INTIFP/Ol

INSTRUCTIVO

TOMA DE MUESTRA PARA EL

LABORATORIO DE FITOPATOLOGIA

Rev. 2

Hoja I de 12

LAB ORATORIO DE FITOPATOLOGIA.

INSTRUCTIVO INT/FP/OI
TOMA DE MUESTRA PARA EL LABORATORIO DE
FITOPATOLOGIA.

Rev. 2

ELABORADO

REVISADO

/J /

REVISADO

6J~dt~
Responsable Tecnico

Director de
Diagn6stico

Responsable de
Calidad

APROBADO

INT/FP/OI
~AG_'DAD
A~

KlJATORIANA
DEAsroutAMIENTO
DEIA~oo.~

INSTRUCTIVO

TOMA DE MUESTRA PARA EL

LABORATORIO DE FITOPATOLOGIA

Rev. 2
Hoja 2 de 12

HISTOruCO DE MODIFICACIONES

REV.
N

PASAA
REV. N

FECHA
16/06/2014

HOJA/S

CONTENIDO MODIFICADO

II

Instructive nuevo
4.1 Definiciones
5.1 Muestras de plantas

4,6,8,10
15/0711 5
II

de partes de plantas

5.1.3. Envio de muestras al Laboratorio

3.1 Documentos utilizados en la elaboracion.
3.2 Registros a utilizar en conjunto con el INT
6. ANEXO

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TOMA DE MUESTRA PARA EL
LABORATORIO
DE FITOPATOLOGIA

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Hoja 3 de 12

INDICE

1.0BJETO

2. ALCANCE

3. REFERENCIAS

3.1 Documentos utilizados en la elaboracion

3.2 Documentos y Registros a utilizar conjuntamente

con ellNT

4. GENERAL

4.1 Definiciones

4.2 Abreviaturas

4.3 Material a utilizar.

4.4 Preparacion de material.

5. PROCEDIMIENTO

a. Muestra de plantas

partes de plantas

b. Muestras liquidas (Agua y abono liquido)

c. Muestras liquidas (Agua y abono liquido)

6. ANEXOS

10

~~
~

INTIFP/OI
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Hoja 4 de 12

1.0BJETO
Establecer instrucciones de toma de muestras de material vegetal, suelo, abonos
organicos y agua de riego. Se describira su adecuada preservacion y condiciones de envio al
laboratorio de Fitopatologfa con la finalidad de obtener especfmenes 0 muestras
representativas que presenten sfntomas de enfermedad y permitan aislar e identificar
microorganismos fitopatogenos.
2.ALCANCE
Este instructivo es de aplicacion para clientes internos y clientes externos y para
program as establecidos de muestreo 0 a casos particularesde sospecha de existencia de
sintomas que indiquen ataque de microorganismos fitopatogenos que afecten a plantas 0
cultivos. De esta manera, se establece un criterio para la recoleccion, preservacion y envfo
de muestras de plantas 0 partes de tejido vegetal (hojas, tallos y rafz), suelos, frutas,
hortalizas, agua y abonos 0 fertilizantes organicos al Laboratorio de Fitopatologfa por parte
de inspectores fitosanitarios (cliente interno) y clientes externos.
3. REFERENCIAS
3.1 Documentos utilizados en la elaboracion
a

a
a

Ley de Sanidad Vegetal y su reglamento, Codificacion 8, Registro Oficial

Suplemento 315 de 16 de Abril del 2004, Republica de Ecuador.
Norma CODEX CACIGL 33, Metodos de muestreo recomendados para la
determinacion de residuos de plaguicidas a efectos del cumplimiento de los
LMR, cac/gl 33-1999, Anexo 1.
FAO 1990; revisado FAO, 1995; CIPF, 1997.
NIMF NO.3 Directrices para la exportacion, el envfo, la importacion y liberacion
de agentes de control biologico y otros organismos benefices. 2005.
NIMF No. 27. Protocolos de diagnostico para las plagas reglamentadas.2006.
PGCILAlOI Procedimiento General de Calidad de Gestion de la Documentacion.
MGCIFP/OIManual de Calidad

3.2 Documentos y Registros a utilizar conjuntamente con el INT

a
a

Historico de Modificaciones
PGC/LA/03-F007. Orden de Trabajo

4. GENERAL
4.1 Definiciones
a

EI muestreo se basa en la obtencion de una muestra representativa que permita disponer

de todos los elementos de valor que permitan diagnosticar e identificar al
microorganismo causal de la enfermedad. Norma CODEX CACIGL 33, Anexo I, p. 14.

