcticas

47

2. Adicin de agonistas a la cmara de rgano aislado

a) En el apartado Agonist, seleccione el agonista que se utilizar.


b) Seleccione la concentracin molar que se emplear.
c) Introduzca en el volumen a utilizar: 0.10 mL
d) Oprima el botn Add to Organ Bath, para agregar el agonista a la cmara. Registre por 12 segundos
(un cuadro en la lnea de tiempo) que equivale a 3 minutos en la simulacin.
e) Para curvas acumulativas, agregue la siguiente concentracin de agonista. Para curvas por lotes o no
acumulativas, oprima el botn Flush Reservoir to Bath, para lavar el tejido con disolucin Krebs.
3. Adicin de antagonistas a la cmara de rgano aislado

a) En el apartado Antagonist, seleccione el antagonista que se utilizar.


b) Seleccione la concentracin molar que se emplear.
c) Introduzca en el volumen a utilizar: 0.10 mL
d) En la lista desplegable que se encuentra a la derecha del botn Add to, seleccione Organ Bath, y
oprima el botn Add to para agregar el antagonista a la cmara.
4. Medicin de la respuesta del tejido
Para medir la amplitud de los picos de las contracciones del tejido:

a) Oprima el botn Stop, para terminar el experimento.


b) Usando la barra de desplazamiento horizontal del rea de registro, seleccione la seccin que contiene
las contracciones del tejido que sern medidas.
c) Arrastre el cursor de medicin al punto de la grfica de registro que ser medido. La fuerza de
contraccin (en gramos) ser mostrada debajo del cursor.
d) Se sugiere tomar al menos cinco lecturas cercanas dentro de la meseta o rea de medida y obtener el
promedio de las lecturas para un mejor resultado.
B) Experimentos a realizar en el software de simulacin
Experimento1.
Curvas concentracin respuesta de agonistas.

a) Seleccione como tejido al leon de cobayo e inicie un nuevo experimento.


b) Seleccione a Histamina (Histamine) como el agonista a utilizar a una concentracin de 1x108 M y
un volumen de 0.10 mL.
c) Oprima el botn Record para iniciar el experimento.
d) Se deja estabilizar la muestra por 3 minutos (12 segundos reales o un cuadro del rea de registro) y se
oprime el botn Add to Organ Bath.
e) Cuando la contraccin del msculo se estabilice (se registre una meseta) o hayan transcurrido 3
minutos de la simulacin (si es que no hay contraccin), se agrega la concentracin de 1x10 7 M y
as sucesivamente hasta agregar la concentracin de 1x100 M.

48

Dr. Andrs Navarrete Castro

f) Al terminar la curva, se oprime el botn Stop y se guarda el registro. Se calcula la fuerza de contraccin
por cada concentracin agregada.
g) Se realiza el mismo experimento, ahora con Carbacol (Carbachol).
Experimento 2.
Efecto de un antagonista en la curva concentracin respuesta de agonistas

a) Seleccione como tejido al leon de cobayo e inicie un nuevo experimento.


b) Seleccione a Histamina como el agonista a utilizar a una concentracin de 1x10 8 M y un volumen
de 0.10 mL.
c) Seleccione a Mepiramina (Mepyramine) como el antagonista a utilizar a una concentracin de 1x106
M y un volumen de 0.10 mL.
d) Oprima el botn Record para iniciar el experimento.
e) Se deja estabilizar la muestra por 3 minutos (12 segundos reales o un cuadro del rea de registro) y
se agrega el antagonista a Organ Bath oprimiendo el botn Add to del apartado Antagonist. Se
deja incubar por 3 minutos de simulacin.
f) Despus de terminada la incubacin. Se construye la curva concentracin respuesta de la Histamina
como se describe en el experimento 1.
g) Se realiza el mismo experimento, ahora con Carbacol como agonista y Atropina (Atropine) como
antagonista.
h) Adicionalmente, realice el mismo experimento utilizando dos concentraciones ms del antagonista, a
fin de tener el efecto del antagonista a tres diferentes concentraciones, en la accin del agonista.
Nota: Se puede experimentar con combinaciones de agonistas y antagonistas con los que cuenta el
software, para demostrar la selectividad de estos ltimos.
Experimento 3.
Efecto relajante de antagonistas

a) Seleccione como tejido al leon de cobayo e inicie un nuevo experimento.


