Curso de Agronomia

Microbiologia Agrcola
Profa. Andra Teixeira

AULA PRTICA
COLORAO DE BACTRIAS
Estudo da forma e organizao das bactrias
1. INTRODUO
Os microrganismos diferem qumica e fisicamente entre si, reagindo de
modo diferente s operaes de colorao. Este o princpio bsico da
colorao diferencial. Ento, designa-se colorao diferencial como o mtodo
que permite distinguir tipos de bactrias.
O mtodo de colorao de Gram o mais utilizado em Bacteriologia e
permite a diferenciao da maioria das bactrias em 2 grupos pelas
diferenas marcantes na parede celular que apresentam. O princpio da
tcnica est baseado na diferena de composio da parede de diferentes
bactrias e na capacidade destas paredes em reterem os corantes utilizados.
Assim, os corantes utilizados coram as bactrias Gram-positivas em roxo e as
Gram-negativas em vermelho.
A tcnica no se aplica para micoplasmas, bactrias desprovidas de
parede, micobactrias pela presena de muitos lipdios insolveis na parede e
espiroquetas pela estrutura muito delgada e pouco permevel aos corantes.
2. OBJETIVOS
Corar uma lmina pelo mtodo de Gram;
Compreender cada etapa do processo de colorao, bem como a funo
de cada substncia utilizada.
Reconhecer bactrias Gram positivas e Gram negativas ao microscpio;
Compreender a importncia dessa colorao para microbiologia;
3. MATERIAL

Placa de Petri contendo crescimento bacteriano

Lminas para preparao do esfregao
Ala de platina
Swab
Cristal violeta
Lugol
lcool etlico
Fucsina

4. METODOS
4.1

Preparao do esfregao

1. Limpar uma lmina de vidro (passar algodo embebido em lcool)

2. Quando se tratar de uma cultura em meio lquido, com uma ala de
inoculao, tomar uma pequena poro da cultura, observando as

precaues de assepsia, e coloc-la sobre a lmina espalhando-a para

formar um esfregao fino e uniforme.
3. Quando a cultura for em meio slido, colocar uma gota de gua
destilada sobre a lmina e com uma ala de inoculao, colher uma
pequena quantidade de crescimento bacteriano da superfcie do agar e
suspend-la na gota de gua destilada, espalhando suficientemente
para obter um esfregao fino.
4. Deixar a lmina secar temperatura ambiente;
5. Fixar na chama do Bico de Bunsen, cortando a chama por 3x.
4.2

Colorao de Gram

1. Cobrir o esfregao bacteriano com Cristal violeta, deixar 2 minutos e

verter o corante na cuba.
2. Remover o excesso da soluo de cristal violeta da lmina, lavando-a
levemente com gua corrente (opcional).
3. Cobrir o esfregao com soluo de Lugol, deixar por 4 minutos e retirar
a seguir, lavando com um filete de gua.
4. Descorar o esfregao usando uma soluo de lcool acetona,
rapidamente (10 a 15 segundos).
5. Lavar com gua corrente, imediatamente.
6. Cobrir o esfregao com a Fucsina, deixar por 30 segundos e retirar
7. Lavar com gua corrente
8. Secar com papel absorvente
9. Fixar na chama do Bico de Bunsen
* observar a lmina: colocar uma gota de leo de imerso sobre o
esfregao corado e observar a lamina no microscpio, com objetiva de
100x.
4.3

Observao microscpica de lminas prontas

1. Adicionar sobre o esfregao das lminas prontas uma pequena gota de

leo de imerso.
2. Examinar no microscpio tico, com objetiva de imerso (100x).
5. RESULTADOS E DISCUSSO
Registe todas as suas observaes, relativas forma, organizao e
tamanho dos microrganismos observados. Apresente o relatrio de acordo
com as normas indicadas.
6. REFERENCIAS
TORTORA, G.J.; FUNKE, B.R.; CASE, CL. Microbiologia. 10. ed. Porto
Alegre: Artmed, 2010
VERMELHO, A. B. et al. Prticas de Microbiologia. 1 ed. Rio de Janeiro:
Guanabara Koogan, 2006.