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Muestra:"Una
0 mas unidades seleccionadas
entre una poblacion de unidades, 0 una
porcion de material seleccionada entre una cantidad mayor de material. AI efecto de
estas recomendaciones, la intenci6n de una muestra representativa es ser representativa
dellote, la muestra a granel."Norma CODEX CAC/GL 33, Anexo I, pag. 14.

Tamafio de la muestrarNumero
de unidades, 0 cantidad de material, que constituyen
la muestra". Norma CODEX CAC/GL 33, Anexo I, pag. 14.

Unidad:"La parte discreta mas pequefia de un lote que debera extraerse para formal' la
totalidad 0 parte de una muestra primaria" Norma CODEX CAC/GL 33, Anexo I, p. 12.

Las unidades se delimitaran como se indica a continuacion:

a) Frutas y hortalizas frescas. Cad a fruta, hortaliza 0 racimo natural de estas (por
ejemplo entero constituira una unidad, salvo en el caso de que sea pequefio. Las
unidades de productos pequefios envasados podran delimitarse segun se indica
en el apartado d) Cuando se puede utilizar un instrumento de muestreo sin dafiar
el material, pod ran crearse unidades por este medio. Las frutas u hortalizas
frescas no deberan cortarse ni romperse para obtener unidades.Norma CODEX
CAC/GL 33, Anexo I, pag. 15.
b) Material envasado. "Se tornaran como unidades los envases discretos mas
pequefios. Cuando los en vases mas pequefios sean muy grandes, seran objeto de
un muestreo a granel, segun se indica en el apartado e) Cuando los envases
pequefios sean muy pequefios, un conjunto de envases podra formar una
unidad." Norma CODEX CAC/GL 33, Anexo I, pag. 15.

Muestra de laboratorio:
"Muestra enviada al laboratorio 0 recibida por este. Cantidad
representativa de material extrafdo de la muestra (sitio de muestreo)." Norma CODEX
CAC/GL 33, Anexo I, pag. 13.

Muestra analitica:EI material destin ado al analisis a partir de la muestra de laboratorio

separando la porcion del producto que ha de analizarse y luego mezclando, triturando,
cortando finamente, para poder prescindir de porciones analfticas con el mfnirno error de
muestreo.

Nota: "La preparacion de la muestra analitica debora reflejar el procedimiento utilizado

para establecer la identificacion del patogeno." Norma CODEX CAC/GL 33, Anexo I,
pag. 13.

PJaga: "Cualquier especie, raza 0 biotipo vegetal 0 animal 0 agente pat6geno dafiino
para las plantas 0 productos vegetales."(FAO 1990; revisado FAO, 1995; CIPF, 1997).

Lote: "Conjunto de unidades de un solo producto basico, identificable por

composici6n hornogenea, origen, etc., que forma parte de un envio" (FAO, 1990).

su

Parasito: "Organismo que vive dentro

este" (NIMF N 3, 2005).

de

Diaguostico
27,2006).

Sitio de muestreo: Lugar, predio, sitio de embarque, sitio de desembarque, puerto 0

aeropuerto, etc. en el cual se va a inspeccionar y posteriormente se van a tomar
muestras, las mismas que seran trasladadas al laboratorio para su analisis,

sobre un organismo

de pJaga: "Proceso de deteccion e identificacion

mayor, alimentandose

de una plaga" (NIMF N

.\

!~

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Hoja 6 de 12

Personal tecnico de muestreo: Se considera personal tecnico de muestreo en el caso de

Cliente Interno a los Inspectores Fitosanitarios y en el Caso de Cliente externo a las
personas que muestrean por designacion de cada cliente.

4.2 Abreviaturas
RT:

Responsable Tecnico

A:

Analista

NA:

No aplica

4.3 Material a utilizar.

Tijeras podadoras.
Machete.
Sierra manual.
Barreno pala excavadora.
Material de empaque y rotulacion: Papel absorbente, fundas plasticas y de papel,
marcador indeleble, cajas termicas y gel refrigerante.

4.4 Preparacion de material.

EI personal tecnico de muestreo debera asegurarse de disponer de todas las herrarnientas
necesarias para ejecutar su trabajo. EI material debera encontrarse limpio antes de
proceder al muestreo y desinfectarse entre cada especirnen muestreado.

5. PROCEDIMIENTO
a.

Muestra

de plantas

partes de plantas

EI personal tecnico de muestreo (tecnicos de laboratorio, inspectores fitosanitarios,

personal de control y vigilancia, 0 personal tecnico autorizado) debe acudir al sitio de toma
de muestra de acuerdo a la planificacion 0 a la solicitud de requerimiento de la inspeccion
debiendo observar las condiciones en las cuales se encuentra el area de cultivo, huerta,
vivero, embarque, contenedor, bodega, punto de acopio, muelle, barco.
EI personal tecnico de muestreo debera registrar en el formato de Orden de Trabajo,
de muestreo como: el site de muestreo georeferenciado, datos de referencia del c1iente 0 dueiio del predio de la muestra, presencia de
pesticidas, fecha de muestreo, codigo, identificacion de la muestra, entre otros.

PGC/LAl03-FOO7" vigentela informacion

EI personal tecnico de rnuestreo, debera observar la sintomatologfa de la planta(as) 0

partes de la planta (as) 0 cultivo con la finalidad de dar un pre diagnostico que se registra en
la Orden de Trabajo, PGCILA/03-F007 vigente.
EI personal tecnico
siguiente tabla I.

responsable

de muestreo,

debe tomar la muestra

de acuerdo

a la

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AGROCALIDAD
AGENoA ECUATORIANA
DEASEGURAMIENTO
DELA CAI.II:W) DB. IGRO

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Hoja 7 de 12

Tabla I: Numero de muestrasa recolectar

PLANTA

PARTE DE LA
PLANTA

MUESTRA
RECOLECTADA

Planta de altura
menor a 15 cm

Hoja
Tallo
Raiz

Min.5
Min.3
Min.l

Planta mayor a 15
cm de altura

Hoja
Tallo
Raiz

Min. 5
Min.l
Min.200g

Plantas herbaceas

Planta
completa

Min.2

Plantas leiiosas 0
semi-Ieiiosas
completas con
sintomas de
marchitez

Ramas con
marchitez
activa

Min.2

Arboles

Hojas
Tallo
Raiz

Min. 5
Min. 1
Min.200g

Frutas

fruta

Min. 100 9

Tuberculos

Ejemplo: papa

Min. 500 9

OBSERVACIONES
Es importante que se tomen muestras
con caracterfsticas iniciales y medias de
la enfermedad.
Tallo: incluir muestras de la porcion
terminal del tallo con yemas laterales,
hoias y flores en condicion identificable
Es importante que se tomen muestras
con caracterfsticas inidales y medias de
la enfermedad.
Tallo: incluya muestras de la porcion
terminal del tallo con yemas laterales,
hojas y flores en condicion identificable
Estas plantas tend rim la tendencia a
deshidratarse y secarse. Envie la planta
completa, y especfmenes mostrando
sintomas
iniciales,
con rakes y
sustrato de crecimiento adyacente si
esta incluido en el envio. Mande varias
plantas.
Se colectan ramas
con marchitez
activa, pero NO totalmente muertas. Se
envuelven en un plastico para retener la
humedad. Se colectan las rakes en
forma separada y se coloca en una
bolsa plastica.
Es importante que se tomen muestras
con caracterfsticas iniciales y medias de
la enfermedad.
Considerar
que estas deben
ser
colocadas
en
fundas
plesticas.
etiquetadas
Es importante que se tomen muestras
con caracterfsticas iniciales y medias de
la enfermedad

Para el caso muestra de rafz es necesario considerar que debe recolectarse tarnbien
con suelo (aprox. 500 g) y debera enviarse al laboratorio como una sola muestra.
El analista de laboratorio, inspectores fitosanitarios, personal de control y vigilancia,
personal tecnico de rnuestreo es responsable de la toma, envfo y preservaci6n de la muestra
recolectada.

