Universidad REGIONAL Autnoma

de los andes
UNIANDES

FACULTAD DE CIENCIAS MDICAS

ESCUELA DE:
MEDICINA.
CATEDRA:
LABORATORIO DE BIOQUIMICA

SEMESTRE:
TERCERO

AUTORES:
Aldaz Tatiana
Crdova Ma. Fernanda
Carolina Mayorga
Rodrguez Diego
2007

Agradecimiento
Queremos hacer pblico nuestro agradecimiento a nuestro
respetado catedrtico el
Dr. Marcelo Ochoa, y a los docentes que conforman la ctedra
BCM-Bioqumica por su gua y entereza n cada paso de
nuestra formacin acadmica.
Ayudantes de Ctedra de Bioqumica

Dedicatoria
Para toda la gran familia de la Facultad de Ciencias Mdicas
de nuestra querida
Universidad Autnoma de los Andes; donde estamos forjando
nuestras vidas profesionales.
Para las generaciones actuales y futuras que se educan en
tan noble institucin.

Pensemos siempre que solo una slida educacin y una

buena formacin moral nos hace seres humanos
verdaderamente libres

PRIMERA PRCTICA
HOMEOSTASIS DE LA GLUCOSA
OBJETIVOS:
Al trmino de la prctica y una vez cumplidas todas las experiencias de enseanza
aprendizaje, el estudiante ser capaz de:
1. Establecer la importancia de los carbohidratos en la produccin de energa
metablica celular.
2. Recordar las diversas formas y clasificaciones que presentan los hidratos
de carbono, tanto en la naturaleza, como en el organismo.
3. Relacionar la alteracin del metabolismo de los hidratos de carbono con el
desarrollo de la Diabetes Mellitus.
INTRODUCCIN
Los carbohidratos son una fuente de energa para la mayora de organismos
vivos. Tejidos como el cerebro necesitan de glucosa en forma permanente, y su
deficiencia o exceso ocasiona graves trastornos. Las concentraciones elevadas y
persistentes de glucosa pueden ocasionar ceguera, falla renal y enfermedad
vascular perifrica crnica. Una baja cuanta de glucosa a su vez puede causar
convulsiones y aun coma.
METABOLISMO FETAL
Dada su importancia en pediatra nos referiremos brevemente al metabolismo re
los carbohidratos en el feto.
La glucosa, el lactato y los aminocidos son los principales sustratos para el
metabolismo y el crecimiento fetal. La glucosa de la circulacin materna se
transfiere al feto por difusin facultada a travs de la placenta, por lo que la
concentracin de glucosa en el feto es aproximadamente las dos terceras partes
de la concentracin plasmtica de glucosa en la madre.
Las enzimas gluconeognicas estn presentes en el feto, desde la 10 semana de
gestacin. La glucosa utilizada por el feto, est disponible para el metabolismo
oxidativo fetal y es una fuente de carbono para almacenar glucgeno y para la
sntesis de otros compuestos orgnicos. En condiciones normales, del 60 al 70%
de la glucosa utilizada por el feto es oxidada a CO2.
La insulina est presente en el pncreas del feto humano, desde la octava
semana de gestacin. Como la insulina no atraviesa la placenta, el incremento
de los niveles de insulina en el ltimo trimestre de gestacin, puede reflejar un
incremento de la liberacin de insulina pancretica fetal. Sin embargo, el pncreas
fetal parece ser menos sensible a los cambios de concentracin de glucosa que el
pncreas del adulto. La secrecin de insulina se aumenta por la hiperglucemia

