Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
Objetivos:
-Aislar el complejo desoxirribonucleoproteico (ADN-protena) a partir de timo de
ternera
-Disociar el complejo en sus dos componentes: DNA y protenas
-Precipitar desoxirribonucleato de sodio.
-Disolver desoxirribonucleato de sodio obtenido.
Introduccin
ELECCION DEL TEJIDO
Con el objeto de elegir tejido biolgico adecuado para la obtencin del ADN, se deben
considerar algunos requisitos, entre los que se puede mencionar los siguientes:
1) Elevada concentracin de ADN.
2) Mnima relacin ARN/ADN
3) Baja actividad de ADNasa.
4) Elevado contenido ADN/rgano.
5) Fcil disponibilidad.
6) Bajo costo.
1) Elevada concentracin de ADN.
Casi todas las clulas contienen ADN; excepcionalmente, algunas de ellas carecen de
ncleo y tambin de ADN, como en el caso de los glbulos rojos de los mamferos.
En las clulas nucleadas, la cantidad de ADN vara notablemente en los diferentes
tejidos. Como ejemplo, consideremos el contenido de ADN de los diferentes tejidos de una
rata adulta:
TEJIDO
msculo esqueltico
cerebro
testculo
hgado
vescula seminal
corazn
rin
pncreas
pulmn
intestino delgado
bazo
mdula sea
timo
57
123
230
240
254
306
324
480
710
1290
1400
1530
2760
En esta tabla se observa que, en la rata adulta el rgano ms rico en ADN es el timo
(concentraciones algo menores se encuentran en la mdula sea, el bazo y el intestino
delgado.).
ARN/ADN
3,68
1,73
1,08
0,335
0,285
0,195
No basta con que el material biolgico rena todas las caractersticas que vimos
anteriormente; es necesario tambin que sea fcil de obtener en el momento que se
necesite. Por ejemplo, el esperma de salmn tiene casi exclusivamente ADN y constituye
una excelente materia prima, pero no es fcil de conseguir. A su vez, el timo de ternera se
consigue con mucha facilidad en nuestro pas que es tpicamente ganadero, pero en
EEUU no ocurre lo mismo y resulta ms sencillo de conseguir el bazo de cerdo. Es decir,
que la eleccin del tejido depende del lugar donde se trabaja por las posibilidades que se
ofrecen de conseguirlo con mayor facilidad.
6) Bajo costo:
En nuestro pas el timo de ternero puede conseguirse gratuitamente en los mataderos,
porque constituye un material de desecho.
CONCLUSION: para obtener ADN en nuestro laboratorio elegimos el timo de ternera
vulgarmente llamado molleja de cuello porque rene todos los requisitos enumerados.
ADN o sea la ruptura de los puentes hidrgeno que mantienen unidas las dos cadenas
polinucleotdicas.
Tambin se recomienda agregar algunas gotas de alcohol octlico normal, porque evita
la formacin de espuma y produce hemlisis con lo cual se facilita la eliminacin de la
hemoglobina del tejido.
Otro factor muy importante es la temperatura; a bajas temperaturas (0 a 5C) se inhibe la
ADNasa y otras enzimas que se producen en el metabolismo de la glndula y que actan
sobre el DNA produciendo la degradacin de su molcula. Por ese motivo en esta primera
etapa todos los pasos deben realizarse en fro (0 a 5C), aunque se trabaje en presencia
de inhibidores.
Los dos tipos de nucleoprotenas (RNP y dRNP) que se encuentran presentes en el
homogenato, diferenciables por su distinta solubilidad, pueden separarse por
centrifugacin en fro; se obtiene un precipitado formado por el material insoluble en la
solucin salina (dRNP) y un sobrenadante que contiene el material soluble en esa solucin
(RNP).
En conclusin:
Sobrenad (RNP)
Timo
(SSC-1X)
______________Homogenato ____________________ Centrifugado
Precip (dRNP)
(RNP y dRNP)
BIBLIOGRAFIA
QUIMICA ORGANICA DE FINAR, VOL II.
BIOQUIMICA DE LEHNINGER.
BIOQUIMICA DE STRYER, VOL I.
BIOQUIMICA DE NIEMEYER, VOL I.-