b) Seleccione a Histamina como el agonista a utilizar a una concentracin de 1x10-1 M y un volumen
de 0.10 mL.
c) Oprima el botn Record para iniciar el experimento.
d) Se deja estabilizar la muestra por 3 minutos (12 segundos reales o un cuadro del rea de registro) y
se oprime el botn Add to Organ Bath.
e) Cuando la contraccin del msculo se estabilice (se registre una meseta) o hayan transcurrido 3 minutos
de la simulacin (si es que no hay contraccin), se construye una curva concentracin respuesta con
concentraciones crecientes de Mepiramina (de 1x108 M a 1x100 M). Tome en cuenta que ahora
la fuerza de contraccin disminuir en lugar de aumentar.

Manual de Farmacologa I. Guin de Prcticas

49

f) Al terminar la curva, se oprime el botn Stop y se guarda el registro. Se calcula la fuerza de


contraccin por cada concentracin agregada.
g) Se realiza el mismo experimento, ahora con Carbacol a una concentracin de 1x10 3 M y como
antagonista Atropina.
Nota importante: Al igual que en los experimentos in vitro, la concentracin real en la cmara de rgano
aislado es 100 menor debido a la dilucin 1:100 que se realiza al agregar 0.01 mL de muestra
en 10 mL de disolucin que contiene la cmara.

V. Anlisis de resultados
1. Con los datos obtenidos del experimento 1

a) Construir las curvas concentracin respuesta de Histamina y de Carbacol.


b) Determinar el modelo al que se ajustan los datos.
c) Calcular la CE50 para la Histamina y el Carbacol de acuerdo con modelo determinado en el inciso
anterior.
2. Con los datos del experimento 2

a) Construir las curvas concentracin respuesta de Histamina y de Carbacol con cada uno de los
antagonistas utilizados.
b) Calcular la CE50 para las combinaciones de Histamina y de Carbacol con los antagonistas utilizados de
acuerdo con modelo determinado en el experimento anterior.
c) Calcular cuntas veces se disminuy el efecto del Carbacol y de la Histamina por la presencia de sus
antagonistas.
d) Con las tres curvas concentracin-respuesta de los antagonistas a diferente concentracin, calcule la
potencia o pA2 del antagonista.
3. Con los datos del experimento 3

a) Construir las curvas concentracin respuesta de Histamina y de Carbacol con cada uno de los
antagonistas utilizados.
b) Determinar el modelo al que se ajustan los datos.
c) Calcular la CI50 (Concentracin Inhibitoria media) para las combinaciones de Histamina y
de Carbacol con los antagonistas utilizados, de acuerdo con modelo determinado en el inciso
anterior.

50

Dr. Andrs Navarrete Castro

VI. Bibliografa
Samuelsson G. (1991). Assays for pharmacological activity: Non-specific assays. Methods in

Plant Biochemistry. Volume 6. Assay for bioactivity. Academic Press Limited, EUA, 261-280.

Schwinghammer T y Kroboth P. (1988). Basic concepts in pharmacodynamic modeling. Journal

of Clinical Pharmacology. 28:388-394.

Tallarida R. (2000). Drug sinergism and dose-effect data analysis. Chapman & Hall/CRC,

EUA.

9.

Demostracin del efecto sinergista y antagonista


en un sistema de rgano aislado

Nmero de sesiones sugeridas: 2 sesiones (ejecucin y anlisis)


Temas relacionados con el curso de teora de Farmacologa I: Farmacodinamia, agonistas y antagonistas; Farmacometra, relacin
dosis-respuesta gradual.