fetal aguda.
Por su parte el glucagn est presente desde el comienzo del segundo
trimestre, aunque en un feto normal y con concentraciones de glucosa materna
normal, no parece tener una funcin reguladora.
Por otra parte, la sntesis de glucgeno empieza al comienzo de la novena
semana de gestacin en el embrin humano, y la mayor cantidad de glucgeno
se acumula durante el ltimo trimestre.
Se ha observado que los niveles de glucgeno en pulmn y msculo cardaco
declinan suavemente, cuando el feto se acerca al trmino. El almacenamiento de
glucgeno cardaco puede servir como fuente de energa durante perodos de
estrs como por ejemplo en casos de asfixia fetal. Los contenidos de glucgeno
heptico y muscular alcanzan al final de la gestacin de 3 a 5 veces los niveles de
un adulto y forman un importante pool de reserva de energa para el feto y el
recin nacido. La sntesis de glucgeno heptico se regula en el feto por medio de
la glucgeno sintetasa y la glucgeno fosforilasa.
En el momento del nacimiento, se interrumpe el suministro de glucosa por la
placenta y la glucosa sangunea cae, de modo que el glucagn comienza a
aumentar con un pico mximo en las dos primeras horas de vida estimulando la
glucogenolisis heptica.
Tambin hay cambios en las enzimas fetales. La hexocinasa fetal importante en
la gluclisis, tiene una actividad 500 veces ms elevada que en los adultos,
disminuye en los ltimos cinco de gestacin llegando a valores de adulto a los 21
das despus del nacimiento.
Por su parte la fructocinasa y la galactocinasa no tienen actividad en el hgado
fetal con niveles bajos despus del nacimiento y alcanza un pico en el periodo de
destete.
La principal forma de obtencin de energa de los tejidos fetales es la gluclisis, y
corno resultado de ello una alta produccin de lactato (90%) y solo el 10% da
origen a la acetil Co A. El lactato a su vez es una fuente de produccin de la
glucosa por el mecanismo ce la gluconeognesis.
GLUCEMIA Y MECANISMOS DE CONTROL
Una persona adulta de vida sedentaria, consume diariamente 200 a 300 g de
glcidos, 70-100 g de protena y 60-90 g de grasa, que corresponden a un
requerimiento energtico diario de 1600 a 2400 Kcal. Las reservas energticas se
movilizan entre las comidas y durante la noche para mantener la glucosa
sangunea.
La disponibilidad constante de combustibles en la sangre se denomina
Homeostasis calrica, la cual implica que el nivel sanguneo de combustible en
equivalente de ATP, no cae debajo de cierto lmite, independientemente de si la
persona se encuentra en un estado de buena nutricin o en ayuno

La homeostasis de la glucosa se logra mediante dos ajustes:

A) regulacin entre la captacin perifrica y la produccin heptica de glucosa
que mantiene niveles entre 70- 110 mg/dl.
B) Regulacin hormonal por el mantenimiento de un balance entre liberacin y
accin de la insulina, por un lado, y por otro las respuestas opuestas
mediadas por el glucagn, catecolaminas, hormona del crecimiento y
cortisol.
Hay que considerar que tambin ciertos frmacos son capaces de presentar entre
sus efectos indeseables, alteraciones de los carbohidratos como ocurre con los
diurticos, beta bloqueadores, simpaticomimticos, corticoides y hormonas
sexuales.
Dado que la mayor parte de la glucosa es fuente exgena se reconocen dos
perodos:
1. Estado post-prandal en la que la disponibilidad de nutrientes es superior
a la demanda, por lo que hay una sntesis neta de la sustancia de reserva.
2. Estado post-absortivo (6-12 horas) en la que se produce una degradacin
neta de la sustancias de reserva (glucgeno).
En el estado post-prandial, la concentracin srica de glucosa es elevada y la
relacin insulina/glucagn alta, a favor del numerador.
La glucosa sumada a secretagogos como los cidos grasos libres, cuerpos
cetnicos y aminocidos (que inducen la liberacin de calcio libre en el interior del
acino pancretico), obran como un estimulador de las clulas beta del pncreas
que producen una pre -prohormona conocida como pre-pro insulina, de la cual
se escinde el pptido seal de 23 a.a. para formar la pro insulina, la cual por
accin de proteasas llega a constituir la insulina + el pptido C.
Cabe sealar que el incremento del calcio intracelular pancretico, se asocia a
una elevacin del ATP, promovindose la activacin de los canales inicos de
membrana que permiten la liberacin de insulina.
Normalmente un pncreas funcional produce y libera diariamente 40 a 50
unidades de insulina, pero tiene cientos de unidades almacenadas bajo reserva.
La accin de la insulina involucra varios pasos posteriores a la unin de la
hormona con sus receptores formados por 2 subunidades alfa extracelulares y 2
subunidades beta transmembrana y citoplasmtica.
La insulina se une a la subunidad alfa y produce fosforilacin de residuos de
tirosina en las subunidades beta, lo cual desencadena una cascada de
fosforilaciones tanto del mismo receptor como de otras molculas
intracitoplasmticas, de las cuales la ms importante es el denominado sustrato
del receptor insulnico tipo 1 o IRS 1. Si por error metablico la fosforilacin ocurre
sobre residuos de treonina o de serina del receptor, lo que ocurre es una

disminucin de la accin insulnica.

