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Espectrofometra: Espectros de
absorcin y cuantificacin espectrofotomtrica de
biomolculas
OBJETIVOS
Establecer el espectro de absorcin UV-Vis para clorofila para determinar su max
Aplicar la ley de Lambert-Beer y realizar una recta de calibrado para clorofila
Calcular grficamente el valor del coeficiente de extincin molar.
Determinacin cuantitativa de clorofila en una muestra problema y el rendimiento por peso hmedo y seco del
proceso de extraccin
INTRODUCCIN
A = log I/Io = cl
La absorbancia de una solucin es directamente
proporcional a su concentracin a mayor nmero
de molculas mayor interaccin de la luz con ellas-;
tambin depende de la distancia que recorre la luz
por la solucin a igual concentracin, cuanto mayor
distancia recorre la luz por la muestra ms
molculas se encontrar-; y por ltimo, depende de
, una constante de proporcionalidad -denominada
coeficiente de extincin (en algunas referencias se
maneja con el nombre de absortividad)- que es
Espectrofotmetro.
Agitador de tubos de ensayo.
Balanza.
Gradillas con 12 tubos de ensayo.
Juego de pipetas graduadas (0.5, 1.0, 2.0, 5.0, 10.0
y 25.0 ml).
Juego de micropipetas
Probetas 100 ml
Vaso de precipitado 100 mL
7 Balones aforados de 25 mL
Agitador de vidrio
Mortero
Celdas de cuarzo para medir en el
espectrofotmetro.
1.
2.
3.
4.
5.
PROCEDIMIENTO
4
BIBLIOGRAFIA
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CUESTIONARIO
(para incluir en el informe del lab. a mano).
1. El porcentaje de transmitancia de una solucin
acuosa de fumarato de sodio a 240 nm y 25C, es
de 15.2% para una solucin 4x10 -4 M. en una celda
de 1.00 cm. Calcular la absorbancia y el coeficiente
de extincin molar correspondiente.
2. Utilizando una cubeta de absorcin de 1.00 cm,
se determin la transmitancia de la luz de 463 nm
(463 A) para una solucin de bromo en tetracloruro
de carbono, encontrndose los siguientes
resultados: