La microscopa electrnica es una tcnica que requiere instrumentos de alta complejidad y

personal altamente especializado. Se utilizan la microscopa electrnica de transmisin o

convencional y la de barrido.
Las muestras para microscopa electrnica deben fijarse en glutaraldehdo, que se solicita al
laboratorio de Anatoma Patolgica con las instrucciones para la toma y fijacin de la
muestra. Los fragmentos deben ser pequeos y tienen que fijarse en forma de varios trocitos
cuboideos de tejido de no ms de 1 mm, obtenidos con hoja de afeitar o bistur limpios. Las
muestras se incluyen en resinas sintticas (Epon) y se practican cortes 10 veces ms delgados
que los de microscopa de luz llamados cortes ultrafinos. La tincin se realiza con sales de
metales pesados como citrato de plomo, tetrxido de Osmio o acetato de uranilo, que
permiten un contraste adecuado del tejido bajo el haz de electrones. Los cortes ultrafinos se
montan sobre grillas de cobre, se tien y se observan al microscopio electrnico. Para
documentar los hallazgos es necesario obtener fotografas en blanco y negro de las
preparaciones. Las grillas, muestras, inclusiones y fotografas se guardan en un archivo
especial durante aos.

Microscopa electrnica de transmisin

En esta tcnica la preparacin teida es traspasada por un haz de electrones, lo cual
proporciona la imagen ultrafina sobre una pantalla ad hoc. El microscopio electrnico de
transmisin es capaz de generar un haz de electrones a alta tensin (80kV) y concentrarlo
sobre la preparacin mediante un complejo sistema de campos electromagnticos
equivalentes a las "lentes" del microscopio de luz.
La mayor utilidad de la microscopa electrnica de transmisin es en Oncologa. Es
particularmente til en el diagnstico de neoplasias malignas, ya que permite identificar la
estirpe o diferenciacin de una neoplasia. Por ejemplo, al demostrar elementos de
diferenciacin no apreciables a microscopa de luz como desmosomas, propios de clulas
epiteliales, que orientan hacia carcinoma; microvellosidades bien desarrolladas, que sugieren
adenocarcinoma; melanosomas en melanoma y grnulos densos rodeados por membrana en
carcinoma neuroendocrino.
En conjunto con la inmunohistoqumica permite identificar un alto procentaje de las
neoplasias malignas (95%). Igualmente, en el diagnstico diferencial de metstasis tumor

maligno indiferenciado en ganglio linftico ( melanoma maligno, carcinoma, linfoma). En el

frecuente dilema adenocarcinoma versus mesotelioma maligno pleural; tambin en el
diagnstico de la granulomatosis de clulas de Langerhans.
Esta tcnica juega un papel muy importante en el estudio de las enfermedades del rin, en
particular en glomerulopatas primarias y secundarias. Junto con la inmunofluorescencia
directa representan el estudio bsico para llegar a un diagnstico preciso en cada caso.
Otras aplicaciones son la identificacin de partculas virales intranucleares y citoplasmticas.
Tambin en enfermedades metablicas para estudiar el tipo de inclusiones o cuerpos de
inclusin en las clulas afectadas (Niemann-Pick, Tay-Sachs, amiloide, etctera). En
enfermedades ampollares de la piel es el nico mtodo para diferenciar variedades de
epidermlisis bulosa congnita.
En ciertas enfermedades respiratorias se ha detectado un trastorno importante del transporte
mucociliar. Ultraestructuralmente, se observan cilios con alteraciones en nmero y
disposicin del esqueleto ciliar microtubular y ausencia de los brazos internos de dinena y de
las espculas radiales del esqueleto microtubular constituyendo el llamado sndrome de cilios
inmviles o disquinesia ciliar. Estas anomalas representan un trastorno de carcter congnito
y la microscopa electrnica es el nico mtodo que permite hacer un diagnstico preciso en
estos pacientes.
En muchos casos la informacin negativa, o sea la ausencia de algn carcter morfolgico
especfico, puede ser tambin muy til . El examen cuidadoso y la evaluacin de las
caractersticas ultraestructurales a la luz del cuadro clnico y la imagen histopatolgica al
microscopio de luz y los estudios inmunohistoqumicos, permiten un diagnstico de certeza
en la mayora de los casos.