Toda esta cadena de eventos, inducen la translocacin a la membrana
plasmtica de transportadores de glucosa (GLUT 4) hasta la activacin de las
vas metablicas implicadas en el almacenamiento de las reservas energticas.
La insulina cumple con cinco grandes efectos fisiolgicos:
A. Inhibe la liberacin de cidos grasos del tejido adiposo (liplisis)
B. Promueve la sntesis de glucgeno
C. Acelera el transporte de glucosa a travs de GLUT 4, en el msculo y tejido
adiposo
D. Activa la sntesis de triglicridos en el tejido adiposos (lipognesis)
E. Inhibe la sntesis de glucosa en el hgado (glucognesis)
Es comn; encontrar en la clnica, el trmino sensibilidad a la insulina, a la cual
definimos como la relacin entre el grado de utilizacin de la glucosa
plasmtica y los cambios en la concentracin de la hormona.
Una disminucin en la accin de la insulina (resistencia a la insulina) puede
producirse como consecuencia de una alteracin a nivel de pre o post-receptores,
disminucin del flujo sanguneo tisular, alteracin del transporte celular de glucosa
o defectos intracelulares del metabolismo (principalmente en el msculo
esqueltico). La toxicidad de la glucosa en la hiperglucemia crnica puede alterar
la secrecin de insulina e inducir la resistencia a la insulina.
La disminucin del nivel plasmtico de la glucosa en rangos fisiolgicos, conlleva
la disminucin de la secrecin de insulina. Si se producen disminuciones
adicionales de la glucemia, se incrementa la secrecin de las hormonas
contrarreguladoras: glucagn, adrenalina, cortisol y hormona del crecimiento que
tienen efectos antagnicos a la insulina en hgado y tejidos perifricos.
Estos efectos tpicos de un estado post- absortivo, son de comienzo rpido en el
caso del glucagn y adrenalina y ms retrasado si se trata de cortisol y hormona
del crecimiento. El glucagn tiene un potente efecto en la gluconeognesis,
glucogenolisis hepticas y movilizacin de reservas lipdicas. Las catecolaminas
especialmente adrenalina, potencian la secrecin del glucagn, inhiben la
actividad de la glucgeno sintetasa y estimulan la liplisis, glucognesis y
gluconeognesis. Las catecolaminas adems tienen un efecto alfa adrenrgico
que limita la secrecin de insulina y predomina sobre el efecto beta adrenrgico
(liberador de insulina).
Juntos catecolaminas y glucagn, movilizan las reservas energticas en
hgado, tejido adiposo y msculo esqueltico, para producir sustratos como
glucosa y cidos grasos libres para el metabolismo celular durante la
hipoglucemia o estrs.

El cortisol estimula la lipognesis, la degradacin proteica y la gluconeognesis a

tiempo que estimula la liberacin de adrenalina por la mdula suprarrenal.
Por su parte la hormona del crecimiento tiene efectos sinrgicos y antagnicos
con la insulina. El efecto sinrgico est dado mediante la somatomedina C con
efectos pro-insulnicos, mientras que es antagnico en tanto inhibe el trasporte y
utilizacin de la glucosa en los tejidos perifricos e incrementa la liplisis.
De lo que hemos sealado, el hgado norma! cumple un pape! fundamental en la
regulacin de la glucemia. Un hgado normal es glucognico, glucoltico,
hipognico y colesterognico.
En estado de ayunas el hgado es diferente: glucgenoltico, gluconeognico,
cetognico y proteoltico.
En palabras simples, el hgado es un estratega de altos kilates pues almacena
caloras cuando hay alimento, pero al mismo tiempo es capaz de movilizar estos
depsitos cuando el resto del cuerpo lo necesita.
Bajo estos mecanismos reguladores, la glucosa sangunea se mantiene siempre
bajo estrechos lmites fisiolgicos en la sangre, mientras que las concentraciones
de cuerpos cetnicos o de cidos grasos varan en uno o dos rdenes de
magnitud. La proporcin de insulina/glucagn variar desde 0.5 en una persona
bien alimentada a 0.05 despus de un ayuno de 3 das.
MARCHA EXPERIMENTAL
DETERMINACIN DE GLUCOSA POR ESPECTROFOTOMETRIA
La oxidacin enzimtica de la glucosa por la enzima glucosa oxidasa (GOD)
forma cido glucnico y perxido de hidrgeno. En presencia de peroxidasas
(POD), el H2O2 produce la oxidacin copulativa del fenol con la 4, aminofenazona
(4,AF) y la formacin de un cromgeno de color rojo cereza que exhibe una
absorcin mxima a 505 nm.
Reactivos
1.

Reactivo de trabajo (GOD y POD)

2. Aminofenazona
3. Fenol
4. Estndar (100 mg/dl)
Tcnica y procedimientos
En tres tubos de ensayo rotulados como blanco, estndar y desconocido,
pipetear:
Reactivos Blanco Estndar Desconocido
Estndar
No
20 l
No

Muestra
No
No
20 l
R. de
2 mi
2 mi
2 mi
trabajo
Incube en bao Mara a 37 C durante 10 minutos y proceda a la lectura
espectrofotomtrica con 505 nm, llevando al 100 % de transmitancia con el tubo
blanco, luego registre las lecturas del estndar y del desconocido. Transforme las
lecturas en absorbencias utilizando la tabla del anexo.
Clculo
Glucosa (mg/dl) = D x F
donde, F = 100 mg/dl / absorbencia del estndar
Valores de referencia
Suero o plasma

