Facultad de Salud

Escuela de Bacteriologa y Laboratorio Clnico

Programa Acadmico de Bacteriologa y Laboratorio Clnico
Gua de laboratorios de parsitos emergentes, re-emergentes y exticos
CONTENIDO
1. Laboratorio 1: Diagnstico de Protozoarios intestinales y tisulares.
2. Laboratorio 2: Diagnstico de Helmintos: Cstodos, Digneos y Nematodos.
3. Laboratorio 3: Laboratorio de tcnicas.
Normas bsicas de seguridad en el laboratorio
En las prcticas de laboratorio se trabajar con agentes causantes de enfermedades
en humanos; por lo tanto, es importante tener en cuenta la siguiente premisa: TODA
muestra fresca que se trabaje dentro del laboratorio est CONTAMINADA hasta
que no se demuestre lo contrario. Por ende, es necesario que para evitar
inconvenientes se trabaje siguiendo detalladamente las recomendaciones de
bioseguridad.
Antes de empezar a trabajar es indispensable reconocer, entender y aplicar las
principales normas de bioseguridad. A continuacin, se dan a conocer las normas que
deben cumplir los estudiantes.
Vestuario

Ingresar al laboratorio con la bata puesta y abotonada.

Utilizar siempre zapatos cerrados.
NO utilizar vestimenta corta ni joyas y mantener el cabello recogido.

Comportamiento
Utilizar los elementos de Bioseguridad pertinentes (Bata, guantes,
gafas, tapabocas, etc.)
NO fumar, comer, beber o mascar chicle
NO pipetear con la boca.
NO correr, gritar, empujarse o causar pnico.
NO arrojarse lquidos o reactivos.
Est PROHIBIDO el uso de telfonos celulares y computadores
porttiles dentro del laboratorio.
Utilizar los elementos del laboratorio nicamente dentro de este.
Conocer la ficha tcnica de un reactivo previa manipulacin.
NO utilizar los equipos del laboratorio sin conocer las instrucciones de
manejo.
En caso de embarazo NO manipular sustancias txicas
Informar inmediatamente de cualquier accidente o derrame ocurrido en
el laboratorio.
Bioseguridad

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Est PROHIBIDO manipular el microscopio con los guantes puestos.

NO es permitido manipular las manijas de las puertas con los guantes
puestos
NO tocarse el rostro, los ojos, la nariz, la boca, el cabello o la piel en
general con los guantes puestos.
Manejo de equipos y Materiales
Cada estudiante es responsable de su rea de trabajo, por lo tanto
debe realizar aseo de la misma ANTES y DESPUS de la prctica con
Etanol al 70%.
Cada estudiante es responsable de su microscopio, por lo tanto debe
revisarlo cuidadosamente ANTES de iniciar la prctica e informar si
presenta irregularidades.
Al terminar las prcticas, cada estudiante debe realizar aseo (etanol al
70%) de las siguientes partes del microscopio: platina, pinza de la
platina, tornillos macromtrico y micromtrico.
NO trabajar lejos de la mesa de laboratorio, no colocar objetos en el
borde
Verificar que el material de vidrio est en buenas condiciones en el
momento de recibirlo y devolver el material astillado o quebrado a la
persona responsable.
Depositar el material de vidrio roto en el lugar apropiado para tal fin.
Reportar al profesor el material/equipo: quebrado, extraviado o daado

Desechar los guantes usados NICAMENTE en la bolsa roja.

Cumplir con el programa de vacunacin establecido por la Universidad,
para el ingreso a los laboratorios.
Seguir los procedimientos establecidos por el profesor, para el manejo
de preparados y micropreparados.
Si sus manos han entrado en contacto con la muestra, debe lavarse las
manos con agua y jabn.
NO introducir ningn elemento a la boca.
Identificar la ubicacin de la ducha lavaojos, extintores y salidas de
emergencia.
En caso de emergencia, de aviso al profesor o persona encargada del
laboratorio y siga el protocolo para obtener ayuda.

Introduccin.
La parasitologa es el rea de la zoologa encargada del estudio de las relaciones
simbiticas parasitarias que se presentan entre organismos pertenecientes a
diferentes especies, en las cuales uno de los organismos, el parsito, usa al otro, el
hospedero (tambin llamado hospedador), como su sitio de residencia
(medioambiente), su fuente de alimento y en algunos casos puede incluso haber una
dependencia a nivel fisiolgico. De esta relacin, el parsito saca provecho para su
alimentacin, sobrevivencia y reproduccin, y el hospedero puede verse afectado en
mayor o menor grado, con lo cual pueden alterarse algunas de sus funciones
biolgicas (crecimiento, tasa reproductiva y/o supervivencia).

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Los humanos, al igual que muchos otros seres vivos de los reinos Animal y Vegetal,
hemos establecido relaciones de tipo parasitario con organismos pertenecientes a los
reinos Monera, Chromista, Protista, Hongo y Animal; incluso con los virus tenemos
relaciones de tipo parasitario, de hecho, estos constituyen uno de los ejemplos
extremos de este tipo de relacin. Sin embargo, el trmino Parsito se emplea, en un
espectro menos amplio, bsicamente para describir organismos eucariotas, uni o
multicelulares, de los reinos Chromista, Protista y Animal.
Los parsitos que afectan al hombre se cuentan entre las principales causas de morbimortalidad en los pases tropicales y sub-tropicales. En las ltimas dcadas del siglo
XX con la aparicin del VIH-SIDA, la masificacin de las transfusiones y los trasplantes
de rganos, el uso indiscriminado de antibiticos (antibacterianos, antifngicos y
antiparasitarios), as como los fenmenos conducentes al cambio climtico han
facilitado la aparicin de nuevas entidades (Emergentes), entre las que se cuentan las
Microsporidiosis y las infecciones por Cyclospora cayetanensis y Cryptosporidium sp.,
o el resurgimiento de enfermedades que se crea estaban controladas en algunas
reas (Re-emergentes), como la TBC y la Malaria, por citar algunos ejemplos. El
personal mdico y mdico-asistencial (enfermeras, bacterilogos, microbilogos
clnicos, laboratoristas) debe conocer cules son los posibles agentes parasitarios
presentes en diferentes circunstancias e individuos y estar en capacidad de realizar
una correcta toma y manipulacin de la muestra para obtener un resultado confiable, y
establecer qu tcnica se ha de emplear para ofrecer un diagnstico acertado de las
enfermedades parasitarias. De este modo se logra una atencin oportuna, eficiente y
adecuada del paciente.
1. Laboratorio 1: Diagnstico de Protozoarios intestinales y tisulares.

1.1. Protozoarios
El hombre es hospedero de varias especies de protozoarios, algunos actan como
comensales, otros lo hacen como parsitos obligados y unos cuantos ms son
parsitos oportunistas. Dependiendo de su localizacin, el tiempo de evolucin y el
cuadro clnico del paciente se debe decidir cual es la muestra ptima a utilizar para
diagnosticar todas aquellas infecciones, que se sospecha, son causadas por
protozoos. Igualmente, dependiendo de la muestra, hay diferentes tipos de pruebas
que el laboratorio debe aplicar para determinar la presencia del patgeno, bien sea de
manera directa o indirecta. Sin embargo, en la mayora de los casos el diagnstico de
las infecciones por protozoos tiene como base la determinacin de la presencia del
agente y su correcta identificacin con base en sus caractersticas morfolgicas, por lo
tanto, una gran parte del diagnstico recae en el examen directo, con o sin
coloraciones especiales. En otros casos, como en las infecciones por Toxoplasma
gondii y Trypanosoma cruzi, son de gran utilidad las pruebas indirectas, aquellas que
miden indirectamente la presencia del parsito al establecer el nivel de respuesta
inmune del paciente ante la presencia del patgeno, bien sea determinando la
presencia de anticuerpos o la respuesta inmune celular.
Entre los protozoos que afectan al hombre encontramos algunos de localizacin
intestinal, bien en intestino delgado o grueso, mientras otros son hemticos o tisulares.
Entre estos ltimos, algunos se localizan en piel, otros en diferentes rganos y unos
ms pueden incluso ser multi-sistmicos. Entre los parsitos intestinales se
encuentran Cryptosporidium sp. y Giardia duodenalis, los cuales por su prevalencia,
generan alta morbilidad, principalmente en poblacin infantil y en edad escolar.

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Adems, Cryptosporidium y los Microsporidios estn asociados con diarreas crnicas

en pacientes con inmunocompromiso, incluidos VIH+. De los parsitos tisulares son de
gran importancia T. gondii y T. cruzi. El primero puede ocasionar cuadros clnicos
agudos o crnicos en fetos, recin nacidos y pacientes con diferentes tipos de
inmunosupresin, mientras el segundo generalmente se detecta en pacientes con
cuadros crnicos; en ambos casos se puede comprometer la vida del paciente o
generar alta morbi-mortalidad. Tambin son importantes Leishmania, por el efecto
desfigurante de sus lesiones en piel y mucosas, adems de la mortalidad infantil en los
cuadros viscerales, y Plasmodium por la posibilidad de malaria severa, malaria
complicada y mortalidad tanto de adultos como de nios.

1.2. Generalidades del diagnstico de las infecciones por protozoarios.

1.2.1. Protozoos intestinales: Las parasitosis intestinales son una de las
principales causas de morbilidad en poblacin infantil. Entre los protozoos ms
frecuentemente informados como causantes de infeccin intestinal en humanos
se encuentran Iodamoeba buetschlii, Endolimax nana y varias especies de
Entamoeba, en el grupo de las amibas; Giardia duodenalis, Chilomastix mesnili
y Trichomonas hominis entre los flagelados; Balantidium coli como el nico
ciliado y Blastocystis sp. como el nico Chromista. Entre las coccidias
intestinales se encuentran Cyclospora cayetanensis, Cystoisospora (Sin.
Isospora) belli, Sarcocystis bovihominis, S. suihominis y varias especies de
Cryptosporidium.
Las amibas, los flagelados, B. coli, C. belli y Blastocystis se diagnostican usualmente
por examen microscpico de muestras de materia fecal en directo con solucin salina
y coloracin temporal con lugol (Figura 1) y concentracin o enriquecimiento por
sedimentacin o flotacin. En el caso de las coccidias intestinales se emplean tcnicas
de coloracin cido alcohol resistente como Ziehl-Neelsen y Kinyoun, o la coloracin
de Safranina (Figura 2). Sin embargo, el examen morfolgico no puede en ocasiones
diferenciar las especies involucradas (especialmente en los gneros Entamoeba sp, y
Cryptosporidium sp.), por lo cual se requieren tcnicas moleculares. La definicin de la
especie es importante para poder establecer la fuente de infeccin y las medidas de
control.

Figura 1. Para el diagnstico por examen coprolgico es necesario realizar el montaje de dos
soluciones homogenizadas de la muestra de materia fecal, una con solucin salina y la otra
con lugol. Al realizar este procedimiento debe verificarse que se pueda leer un texto impreso
a travs de la preparacin. Si queda muy gruesa ser imposible discernir entre artefactos y
formas parasitarias. Si queda muy delgada es posible que no haya suficiente muestra y los
parsitos estn ausentes en la preparacin.
Imagen tomada de: http://www.cdc.gov/dpdx/diagnosticProcedures/stool/microexam.html

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Figura 2. Para el diagnstico de las coccidias intestinales se recomiendan las coloraciones

AAR (Ziehl-Neelsen y Kinyoun) (derecha) y de Safranina (izquierda).
Imagen tomada de: http://www.cdc.gov/dpdx/cryptosporidiosis/index.html

1.2.2. Cultivo y aislamiento: En algunos casos se recomienda la realizacin

de cultivos tanto para protozoos intestinales como tisulares, pero no estn al
acceso de todos los pacientes pues usualmente se realizan en laboratorios
especializados. Estos cultivos pueden ser xnicos, axnicos o en cultivos
celulares (para los intracelulares obligados) y permiten obtener un mayor
nmero de organismos para realizar con ellos la identificacin morfolgica, as
como otras pruebas diagnsticas o de genotipificacin molecular. Tambin se
puede hacer cultivo in vivo o inoculacin en animales de laboratorio, pero
igualmente esto solo se logra en laboratorios de referencia y a unos costos no
asequibles para muchos de los pacientes.
1.2.3. Control de calidad: Los laboratorios requieren de controles internos y
externos para asegurar la calidad del diagnstico. Para ello se remiten
muestras conocidas por la entidad encargada de realizar los controles externos
pero desconocidas para el personal del laboratorio. Estas muestras deben ser
evaluadas y los resultados entregados a la entidad acreditadora. Cuando se
realiza este tipo de procedimientos se deben tambin implementar las tcnicas
de coloracin de extendidos de materia fecal, bien sea con Hematoxilina
Frrica o Colorante Tricrmico de Wheatley, consideradas estndares de oro
del diagnstico coprolgico.
1.3. Morfologa de protozoarios intestinales que infectan humanos.
(Las caractersticas detalladas que identifican los diferentes protozoarios intestinales,
hemticos y tisulares deben ser estudiadas en los textos complementarios sugeridos
en clase). Cabe recordar que los protozoarios intestinales presentan los estadios de
trofozoito, quiste, ooquiste y varias morfologas en Blastocystis. En el caso de las
amibas, el trofozoito tiene una forma irregular, cuando la materia fecal est fresca se
puede apreciar la movilidad de sus seudpodos y se debe identificar la morfologa de

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sus ncleos, pues estos varan entre los diferentes gneros y especies. Los quistes de
las amibas varan en su forma, su tamao, su nmero y la apariencia de los ncleos.
Las coccidias intestinales: se diferencian por la morfologa y tamao de sus
ooquistes, as como por diferencias en la captacin del colorante cuando se realiza la
coloracin AAR. De las coccidias Cystoisospora belli es la nica que puede ser
diagnosticada solo con base en sus caractersticas morfolgicas en examen directo.
Cryptosporidium y Cyclospora cayetanensis deben ser diagnosticadas por medio de
coloraciones especiales, las cuales no se incluyen en el examen coprolgico de rutina,
por lo cual el mdico tratante debe hacer la solicitud expresa de la coloracin en la
orden que se enva al laboratorio. Se debe tener en cuenta que la mayora de expertos
recomienda la realizacin de al menos dos exmenes, usualmente tres, en das no
consecutivos para lograr una mayor sensibilidad en el examen coprolgico.
Los flagelados intestinales: presentan trofozoito y quiste, con excepcin del gnero
Trichomonas, en el cual solo se encuentra el estadio de trofozoito. Los flagelados en
general tienen forma piriforme en estadio de trofozoito y cuando estn viables se
aprecia el movimiento de los flagelos. Los quistes varan en tamao y forma y son
fcilmente distinguibles unos de otros.
El Chromista: Blastocystis es bastante pleomrfico tanto en tamao (vara entre 5 m
y 40 m), como en sus mltiples formas (vacuolar o de cuerpo central, granular,
multivacuolar, ameboide y quiste, entre otras), de las cuales la ms fcilmente
reconocible es la forma de cuerpo central, en la cual hay una gran vacuola en el centro
del trofozoito que deja un muy delgado halo de citoplasma en el cual se distribuyen los
ncleos.