I. Introduccin
Las preparaciones de tejidos u rganos aislados son comnmente usadas para estudiar los efectos de un
frmaco sobre un tipo especfico de receptores. Estas preparaciones son tambin utilizadas para bioensayos,
caracterizacin de receptores especficos o sus subtipos, para determinar la curva concentracin-respuesta de
un agonista y para estudiar el antagonismo entre un frmaco y otro nuevo descubierto.
El leon de cobayo ha sido una preparacin in vitro utilizada para estudiar cambios mediados por receptores,
para identificar nuevos receptores, y para determinar la variacin en especies producidas por frmacos anticolinrgicos. Varios receptores, incluyendo los de histamina, los GABArgicos y adrenorreceptores se pueden
estudiar en este tipo de preparaciones.
La preparacin de leon de rata puede ser usada para ensear los conceptos bsicos del bioensayo y para
demostrar la actividad espasmoltica de frmacos colinrgicos y anticolinrgicos. Las ventajas de esta preparacin son su bajo costo y fcil implementacin y manejo.
En esta prctica se utilizar la preparacin de leon de rata para determinar el efecto del Carbacol y Atropina
sobre los receptores colinrgicos presentes en la preparacin.

II. Objetivos
Los objetivos de esta prctica son:
1. Demostrar el efecto concentracin dependiente del Carbacol en leon de rata.
2. Determinar el tipo de interaccin farmacolgica de la Atropina sobre la actividad del Carbacol en leon
de rata.

III. Material
a) Material biolgico
Una rata Wistar hembra de 200-250 g de peso, con ayuno de 12 h y libre acceso al agua.

52

Dr. Andrs Navarrete Castro

b) Materiales, cristalera y equipo


Vaso de precipitado de 1 L
Pipetas graduadas de 1 mL
Seis matraces aforados de 10 mL
Estuche de diseccin
Placa de agitacin
Balanza analtica
Polgrafo Biopac System acoplado a una computadora con el software AcqKnowledge versin

3.7

c) Reactivos
Disolucin Krebs-Henseleit (KHS).

Composicin en mM: NaCl 118, KCl 4.7, MgSO4.7H2O 1.2, CaCl2 2.5, KH2PO4 1.2,
NaHCO3 25, glucosa (C6H12O6) 11.
Cantidades de las sales para preparar 1000 mL de disolucin Krebs-Henseleit (KHS)
D-glucosa
C6H12O6
1.998 g
Sulfato de magnesio heptahidratado

MgSO4 l 7H2O

0.2956 g

Dihidrogenofosfato de potasio
Cloruro de potasio
Cloruro de sodio
Hidrgenocarbonato de sodio
EDTA disdico dihidratado
Cloruro de calcio dihidratado

KH2PO4
KCl
NaCl
NaHCO3
C10H14O8N2Na2 l 2H2O
CaCl2 l 2H2O

0.1632 g
0.351 g
6.903 g
2.1 g
0.0117 g
0.3677 g

Se disuelven todas las sales, una por una, en aproximadamente 500 mL de agua destilada. Disolviendo al
ltimo el cloruro de calcio. Una vez disueltas las sales y sin signos de precipitacin se lleva a un volumen de
1000 mL con agua destilada.
La disolucin KHS deber tener un pH de 7.4 a 37C y se mantendr con burbujeo constante de gas
carbgeno (95% O2 y 5% CO2). Si presenta precipitacin deber prepararse nuevamente.
Disoluciones de Carbacol (1x104, 3x105, 1x105, 3x106 y 1x106 M).

Preparacin de la disolucin Stock (1x103 M).


Disolver 1.825 mg de Carbacol en agua destilada y aforar a 10 mL.
Preparacin de las disoluciones.
Una vez preparada la disolucin stock deber seguirse la serie de diluciones como se muestra en el
siguiente esquema, utilizando matraces aforados de 10 ml:

Manual de Farmacologa I. Guin de Prcticas

53

Disolucin de Sulfato de Atropina (1x10 6 M).

Se pesan 1.692 mg de sulfato de atropina, se disuelven agua destilada y se afora aun volumen
de 10 mL (disolucin Stock). A continuacin se sigue el esquema de diluciones como se indica:

IV. Procedimiento

a) Manejo del Polgrafo Biopac System


Para el manejo adecuado del Polgrafo Biopac System por medio del software AcqKnowledge, vase
el Apndice IV de esta gua.

b) Diseccin del leon de rata


1) Sacrificar la rata en la cmara de CO2 o por dislocacin cervical.
2) Abrir el abdomen y realizar la diseccin del leon. La localizacin del leon se muestra en el
siguiente esquema.