Conservacion de la muestra.
Las muestras una vez recolectadas, deben ser envueltas en papel absorbente 0 papel
libre de tinta, posteriormente debe colocar en una funda de papel. Material vegetal altamente
hidratado como hojas y tallos de cucurbitaceas, frutos y tuberculos deben envoIverse en
papel absorbente seco para disminuir su humedad. Ramas y hojas de plantas con tendencia a
desecarse deberan envolverse en papel absorbente ligeramente hurnedecido.

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INTfFP/Ol
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AOROCALIDAD

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Ill!lA ~

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Hoja 8 de 12

La muestra debe ser protegida de la humedad, por este motivo es importante colocar
la funda de papel con la muestra en una funda plastica.Preservar la muestra a 4C. NO
agregar agua a la mllestra, esto acelera el deterioro de la muestra.

Envio de la muestra allaboratorio.

La muestra recolectada y debidamente conservada debera ser enviada al Laboratorio
de Fitopatologfa, en el caso de anal isis micologico y bacteriologico hasta 48 horas despues
de recolectada y en el caso de analisis virologico hasta 24 horas de recolectada.
Adjuntar

a la muestra el formulario correspondiente

en la Orden de Trabajo,
vigente en el caso de cliente interno, en el cual se describen la solicitud
de analisis y el mimero de muestras. En el caso de c1iente externo, la muestra debera ser
trasladada a recaudacion para realizar el pago del analisis y posterior lIenado de la
informacion por parte del cliente.

PGC/LN03-F007

b. Muestras de suelo y abonos solidos

El personal tecnico de muestreo debe acudir al sruo de muestreo de acuerdo a la
planificacion 0 a la solicitud de requerirniento de la inspeccion debiendo observar las
condiciones en las cuales se encuentra el area de cultivo, huerta, vivero, embarque,
contenedor, bodega, punto de acopio, muelle, barco.
EI personal tecnico de muestreo debera registrar en la Orden de Trabajo, PGC/LA/03F007 vigente los datos de muestreo como: el sitio de muestreo geo-referenciado, datos de
referencia del cliente 0 duefio del predio de la muestra, fecha de muestreo, codigo de
identificacion, entre otros.
EI personal tecnico de muestreo, debe tomar la muestra de acuerdo a la siguiente tabla de
referencia.
Tabla 2. Niimero de rnuestras a recolecrar

MUESTRA

CANTIDAD

Suelo

Min. 1 kg

Abonos s61idos

Min. 1 kg

Conservacion de la muestra
La muestra debe ser colocada en una funda plastica que no permita el derramamiento
muestra, preservar la muestra a 4C.
Etiquetar la muestra con los siguientes datos:
Laboratorio
Identificacion de la muestra
Localizacion: Provincia, Canton, Parroquia
Direccion del cliente
Nombre del cliente
Descripcion de la muestra

de

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Raja 9 de 12

Fecha de toma de muestra

Fecha de envfo de la muestra
Nombre de persona que realiza el muestreo

Envio de la muestra allaboratorio

La muestra recolectada y debidamente conservada debera ser enviada al Laboratorio
de Fitopatologfa, en el caso de analisis micol6gico y bacteriol6gico hasta 48 horas despues
de recolectada y en el caso de analisis virol6gico hasta 24 horas de recolectada.
Adjuntar a la muestra la Orden de Trabajo, PGC/LA/03-F007 vigente, en el cual se
describen la solicitud de analisis y el mimero de muestras en el caso de Cliente Interno.

c. Muestras liquidas (Agua y abono liquido)

