SPIRAMYCINE

Spiramycinum

DFINITION
Macrolide antibiotique labor par certaines souches de Streptomyces ambofaciens
ou obtenu par tout autre moyen et constitu principalement de
(4R,5S,6S,7R,9R,10R,11E,13E,16R)-6-[[3,6-didsoxy-4-O-(2,6-didsoxy-3-C-mthyl-L-ribo-hexopyranosyl)-3-(dimthylamino)--D-glucopyranosyl]oxy]-4-hydroxy-5mthoxy-9,16-dimthyl-7-(2-oxothyl)-10-[[2,3,4,6-ttradsoxy-4-(dimthylamino)- Drythro-hexopyranosyl]oxy]oxacyclohexadca-11,13-din-2-one (spiramycine I ;
Mr 843). La spiramycine II (4-O-actylspiramycine I) et la spiramycine III (4-Opropanoylspiramycine I) sont galement prsentes.
Activit : au minimum 4100 UI/mg (substance dessche).
CARACTRES
Aspect : poudre blanche ou faiblement jauntre, faiblement hygroscopique.
Solubilit : peu soluble dans leau, facilement soluble dans lactone, dans lthanol
96 pour cent et dans le mthanol.
IDENTIFICATION
A. Dissolvez 0,10 g de spiramycine dans du mthanol R et compltez 100,0 ml avec le
mme solvant. Prlevez 1,0 ml de solution et compltez 100,0 ml avec du
mthanol R. Examine de 220 nm 350 nm (2.2.25), la solution prsente un

maximum dabsorption 232 nm. Labsorbance spcifique au maximum dabsorption

est denviron 340.
B. Chromatographie sur couche mince (2.2.27).
Solution examiner. Dissolvez 40 mg de spiramycine dans du mthanol R et
compltez 10 ml avec le mme solvant.
Solution tmoin (a). Dissolvez 40 mg de spiramycine SCR dans du mthanol R et
compltez 10 ml avec le mme solvant.
Solution tmoin (b). Dissolvez 40 mg drythromycine A SCR dans du mthanol R et
compltez 10 ml avec le mme solvant.
Plaque : plaque au gel de silice G pour CCM R.
Phase mobile : la couche suprieure dun mlange de 4 volumes de 2-propanol R,
de 8 volumes dune solution dactate dammonium R 150 g/l ajuste au pralable
pH 9,6 avec de la solution concentre dhydroxyde de sodium R, et de 9 volumes
dactate dthyle R.
Dpt : 5 l.
Dveloppement : sur les 3/4 de la plaque.
Schage : lair.
Dtection : pulvrisez de la solution daldhyde anisique R1 et chauffez 110 C
pendant 5 min.
Rsultats : la tache principale du chromatogramme obtenu avec la solution
examiner est semblable quant sa position, sa coloration et ses dimensions la
tache principale du chromatogramme obtenu avec la solution tmoin (a). Sil
apparat, dans le chromatogramme obtenu avec la solution examiner, en plus de la
tache principale, 1 ou 2 autres taches dont le Rf est lgrement suprieur celui de
la tache principale, elles sont semblables quant leur position et leur coloration aux
taches secondaires du chromatogramme obtenu avec la solution tmoin (a), mais
diffrent des taches du chromatogramme obtenu avec la solution tmoin (b).
C. Dissolvez 0,5 g de spiramycine dans 10 ml dacide sulfurique 0,05 M et ajoutez 25 ml
deau R. Ajustez environ pH 8 avec de lhydroxyde de sodium 0,1 M et compltez
50 ml avec de leau R. A 5 ml de cette solution, ajoutez 2 ml dun mlange de
1 volume deau R et de 2 volumes dacide sulfurique R. Il se dveloppe une
coloration brune.
ESSAI
pH (2.2.3) : 8,5 10,5.
Dissolvez 0,5 g de spiramycine dans 5 ml de mthanol R et compltez 100 ml avec
de leau exempte de dioxyde de carbone R.
Pouvoir rotatoire spcifique (2.2.7) : 80 85 (substance dessche).
Dissolvez 1,00 g de spiramycine dans une solution dacide actique dilu R
10 pour cent V/V et compltez 50,0 ml avec la mme solution acide.
Composition. Chromatographie liquide (2.2.29) selon les indications de lessai
des substances apparentes.
Injection : solution examiner et solution tmoin (a).
Calculez la teneur pour cent en utilisant la teneur dclare pour la spiramycine SCR
en spiramycine I, II et III.
Composition en spiramycines (substance dessche) :
spiramycine I : au minimum 80,0 pour cent,
spiramycine II : au maximum 5,0 pour cent,
spiramycine III : au maximum 10,0 pour cent,
somme des spiramycines I, II et III : au minimum 90,0 pour cent.
Substances apparentes. Chromatographie liquide (2.2.29).