54

Dr. Andrs Navarrete Castro

3) Disecar una longitud aproximada de 1012 cm de leon, lavarlo con disolucin KHS hasta que la
luz intestinal quede libre materia orgnica.
4) Cortar segmentos de aproximadamente 1 cm de largo y colocarlos en disolucin KHS, con burbujeo continuo
de gas carbgeno.
c) Montaje de la preparacin
1) Cada preparacin se suspender en una cmara para rgano aislado con ganchos de alambre
de nicromel, que se incrustan en el tejido. Uno de los extremos se fija a la cmara y el otro al
transductor de fuerza conectado al Polgrafo Biopac System, de acuerdo a las siguientes figuras:

55

Manual de Farmacologa I. Guin de Prcticas

2) Cada cmara deber contener 10 mL de solucin KHS con burbujeo constante de gas carbgeno
a una temperatura de 371 C.
3) El tejido se somete a una tensin inicial de 1 g dejndolo estabilizar por 20 minutos, con un
lavado intermedio a los 10 minutos.
4) Realizar dos estimulaciones con 100 L de Carbacol (1x10-4 M) a intervalos de 20 minutos,
con un lavado intermedio a los 10 minutos Despus de cada estimulacin se lava el tejido con
solucin KHS dos veces para eliminar al Carbacol.
Nota: La concentracin real en la cmara de rgano aislado es 100 veces menor debido a la
dilucin (1:100).

5) El cronograma de los pasos 2 a 4 es el siguiente:


Tiempo corrido (min)
0
10
20
30
40
50
60
70

Actividad
Inicio
(Oprimir el botn Start)
Lavado con KHS
Estimulacin 1 y
Lavado con KHS
Lavado con KHS
Estimulacin 2 y
Lavado con KHS
Lavado con KHS
Lavado con KHS
Inicio de las evaluaciones

d) Curva acumulativa concentracin respuesta del Carbacol


1) Estando estable el tejido, se registra una lnea basal durante 5 minutos y se adicionan 0.1 mL de
Carbacol 1x10-6 M (disolucin 1). Las siguientes disoluciones se agregarn sucesivamente en el
momento en que la disolucin anterior alcance una meseta de contraccin.
Disolucin
1
2
3
4
5

Concentracin de Carbacol
1x106 M
3x106 M
1x105 M
3x105 M
1x104 M

2) Despus de evaluar se lava el tejido por dos veces con disolucin KHS dejando reposar por
periodos de 10 minutos entre cada uno.
e) Efecto de la Atropina en la accin del Carbacol
1) Estando estable el tejido, se registra una lnea basal durante 5 minutos y se adicionan 0.1 mL de
Atropina 1x106 M.
2) Se deja incubar el tejido con la Atropina durante 5 minutos y posteriormente se realiza la curva
acumulativa concentracin-respuesta, como se indic en el inciso e).

56

Dr. Andrs Navarrete Castro

V. Anlisis de resultados
1. Para analizar los datos es necesario descargar el software AcqKnowledge 3.9 Demo en la siguiente
direccin electrnica:
http://www.biopac.com/Demos.asp?did=4&PCDemoResearch=Y
Es necesario registrase para descargarlo, y debe instalarse como indican las instrucciones del sitio web.
Con ayuda del software y de su profesor deber llenar el cuadro de datos anexa.
TABLA DE DATOS DEL EXPERIMENTO
EXPERIMENTO 1. CARBACOL
NM.

CONCENTRACIN
(M) CARBACOL

LOG [CONC (M)]

MUESTRA / CANAL
1

Basal
1
2
3
4
5
6
EXPERIMENTO 2. CARBACOL + ATROPINA (1X10-6 M)
NM.

