MEIOSE EM PLANTAS : DEZ ANOS DE DESCOBERTA DO GENE

Abstrat: As plantas tm sido sempre na vanguarda dos estudos genticos e citogenticos , mas
s foi aps a exploso de ferramentas genmicas ligadas ao desenvolvimento da Arabidopsis
thaliana como modelo, que os primeiros genes envolvidos na meiose planta foram clonados no
final de 1990 . Desde ento , em menos de 10 anos, cerca de cinquenta genes de plantas
meiticas foram funcionalmente caracterizado , principalmente em Arabidopsis , mas tambm
em arroz e milho . Nesta reviso , ns damos uma viso geral desta dcada da descoberta, com
destaque para as estratgias que tm sido utilizados para a identificao de genes meitica.
Destacamos, ainda, avanos particularmente interessantes que essas telas de mutantes e
genes tornou possvel .
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A partir de uma clula-me diplide, a meiose gera quatro produtos haplides a partir do qual
gametophytes iro diferenciar. Esta reduo ploidia uma consequncia directa das duas
rodadas de segregao cromossmica (meiose I e meiose II) aps uma nica fase S (fase S prmeitica). A primeira diviso meitica (muitas vezes chamado reducional) separa cromossomos
homlogos do outro, enquanto a meiose II separa cromatdeos irmos, de modo que se
assemelha a uma mitose haplides (Gerton e Hawley, 2005). Quatro caractersticas notveis
participar desta conquista: Em primeiro lugar, agora claro que a replicao do DNA da meiose
diferente de replicao mittico e que vrios processos importantes tornam-se iniciado j em
fase S (Forsburg, 2002). Em segundo lugar, a recombinao gentica, em adio aos seus
efeitos sobre a variabilidade da descendncia, necessrio na maioria dos organismos para a
separao correcta de cromossomas homlogos na meiose I (Petronczki et al., 2003). Em
terceiro lugar, os mecanismos meiticos de coeso irm cromatdeos e orientao cinetcoro
tambm so modificadas em comparao com os mesmos processos em mitose, a fim de
assegurar a segregao de cromossomas homlogos na primeira diviso e de separao dos
cromatdeos irmos apenas no segundo (Ishiguro e Watanabe, 2007 ). Finalmente, o evento
mais espetacular da prfase meitica o emparelhamento ea synapsis ao longo do complexo
sinaptonmico de cromossomos homlogos em pares.

Estudos de plantas tm sido proeminente no campo da meiose a partir do incio precoce de

estudos genticos e citogenticas, com a utilizao de modelos de culturas, tais como trigo e
milho. Os genes meiose primeira planta foram isolados em lrio, tirando partido do grande
tamanho dos rgos reprodutivos e longa durao da meiose nesta espcie, para produzir
bibliotecas de cDNA muito especficas (Bouchard, 1990; Kobayashi et al, 1993, 1994. ). Em
seguida, os primeiros genes de recombinao de Arabidopsis thaliana foram isolados no final
dos anos 1990 com base em semelhana de sequncia com Saccharomyces cerevisiae (Sato et
al, 1995;. Klimyuk e Jones, 1997; Doutriaux et al., 1998). Entretanto, Arabidopsis, surgiu como
um modelo para estudos de desenvolvimento e grandes coleces mutantes foram gerados, em
conjunto com uma ampla variedade de ferramentas moleculares, genticos e citolgicas. Os
primeiros relatrios de telas para defeitos meiticas em Arabidopsis so de 1997 (Peirson et ai,
1997;.. Ross et ai, 1997), e estes foram rapidamente seguido pela clonagem dos primeiros
genes meiticas Arabidopsis (Glover et al., 1998 ; Bai et ai, 1999;.. Bhatt et al, 1999).
Subsequentemente, o rastreio mutante DNApool (Couteau et al., 1999) e a sequenciao
sistemtica das fronteiras de insero permitido o primeiro isolamento (e o subsequente uso
generalizado desta abordagem) e caracterizao funcional de genes meiticas com base em
semelhana de sequncia. Desde ento, a identificao e caracterizao de genes de plantas

meiticas tem tido um enorme acelerao utilizando milho e arroz, para alm da Arabidopsis,
como modelos de plantas no campo.

Ao contrrio de outros modelos eucariticos meicitos plantas no apresentam pontos de

verificao rigorosos e raramente se comprometem a processos apoptticos , o que torna
possvel investigar nocautear mutantes correspondentes s etapas abrangendo todo o processo
de meiose (de interfase pr-meitica a formao de esporos ) . Alm disso, o aumento da
viabilidade de vrios mutantes de plantas em comparao com os seus homlogos de
mamferos permitiu o estudo de vrios aspectos da coeso ou reparo de DNA que so
compartilhados entre a meiose e mitose.

Esta avaliao no pretende dar uma imagem completa dos mecanismos de planta meiose
porque o leitor pode se referir a outros comentrios recentes sobre estes temas ( Hamant et al ,
2006; . Mezard , 2006; Osman et al , 2006; . . Mezard et al , 2007) . Em vez disso, vamos dar
uma viso geral das principais estratgias utilizadas nos ltimos anos no campo da
identificao de genes meitica. Ns tambm incidir sobre resultados particularmente
interessantes dessas telas mutantes e genticos.

ESTRATGIAS PARA A CARACTERIZAO GENTICA DA MEIOSE PLANTA

Durante os ltimos dez anos , a seguir ao primeiro isolamento de um gene envolvido na meiose
em plantas , foram identificados aproximadamente 50 genes e caracterizado ( Tabela 1 ) . At
data , a maioria dos genes clonados foram isolados atravs de colocao de etiquetas de
insero ( por exemplo , perturbaes causadas por um transposo ou um DNAt
Agrobacterium ) . Duas estratgias complementares foram usados para isolar os mutantes : ( i )
abordagens genticas frente, que envolvem o rastreio de linhas mutadas para um fentipo
sugestivo de um defeito meiose , e a subsequente clonagem do gene , tirando partido da tag .
( Ii ) Reverso gentica , que consiste na escolha de genes candidatos , que corresponde
procura de mutaes e , em seguida, analisar o fentipo .

GENTICA PARA A FRENTE

Cerca de metade dos genes meiticas actualmente conhecidas em plantas foram identificadas
utilizando uma abordagem gentica para a frente, por rastreio de T-DNA ou de transposes
mutantes para a reduo da fertilidade e, em seguida, a realizao de anlises citolgicas.
Estes tipos de telas foram conduzidos em Arabidopsis, milho e arroz (Tabela 1). A natureza do
utation - insero de uma sequncia conhecida - facilita grandemente a identificao do gene
mutado por amplificao da sequncia de insero que flanqueiam (Alonso e Ecker, 2006).
Usando esta genes abordagem pode ser identificado sem qualquer preconceito, por
conseguinte, conduzido para a caracterizao de genes que de outro modo no foram previstos
para ser envolvido na meiose, nomeadamente, uma srie de genes que parecem ser especficos
de plantas, tais como PHS1, SWI1 ou pair1 ( Tabela 1 ). Simultaneamente, esta abordagem
tambm conduziu ao isolamento de mutantes em genes que foram conservados durante a
evoluo e que foram previamente implicado na meiose em outras espcies, mais vulgarmente
em levedura. Este o caso para Spo11, Rec8, Hop1 ou Zip4 por exemplo (Quadro 1).

Assim, a eficincia desta abordagem tem sido plenamente demonstrado e estudos semelhantes
ainda esto em andamento em vrios laboratrios. muito provvel que muitos genes
envolvidos na meiose em plantas vo ser identificados utilizando esta estratgia, no futuro
prximo. No entanto, esta abordagem tem vrias limitaes. (I) genes funcionalmente
redundantes e duplicados no so identificados. (Ii) so telas Fentipo trabalhoso e demorado.
(Iii) Os critrios para a deteco de reduo da fertilidade no so muito sensveis, o que torna
provvel que fentipos meiose sutis so perdidas. Por exemplo, um mutante Atmlh3 que tem
um fentipo meitica bvio mostra apenas uma modesta reduo na fertilidade (cerca de 40%)
(Jackson et ai., 2006), o que provavelmente explica porque que no foi encontrado em um
grande ecr no qual os mutantes com fentipos mais fortes so recorrentemente encontrada
(MG, resultados no publicados). (Iv) Finalmente, quando T-DNA usado como o agente
mutagnico, apenas cerca de 20% das mutaes isoladas esto ligadas com uma insero de TDNA, o melhor cenrio para a rpida identificao do gene mutado. As outras mutaes 80%
so causados principalmente pela insero muito curto / delees, provavelmente causados por
inseres de T-DNA com Falha (M. G., resultados no publicados). Assim, na maioria dos casos,
a mutao tem de ser identificado por clonagem posicional clssica baseada em mapeamento
gentico. Finalmente esses tipos de mutagnese so frequentemente associados com grandes
rearranjos cromossmicos que complicam significativamente os estudos moleculares, genticas
e fenotpicas dos mutantes isolados.

GENTICA REVERSA

A segunda estratgia utilizada para caracterizar genes envolvidos na meiose nas plantas uma
abordagem gentica reversa. Utilizando esta abordagem, os genes candidatos so escolhidos e,
em seguida, em mutantes desses genes so isolados e o seu fentipo caracterizado. As
mutaes causadas pela insero de T-DNA (ou transposons) so encontrados por rastreio por
PCR de ADN mutante reunidas ou, mais comumente agora em bases de dados gerados pela
sequenciao sistemtica das fronteiras de insero. Actualmente, estas bases de dados
contm cerca de 380.000 mutaes mapeados no genoma de Arabidopsis, colocao de
etiquetas 90% dos genes (Alonso e Ecker, 2006;
http://signal.salk.edu/Source/AtOME_Data_source.html) e em 172000 do genoma do arroz
(http://signal.salk.edu/RiceGE/RiceGE_Data_Source.html).

Outros tipos de recursos mutantes tambm existem para Arabidopsis, como EMS mutagnese
associados a lavra (Alonso e Ecker, 2006), mas ainda no tenham sido exploradas no campo da
planta meiose. recursos de gentica inversa esto tambm em desenvolvimento para a petnia
e milho. Este tipo de abordagem para a gentica reversa utilizado em plantas superiores,
porque DNA estranho integra quase exclusivamente ao acaso, sites no homlogos (Mengiste e
Paszkowski, 1999). Uma abordagem alternativa o silenciamento do gene de ARNi, que
particularmente til quando o gene candidato duplicada ou essencial para o desenvolvimento
da planta (Siaud et ai, 2004;.. Higgins et ai, 2005; Liu e Makaroff, 2006). ARNi gene
silenciamento pode fenocpia a mutao correspondente, mas com as variaes na intensidade
do fentipo, ou dar origem a um fentipo diferente (Higgins et al., 2004) (Li et al, 2004;. Siaud
et al., 2004).

Os genes candidatos a ser caracterizado seleccionado de acordo com vrios critrios . Mais
vulgarmente , os genes so escolhidos com base na sua similaridade de sequncia com genes
previamente mostrado para ser envolvido na meiose em outros reinos . Nos ltimos anos , isso
levou a uma alta taxa de Caracterizao do gene da meiose em plantas, principalmente em
Arabidopsis , e demonstrou que todos os trs cenrios possveis ocorreram durante a evoluo
da meiose entre as espcies : protenas mostraram a alta conservao funcional , conservao
da funo , mas com diferenas claras , ou no conservao da funo (ver abaixo) . Esta
abordagem permitiu um aumento muito rpido no nosso conhecimento da meiose nas plantas

nos ltimos anos, mas ser provvel que em breve atingir um patamar por causa do baixo
conservao da sequncia de muitos genes meiticas .
Uma abordagem emergente para a seleo de candidatos explorar os dados transcriptomic /
protemica. Neste caso, os candidatos no so escolhidos de acordo com sua seqncia, mas o
seu nvel de expresso no lugar certo e / ou no momento certo. Transcriptoma / proteoma perfis
dos rgos sexuais ou meicitos foi realizada em vrias espcies. Em Arabidopsis, o
transcriptoma de botes florais (Schmid et al., 2005) e as anteras (Zhang X et al, 2005;..
Wijeratne et al, 2007) foi analisada. Da mesma forma, os perfis de panculas de arroz e anteras
de expresso foram analisados (Tang et ai, 2005;.. Zhang ZZ et al, 2005), enquanto perfis
parcial de Brassica oleracea e meicitos Petunia (proteoma ou transcriptoma) foi levada a cabo
(Sanchez-Moran et al ., 2005; Cnudde et ai, 2006).. Na Arabidopsis, o perfil especfico de
micitos ainda no foi realizado no entanto, porque a dimenso relativamente pequena e baixo
nmero dessas clulas rendem preparao de amostras difceis. Assim, ao contrrio de levedura
(Primig et al, 2000;.. Mata et al, 2002), at agora, no temos na mo de um transcriptoma
meitica de alta qualidade para as plantas. No entanto, o papel meitica de um gene especfico
da planta foi recentemente caracterizado em Arabidopsis seguindo uma abordagem gentica
reversa com base em perfis de anteras meitica em fase de expresso de microarray (Wijeratne
et al., 2006). Obviamente, nem todos os genes expressos em botes de flores, anteras, e at
mesmo meicitos, so necessrios para a meiose, mas a pr seleco de uma lista de genes, e
assim mutante linhas, devido ao perfil de expresso, permite que analisa o fentipo de
potenciais mutantes. Esta estratgia ir levar identificao de mutantes com fentipos subtis
e provavelmente aumentar a variedade de genes meiticas. Outra abordagem promissora a
criao de telas para identificar os parceiros de protenas-chave conhecidos, tais como duas
telas hbridas ou co imunoprecipitao 'menus pendentes', mas os resultados de tais
experincias no foram relatados at agora.

O QUE TEM TODAS AS PESQUISAS NA LTIMA DCADA NOS ENSINOU SOBRE MECANISMOS
PLANTA MEIOSE?

CONTROLO DA MEIOSE E ACONTECIMENTOS MEITICOS PRIMEIROS

Meiose representa a transio entre uma esporoftica e um estado gametophytic. Parece que o
sinal (s) que permite (m) esta mudana diferir consideravelmente entre diferentes eucariotas.
Uma particularidade das plantas a ausncia de uma linha de germe predeterminado. Em vez
disso, meicitos diferenciar tarde no desenvolvimento da planta, aps uma srie de etapas de
ativao hometicos (Ma, 2005; Feng e Dickinson, 2007). A nossa compreenso da identidade
meiocyte em comparao com as clulas circundantes diplides ainda muito baixa, mesmo se
vrios mutantes MPS1 (em arroz ou ems1 / exs1 em A. thaliana) foram descritos em que o
equilbrio entre os diferentes tipos de clulas (clulas sporogenous contra clulas do tapetum)
deslocadas (. Azumi et ai, 2002; Canales et ai, 2002;.. Zhao et ai, 2002;. Nonomura et ai, 2003).
A recente identificao de uma protena de arroz Argonaute (MEL1;. Nonomura et al, 2007),
especficas para a linhagem de clulas germinativas sugere pela primeira vez que o sistema
silencioso de ARN mediada possivelmente est envolvida no desenvolvimento de clulas
sporogenous de plantas, como foi mostrou ser o caso de outros eucariotas superiores (Holmes e
Cohen, 2007).

Embora os genes semelhantes para a protena de ligao de Schizosaccharomyces pombe ARN

Mei2, que desempenha um papel importante na meiose configurar neste levedura, foram
caracterizadas em Arabidopsis, sugerindo que parte do mecanismo de iniciao meiose foi
conservada, A. thaliana Mei2 -like genes (LMA genes) parecem ter fortes papis pleiotrpicos no
desenvolvimento das plantas. Os fentipos observados quando genes AML1-5 so inativados
que revelam um papel na meiose, mas os defeitos meiticas observadas exclui um papel direto
na planta de iniciao da meiose (Kaur et al., 2006). Vrios genes foram isolados que podem
desempenhar papis importantes em eventos meiticos primeiros (Tabela 1). Por exemplo, as
mutaes em Switch1 evitar a activao da mquina meitica (pelo menos, a coeso e a
recombinao) (Mercier et ai., 2003).
Vrias protenas ciclina do tipo (CDC45 ou SDS) pode tambm desempenhar um papel em
qualquer controle da progresso do ciclo celular meitica ou um papel mais especfico na
reparao do ADN (Azumi et ai, 2002;.. Stevens et al, 2004). Alm disso, os fentipos de MS5 /
TDM e mutantes TAM (que conduzem a um terceiro ciclo de segregao de cromossomas e um
alongamento de meiose I, respectivamente) sugerem que os genes correspondentes so
possveis reguladores do ciclo celular meitica (, 1998 Glover et al. ; Wang et ai, 2004).. No
entanto, nossa compreenso destas medidas regulamentares em meiose planta ainda muito
fragmentada.
CONTROLES DE COESO E CINETCORO

Durante a mitose e da irm meiose chromatids so mantidos juntos por um complexo de

protenas chamado cohesin que contm quatro grandes subunidades: dois membros da
manuteno estrutural da famlia Chromosome (SMC1 / SMC3), SCC1 / Rad21 e SCC3 / Psc3
(Ishiguro e Watanabe, 2007) . A dinmica da liberao do complexo de coeso so essenciais
para a correta segregao de cromossomos na meiose. libertada de um modo em dois passos
por uma peptidase de endo especfica, o separase, primeiro ao longo do brao em anafase I e,
em seguida, no centrmero durante a anafase II. coeso centromrico especificamente
protegido na anafase I, pela protena Shugoshin (Watanabe, 2006). A funo de vrias protenas
envolvidas no presente processo foi analisada em plantas. A subunidade Rad21 especfica
meiose (Rec8) foi identificado e caracterizado funcionalmente em Arabidopsis, arroz e milho
(Tabela 1). O SMC1 e SMC3 mutantes so embrio letal e o seu papel na meiose no poderia ser
investigado (Liu et al., 2002). A nica homlogo de Arabidopsis SCC3 tambm foi caracterizada
e tambm identificada como sendo um gene essencial, por sorte, no entanto, devido a um alelo
gotejante, o seu papel na meiose pode ser investigada (Chelysheva et al., 2005). Estes estudos
demonstraram claramente a conservao funcional do complexo cohesin na segregao
cromossmica meitica em plantas e destacou o papel de coesinas na criao de fixao
monopolar da irm cinetcoros na meiose I (Ishiguro e Watanabe, 2007). O separase tambm
foi caracterizado em Arabidopsis, e sua funo na liberao de coeso, tanto mitose e meiose
foi mostrado (Liu e Makaroff, 2006).

Um homlogo de milho Shugoshin mostrou ser essencial para a proteco de coeso

centromrica em anafase I ( Hamant et al . , 2005) . O genoma de Arabidopsis contm dois
homlogos Shugoshin , ao contrrio de levedura , mas semelhantes aos mamferos , mas
nenhum deles poderia ser caracterizados at agora , devido ausncia de mutantes nas bases
de dados pblicas .

RECOMBINAO MEITICA

O modelo de trabalho de recombinao meitica foi originalmente proposto em S. cerevisiae

por Szostak et al. (1983 ) , e foi modificado desde ento ( Allers e Lichten , 2001; Oh et al., 2007
) . De acordo com o modelo , a recombinao meitica iniciada pela formao programada de
ADN doublestrand quebras ( LAP ), que so depois ressecados para gerar 3 nicas molculas de
ADN de cadeia que conduzem a reparao do ADN para o cromossoma homlogo ao invadir
uma cadeia dupla homlogo intacta do cromossoma homloga .

Iniciao de recombinao meitica: Formao de DSB: A iniciao da recombinao meitica

pela formao de DSB de ADN programadas conservado entre todos os eucariotas, como
mostrado pela conservao da protena-chave no processo: Spo11 (Keeney, 2001). As plantas
tm vrios homlogos putativos Spo11, dois dos quais (AtSPO11-1 e AtSPO11-2) so
necessrios para a iniciao da recombinao meitica (grlon et ai, 2001;.. Stacey et ai, 2006).
Cada mutante simples ou Atspo11-1 Atspo11-2 mostra um fentipo tpico asynaptic (sem
sinapse, nenhum ou muito poucos bivalentes) associada com uma diminuio dramtica na
recombinao meitica. Alm disso, eles suprimir defeitos de reparao de ADN quando
cruzado com uma vasta variedade de mutantes de meiose, demonstrando que ambos os
homlogos Spo11 so absolutamente necessrios para a formao de DSB em Arabidopsis. A
falta de redundncia funcional entre estes dois genes sugere que a formao ORL catalisada
por um heterodmero Spo11 em plantas e no como um homodmero Pensa-se que ocorrem em
outros eucariotas.

Em S. cerevisiae , Spo11 requer nove outras protenas para catalisar a formao de DSB
( Keeney , 2001) . S quatro destes so conservadas ( ao nvel da sequncia ) em plantas
( RAD50 , MRE11 , Nbs1 , Ski8 ) , mas nenhum deles tenha conservado funo neste passo de
recombinao ( Tabela 1 ) ( Jolivet et ai , 2006; . Waterworth et ai . , 2007) . No entanto , o
rastreio mutante meitico para a frente tem levado identificao de AtPRD1 , que necessrio
para a formao de DSB meitica em Arabidopsis e interage com AtSPO11-1 num ensaio de dois
hbridos de levedura , proporcionando a primeira evidncia para a existncia de uma DSB de
formao de complexo em maior eucariontes ( De Muyt et al., 2007 ) . Os outros atores neste
complexo ainda precisam ser identificados. De acordo com o fentipo dos mutantes de ORL defeituosos descritos acima , o gene de SDS , que codifica uma protena ciclina do tipo
especfico da meiose ( Azumi et al . , 2002) podem pertencer a esta classe ( Tabela 1 ) .

Passos iniciais de reparao DSB: A maioria das protenas de recombinao envolvidas no

reparo DSB parecem ser conservados entre os reinos. As anlises funcionais destes genes em
plantas revelaram que isto verdade para as plantas, bem como, ainda que algumas
especificidades foram revelados.

Durante a diviso celular meitica em S. cerevisiae, LAP so produzidos meiticas e, em

seguida, processada pelo complexo MRX (consistindo de Mre11, Rad50, e Nbs1 / XRS2) que
tambm necessria em S. cerevisiae para a formao de LAP meiticos (Borde, 2007 ). As

funes de ambos MRE11 RAD50 e foram examinados em Arabidopsis, e mostraram que o

complexo MRX necessria para o processamento de DSB em plantas, mas no para a sua
formao (Bleuyard et ai, 2004;. Puizina et al., 2004). processamento de DNA de LAP gera
caudas singlestranded, que so carregados com protenas de troca de fita de DNA e pensado
para ser envolvido em pesquisas de homologia de ativos (Shinohara e Shinohara, 2004). As
funes de vrias protenas envolvidas neste processo foram analisadas em Arabidopsis. Rad51
e DMC1 so ambos homlogos RecA mas desempenham papis nicos e diferentes durante
levedura reparao meitica DSB. Ambas as protenas foram identificadas em A. thaliana, e
caracterizao dos mutantes correspondentes revelou grandes diferenas na funo que
desempenham. Atrad51 mutantes no conseguem reparar DSB meiticos (. Li et ai, 2004)
enquanto que LAP em mutantes Atdmc1 so reparadas, presumivelmente, utilizando o
cromatdeos irmos como um modelo (. Couteau et ai, 1999; Siaud et al., 2004). Isto sugere que
AtRAD51 inicia pesquisas de homologia independentemente do alvo, enquanto At- DMC1
favorece reparao inter-homlogo. O rompimento dos dois homlogos RAD51 presentes nos
resultados de milho em defeitos mais leves que as observadas em Arabidopsis, sugerindo a
possibilidade de redundncia da sua funo de outras protenas relacionadas com RecA (Li et
al., 2007). Alm AtRAD51 e AtDMC1, dois paralogues RAD51, AtRAD51C e AtXRCC3, esto
envolvidas em meiose reparao de DSB. Analisa fenotpica dos mutantes Atrad51c e Atxrcc3 e
ensaios de dois hbridos sugerem que estas protenas cooperar com AtRAD51 neste passo em
recombinao meitica (Osa kabe et ai, 2002;.. Kerzendorfer et ai, 2006). Vrias protenas so
pensados para ajudar DMC1 / RAD51 na invaso vertente: homlogos do produto BRCA2 gene
de suscetibilidade ao cncer de mama e do complexo Mnd1 / Hop2 foram recentemente
identificadas como jogadores-chave na recombinao meitica em Arabidopsis, em cooperao
com as recombinases (Schommer et al ., 2003; Siaud et ai, 2004;.. Dray et ai, 2006;.
Kerzendorfer et ai, 2006;. Vignard et ai, 2007). Alm disso, o gene PHS1 milho, que parece ser
especfico da planta, pensa-se estar envolvido no recrutamento de mquinas a cadeia invaso
(Pawlowski et al., 2004).

As etapas finais de recombinao meitica:. H fortes evidncias para a existncia de pelo

menos dois produtos genticos diferentes decorrentes de reparao de DSB (CO e NCO) em
plantas como em outros eucariotas (Francis et l, 2007; revistos em Mezard et al. , 2007). Existe
muito pouca informao disponvel at data sobre os mecanismos pelos quais NCO so
gerados, excepto para o possvel envolvimento de uma via dependente de recozimento strandsntese (Paques e Haber, 1999). Os possveis interligaes entre essas vias e a identificao da
fase em que os diferentes caminhos divergem ainda so muito hipottico. No que diz respeito
COs, duas classes diferentes de cos so distinguidos: Classe I COs so sensveis a interferncia
(quando a ocorrncia de um CO interfere com a ocorrncia de uma outra (Muller, 1916)),
enquanto a classe II so aleatrios COs LY distribudo. A relao de COs interferentes para COS
no interferentes difere dependendo das espcies em que foi estudado. Nos dois extremos so
C. elegans que s tem que interferem COs e S. pombe com apenas COs no interferentes. Em S.
cerevisiae, formao de Classe I CO depende das protenas ZMM (ZIP1, Zip2, Zip3, Zip4, Msh4,
Msh5 e Mer3) e, em menor extenso no MLH1 e Mlh3. COs classe II exigem as protenas Mus81
e Mms4 (Lynn et al., 2007).

A existncia de duas vias CO em plantas foi primeiramente sugerida por Copenhaver et ai. (2002) e agora
suportada pela recente caracterizao de Arabidopsis MUS81 e homlogos ZMM (Tabela 1). homlogos
putativos de Eme1, Zip2 e Zip3 continuam a ser identificado no entanto.

O rompimento da Arabidopsis ZMM no parecem alterar eventos prfase meitica primeiros

acordo com marcadores de recombinao cedo quanto RAD51 ou DMC1, e para synapsis que
quase no afetado. No entanto, sempre que provoca uma diminuio drstica da formao de
CO (excepto no caso de Atmlh1, porque o papel deste gene na meiose no foi investigada (Dion
et ai., 2007)). O efeito mximo sobre a formao de CO nunca foi superior a 85% do nvel do
tipo selvagem, sugerindo que pelo menos 15% de Arabidopsis COs so independentes da via
ZMM.

O genoma de Arabidopsis contm dois genes MUS81 putativos, uma delas foi mostrado para ser
envolvido na reparao do DNA somtico (Hartung et al, 2006;. Berchowitz et al., 2007), e,
provavelmente, tambm contribui para 9% de cos (Berchowitz et ai ., 2007). No entanto, tal
como observado em levedura (de los Santos et ai, 2003;.. Argueso et al, 2004), COS
permanecem quando ambas as vias de interferncia e no interferentes so simultaneamente
interrompido em Arabidopsis, sugerindo a (Berchowitz et al., 2007) possvel existncia de um
terceiro mecanismo para a formao de CO. A segunda MUS81 homlogo putativo pensado
para ser um pseudogene (Hartung et al, 2006;.. Berchowitz et ai, 2007).

O filamento transversal de um elemento central do complexo sinaptonmico codificado em

Arabidopsis por dois genes parcialmente redundantes ZYP1a e ZYP1b. ARNi mediado
esgotamento da protena de Arabidopsis ZYP1 induz uma reduo na fertilidade correlacionada
com uma diminuio de 20% na formao de CO, e um nvel elevado de associaes no
homlogas e formao multivalente (Higgins et al., 2005). Estes achados sugerem que o
filamento transversal Arabidopsis desempenha um papel mais importante na preveno de
recombinao no homloga que na categoria I CO maturao. Com base no fentipo mutante
ZMM em Arabidopsis, descrito acima, vrios genes meiticas outra planta tambm pode
pertencer a esta classe funcional. PTD, por exemplo, codifica uma protena que partilha um
domnio do terminal C, com as protenas de reparao do ADN ERCC1 / RAD10 e XPF / Rad1 e
conservada entre as plantas, e quando interrompido induz um fentipo semelhante ao AtMER3
s, com uma reduo de 70% nas formao de CO (Wijeratne et al., 2006). Outro exemplo
MPA1, que codifica para uma metaloprotease da famlia M1 (metalopeptidase puromycinesensvel), e necessria para 90% de COs, enquanto dispensvel para a sinapse normal geral
(Sanchez- Moran et al., 2004). Embora o envolvimento precisa destas protenas na via CO
maturao deve ser confirmado, estes podem fornecer pistas interessantes para ajudar a
identificar novos componentes da Classe I CO processo de maturao e compreender as
especificidades das instalaes no que diz respeito a outros eucariotos.