Prparez les solutions immdiatement avant lemploi.

Solution examiner. Dissolvez 25,0 mg de spiramycine dans un mlange de
3 volumes de mthanol R et de 7 volumes deau R puis compltez 25,0 ml avec le
mme mlange de solvants.
Solution tmoin (a). Dissolvez 25,0 mg de spiramycine SCR dans un mlange de
3 volumes de mthanol R et de 7 volumes deau R puis compltez 25,0 ml avec le
mme mlange de solvants.
Solution tmoin (b). Prlevez 2,0 ml de solution tmoin (a) et compltez 100,0 ml
avec un mlange de 3 volumes de mthanol R et de 7 volumes deau R.
Solution tmoin (c). Dissolvez 5 mg de spiramycine SCR dans 15,0 ml de solution
tampon pH 2,2 R et compltez 25,0 ml avec de leau R, puis chauffez au bainmarie 60 C pendant 30 min.
Solution blanc : mthanol R, eau R (3:7 V/V).
Colonne :
dimensions : l = 0,25 m, = 4,6 mm,
phase stationnaire : gel de silice octadcylsilyl pour chromatographie R (5 m) (gel
de mthylsilice octadcylsilyl groupement polaire incorpor), prsentant un
diamtre de pores de 12,5 nm et un taux de carbone de 15 pour cent,
temprature : 70 C.
Phase mobile : mlangez 5 volumes dune solution de phosphate dipotassique R
34,8 g/l pralablement ajuste pH 6,5 avec une solution de phosphate
monopotassique R 27,2 g/l, 40 volumes dactonitrile R et 55 volumes deau R.
Dbit : 1,0 ml/min.
Dtection : spectrophotomtre 232 nm.
Injection : 20 l de solution blanc, de solution examiner et des solutions
tmoins (b) et (c).
Enregistrement : 3 fois le temps de rtention de la spiramycine I.
Identification des spiramycines : utilisez le chromatogramme fourni avec la
spiramycine SCR et celui obtenu avec la solution tmoin (a) pour identifier les pics
dus aux spiramycines I, II et III.
Rtention relative par rapport la spiramycine I (temps de rtention = 20 min
30 min) : spiramycine II = environ 1,4 ; spiramycine III = environ 2,0 ;
impuret F = environ 0,41 ; impuret A = environ 0,45 ; impuret D = environ 0,50 ;
impuret G = 0,66 ; impuret B = environ 0,73 ; impuret H = environ 0,87 ;
impuret E = environ 2,5.
Si ncessaire, ajustez la composition de la phase mobile en changeant la quantit
dactonitrile.
Conformit du systme : solution tmoin (c) :
rsolution : au minimum 10,0 entre les pics dus limpuret A et la spiramycine I.
Limites :
impurets A, B, C, D, E, F, G, H : pour chaque impuret, au maximum la surface du
pic principal du chromatogramme obtenu avec la solution tmoin (b) (2,0 pour cent),
toute autre impuret : pour chaque impuret, au maximum la surface du pic principal
du chromatogramme obtenu avec la solution tmoin (b) (2,0 pour cent),
total : au maximum 5 fois la surface du pic principal du chromatogramme obtenu
avec la solution tmoin (b) (10,0 pour cent),
limite dexclusion : 0,05 fois la surface du pic principal du chromatogramme obtenu
avec la solution tmoin (b) (0,1 pour cent) ; ne tenez compte ni des pics dus au
blanc, ni des pics dus aux spiramycines I, II et III.
Mtaux lourds (2.4.8) : au maximum 20 ppm.

1,0 g de spiramycine satisfait lessai limite F. Prparez la solution tmoin avec 2 ml

de solution 10 ppm de plomb (Pb) R.
Perte la dessiccation (2.2.32) : au maximum 3,5 pour cent, dtermin 80 C sur
du pentoxyde de diphosphore R sous une pression ne dpassant pas 670 Pa
pendant 6 h sur 0,500 g de spiramycine.
Cendres sulfuriques (2.4.14) : au maximum 0,1 pour cent, dtermin sur 1,0 g de
spiramycine.
TITRAGE
Effectuez le titrage microbiologique des antibiotiques (2.7.2).
CONSERVATION
En rcipient tanche.
IMPURETS
Impurets spcifies : A, B, C, D, E, F, G, H.