CONCENTRACIN
(M) CARBACOL

LOG [CONC (M)]

MUESTRA / CANAL
1

Basal
1
2
3
4
5
6

2. Con los datos obtenidos:

a) Construir las curvas concentracin respuesta de Carbacol y de Carbacol+Atropina.


b) Determinar el modelo al que se ajustan los datos.
c) Calcular las CE50 para el Carbacol y para Carbacol+Atropina, de acuerdo con el modelo determinado
en el inciso anterior.

Manual de Farmacologa I. Guin de Prcticas

57

d) Calcular cuntas veces se disminuy el efecto del Carbacol por la presencia de la Atropina.
e) Determinar el tipo de interaccin de la Atropina sobre la accin del Carbacol.

VI. Bibliografa
Samuelsson G. (1991). Assays for pharmacological activity: Non-specific assays. Methods in

Plant Biochemistry. Volume 6. Assay for bioactivity. Academic Press Limited, EUA, 261-280.

Schwinghammer T y Kroboth P. (1988). Basic concepts in pharmacodynamic modeling. Journal

of Clinical Pharmacology. 28:388-394.

Tallarida R. (2000). Drug sinergism and dose-effect data analysis. Chapman & Hall/CRC, EUA.

Apndice I.

Tabla de convensin de proporcin


a unidades Probit

Tabla de conversin de proporcin (pi) a unidades probit (yi)


pi

0.00

0.01

0.02

0.03

0.04

0.05

0.06

0.07

0.08

0.09

0.00

---

2.673

2.945

3.119

3.249

3.355

3.445

3.524

3.595

3.659

0.10

3.718

3.773

3.825

3.874

3.920

3.964

4.006

4.046

4.085

4.122

0.20

4.156

4.194

4.228

4.261

4.294

4.326

4.357

4.388

4.417

4.447

0.30

4.476

4.505

4.532

4.561

4.588

4.615

4.642

4.669

4.695

4.721

0.40

4.747

4.773

4.798

4.824

4.849

4.874

4.900

4.925

4.950

4.975

0.50

5.000

5.025

5.050

5.075

5.100

5.125

5.151

5.176

5.202

5.227

0.60

5.253

5.279

5.305

5.331

5.358

5.385

5.412

5.439

5.467

5.495

0.70

5.524

5.553

5.582

5.612

5.643

5.674

5.706

5.739

5.771

5.806

0.80

5.841

5.878

5.915

5.954

5.994

6.036

6.080

6.126

6.175

6.227

0.90

6.282

6.341

6.405

6.476

6.555

6.645

6.751

6.881

7.054

7.327

pi

0.000

0.001

0.002

0.003

0.004

0.005

0.006

0.007

0.008

0.009

0.97

6.88

6.896

6.911

6.927

6.944

6.960

6.978

6.996

7.014

7.034

0.98

7.054

7.075

7.097

7.121

7.145

7.171

7.198

7.227

7.258

7.291

0.99

7.327

7.366

7.409

7.458

7.513

7.576

7.652

7.748

7.879

8.091

Apndice II.

Tcnicas de manejo e identificacin


de animales de laboratorio (rata y ratn)

I. Manejo del ratn.


Los ratones, as como la mayora de los animales de laboratorio, pueden ser levantados por su cola. La base
de la cola es sujetada entre los dedos pulgar e ndice y el roedor entonces es levantado en posicin vertical.
Esta tcnica resulta til para manejar y trasladar a los ratones distancias cortas. Se debe tener cuidado de no
sujetarlo por la punta de la cola ya que podra escalar la misma y morder la mano (figura 1 y 2).

Figura 1. Forma correcta de manejar un ratn

Figura 2. Forma incorrecta de manejar un ratn

Para la inmovilizacin del ratn con el objetivo de administrarle un frmaco o sustancia, se proceder de la
siguiente manera:
Se toma al ratn como se explic anteriormente, y el peso del cuerpo del roedor es apoyado sobre la reja
de la caja (figura 3), se toma ahora la cola del ratn por medio del dedo meique y con los dedos ndice y
pulgar se toma de la piel de la nuca (figura 4 y 5). Se voltea y se levanta la mano, de manera que el vientre
quede expuesto (figura 6 y 7). Una buena inmovilizacin evita que el ratn se voltee o se mueva al momento
de la administracin.

