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TALLER DE VALIDACIN PARA

LABORATORIOS DE CONTROL DE
CALIDAD DE LA INDUSTRIA
FARMACEUTICA

III.- PARMETROS DE VALIDACIN DEL TIPO


FISICOQUMICO Y BIOLGICO

viernes, 04 de octubre de

Parmetros de validacin del tipo fisicoqumico y


biolgico

Las preguntas ms comunes en un proceso


de validacin.
Por qu
Valido?
Cmo
Valido?

Qu
Valido?

Quin
Valida?

Dnde
Valido?
Cundo
Valido?
viernes, 04 de octubre de 2013

Parmetros de validacin del tipo fisicoqumico y


biolgico

Definiciones
Criterio de aceptacin (criterio de funcionamiento): Exigencias de una
caracterstica de funcionamiento en funcin de las cuales se puede
determinar que un mtodo analtico es adecuado para la finalidad
perseguida y ofrece resultados fiables.
Documentacin.- Conjunto de informacin que sustenta una actividad
realizada.
Especificaciones.- Descripcin del material, sustancia o producto, que
incluye la definicin de sus propiedades y caractersticas, con las tolerancias
de variacin de los parmetros de calidad.

Metodologa de prueba.- Procedimiento o grupo de procedimientos, para


determinar si un producto o materia prima cumple con las especificaciones
establecidas.

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Definiciones
Mtodo analtico.- Descripcin de la secuencia de actividades, recursos
materiales y parmetros que se deben cumplir, para llevar a cabo el anlisis
de un componente especfico de la muestra.
Mtodo analtico desarrollado internamente.- Mtodo desarrollado por el
propio laboratorio.
Mtodo analtico oficial.- Mtodo que aparece en la literatura oficial
reconocida.
Mtodo analtico no oficial.- Mtodo que no aparece en la literatura oficial
reconocida.
Parmetros de desempeo: Parmetro especfico a estudiar en un protocolo
de validacin

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Definiciones
Validacin: Es el proceso que establece, mediante estudios de laboratorio,
que las caractersticas de desempeo del mtodo, satisfacen los requisitos
para su aplicacin analtica.
Validacin parcial (confirmacin del mtodo): Evidencia objetiva para
demostrar que al aplicar un mtodo normalizado, se cumple con las
especificaciones del mismo y se cuenta con la competencia tcnica para
realizarlo adecuadamente tomando en consideracin sus propias
instalaciones, equipo y personal.

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Clasificacin de los mtodos


de ensayo

Clasificacin grado de
cuantificacin

Normalizados / No
Normalizados
Mtodos
Cualitativos

Mtodos Semi
Cuantitativos

Mtodos
Cuantitativos

Clasificacin por principio de


Deteccin

Mtodos Biolgicos

Mtodos Bioqumicos
(eje. ELISA)

Mtodos Fsico Qumicos


(TLC,CG,HPLC)

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CLASIFICACIN DE MTODOS DE
ENSAYO

Mtodo Normalizado
Normas Oficiales Mexicanas
(NOM)

Normas Mexicanas (NMX).

Farmacopea de los Estados


Unidos Mexicanos (FEUM)

Como segunda instancia:


Mtodos
Oficiales del
AOAC

Pesticide
Analytical
Manual (PAM)

Environmental
Protection
Agency (EPA)

United States
Pharmacopoeia
(USP)

British
Pharmacopoeia
(BP)

American Society
for Testing
Materials (ASTM)

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Parmetros de funcionamiento para los ensayos que involucran


mediciones analticas

(mtodos normalizados)
Porcentaje de Recuperacin o error relativo
Limite de deteccin
Lmite de Cuantificacin
Intervalo lineal y de trabajo
Reproducibilidad
Repetibilidad
Sesgo
Incertidumbre
(mtodos no normalizados)
Selectividad
Sensibilidad
Robustez
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Consideraciones para una validacin:


Debe ser llevada a cabo despus de que
el mtodo ha sido optimizado.
Aplica a un analista especfico,
laboratorio y equipo.
Aplica a un intervalo razonable de
concentracin.
Blancos de muestras (Placebos). Matriz
que no contiene el analito de inters.
Muestras adicionadas. Matriz que
contiene el analito y se le adiciona el
mismo.
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A las dos tipos de matriz se les adiciona cantidades


conocidas del analito de inters.
Seleccionar la matriz: mas solicitada, y la mas
compleja.