0,7 a 1,10 g/l

Sangre total

0,6 a 1,00 g/l

LCR

0,4 a 0,74 g/l

SEGUNDA PRCTICA
COLESTEROL
OBJETIVOS.
Al trmino de la prctica el estudiante estar en capacidad de:
1. Recordar la importancia y clasificacin de los lpidos presentes en el
organismo.
2. Relacionar las alteraciones metablicas de los lpidos con el desarrollo de
patologa relacionadas, en especial el colesterol.
INTRODUCCIN
Presente en todas las clulas, el colesterol es una sustancia grasa natural,
constituida por un esqueleto de 27 carbonos, dispuestos en dos ciclos hexanos,
un ciclo pentano y una cadena lateral aliftica. De carcter insoluble, posee en el
carbono 3 un grupo OH por el se fija y muestra al medio acuoso, mientras que el
resto de la molcula se sepulta en el interior de las estructuras celulares por su
carcter hidrofbico. Son alimentos ticos en colesterol y grasas saturadas las
carnes rojas y derivados, pollo con piel, carne de cerdo, todo tipo de embutidos,
chocolates, huevos y productos lcteos enteros.
De origen heptico y exgeno, constituye un elemento qumico importante por su
participacin en la sntesis de hormonas esteroides y pro-vitamina D3, y cuya
sntesis se ejecuta en ms del 50% en el organismo, es decir cerca de 500 mg/
da.
Si consideramos como un 100% todo el organismo, el 50% se elabora en el
hgado, un 15% en el intestino y el resto en la piel y lo hace tanto en el retculo
endoplsmico como en el citoplasma.
Su sntesis involucra cinco pasos fundamentales:
1. Formacin de HMG CoA. (3 hidroxi 3 metil glutaril CoA) a partir de la
acetil Co. A
2. Fosforilacin del mevalonato para formar unidades isoprenoides activas
(isopentanilpirofosfato)
3. Condensacin de 3 molculas de isopentanilpirofosfato para formar el
farnesilpirofosfato, que se condensa con los isoprenoides y forma el
geranilpirofosfato y luego en escualeno.
4. El escualeno que tiene una estructura semejante a los esteroides, se
convierte en lanosterol al ciclarse la molcula.
5. Formacin del colesterol.

La principal enzima del ciclo de biosntesis, es la HMD glutaril Co.A reductasa,

que puede ser inhibida por medicamentos que impiden su sntesis. Por otra parte
se ha descrito una variacin diurna que afecta tanto a la sntesis como a la
actividad de la reductasa. La administracin de insulina o hormona tiroidea
produce un incremento de la actividad de la enzima clave, mientras que el
glucagn o los corticoides lo reducen.
En el hombre, el colesterol total que se eleva con la edad, se halla esterificado en
cerca del 75%, siendo transportado por las lipoprotenas de forma esfrica,
encontrndose en mayor cantidad en las LBD o beta lipoprotenas.
Su excrecin de cerca 1 g diario, se cumple en un 50% por las heces como
coprostanol y el resto como esteroides neutros.
Dado que el colesterol es un factor de riesgo para sufrir enfermedad coronaria,
junto con el tabaquismo, hipertensin arterial, diabetes, sobrepeso u obesidad e
inactividad fsica, edad mayor de 45 aos en hombres y de 55 en mujeres, historia
familiar de fallo cardaco, se lo dosifica junto a las lipoprotenas HDL y LDL.
El colesterol HDL es el llamado colesterol bueno por ayudar al organismo a
arrastrar el colesterol desde los sitios perifricos al hgado para que se
metabolice, protegiendo de esta manera la acumulacin del colesterol en tejidos y
arterias.
Por el contrario el colesterol LDL es el colesterol malo, porque transporta el
colesterol por todos los sitios del organismo, depositando el lpido en la pared de
arterias formando placas de ateroma que pueden ocluir el sistema vascular; por
tanto cuanto mayor son los niveles de colesterol LDL en sangre, mayor es el
riesgo de sufrir enfermedad coronaria.
Se considera que los niveles de colesterol deseable o saludable, son menores de
200 Mg. / dl; Colesterol LDL menor a 130 mg / dl y Colesterol HDL menor a 35
mg / dl. Se considera como lmite de riesgo tipo Boderlein o limtrofe entre 200 a
239 Mg. / dl de colesterol. Se considera como valores bajo de colesterol HDL, a
cifras menores de 35mg / dl.
El colesterol LDL es considerado como una mejor orientacin de enfermedad
coronaria que el colesterol total aislado. Sus cifras tienen un valor significativo si
se acompaan de un colesterol HDL bajo, un colesterol total elevado o Boderlein y
dos o ms factores de riesgo.
Se ha observado una hipercolesterolemia en casos de ictericia obstructiva,
cirrosis biliar, hipotiroidismos, sndrome nefrtico, diabetes mellitus, xantomatosis,
gota, etc. Quinto mes de embarazo y postparto.
Las principales funciones de los lpidos son las siguientes:
cidos grasos: Combustible metablico, constituyentes de lpidos.
Prostaglandinas: Moduladores intracelulares.