62

Dr. Andrs Navarrete Castro

Figura 3.

Figura 4.

Figura 5.

Figura 6.

Figura 7.

63

Manual de Farmacologa I. Guin de Prcticas

Una vez inmovilizado el ratn se puede proceder a la administracin del frmaco o sustancia, teniendo
cuidado de sujetarlo firmemente.

II. Manejo de la rata


La rata debe manejarse por la base de la cola y evitar levantarla de esta manera por mucho tiempo debido a los
movimientos que realiza (figura 8). El traslado se realizar de esta manera en distancias muy cortas y no se
deber sujetar por la punta de la cola.

Figura 8. Forma correcta de manejar a una rata.


Para la inmovilizacin de la rata de laboratorio existen muchas tcnicas. A continuacin se explicarn las ms
utilizadas.

Tcnica 1.
Se sujeta a la rata por la base de la cola con la mano derecha y con la izquierda se coloca el cuello de la rata
entre los dedos medio e ndice. La rata entonces es sujetada por las extremidades anteriores y el abdomen
sin hacer presin sobre el cuello (figura 9, 10 y 11). Se levanta la mano y la cola es sujetada con la mano
izquierda para dejar expuesto el vientre (figura 12 y 13). Se levanta la mano y la cola es sujetada con la
mano derecha para dejar expuesto el vientre.

Figura 9.

Figura 10.

Figura 11.

64

Dr. Andrs Navarrete Castro

Figura 12.

Figura 13.

Tcnica 2.
Se sujeta a la rata por la base de la cola con la mano derecha y con la mano izquierda se coloca el cuello de la rata
entre los dedos pulgar e ndice (figura 14 y 15), de manera que los dedos queden a la altura de las extremidades anteriores. Con el movimiento natural de la mano, se cierra sta de manera que las extremidades anteriores
de la rata queden cruzadas, se levanta y se sujeta la cola con la mano derecha para dejar expuesto el vientre
(figuras 16, 17 y 18).

Figura 14.

Figura 15.

Figura 16.

Figura 17.

Figura 18.

65

Manual de Farmacologa I. Guin de Prcticas

III. Marcaje del ratn y la rata


La tcnica recomendada para el marcaje de ratones y ratas en el Laboratorio de Farmacologa se realiza en la
cola del animal por medio de un marcador indeleble, siguiendo la clave que se muestra en las figuras 19 a 25.
Esta tcnica se recomienda cuando se utilizan pocos animales y en experimentos muy cortos en duracin.

Figura 19. Marcaje en la cola con marcador.


Figura 20. Ratn marcado con el nmero 1.

Figura 21. Ratn marcado con el nmero 2.

Figura 22. Ratn marcado con el nmero 3.

Figura 23. Ratn marcado con el nmero 4.

Figura 24. Ratn marcado con el nmero 5.

Figura 25. Ratn marcado con el nmero 6.

66

Dr. Andrs Navarrete Castro

IV. Bibliografa
Short D y Woodnott D (editores). (1963). The A.T.A. manual of laboratory animal practice

and techniques. Charles C. Thomas-Publisher, EUA: 47-57.

Apndice III.

Formato de Consentimiento Informado

Apndice IV.

Instructivo para el uso del polgrafo


Biopac System MP-100

I. Materiales y reactivos
Polgrafo Biopac System MP-100A-CE
Gas carbgeno (oxigeno 95%-dixido de carbono 5%).
Disolucin Krebs-Henseleit (KHS)

Disolucin Krebs-Henseleit (KHS)


D-glucosa

C6H12O6

1.998 g

Sulfato de magnesio heptahidratado

MgSO47H2O

0.2956 g

Dihidrogenofosfato de potasio

KH2PO4

0.1632 g

Cloruro de potasio

KCl

0.351 g

Cloruro de sodio

NaCl

6.903 g

Hidrgenocarbonato de sodio

NaHCO3

2.1 g

EDTA disdico dihidratado

C10H14O8N2Na22H2O

0.0117 g

Cloruro de calcio dihidratado

CaCl22H2O

0.3677 g

Preparacin: Se disuelven todas las sales en aproximadamente 500 mL de agua destilada. Disolviendo
en ltimo trmino al Cloruro de calcio. Una vez disueltas las sales y sin signos de precipitacin se lleva a un
volumen de 1000 mL con agua destilada.
Disolucin de Acetilcolina 3x10-5 M
Disolucin de Norepinefrina 1x10-6 M
Disolucin de Carbacol 1x10-4 M