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1.3.1. Morfologa microscpica de Coccidias intestinales

PROTOZOOS INTESTINALES: Coccidias

Nombre: Cryptosporidium sp
Estadio?:
Infectivo?: Si _____ No _____
Tcnica:

Nombre: Cyclospora cayetanensis

Estadio?:
Infectivo?: Si _____ No _____
Tcnica:

Nombre: Cyclospora cayetanensis

Estadio?:
Infectivo?: Si _____ No _____
Tcnica:

Nombre: Cystoisospora belli

Estadio?:
Infectivo?: Si _____ No _____
Tcnica:

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1.3.2. Morfologa microscpica de Flagelados y Cromistas

PROTOZOOS INTESTINALES: Flagelados y Cromistas

Nombre: Giardia duodenalis

Estadio?:
Infectivo?: Si _____ No _____
Tcnica:

Nombre: Giardia duodenalis

Estadio?:
Infectivo?: Si _____ No _____
Tcnica:

Nombre: Blastocystis sp
Estadio?:
Infectivo?: Si _____ No _____
Tcnica:

Nombre: Blastocystis sp
Estadio?:
Infectivo?: Si _____ No _____
Tcnica:

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1.3.3. Morfologa microscpica de Sarcodinos e Incertae sedis

PROTOZOOS INTESTINALES: Sarcodinos e Incertae sedis

Nombre:
Entamoeba
histolytica/E.
dispar/E. moshkovskii
Estadio?:
Infectivo?: Si _____ No _____
Tcnica:

Nombre:
Entamoeba
histolytica/E.
dispar/E. moshkovskii
Estadio?:
Infectivo?: Si _____ No _____
Tcnica:

Nombre: Urbanorum sp
Estadio?:
Infectivo?: Si _____ No _____
Tcnica:

1.4. Protozoos tisulares y hemticos: Estos protozoos requieren

procedimientos de toma de muestras ms invasivos, tcnicas ms complejas y,
en la mayora de los casos, el diagnstico recae ms en las tcnicas indirectas
(determinacin de anticuerpos). En los casos en que se pueden emplear
tcnicas directas se requiere el apoyo de coloraciones para lograr un buen
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diagnstico. Para los protozoos hemticos tambin se recurre a las