Esteres de Glicerol
Acilgliceroles: Depsitos de cidos grasos, intermediarios metablicos.
Fosfoglicridos: Estructura de membrana
Esfingolpidos
Esfingomielina: Estructura de membrana
Glucoesfingolpidos: Membranas, antgenos de superficie
Derivados del esterol
Colesterol: Estructura de membrana y de lipoprotenas
Esteres de Colesterol: Almacenamiento y transporte
cidos biliares: Digestin y absorcin de lpidos
Hormonas esteroides: Regulacin metablica
Vitamina D: Metabolismo de calcio y fsforo
Terpenos
Dolicoles: Sntesis de glucoprotenas
Vitamina A : Visin, integridad epitelial, expresin gentica y crecimiento.
Vitamina E: Antioxidante lipdico
Vitamina K: Coagulacin sangunea
ALTERACIONES PATOLGICAS RELACIONADAS CON EL METABOLISMO
DEL COLESTEROL
El organismo de los seres vivos funciona en tal armona que cada clula lleva
consigo la informacin de su respectivo rol a jugar en determinado momento de la
vida. De esta manera en los seres humanos los componentes lipdicos funcionan
coordinadamente manteniendo funciones especficas.
Cuando esta coordinacin, no funciona, se genera una serie de alteraciones
patolgicas:
Depsitos de Colesterol
En algunas lipidosis el colesterol se acumula en diversas partes del cuerpo como
huesos y otros tejidos. Debido a la coloracin amarillenta de stos depsitos, la
enfermedad toma el nombre de xantomatosis, misma que puede cursar o no con

alteraciones en los niveles sricos de colesterol o de alguna lipoprotena, como es

el caso del xantoma diseminado o sndrome de Hand Schuller Christian, en el que
se observa adems de lesiones seas y del sistema nervioso. Estos depsitos de
colesterol suelen observarse tambin en diabetes mal controlada, hipotiroidismo y
obstruccin biliar (xantomatosis secundaria ).
Acmulos de colesterol en el rbol biliar
El colesterol se mantiene en solucin en la bilis, debido a la accin hidrotrpica de
las sales biliares y por la combinacin con las protenas secretadas por la pared
de la vescula. De esta manera el colesterol contribuye indirectamente a la
formacin de clculos biliares, junto a otros factores como el estasis de la bilis y
los procesos de desarrollo bacteriano concomi-tantes (colecistitis - colelitisis).
Todo esto hace que el colesterol se precipite y forme un clculo solitario,
generalmente de gran tamao o mltiples clculos facetados con mezclas
variables de colesterol, pigmentos biliares y calcio (colelitiasis).
Modificaciones del colesterol circulante
El hgado produce y capta colesterol plasmtico. La vida media del colesterol en
el plasma es de aproximadamente 8 das e inmediatamente es esterificado a nivel
heptico, por lo que en afecciones como la necrosis hpatocelular, e intoxicacin
por fsforo blanco, este suele disminuir a cifras de 70 a 700 mg por 100 ml (valor
normal 150 a 250 con un 75% de esterificacin). La disminucin de la
esterificacin se relaciona con el grado de afeccin hpatocelular.
La ateroesclerosis
En aquellos casos en los cuales las cifras de colesterol se mantienen
crnicamente elevadas, este suele depositarse en el endotelio de las arterias,
especialmente a nivel de las coronarias, formando placas constituidas por
colesterol y sus steres y en cantidades menores por fosfolpidos y
triacilglicridos. Las alteraciones de los lpidos plasmticos que ms influyen
sobre el depsito de grasas sobre las arterias son :
1. Incremento en la concentracin de lipoprotenas de muy baja densidad
(VLDL) y normalidad de lipoprotenas de baja densidad (LDL)
2. Incremento en la concentracin de LDL
3. Incremento de los niveles de VLDL y LDL
4. Niveles bajos de las lipoprotenas de alta densidad (HDL)
La nutricin en lpidos de las personas, constituye un factor de riesgo mayor para
el desarrollo de ateroesclerosis (exceso de cidos grasos saturados en la dieta).
Los principales factores de riesgo para el desarrollo de la ateroesclerosis son :
antecedentes genticos y familiares, edad, sobrepeso y consumo de una dieta
rica en lpidos, estilo de vida sedentario, estrs, hbito de fumar e ingesta de
alcohol excesiva.