70

Dr. Andrs Navarrete Castro

II. Procedimiento

A. Calibracin del polgrafo.


1. Se verifica que todos los canales estn firmemente conectados y ajustados.

2. Se enciende la computadora y el polgrafo oprimiendo el botn en la posicin ON.

3. Se verifica que el nivel de agua del bao recirculador cubra la resistencia y la bomba. Se enciende y
deja estabilizar la temperatura en 371C. Este bao proporciona el flujo de agua que mantiene
la temperatura de la disolucin KHS a dicha temperatura.

Manual de Farmacologa I. Guin de Prcticas

71

4. En la pantalla de la computadora se selecciona el icono

para iniciar el programa AcqKnowledge, el cual registra los datos provenientes del Polgrafo.
5. Al comenzar el programa se abre la ventana que se ilustra enseguida.

6. Para comenzar la configuracin del polgrafo se selecciona en el men la opcin MP100, y posteriormente
la opcin Setup Channels que nos abrir una ventana emergente.

72

Dr. Andrs Navarrete Castro

7. En la ventana emergente Input Channels, se activan los canales que se utilizarn seleccionando las casillas
Acquire, Plot y Values con para cada canal An.

8. Para la calibracin de cada canal se selecciona primero el canal


cual aparecer la siguiente ventana emergente.

y se oprime el botn

con el

9. En las casillas Scale value se colocan 0 (cero) y 2 (dos) y en Units se coloca g (gramos) como se muestra
a continuacin.

Manual de Farmacologa I. Guin de Prcticas

73

10. Con el valor Scale value = 0, se oprime el botn


y el programa automticamente calcular el
valor Input volts correspondiente a 0 g (cero). Con el valor Scale value = 2, se coloca una pesa de 2
gramos sobre el transductor y se oprime el botn
, el programa entonces, automticamente calcular
el valor Input volts correspondiente a 2 g (dos gramos). Al terminar se oprime el botn OK.

Este procedimiento se repite con cada canal que se utilizar.

11. Continuando con la calibracin, se selecciona en el men la opcin MP100, y posteriormente la opcin
Setup Acquisition.

12. Al seleccionar la opcin Setup Acquisition se abrir la siguiente pantalla emergente.

74

Dr. Andrs Navarrete Castro

13. En la pantalla emergente Setup Acquisition, se seleccionarn las opciones Record and Save once to
Disk acquisition. Posteriormente se elegir Acquisition Sample Rate en 0.5 1.0 samples /second, y en
Total lengh se determinar el mximo en horas, como se muestra a continuacin.

14. El Polgrafo ya est calibrado y se puede seguir con el montaje del tejido.

B. Montaje del tejido

1. Antes de montar el tejido se selecciona en el men del software AcqKnowledge la opcin MP100, y
posteriormente. Show Input Values.

Manual de Farmacologa I. Guin de Prcticas

75

2. Al seleccionar abrir una ventana emergente que muestra los valores que se registran en el Polgrafo.

En la ventana emergente se oprime el botn n y despus el de Options. En esta ltima se seleccionan Channel
numbers, Units y Values, y el tamao de letra adecuado para su visualizacin (se recomienda de 14-18
puntos). Al terminar se oprime el botn OK.

76

Dr. Andrs Navarrete Castro

3. Se realiza la diseccin del tejido a utilizar de acuerdo a lo reportado en la literatura. En caso de leon o
trquea de cobayo o aorta de rata el tejido se cortar en anillos para su montaje.
4. Para aorta y traquea el tejido es sujetado por medio de ganchos de alambre Nicromel como se muestra
en la figura.

Para leon el tejido es montado de acuerdo a la siguiente figura, insertando el tejido en los ganchos:

5. Los ganchos junto con el tejido son colocados dentro de la cmara de rgano aislado previamente llena
con KHS y con burbujeo constante de gas carbgeno, como se muestra a continuacin.