Microscopa electrnica de barrido

La microscopa electrnica de barrido permite el estudio de superficies celulares. La imagen
se obtiene rastreando la superficie de la muestra con un haz electrnico ultrafino. Las seales
generadas se recolectan, amplifican y captan en un tubo de rayos catdicos. Se utiliza en
forma rutinaria en el estudio de enfermedades del tallo piloso. En estas condiciones hay
anomalas estructurales y de superficie de los pelos, que pueden identificarse fcilmente con
esta tcnica. De esta forma, es posible incluso establecer un pronstico de reversibilidad de
las alteraciones utilizando esta tcnica.

El Microscopio Electrnico
El microscopio electrnico utiliza un flujo de electrones en lugar de luz. Consta
fundamentalmente de un tubo de rayos catdicos, en el cual debe mantenerse el vaci. El
ctodo est constituido por un filamento de tungsteno, que al calentarse elctricamente emite
los electrones, los cuales son atrados hacia el nodo por una diferencia de potencial de 50.000
a 100.000 voltios. La lente del condensador enfoca este haz y lo dirige hacia el objeto que se
observa, cuya preparacin exige tcnicas especiales. Los electrones chocan contra la
preparacin, sobre la cual se desvan de manera desigual.
Con el objetivo se enfoca la imagen, que es ampliada por la lente de proyeccin. Para variar los
aumentos en el microscopio electrnico basta variar la distancia focal de la lente proyectora.
Como los electrones no impresionan la retina del ojo humano, debe recogerse la imagen del
microscopio electrnico en una pantalla fluorescente, la cual posee una superficie impregnada
con fsforo o sulfuro de cinc. La imagen obtenida en esta pantalla puede fotografiarse.
Se acostumbra utilizar el trmino microfotografias para las fotografas tomadas a travs del
microscopio ptico y micrografa o electromicrografia para las que se toman en el microscopio
electrnico.
Los aumentos mximos conseguidos en el microscopio electrnico son del orden de 2.000.000
(dos millones de aumento!) mediante el acoplamiento al microscopio electrnico de un
amplificador de imagen y una cmara de televisin. En resumen, el microscopio electrnico
consta esencialmente de:
a.
Un filamento de tungsteno (ctodo) que emite electrones.
b.

Condensador o lente electromagntica, que concentra el haz de electrones.

c.

Objetivo o lente electromagntica, que ampla el cono de proyeccin del haz de luz.

d.

Ocular o lente electromagntica, que aumenta la imagen.

e.

Proyector o lente proyectora. que ampla la imagen.

f.

cPantalla fluorescente, que recoge la imagen para hacerla visible al ojo humano.

Tipos de Microscopios Electrnicos

Existen varios tipos de microscopios electrnicos, que cada da se perfeccionan ms.
El microscopio electrnico de transmisin que utiliza un haz de electrones acelerados
por un alto voltaje (cien mil voltios). Este haz ilumina una seccin muy fina de la muestra, sean
tejidos, clulas u otro material.

El microscopio electrnico de barrido se utiliza para el estudio de la morfologa y la

topografa de los elementos. Estos instrumentos utilizan voltajes cercanos a los 20.000 voltios.
Las lentes magnticas utilizan un haz muy fino de electrones para penetrar repetidamente la
muestra, y se produce una imagen ampliada de la superficie observada en la pantalla de un
monitor.

El microscopio electrnico mixto tiene propiedades comunes con el de transmisin y

con el de barrido y resulta muy til para ciertas investigaciones. Hay otros microscopios
analticos que detectan seales caractersticas de los elementos que constituyen la muestra.