Desde la perspectiva de salud y nutricin, se recomienda evitar los factores de

riesgo sealados y en el aspecto diettico se debe procurar una reduccin
mxima del total de grasa ingerida a menos del 30 % de la energa requerida,
reducir la ingesta de grasas saturadas a menos del 10% de la energa requerida y
reducir el consumo de colesterol a menos de 30mg./ da (1 huevo = 212mg).
MARCHA EXPERIMENTAL
(Tecnica de Crockett y Tecnica de Moline)

COLESTEROL TOTAL (TECNICA DE CROCKETT)

Principio. Este mtodo consiste en aadir de una forma prefijada una
microcantidad de suero a una mezcla reactiva ya preparada, que es una mezcla
ternaria formada por anhdrido actico, cido actico y cido sulfrico.
Toma del producto. 2ml de sangre total extrada del enfermo en ayunas, en un
tubo seco.
Reactivo. Reactivo de color, de composicin idntica al indicado para el mtodo
extractivo.
Tcnica. En una serie de tubos de ensayo introducir 4ml de reactivo de color.
Aadir a la parte superior de esta mezcla, sin mezclar, 0.2ml de suero.
Para evitar la mezcla se utiliza una micropipeta de 0.2ml, cuya capilaridad
produce un descenso lento del suero. Para recuperar los ltimos vestigios de
sueros retenidos, se eleva la micropipeta de modo que la punta se encuentre
situada 3 o 4 cm. por encima de la mezcla reactiva y en contacto con la pared del
tubo; se sopla entonces con precaucin para evitar la mezcla.
Como anteriormente, la escala de patrones se efecta mediante un suero de
referencia con una tasa alta de colesterol. Despus de reconstruir el suero patrn
se diluye una fraccin al con suero fisiolgico.
PREGUNTAS
1. Cite las caractersticas fsico-qumicas de lpidos
2. Que son los cidos grasos Omega 3 y Omega 6; defina su importancia y
sus fuentes alimenticias
3. Patologas causadas por el aumento de los valores normales de colesterol.
(Mnimo tres y descrbalas)

TERCERA PRCTICA
PROTENAS SERICAS
Objetivos:
Al terminar la prctica y una vez cumplidas todas las experiencias de enseanza
aprendizaje, el estudiante ser capaz de:
1. Identificar la importancia de la albmina y la globulina en el organismo.
2. establecer relaciones entre los niveles de albmina y globulina como un
acercamiento a la clnica y diagnostico de enfermedades.
Introduccin:
Las protenas son constituyentes de los msculos, las enzimas, las hormonas, los
vehculos de transporte, la hemoglobina y otras sustancias funcionales y
estructurales claves del organismo. Las protenas forman el componente ms
significativo que contribuye a la presin osmtica dentro del espacio vascular.
Esta presin osmtica sirve para mantener el lquido dentro del espacio vascular y
minimizar, por tanto, su extravasacin.
La albmina y la globulina constituyen la mayor parte de las protenas dentro
del cuerpo y se miden como protenas totales.
La

albmina:

es

una

protena

sintetizada

por

el

hgado.

Constituye

aproximadamente el 60 por ciento de las protenas totales. El principal objetivo de

la albmina dentro de la sangre consiste en mantener la presin osmtica
coloidal. Adems, la albmina transporta constituyentes sanguneos importantes,
como frmacos, hormonas y enzimas.
Las globulinas son los constituyentes fundamentales de los anticuerpos. Su
papel en el mantenimiento de la presin osmtica es mucho menor que el de la
albmina. En menor grado, las globulinas actan tambin como vehculos de
transporte.
Tanto la albmina como las globulinas pueden medirse por separado.
La albmina es sintetizada dentro del hgado y, por tanto, proporciona una
medicin de la funcin de los hepatocitos.
Las globulinas se dividen a grandes rasgos en globulinas alfa-1, alfa-2, beta y