La matriz se analiza antes de la adicin para


determinar el contenido inicia del analito, en la
prctica se recomienda un mnimo de 6 repeticiones.
Para muestras adicionadas, se puede utilizar la
mitad de la cantidad requerida por el mtodo y
adicionar para completar el contenido del analito.
Cuando no sea posible adicionar de manera directa
el analito a la muestra, la adicin puede ser llevada a
cabo en alguna etapa del mtodo.
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% DE RECUPERACION O ERROR RELATIVO


Cantidad del analito recuperada en la porcin de muestra o muestra adicionada
cuando esta es conducida a travs del mtodo analtico completo, y que permite
evaluar la eficiencia de la extraccin, proceso de preparacin e interferencias
que puedan existir al aplicarlo. Se expresa en trminos de porcentaje.

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Consideraciones:
Es dependiente de la matriz, proceso de anlisis y concentracin del analito.
Debe demostrarse en todo el intervalo de trabajo.
A bajas concentraciones y en mtodos que involucran pasos de extraccin,
purificacin y concentracin, los recobros a menudo son bajos
Esta estrechamente relacionada con los errores sistemticos.

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LMITE DE DETECCIN
Es la concentracin ms baja a la cual puede detectarse el analito pero no
necesariamente cuantificarse bajo las condiciones experimentales establecidas.

LMITE DE CUANTIFICACIN
Es la concentracin ms baja a la cual el analito puede cuantificarse con una
precisin y veracidad aceptables bajo las condiciones experimentales
establecidas.

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LIMITES DE CUANTIFICACIN Y DETECCIN PARA EL INTERVALO


DE TRABAJO
En el anlisis de trazas (ppm, ppb, ppt), es importante saber la concentracin
ms baja del analito, que puede detectarse o cuantificarse confiable por el
mtodo.
Para propsitos de validacin es suficiente proporcionar un indicativo del nivel
al cual la deteccin resulta problemtica.
Se calcula en: Residuos, Contaminantes, Impurezas, Productos de degradacin.

No se calcula en: Composicin, Ingrediente activo.


Lmite de Cuantificacin criterio de aceptacin: valor menor o igual al nivel
inferior .

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INTERVALO LINEAL Y DE TRABAJO


Es la capacidad de un mtodo analtico para dar resultados que son directamente
proporcionales a la concentracin del analito en la muestra dentro de un
intervalo dado.

LINEALIDAD DEL METODO


2.50

y = 1.3171x - 0.0156
R = 0.997

2.00
1.50
Y

1.00
0.50
0.00
0.0

0.5

1.0

1.5

2.0

-0.50
X

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Intervalo comprendido entre las concentraciones superior e inferior del analito


en la muestra (incluyendo dichas concentraciones) para las que se ha
demostrado que dicho analito es cuantificado con un nivel satisfactorio de
linealidad, repetibilidad y recuperacin.

Intervalo donde la respuesta analtica es directamente proporcional a la


concentracin del analito en la muestra.
Relacin respuesta vs concentracin repetible.
Puede ser diferente para distintas matrices.
Tipo de prueba

Respuesta

Espectrofotomtrica
Cromatogrfica
Potenciomtrica
Volumtrica
Gravimtrica

Tipo de prueba

Respuesta

Absorbancia o transmitancia
rea o altura del pico
milivolts, unidades de pH, S
mL gastados
Diferencia de peso
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EJEMPLO DE INTERVALO DE TRABAJO

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INTERVALO LINEAL Y DE TRABAJO
6

Punto de Corte de la Regresin Lineal

5
4
3
2
1
0
0

-1

Regression Lines with a Break-Point


Parameters
Slope of 1st Line1.3249441
Constant Term in 1st Line-0.0204357
Slope of 2nd Line0.9876009
Break Point3

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REPETIBILIDAD
Grado de concordancia entre resultados analticos individuales, cuando el procedimiento
se aplica repetidamente a diferentes porciones de una muestra homognea por un solo
analista, usando los mismos instrumentos y mtodo en intervalos cortos de tiempo.
Es la fraccin del analito aadido a una muestra de ensayo (fortificado o muestra
sembrada) antes del anlisis, que es medido (recuperado) por el mtodo ensayado.

REPRODUCIBILIDAD
Grado de concordancia entre resultados analticos individuales, cuando el procedimiento
se aplica repetidamente a diferentes porciones de una muestra homognea por dos
analistas o instrumentos diferentes, usando el mismo mtodo en diferentes das.

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Consideraciones:
Miden la variabilidad del mtodo analtico en la rutina de trabajo.
Dependen slo de la distribucin de los errores aleatorios y no se relaciona con el
valor verdadero o valor especificado.
Se determinan utilizando muestras homogneas representativas de las matrices a la
cuales ser aplicado el mtodo .
Se utilizan blancos de muestras o muestras adicionadas en el laboratorio para simular
las muestras de prueba originales.

Se definen en trminos de la desviacin estndar, coeficiente de variacin o el criterio


de aceptacin del mtodo de ensayo.

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No. Curva
Analista

0,2 PPB

0,3 PPB

0,4 PPB

Sumatoria t
Sumatoria t

BETAGONISTAS-12RECUPERACIN 3

REPLICA No. 2

REPLICA No. 3

REPRO_EQUI,BOV, REPRO_EQUI,BOV,
POR
POR

MI. MARIA
DOLORES
MARTINEZ

QI. LILIA
PEGUEROS
OSORIO

IQ. BERNARDINO
LLANOS ALVAREZ

0.19

0.17

0.19

0.18

0.18

0.23

0.18

0.20

0.23

0.17

0.19

0.24

0.17

0.18

0.23

0.17

0.19

0.23

0.19

0.20

0.23

0.31

0.25

0.30

0.29

0.26

0.28

0.28

0.32

0.29

0.27

0.26

0.27

0.29

0.28

0.32

0.28

0.28

0.32

0.28

0.26

0.29

0.36

0.43

0.47

0.35

0.47

0.34

0.35

0.45

0.36

0.42

0.47

0.37

0.39

0.44

0.43

0.38

0.46

0.41

0.34

0.43

0.37

5.840

6.370

6.400

34.106

40.577

40.960

Histogram of Paleta 1, Paleta 3, paleta 2


Normal

Variable
Paleta 1
Paleta 3
paleta 2

7
6

Frequency

REPLICA No. 1

Mean StDev N
12.31 4.408 16
12.44 9.114 16
11.81 4.902 16

5
4
3
2
1
0

-5

10
15
Data

20

25

30

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ANOVA
ESTADSTICOS
Sumatoria T
18.61000

Sumatoria T
115.6425

n
21

h
3

N
63

Cuenta

Suma

Promedio

Varianza

21

5.840

0.278095238 0.00675619

21

6.370

0.303333333 0.012873333

21

6.400

0.304761905 0.00574619

Sumatoria x
6.0143

h-1
2

h(n-1)
60

hn-1
62

RESUMEN

GRAFICA Boxplot of MEDIAS

ANLISIS DE VARIANZA

Inter. Confianza
Suma de
cuadrados

Grados de libertad

Entre grupos
Dentro de los grupos

0.00945
0.50751

2
60

Total

0.51697

62

Origen de las variaciones

95
0.05
Promedio de los
cuadrados

0.00473
0.00846

20

15

Data

Grupos
MI. MARIA DOLORES
MARTINEZ
QI. LILIA PEGUEROS
OSORIO
IQ. BERNARDINO LLANOS
ALVAREZ

F calculada

0.5587

Probabilidad

Valor crtico
para F

10

0.574925948 3.150411
0
Paleta 1

CRITERIOS DE ACEPTACIN

VALOR CRITICO

F CALCULADA

ESTATUS DE LA PRUEBA

El valor de F calculada debe ser menor o


igual al valor critica para F

3.150411

0.558652

CUMPLE EL CRITERIO

paleta 2

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SESGO
Es la diferencia entre el valor promedio obtenido de los resultados de prueba con
respecto a un valor de referencia aceptado o conocido.

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MATERIAL DE REFERENCIA CERTIFICADO


Calibracin de Equipos

Validacin de mtodos

Inter-comparaciones

Verificacin (uso correcto del mtodo)

Deteccin de errores

Constatacin de resultados

Ensayos de Aptitud
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ENSAYOS DE APTITUD
Interval Plot of Arsnico
95% CI for the Mean

2.50

ppm

2.25

2.00

Valor A signado 1.96 ppm

1.75

1.50
CONSENSO

L1

L2

L3

L4

L5

L6 REFERENCIA

ID. Laboratorios

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INCERTIDUMBRE
Estimacin que caracteriza el intervalo de valores, dentro de los cuales se encuentra el
valor convencionalmente verdadero de la magnitud medida.

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Consideraciones:
Es un parmetro nico (usualmente una desviacin estndar o un intervalo de
confianza) que expresa el intervalo de posibles valores sobre la base de los resultados
de medicin.
Su estimacin considera todos los efectos reconocidos que influyen en el resultado.
Se establece una vez que se ha efectuado la validacin o confirmacin del mtodo.
Un resultado analtico no puede ser interpretado sin el valor de incertidumbre
asociado.

TIPO A

TIPO B

Desviacin estndar de una


serie de repeticiones

Desviacin estndar basado


en certificados de anlisis y
calibracin
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Parmetros de validacin del tipo fisicoqumico y


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SELECTIVIDAD
Capacidad de un mtodo analtico para obtener
una respuesta debida nicamente al analito de inters
y no a otros componentes de la muestra.

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SENSIBILIDAD
Es el cambio en la respuesta del instrumento que corresponde a un cambio en
la concentracin del analito. Es la pendiente del intervalo de trabajo y cuanto
mayor es esta, mayor es la sensibilidad del mtodo.
12

12

10

10

y=a+bx

8
6

respuesta

respuesta

6
4
2
0

y=a+bx+cx2

2
0

concentracin

10

10

concentracin

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ROBUSTEZ
Es la medida de la capacidad del mtodo analtico de permanecer inalterado
por pequeas, pero deliberadas variaciones (efecto de cambio en las
condiciones) en los parmetros del mismo, proporcionando un ndice de su
confiabilidad durante su uso normal.

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CONSIDERACIONES:
En cualquier mtodo habr ciertas etapas en las cuales, si no se llevan a cabo con
suficiente cuidado, tendrn un efecto sobre el desempeo del mismo.
Es posible identificar las variables que tienen el efecto ms significativo y en base a
ello controlarlas cuidadosamente cuando se aplica el mtodo.
Se aplica para investigar su efecto sobre la precisin y veracidad del mtodo.
Generalmente este parmetro aplica para mtodos desarrollados por el laboratorio,
en los cuales se realizan variaciones deliberadas en el mtodo y se cuantifica el efecto
en el rendimiento.

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CMO SE DETERMINA:
1. Identificar de 4 a 7 factores que puedan tener un efecto significativo en el
desempeo del mtodo y variar ligeramente cada uno ellos.
2. Efectuar una serie de 8 combinaciones de valores nominales con variaciones
deliberadas.

3. Analizar una muestra por duplicado con cada serie de combinaciones.


4. Calcular las diferencias de las mediciones de los subgrupos.
5. Graficar en una lnea los valores de las diferencias de menor a mayor.
6.Calcular la desviacin estndar de las diferencias ( sDi ).
7.Reportar los factores que mas influyen en el resultado final.

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Parmetros de validacin del tipo fisicoqumico y


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CMO SE DETERMINA:

COMBINACION DE DETERMINACIONES
Valor del factor F

A/a

B/b

C/c

D/d

E/e

F/f

G/g

Resultados

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Parmetros de validacin del tipo fisicoqumico y


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CMO SE DETERMINA:

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Parmetros de validacin del tipo fisicoqumico y


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CMO SE DETERMINA:

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biolgico
CMO SE DETERMINA:

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CMO SE DETERMINA:

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CMO SE DETERMINA:

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biolgico
CMO SE DETERMINA:

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