Con estos poderosos instrumentos, que utilizan el flujo de electrones y las radiaciones
electromagnticas as como la aplicacin de tcnicas histoqumicas y bioqumicas, adems del
empleo de marcadores radiactivos, se han logrado grandes avances en la biologa celular.
Medicin a travs del Microscopio
Muchas veces interesa al observador conocer el tamao real de los objetos o microorganismos
que est observando a travs del microscopio. Para estas mediciones pueden utilizarse varios
mtodos.
Mtodo de los micrmetros. Se utiliza para esto un micrmetro de platina o de objetivo,
que consiste en un portaobjetos en cuyo centro se halla una escala graduada (de 2 mm de
longitud), con separaciones, entre cada divisin, de una centsima de milmetro.
Adems se utiliza un micrmetro ocular que lleva una escala graduada en dcimas de
milmetros. Se coloca el micrmetro objetivo sobre la platina y se enfoca el microscopio hasta
que las lneas de la escala graduada aparezcan ntidas. Luego se hace superponer la escala
del ocular y se toma como referencia las primeras divisiones en que una lnea del micrmetro
objetivo y una lnea del micrmetro ocular coincidan o se superpongan exactamente.
Luego, por simple regla de tres, se calcula el valor en mieras de cada divisin ocular. Veamos
un ejemplo. Si 9 divisiones del micrmetro objetivo (0,09mm) equivalen a 30 divisiones del
micrmetro ocular, cada divisin del ocular equivaldr a:
0,09 = 0,003 mm = 3 micras
30
Quiere decir que para el objetivo cali-brado y el ocular utilizado, cada divisin del micrmetro
ocular equivale a 3 micras. Una vez obtenido este dato para cada objetivo en la forma que
hemos expuesto, teniendo el microscopio ocular podran hacerse todas las mediciones que se
deseen. Para medir, por ejemplo, un Paramecium de una preparacin, procedemos as:
haremos coincidir los extremos del microorganismo con las divisiones del micrmetro ocular. Si
la longitud del organismo es de 75 divisiones del micrmetro ocular, y cada divisin equivale a 3
mieras, la longitud del Paramecium ser 75x3= 225 mieras. Tambin se pueden efectuar

mediciones en el microscopio con cmara clara y utilizando una regla. En realidad, estas
medidas no son tan exactas como cuando se utilizan micrmetros por errores que se
introducen superponiendo imgenes.

Leer ms: http://www.monografias.com/trabajos12/micros/micros.shtml#ele#ixzz2frPIcNkb

El Microscopio Electrnico
El microscopio electrnico utiliza un flujo de electrones en lugar de luz. Consta
fundamentalmente de un tubo de rayos catdicos, en el cual debe mantenerse el vaci. El
ctodo est constituido por un filamento de tungsteno, que al calentarse elctricamente emite
los electrones, los cuales son atrados hacia el nodo por una diferencia de potencial de 50.000
a 100.000 voltios. La lente del condensador enfoca este haz y lo dirige hacia el objeto que se
observa, cuya preparacin exige tcnicas especiales. Los electrones chocan contra la
preparacin, sobre la cual se desvan de manera desigual.
Con el objetivo se enfoca la imagen, que es ampliada por la lente de proyeccin. Para variar los
aumentos en el microscopio electrnico basta variar la distancia focal de la lente proyectora.
Como los electrones no impresionan la retina del ojo humano, debe recogerse la imagen del
microscopio electrnico en una pantalla fluorescente, la cual posee una superficie impregnada
con fsforo o sulfuro de cinc. La imagen obtenida en esta pantalla puede fotografiarse.
Se acostumbra utilizar el trmino microfotografias para las fotografas tomadas a travs del
microscopio ptico y micrografa o electromicrografia para las que se toman en el microscopio
electrnico.
Los aumentos mximos conseguidos en el microscopio electrnico son del orden de 2.000.000
(dos millones de aumento!) mediante el acoplamiento al microscopio electrnico de un
amplificador de imagen y una cmara de televisin. En resumen, el microscopio electrnico
consta esencialmente de:
a.
Un filamento de tungsteno (ctodo) que emite electrones.

b.

Condensador o lente electromagntica, que concentra el haz de electrones.

c.

Objetivo o lente electromagntica, que ampla el cono de proyeccin del haz de luz.

d.

Ocular o lente electromagntica, que aumenta la imagen.

e.

Proyector o lente proyectora. que ampla la imagen.

f.

cPantalla fluorescente, que recoge la imagen para hacerla visible al ojo humano.

Tipos de Microscopios Electrnicos

Existen varios tipos de microscopios electrnicos, que cada da se perfeccionan ms.
El microscopio electrnico de transmisin que utiliza un haz de electrones acelerados
por un alto voltaje (cien mil voltios). Este haz ilumina una seccin muy fina de la muestra, sean
tejidos, clulas u otro material.
El microscopio electrnico de barrido se utiliza para el estudio de la morfologa y la
topografa de los elementos. Estos instrumentos utilizan voltajes cercanos a los 20.000 voltios.
Las lentes magnticas utilizan un haz muy fino de electrones para penetrar repetidamente la
muestra, y se produce una imagen ampliada de la superficie observada en la pantalla de un
monitor.