gama globulinas, las cuales se pueden separar y cuantificar en el laboratorio

mediante la electroforesis y la densitometra.
La fraccin alfa-1 incluye la alfa-1 antitripsina y la globulina fijadora de tiroxina.
La fraccin alfa -2 contiene la haptoglobina, ceruloplasmina, HDL y alfa-2
macroglobulina.
En general, los niveles de protenas alfa-1 y alfa-2 aumentan cuando hay
inflamacin. La fraccin beta incluye la transferrina, el plasmingeno y las beta
lipoprotenas
La fraccin gama incluye los diferentes tipos de anticuerpos (immunoglobulinas
M, G y A).
Explicacin de la prueba y fisiologa relacionada
Cuando una enfermedad afecta a la clula heptica, el hepatocito pierde su
capacidad para sintetizar albmina, cuyo nivel srico disminuye mucho. Sin
embargo, puesto que la albmina tiene una vida media de 10-18 das, la
afectacin severa de la sntesis heptica de albmina no se puede reconocer
hasta transcurrido ese tiempo.
La albmina y la globulina sricas tambin son parmetros de nutricin. Los
pacientes desnutridos muestran niveles muy disminuidos de protenas sricas.
Adems, los pacientes con enteropatas y uropatias pierden protenas
presentando niveles bajos, a pesar de una sntesis normal.
Algunas enfermedades disminuyen selectivamente la albmina, mientras las
globulinas permanecen normales o aumentan para mantener una cantidad normal
de protenas totales. Por ejemplo, en las enfermedades colgeno-vasculares
como el caso del lupus eritematoso, la permeabilidad capilar est aumentada.
La albmina, una molcula mucho menor que la globulina, se pierde de forma
selectiva hacia el espacio extravascular. Otro grupo de enfermedades que
tambin se asocian con albmina baja, globulina alta y protenas totales normales
son las enfermedades hepticas crnicas. En estos casos, el hgado no puede
producir albmina, pero la globulina es sintetizada adecuadamente en el sistema
reticuloendotelial. El nivel de albmina es bajo en ambos tipos de enfermedades,
pero la cifra de protenas totales se mantiene normal debido al aumento de

globulinas. Estos cambios, sin embargo, se pueden detectar midiendo la relacin

albmina/globulina. En condiciones normales, esa relacin es superior a 1,0. Las
enfermedades que acabamos de mencionar se asocian con relaciones ms bajas.
Interpretacin de la prueba
ALBMINA
1. Niveles aumentados:

Hemoconcentracin.

2. Niveles disminuidos:

Enfermedad heptica (hepatitis, cirrosis, necrosis hepatocelular).

Enteropatias pierde protenas (Sndrome de malabsorcin, Enf. de Crohn,

espre, Enf. Whipple).

Nefropata pierde protenas (Sndrome nefrtico, glomerulonefritis).

Prdidas hacia el tercer espacio (ascitis, quemaduras tercer grado).

Desnutricin.

Dilucin secundaria a un exceso de lquidos IV.

Aumento de la permeabilidad capilar (Enf. colagenovasculares).

GLOBULINA
1. Niveles aumentados:

Tumores Inmunolgicos (p. ej., mieloma mltiple).

2. Niveles disminuidos:

Desnutricin.

Deficiencias inmunolgicas.

PROTENAS TOTALES
1. Niveles aumentados:

Hemoconcentracin.

FACTORES QUE ALTERAN LOS RESULTADOS

Entre los frmacos capaces de aumentar los niveles de protenas se incluyen:

esteroides anablicos

andrgenos,

corticoesteroides

dextrano

hormona del crecimiento

insulina

fenazopiridina

progesterona.

Entre los frmacos que pueden disminuir los niveles de protenas se incluyen:

iones amonio

estrgenos

frmacos hepatotxicos

anticonceptivos orales.

MARCHA EXPERIMENTAL
Determinacin de protenas totales por espectrofotometra
Los enlaces peptdicos reaccionan en medio alcalino con el ion cprico para
formar un complejo de color violeta, cuya intensidad de color es proporcional a 1a
concentracin de protenas totales de la muestra.
Reactivos y mtodo
En tres tubos de ensayo dispense:
Pipetear en las cubetas
Muestra/ estndar
Reactivo de color
Mezcle, incube por 10 min

Reactivo Blanco
Muestra o Estandar
-----20 ul
1000 ul
1000 ul
de 20 a 25 C. Mida la absorbancia de la muestra y del

estndar frente al reactivo de color en 30 minutos.

Clculos:
Con factor:
g/dl = 19 x Absorbancia

g/dl = 190 x Absorbancia

Con Estndar:
g/dl = 8 x Absorbancia de la muestra
Absorbancia del estndar

o g/dl = 80x Absorbancia de la muestra

Absorbancia del estndar

PREGUNTAS
1. Digestin, absorcin y transporte de aminocidos
2. Cuales son las formas de eliminacin del nitrgeno proveniente de las
protenas
3. Valores normales de protenas en sangre.
4. Que es la albuminuria