O complexo sinaptonmico Uma caracterstica importan da primeira prfase meitica observada

na grande maioria dos organismos o conjunto transitria-se do sinaptonmico complexo (SC)
entre cromossomos homlogos. SC montagem se inicia com a formao de um nico eixo de
protena (elemento axial, AE) ao longo de cada par de cromatdeos irmos. Em seguida,
enquanto o reconhecimento e recombinao homloga ocorra, as EAs de cromossomas
homlogos (chamado ento o elemento lateral, LE) esto intimamente ligados entre si, num
processo chamado de sinapse, atravs da polimerizao de um filamento transversal (TF). Muito
poucos componentes de o CF ter sido descrito em plantas, excepto para a protena ZYP1, que
provavelmente representa o componente principal do TF (Higgins et al., 2005). Em relao
protenas no AE, at data apenas protenas axiais associada tm sido descritos at agora:
ASY1, apresentando semelhanas com o Hop1 levedura (.. Caryl et al, 2000; Armstrong et al,
2002) e os coesinas REC8 e SCC3 (CAI et ai, 2003;.. Chelysheva et ai, 2005).

A forma como o SC madura forma realmente ainda desconhecido, mas em S. cerevisiae, a

sinapse depende de um complexo de protenas chamado o SIC (sinapse para Iniciao
complexo), a partir do qual se alonga filamentos transversais. At agora Zip2, Zip3 e Zip4 so
os principais componentes conhecidos da SIC, mas os outros ZMMs (Msh4, Msh5 e Mer3)
tambm desempenham um papel importante nesta etapa da sinapse (Zickler, 2006). O fato de
que todos os componentes SIC so necessrias para Classe I COs, e que o nmero de SIC
modificado quando o nvel de COs varia, levou ideia de que, pelo menos em S. cerevisiae,
synapsis produto da Classe I CO locais . A situao muito provavelmente diferentes em
eucariotas superiores e, nomeadamente, em plantas. Em primeiro lugar, as plantas tm
inmeros sites TF polimerizao, muito mais do que cos (Zickler e Kleckner, 1999). Em segundo
lugar, de Arabidopsis mutantes ZMM apresentam defeitos synapsis discretas e se qualquer
(Mercier et ai, 2003;.. Higgins et ai, 2004;. Chen et ai, 2005;. Jackson et ai, 2006;. Chelysheva et
ai, 2007). A caracterizao recente das AtZIP4, o nico componente SIC conservada (ao nvel da
sequncia de aminocidos) em plantas, mostrou que, neste organismo, os papis que
desempenha na Classe I CO a maturao, por um lado, e a iniciao sinapse, por outro lado, em
grande parte pode ser desacoplado (Chelysheva et al., 2007). Portanto, ou sinapse no depende
de classe I COs,
ou depende de Classe I CO precursores a montante da ZMM
protenas.

Claro que, em plantas, como na maioria dos organismos, recombinao e sinapse so dois
processos intimamente ligados. Estudos ultra-estruturais realizados em diferentes espcies de
plantas mostrou que synapsis rendimentos a partir de sites de interaes de elementos axiais
que carregam ndulos de recombinao precoces (Albini e Jones, 1987). Em Arabidopsis, esses
ndulos foram mal descritos por causa das dificuldades de preparao microscopia eletrnica
nesta espcie. No entanto, a associao de incio ZYP1 com cromossomas, como focos, depende
da formao de DSB (ausente em mutantes Atspo11-1 e Atprd1) (Higgins et ai, 2005;. De Muyt
et al., 2007). ZYP1 extenso subsequente foi mostrado que depender de eventos de
recombinao cedo porque foi impedido em um fundo DMC1 (Higgins et al., 2005) que mostra
que a sinapse normal dependente de intermedirios de recombinao cedo como em outras
espcies (com excepo de D. melanogaster e C. elegans notavelmente). No entanto, parece
haver uma grande diferena entre o nmero de primeiros ndulos (ou o nmero de RAD51 /
DMC1 focos) e o nmero de alongamentos elemento central primeiros contados em zigteno,
sugerindo que apenas uma minoria destes intermedirios de recombinao primeiros poderia
realmente agir como locais de iniciao da sinapse. A maneira como eles so seleccionados,
bem como os componentes especficos de complexos de iniciao sinapse em eucariotas
superiores em geral, e em particular as plantas permanecem por ser elucidados.

CONCLUSO
Um esforo internacional est em andamento para melhorar a nossa compreenso dos
mecanismos moleculares que controlam processos meiticos em uma grande variedade de
eucariotas . Nas plantas, estes estudos tm desfrutado de um boom nos ltimos dez anos.
Devido s telas genticos directos e reversos , um grande nmero de genes envolvidos na
meiose tm sido identificados . Parece agora que os estudos meiticos em plantas esto a
atingir uma nova etapa e que os resultados inovadores sobre os genes isolados iro contribuir
para decifrar mecanismos meiticos em eucariotas superiores .