coloraciones para facilitar la identificacin especfica con base en las
caractersticas morfolgicas de los diferentes estadios.
Los flagelados tisulares: presentan las formas de amastigote, epimastigote,
promastigote y tripomastigote. Hay diferencias entre los gneros Leishmania y
Trypanosoma en cuanto a cules de estas formas estn presentes en su ciclo de vida.
Para la realizacin del examen directo se recurre frecuentemente a la coloracin de
Giemsa, con la cual se resaltan las caractersticas morfolgicas de los organismos.
Esta misma coloracin se emplea para los parsitos sanguneos y para colorear
taquizoitos de Toxoplasma gondii obtenidos por aislamiento en cultivo o en ratn.
Las leishmaniasis son enfermedades zoonticas producidas por parsitos del gnero
Leishmania y transmitidas por insectos vectores hematfagos. Las leishmaniasis
comprenden un amplio espectro que incluye infecciones subclnicas (asintomticas o
inaparentes), localizadas (lesiones en piel) y diseminadas (cutnea, mucosa o
visceral). Afecta a ms de 88 pases en el mundo y se estima que anualmente 1.5
2.0 millones entre nios y adultos desarrollan la enfermedad. Aproximadamente 350
millones de personas estn en riesgo de adquirir la enfermedad y ms de 12 millones
estn actualmente infectadas. Las manifestaciones clnicas de la enfermedad estn
asociadas con la especie del parsito y, por consiguiente, con el rea endmica.
Existen ms de doce especies diferentes de Leishmania que producen enfermedad en
humanos.
Leishmania es un parsito unicelular obligado que sobrevive intracelularmente en
clulas fagocticas (principalmente macrfagos) del hospedero. Es trasmitido a
animales mamferos y al hombre (hospederos) a travs de la picadura de insectos
vectores infectados (principalmente Phlebotomus en el Viejo Mundo y Lutzomyia en el
Nuevo Mundo). Las formas promastigotes del parsito (flageladas), presentes en el
insecto, son inoculadas en la piel durante la picadura. En el hospedero infectan los
macrfagos de la piel y se transforman en amastigote (aflagelado). Los amastigotes se
reproducen dentro del macrfago. En el sitio de inoculacin puede desarrollarse una
lesin y/o, dependiendo de la especie, el parsito puede migrar a otros tejidos del
cuerpo (mucosa o vsceras).
El diagnstico presuntivo de la leishmaniasis se basa en la presentacin clnica de la
enfermedad, aspectos epidemiolgicos relacionados con la transmisin del parsito, y
en algunos casos, en el resultado de la prueba intradrmica de leishmanina o
Montenegro. Sin embargo, el diagnstico definitivo solo se logra a travs de la
visualizacin del agente etiolgico de la enfermedad. El examen directo permite hacer
el diagnstico inmediato visualizando la forma intracelular, amastigote, en un
extendido de una muestra tomada de una lesin representativa. El aislamiento o
recuperacin de formas repetitivas flageladas, promastigotes, se realiza inoculando
muestras clnicas en medios de cultivo selectivos para tripanosomas.
El cultivo es un mtodo especfico y constituye el estndar de oro de los mtodos de
diagnstico para leishmaniasis y es utilizado en segunda instancia para el diagnstico,
despus del examen directo. Es til no solo en el diagnstico clnico sino tambin en
investigacin, permitiendo la posterior identificacin de la especie utilizando
electroforesis de isoenzimas, anticuerpos monoclonales o tcnicas moleculares, y la
determinacin in vitro de la sensibilidad del parsito a medicamentos. La evaluacin de
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una biopsia histopatolgica de lesin representativa tambin permite la deteccin del

parsito en tejidos, pero es menos sensible que los dos mtodos antes descritos. La
deteccin y aislamiento de los parsitos tambin puede realizarse mediante la
inoculacin de un aspirado de la lesin en el hmster dorado, pero esta prueba es de
ms difcil realizacin, por lo cual es poco utilizada.
Existen herramientas diagnsticas indirectas, basadas en respuesta inmune, tales
como pruebas serolgicas y pruebas intradrmicas, que contribuyen a definir el
diagnstico clnico y el tratamiento, pero que no confirman la presencia del parsito;
son de gran utilidad para el desarrollo de estudios epidemiolgicos.
La malaria o paludismo: es una enfermedad transmitida a travs de la picadura de
mosquitos Anopheles infectados, es considerada un problema de salud pblica en
varios pases del mundo, con elevados casos de mortalidad. Entre los sntomas que se
presentan se destacan fiebre, cefalea y escalofro, que suelen aparecer 10 a 15 das
despus de la picadura del vector. Si no se recibe tratamiento oportuno, la malaria
puede poner en riesgo la vida del paciente en corto tiempo, especialmente por malaria
complicada y malaria cerebral. Entre las medidas de control de la enfermedad se
encuentran el diagnstico y tratamiento rpido y eficaz, el uso de toldillos impregnados
de insecticida y la fumigacin con insecticidas de accin residual que buscan controlar
los vectores.
La malaria es causada por parsitos del gnero Plasmodium. En el humano es
producida principalmente por cuatro especies: P. falciparum, P. vivax, P. malariae y P.
ovale. Recientemente se ha descrito la infeccin por P. knowlesi, una especie que
infecta monos, y ocasionalmente se informan otras especies zoonticas. El parsito es
transmitido de humano a humano a travs de la picadura del mosquito, de madre a
hijo congnitamente, por transplante de rganos o va transfusin sangunea.
El ciclo de vida del parsito comprende dos fases, la asexual que se desarrolla en el
humano y la sexual en el invertebrado. La infeccin inicia cuando el mosquito infectado
inyecta esporozoitos a travs de la saliva al torrente sanguneo del humano, estos
alcanzan el hgado, donde desarrollan su ciclo extraeritroctico. Los merozoitos
liberados de los esquizontes tisulares alcanzan el torrente sanguneo y dan inicio al
ciclo eritroctico. Dado que no se cuenta con una vacuna que prevenga la infeccin,
gran parte de las medidas de control de la enfermedad estn dirigidas al diagnstico
oportuno y al tratamiento adecuado. El diagnstico es crucial para decidir el
tratamiento antimalrico, para el cual no slo se tiene en cuenta la especie causal sino
tambin el grado de resistencia de los parsitos en la zona.