EI personal tecnico de muestreo debe acudir al sitio de muestreo de acuerdo a la
planificacion 0 a la solicitud de requerimiento de la inspecci6n debiendo observar las
condiciones en las cuales se encuentra el area de cultivo, huerta, vivero, embarque,
contenedor, bodega, punto de acopio, muelle, barco.
EI personal tecnico de muestreo debera registrar en la Orden de Trabajo,
PGC/LAl03-F007
vigente los datos de muestreo como: el
sitio de rnuestreo georeferenciado, datos de referencia del cliente 0 duefio del predio de la muestra, fecha de
muestreo, c6digo de identificaci6n, entre otros.
EI personal tecnico de muestreo, debe tomar la muestra de acuerdo a la siguiente tabla de
referencia.
Tabla 3. NUJ11erode rnuestras a recolectar
MUESTRA

CANTIDAD

Agua

Mfn. 500 ml

Abono liquido

Mfn. 500ml

OBSERVACIONES
La muestra debe ser recolectada en un
recipiente plastico y que no haya sido usado
en bebidas (coca cola, refresco, jugos, etc.) 0
utilizar frasco de vidrio esterilizado.
EI recipiente debe ser IIenado de manera
completa sin dejar espacios de aire y tapar de
manera inmediata despues de tomada la
muestra

Conservacion de muestra:
La muestra debe ser recolectada en un recipiente plastico (botella) y que no haya sido
usado en bebidas (coca cola, refresco, jugos) 0 utilizar frasco de vidrio esterilizado.
EI recipiente debe ser Ilenado de manera completa sin dejar espacios de aire y tapar
herrneticamente e inmediata despues de tomada la muestra.
Etiquetar la muestra con los datos que se describen en el formato de etiqueta, segun
el Anexo I, la misma que debe adherirse a la botella. Preservar la muestra a 4C.

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Hoja 10de 12

Envfo de la muestra allaboratorio

La muestra recolectada y debidamente conservada debera ser enviada al Laboratorio
de Fitopatologia, en el caso de analisis micol6gico y bacteriologico hasta 48 horas despues
de recolectada y en el caso de analisis virol6gico hasta 24 horas de recolectada.
Adjuntar a la muestra el formulario correspondiente a la Orden de Trabajo,
vigente, en el cual se describen la solicitud de analisis y el rnimero de
muestras, en el caso de Cliente lnterno.

PGC/LA/03-F007

6.

ANEXOS
ANEXO I. Sintornas caracterfsticos de algunasenfermedades en algunos cultivos.

INTIFP/Ol
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Hoja 11 de 12

ANEXOI
Sintomas caracteristicos

de algunas enfermedades

en algunos cultivos.

Enfcrmcdad fungtca,

Enfcrmcdad fllngica

Sintomas
Inicialmente lesiones pequeiias levemente
hundidas. Incremento de tamaiio hasta 12
mm con anillos concentricos.

Sintomas

Centro de la lesion con color tostado con

aspecto moteado.

Podredumbre seca de parte superior de la raiz

y cuello volviendose rojizo y presentando
necrosis en raices.
Disminucion de vigor en parte aerea de la
planta y decremento de la produccion.

Rojas con lesiones pequeiias, circulares de

color castaiio con halos amarillos.
Raices con lesiones color castano,
reduccion de tamaiio y pudricion en raices,
decorticacion en raices grandes

~+

 .'

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Hoja 12de 12

Pudrlclon blanda
Enfermedad bacteriana
Sintomas:
Peciolos y bulbos: Pudriciones blandas.
Tuberculo: Reducci6n amasa pulposa.
Follaje: Marchitamiento general en follaje.
Hoja: Manchas acuosas, marchitamiento.
Olor fuerte

Enfermedad viral
Sintomas:
Peciolos, hojas con clorosis (mosaico)
Clorosis en sentido de la nervadura 0 internervaduras.
Clorosis en formas como anillos, rayas.
Achaparrarniento enrollarniento de apices y frutos,
Enanismo dentro de una poblaci6n de tarnafio