A. R1 = H, R2 = OH, R3 = CH2-CHO : (4R,5S,6S,7R,9R,10R,11E,13E,16R)-6-[[3,6didsoxy-3-(dimthylamino)--D-glucopyranosyl]oxy]-4-hydroxy-5-mthoxy-9,16dimthyl-7-(2-oxothyl)-10-[[2,3,4,6-ttradsoxy-4-(dimthylamino)-- D-rythrohexopyranosyl]oxy]oxacyclohexadca-11,13-din-2-one (nospiramycine I),

B. R1 = H, R2 = osyl, R3 = CH2-CH2OH : (4R,5S,6S,7R,9R,10R,11E,13E,16R)-6-[[3,6didsoxy-4-O-(2,6-didsoxy-3-C-mthyl--L-ribo-hexopyranosyl)-3-(dimthylamino)-D-glucopyranosyl]oxy]-4-hydroxy-7-(2-hydroxythyl)-5-mthoxy-9,16-dimthyl-10[[2,3,4,6-ttradsoxy-4-(dimthylamino)--D-rythrohexopyranosyl]oxy]oxacyclohexadca-11,13-din-2-one (spiramycine IV),
C. R1 = H, R2 = osyl, R3 = C(=CH2)-CHO : (4R,5S,6S,7S,9R,10R,11E,13E,16R)-6-[[3,6didsoxy-4-O-(2,6-didsoxy-3-C-mthyl--L-ribo-hexopyranosyl)-3-(dimthylamino)-D-glucopyranosyl]oxy]-7-(1-formylthnyl)-4-hydroxy-5-mthoxy-9,16-dimthyl-10[[2,3,4,6-ttradsoxy-4-(dimthylamino)--D-rythrohexopyranosyl]oxy]oxacyclohexadca-11,13-din-2-one (17mthylnespiramycine I),
E. R1 = H, R2 = osyl, R3 = CH2-CH3 : (4R,5S,6S,7S,9R,10R,11E,13E,16R)-6-[[3,6didsoxy-4-O-(2,6-didsoxy-3-C-mthyl--L-ribo-hexopyranosyl)-3-(dimthylamino)-D-glucopyranosyl]oxy]-7-thyl-4-hydroxy-5-mthoxy-9,16-dimthyl-10-[[2,3,4,6ttradsoxy-4-(dimthylamino)--D-rythro-hexopyranosyl]oxy]oxacyclohexadca11,13-din-2-one (18-dsoxy-18-dihydrospiramycine I ou DSPM),
G. R1 = CO-CH3, R2 = OH, R3 = CH2-CHO : actate de
(4R,5S,6S,7R,9R,10R,11E,13E,16R)-6-[[3,6-didsoxy-3-(dimthylamino)--D-

glucopyranosyl]oxy]-5-mthoxy-9,16-dimthyl-2-oxo-7-(2-oxothyl)-10-[[2,3,4,6ttradsoxy-4-(dimthylamino)--D-rythro-hexopyranosyl]oxy]oxacyclohexadca11,13-din-4-yle (nospiramycine II),

H. R1 = CO-C2H5, R2 = OH, R3 = CH2-CHO : propanoate de
(4R,5S,6S,7R,9R,10R,11E,13E,16R)-6-[[3,6-didsoxy-3-(dimthylamino)--Dglucopyranosyl]oxy]-5-mthoxy-9,16-dimthyl-2-oxo-7-(2-oxothyl)-10-[[2,3,4,6ttradsoxy-4-(dimthylamino)--D-rythro-hexopyranosyl]oxy]oxacyclohexadca11,13-din-4-yle (nospiramycine III),

D. (4R,5S,6S,7R,9R,10R,11E,13E,16R)-6-[[3,6-didsoxy-4-O-(2,6-didsoxy-3-C-mthyl-L-ribo-hexopyranosyl)-3-(dimthylamino)--D-glucopyranosyl]oxy]-10-[(2,6didsoxy-3-C-mthyl--L-ribo-hexopyranosyl)oxy]-4-hydroxy-5-mthoxy-9,16dimthyl-7-(2-oxothyl)oxacyclohexadca-11,13-din-2-one (spiramycine V),

F. dimre de spiramycine.