CUARTA PRCTICA
UREA
OBJETIVOS:
Al trmino de la prctica ya cumplidas todas las experiencias de enseanza
aprendizaje, el estudiante estar en la capacidad de:
1. Identificar la importancia del ciclo de la urea.
2. Comprender los mecanismos de eliminacin del nitrgeno.
3. Ratificar la importancia del metabolismo de las protenas.
INTRODUCCIN.
Ciclo de la urea.
El metabolismo de los aminocidos y la degeneracin de las bases nitrogenadas
(pricas y pirimdicas) generan importantes cuantas de amoniaco (NH 3). Su
estructura qumica corresponde al de una base de fuerza mediana y representa
para el organismo un poderoso veneno celular. En concentraciones elevadas
(niveles de amonio en sangre de 5x10-5 M son altamente txicos) puede lesionar
las neuronas, por lo tanto, ste debe inactivarse y excretarse rpidamente. En el
hombre se elimina principalmente en forma de urea.
La urea es la diamida del cido carbnico; contrariamente al amoniaco, sta es
neutra y no txica. Es una molcula de pequeo tamao desprovista de cargas y
puede atravesar las membranas. Como ella es muy soluble en el agua, puede
transitar en la sangre y eliminarse con la orina.
La evolucin ha conducido a la aparicin de varios mecanismos para la
eliminacin de iones amonio. Existen organismos amoniotlicos, que excretan
directamente los iones amonio a la atmsfera o al agua, como por ejemplo: una
gran parte de peces, anfibios acuticos, nematodos y protozoos.
Las aves y los reptiles terrestres excretan amonio e forma de cido rico y se les
conoce como organismos uricotlicos. El hombre y la mayor parte de vertebrados
terrestres eliminan este metabolito txico en forma de rea, a travs de un ciclo
metablico conocido como el ciclo de la urea y por ello reciben el nombre de
organismos ureotlicos.
En 1932, H. A. Krebs y K. Henseleit propusieron por primera vez la existencia del
ciclo de la urea, tambin conocido como ciclo de krebs-Henseleit o ciclo de la
ornitina, esto sucedi cinco aos antes del conocimiento de todas las reacciones
del ciclo del cido ctrico.
El ciclo de la urea consta de cinco pasos secuenciales, y se lleva a cabo
especialmente en el hgado; las dos primeras reacciones se realizan en el interior
de las mitocondrias y las tres restantes en el citosol.
El ciclo de la urea constituye el principal eliminador de amoniaco del organismo.

Los desordenes metablicos que conducen un anormal funcionamiento de las

enzimas que sintetizan la urea en el ciclo son potencialmente fatales. La terapia
disponible en el momento actual comprenden las siguientes acciones:
1. Limitar la ingesta proteica y la potencial formacin de amoniaco.
2. Remover el exceso de amoniaco.
3. Mimetizar el ciclo de la urea con detoxificadores alternativas.
DISEO EXPERIMENTAL
Mtodo
La urea se hidroliza por accin de la ureasa en presencia de agua para producir
amoniaco y dioxido de carbono. En una reaccin de Berthelot modificada los
iones amonio reaccionan con hipoclorito y salicilato para formar un complejo
verde. El aumento de la absorbancia a 578nm es proporcional a la concentracin
de urea en la muestra.
Muestras
Suero, plasma (todos los anticoagulantes, excepto el heparinato de amonio
pueden ser usados) y orina.
No usar suero lipmicos.
Suero o plasma se puede almacenar hasta 3 das a 4 grados centgrados.
Ensayo
Longitud de onda:
Paso de luz:
Temperatura:
Medicin:

Hg 578 nm
1 cm
20 a 25 gradoas centgrados, 37 grados centgrados
frente a un blanco de reactivo. Solo se requiere un blanco de
reactivo por serie.

Esquema de pipeteo

Calcular la concentracin de Urea

Para suero/plasma.
Muestra x 80

Estndar

Resultado se expresa en mg/dl.

Valores de referencia:
Urea (Suero):

10 50 mg/dl.
PREGUNTAS

1. Describa el ciclo de la urea

2. Consultar el mtodo de cuantificacin de cido rico en sangre.
3. Que son organismos amoniotelicos y organismos ureotelicos

BIBLIOGRAFIA
ESTEVEZ M. Edmundo, CALLE M. Andrs y TERAN T. Enrique. BIOQUIMICA
MDICA; EL LABORATORIO. Primera Edicin. Editorial Propumed, QuitoEcuador. Mayo 2002.
Dr. YEPEZ Rodrigo. BIOQUIMICA MDICA EN EL LABORATORIO. Tomo I.
Arco Iris, produccin grafica. Quito-Ecuador. 2004.
DEVAUX Guy. TECNICAS DE BIOQUMICA MEDICA. Editorial JIMS.
MURRAY R, GRANNER D, MAYERS P, RODWELL V; BIOQUIMICA DE
HARPER. Editorial El manual Moderno, Mexico, 1988.
ESTRELLA R. BIOQUIMICA Y
Interamericana. La Paz-Bolivia, 1996.
NEWSHOLME F.A. LEECH,
Interamericana, Mxico, 1987.

A.

BIOLOGIA

MOLECULAR.

BIOQUIMICA

MEDICA.

Editorial
Editorial