77

Manual de Farmacologa I. Guin de Prcticas

6. Se le da una tensin a cada tejido de cada cmara, por medio del tensor del transductor de acuerdo con
el siguiente cuadro.
Tejido
Aorta de rata
Trquea de cobayo
leon de rata

Tensin
4.0 gramos
1.5 gramos
1.0 gramo

7. Se oprime el botn Start para comenzar el registro del experimento.

8. Al oprimir el botn Start, comenzar el registro como se muestra a continuacin.

78

Dr. Andrs Navarrete Castro

9. Para personalizar las opciones de visualizacin se recomienda consultar el siguiente cuadro.


BOTN

NOMBRE DEL BOTN

Scope Mode
(muestra todos los
canales juntos)

Chart Mode
(muestra cada canal
por separado)

Show / Hide Journal


(Muestra / oculta la ventana de
anotaciones
en la parte inferior)

Show / Hide Markers


(Muestra / oculta la barra
de marcadores de evento.
Para agregar un marcador
se oprime la tecla F9)

Show / Hide Grid


(Muestra / oculta la rejilla)

EFECTO

Manual de Farmacologa I. Guin de Prcticas

Oprimir
sobre el eje
Y

Oprimir
sobre el eje
X

Set Screen Vertical Axis


(Cambia la visualizacin del
eje Y. Se recomienda un Scale
Setting = 1 g)

Set Screen Horizontal Axis


(Cambia la visualizacin del eje
X. Se recomienda un Scale =
15 minutes)

79

80

Dr. Andrs Navarrete Castro

C. Estimulacin del tejido para el experimento.

1. Una vez montados los tejidos se proceder a su estimulacin de acuerdo con el siguiente cuadro.

Tejido

Sustancia para
estimulacin

Concentracin

Aorta de rata

Norepinefrina

1x106 M

Traquea de cobayo

Acetilcolina

3x105 M

leon de rata

Carbacol

1X104 M

2. El cronograma de estimulacin y lavado de los tejidos se realizar como sigue.


Tiempo corrido
(min)

Actividad

Inicio (Oprimir el botn Start)

15

Lavado con KHS

30

Estimulacin 1 y Lavado con KHS

40

Lavado con KHS

50

Estimulacin 2 y Lavado con KHS

60

Lavado con KHS

70

Lavado con KHS

80

Inicio de las evaluaciones

3. En el minuto 80, se puede iniciar la evaluacin de las sustancias de acuerdo a lo reportado en la


literatura y a los objetivos establecidos.

III. Bibliografa
Estrada S, et al. (1999). Nitric oxide/c GMP mediates the spasmolytic action of 3,4-dihydroxy-

5,5- imethoxybibenzyl from Scaphyglottis livida. Planta Medica. 65(2):109-114.


Hsieh G, et al. (2003). YC-1 potentiates the nitric oxide/cyclic GMP pathway in corpus

cavernosum and facilitates penile erection in rats. European Journal of Pharmacology. 458:83189.
Snchez-Mendoza M, et al. (2007). Mechanisms of relaxant action of a crude hexane extract

of Gnaphalium liebmannii in guinea pig tracheal smooth muscle. Journal of Ethnopharmacology.


111:142147.

Farmacologa I Guin de Prcticas es una obra editada por la Facultad de Qumica.


Se termin de imprimir en diciembre de 2008 en los talleres de la misma.
Se tiraron 1000 ejemplares en papel bond de 36 gramos.
Tipo de impresin: Offset.
Para la composicin del texto se utiliz la fuente Geometr231 BT 12 y 18 pts.
normal, Geometr231 BT 13 pts. bold.
El cuidado de la edicin estuvo a cargo de la Seccin de Diseo Editorial, rea
adscrita al Departamento de Publicaciones.
Publicacin aprobada por el Comit Editorial de la FQ.
Diciembre de 2008.
Diseo de interiores: Lourdes Gracia Archundia.
Diseo de portada: Lic. Leticia Gonzlez Gonzlez.

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