1.4.1. Diagnstico microscpico de los protozoos tisulares y hemticos

El diagnstico oportuno de malaria es crtico dado que la infeccin se puede complicar
a medida que los parsitos se van multiplicando en el tiempo. La identificacin
microscpica es el principal mtodo diagnstico para malaria y permite establecer la
especie de Plasmodium y el recuento parasitario, criterios importantes para el
tratamiento y control del paciente. Cada una de las especies que infectan al humano
tiene caractersticas morfolgicas que permiten el diagnstico diferencial.

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Las pruebas de diagnstico rpido para malaria (PDRs), surgen como una alternativa
a la gota gruesa, en situaciones en que el uso de la microscopa es limitado o poco
factible. Las PDRs diagnostican malaria al reconocer antgenos especficos del
parsito presentes en la sangre del paciente y algunas de ellas permiten la
diferenciacin entre especies de manera clara (pruebas de cuatro bandas), pero tienen
limitaciones para establecer la carga parasitaria y siguen siendo positivas varias
semanas post-tratamiento, lo que dificulta el seguimiento al paciente. Por ello, se
recomienda usarlas simultneamente con la GG.
Para el diagnstico de la leishmaniasis se emplea como estrategia inicial el examen
microscpico de frotis realizados con material tomado del borde activo de la lesin,
posterior a su tincin con Giemsa. Esta tcnica tiene como inconvenientes que puede
ser poco sensible, requiere buen entrenamiento para su anlisis y no permite
identificar la especie de Leishmania. Existen tcnicas moleculares y pruebas
inmunocromatogrficas, con mayor sensibilidad.

1.4.1.1. La gota gruesa y el extendido

El examen de Gota Gruesa (GG) sigue siendo considerado el estndar de oro y la
mejor tcnica para el diagnstico de la malaria en las zonas endmicas (Figuras 3 y 4).
Las tcnicas moleculares presentan una mayor sensibilidad y especificidad, pero el
acceso a ellas es limitado en las zonas rurales, no solo por su no disponibilidad sino
tambin por sus costos. La GG se considera una tcnica de concentracin, en la cual
se puede apreciar una cantidad de sangre representativa para establecer la presencia
de formas de los parsitos causantes de malaria (Plasmodium sp), tripanosomiasis
americana y africana (Trypanosoma sp), filariasis linfticas y apatgenas (Wuchereria
bancrofti, Brugia sp y Mansonella), babesiosis (Babesia sp) y, excepcionalmente,
leishmaniasis visceral (Leishmania sp) en pacientes inmunocomprometidos. Esta
tcnica se realiza generalmente en conjunto con un Extendido en capa fina (Ext.), este
permite ver la morfologa tpica de las diferentes especies de Plasmodium y relacin
entre el parsito y la clula hospedera, con lo cual es muy til para la determinacin de
la especie; mientras que la GG es til para la determinacin especfica y permite
detectar pacientes con bajas cargas parasitarias. Cuando no es posible establecer la
especie en la GG, bien porque el paciente ha tomado medicamentos que alteran la
morfologa del parsito o por la sospecha de malarias mixtas, se recurre al Ext. para
definir la especie.