El microscopio electrnico mixto tiene propiedades comunes con el de transmisin y

con el de barrido y resulta muy til para ciertas investigaciones. Hay otros microscopios
analticos que detectan seales caractersticas de los elementos que constituyen la muestra.
Con estos poderosos instrumentos, que utilizan el flujo de electrones y las radiaciones
electromagnticas as como la aplicacin de tcnicas histoqumicas y bioqumicas, adems del
empleo de marcadores radiactivos, se han logrado grandes avances en la biologa celular.
Medicin a travs del Microscopio
Muchas veces interesa al observador conocer el tamao real de los objetos o microorganismos
que est observando a travs del microscopio. Para estas mediciones pueden utilizarse varios
mtodos.
Mtodo de los micrmetros. Se utiliza para esto un micrmetro de platina o de objetivo,
que consiste en un portaobjetos en cuyo centro se halla una escala graduada (de 2 mm de
longitud), con separaciones, entre cada divisin, de una centsima de milmetro.
Adems se utiliza un micrmetro ocular que lleva una escala graduada en dcimas de
milmetros. Se coloca el micrmetro objetivo sobre la platina y se enfoca el microscopio hasta
que las lneas de la escala graduada aparezcan ntidas. Luego se hace superponer la escala
del ocular y se toma como referencia las primeras divisiones en que una lnea del micrmetro
objetivo y una lnea del micrmetro ocular coincidan o se superpongan exactamente.
Luego, por simple regla de tres, se calcula el valor en mieras de cada divisin ocular. Veamos
un ejemplo. Si 9 divisiones del micrmetro objetivo (0,09mm) equivalen a 30 divisiones del
micrmetro ocular, cada divisin del ocular equivaldr a:
0,09 = 0,003 mm = 3 micras
30
Quiere decir que para el objetivo cali-brado y el ocular utilizado, cada divisin del micrmetro
ocular equivale a 3 micras. Una vez obtenido este dato para cada objetivo en la forma que
hemos expuesto, teniendo el microscopio ocular podran hacerse todas las mediciones que se
deseen. Para medir, por ejemplo, un Paramecium de una preparacin, procedemos as:
haremos coincidir los extremos del microorganismo con las divisiones del micrmetro ocular. Si
la longitud del organismo es de 75 divisiones del micrmetro ocular, y cada divisin equivale a 3
mieras, la longitud del Paramecium ser 75x3= 225 mieras. Tambin se pueden efectuar
mediciones en el microscopio con cmara clara y utilizando una regla. En realidad, estas
medidas no son tan exactas como cuando se utilizan micrmetros por errores que se
introducen superponiendo imgenes.

Leer ms: http://www.monografias.com/trabajos12/micros/micros.shtml#ele#ixzz2frPIcNkb

MICROSCOPIO ELECTRONICO
Debido al limitado poder de resolucin del microscopio ptico, se probaron
varias fuentes de iluminacin tales como rayos X de muy pequea longitud de
onda (0,5 nrn) sin tener xito ya que no pudieron enfocar estos rayos. Sin embargo,
las investigaciones que comenzaron en 1923 sobre difraccin electrnica, sentaron
las bases para la construccin del primer microscopio electrnico.
Cuando los electrones son acellerados mediante una diferencia de ~otencial
1,23
de V volt., tienen la tongitud de onda h igual a . As pues un electrn
VTGLTde
50 Kv. tiene h = 0,0055 nlm. Si sustituimos este valor en la fbrmula de la
resolucin R =
A

obtendremos R = 0,27 nm. Esta resolucin es 1.000

2 N. A.
veoes mayor que la de la luz blanca utilizada para la iluminacin en el microscopio
6ptico. Se puede conseguir poder de resolucin hasta 0,l nm (1 A) con los
nuevos diseos del microscopio electrnico. La tabla nm. 1 resume las unidades

de longitud utilizadals en el microscopio.

La distancia de enfoqu~e del objetivo en el microscopio electrnico de 180 KV

es de 1,1 mlnz. Este factor mejora la profundidad del campo y os cientos de veces
mayor que la conseguida por el microscopio 6ptico. El microscopio electrnico
moderno est basado en los principios generales de la lente eilectro~magntica.