Figura 3: Para elaborar la gota gruesa debe tenerse en cuenta que es la lmina portaobjetos
la que se lleva hacia la gota de sangre para ser tomada del dedo.
(Tomado de:http://emergenmedhb.blogspot.com.co/2015/06/malaria-o-paludismoenfermedad-de-los.html)

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Figura 4: En algunas reas del mundo se hacen la GG y el Ext. en la misma lmina. En nuestro
medio lo usual es emplear lminas independientes, realizando dos GG en una misma lmina.
(Tomado de: https://practicasdehematologiaycitologia.wordpress.com/2014/11/12/practicano10-preparacion-de-gota-gruesa/)

1.4.1.2. Evaluacin de los frotis para el diagntico de la leishmaniasis.

Se debe realizar la toma de la muestra a partir del borde de la lesin ms reciente
(Figura 5) que le haya aparecido al paciente. Es deseable que esta lesin est libre de
coinfeccin por bacterias. Se deben realizar tres frotis con el material recuperado en
una misma lmina portaobjetos (Figura 6) y al menos tres lminas por paciente. El
material puede ser obtenido con un bistur o una jeringa de insulina (Figuras 5 y 7).
Este material tambin puede ser usado para cultivo, inoculacin de animales o
pruebas moleculares

Figura 5. Foto de una lesin de leishmaniasis cutnea. Para el examen directo, la incisin se realiza
con la hoja de bistur en el borde de la lesin

Figura 6. Frotis extendidos de forma circular en la lmina portaobjeto

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Figura 7. Toma de aspirado a partir de la lesin con jeringa de tuberculina

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1.4.2. Morfologa microscpica de protozoos tisulares y hemticos

PROTOZOOS TISULARES

Nombre: Microsporidios
Estadio?:
Infectivo?: Si _____ No _____
Tcnica:

Nombre: Leishmania sp
Estadio?:
Infectivo?: Si _____ No _____
Tcnica:

Nombre: Trichomonas sp
Estadio?:
Infectivo?: Si _____ No _____
Tcnica:

Nombre: Toxoplasma gondii

Estadio?:
Infectivo?: Si _____ No _____
Tcnica:

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PROTOZOOS HEMTICOS

Nombre: Babesia sp
Estadio?:
Infectivo?: Si _____ No _____
Tcnica:

Nombre: Trypanosoma cruzi

Estadio?:
Infectivo?: Si _____ No _____
Tcnica:

Nombre: Plasmodium falciparum

Estadio?:
Infectivo?: Si _____ No _____
Tcnica:

Nombre: Plasmodium falciparum

Estadio?:
Infectivo?: Si _____ No _____
Tcnica:

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Nombre: Plasmodium vivax

Estadio?:
Infectivo?: Si _____ No _____
Tcnica:

Nombre: Plasmodium vivax

Estadio?:
Infectivo?: Si _____ No _____
Tcnica:

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Helmintos:
El hombre es hospedero de varias especies de helmintos, tanto gusanos redondos
(Nematodos) como planos (Platelmintos). Entre estos ltimos pueden infectar al
hombre Cestodos y Digeneos. En muchos casos el hombre acta como hospedero
definitivo y en otros lo hace como hospedero intermediario. Algunos de estos gusanos
son de transmisin fecal oral, otros pueden penetrar activamente por piel, unos ms
son adquiridos a travs de alimentos contaminados, y tambin los hay de transmisin
vectorial. El hombre puede actuar como nico hospedero para algunos de ellos
mientras otros son zoonticos. Aunque las infecciones con nmeros pequeos de
estos organismos generalmente cursan asintomticas, cuando su nmero aumenta
pueden causar cuadros clnicos con patologas variables. En otros casos, el estadio
larvario es el que causa la patologa, no el adulto, y la respuesta inmune puede
participar en la patologa.
Algunos de estos helmintos presentan ciclos de vida sencillos, mientras que otros
tienen ciclos de vida complejos, con migracin visceral antes de llegar a su
localizacin definitiva o usando varios hospederos intermediarios antes de alcanzar al
humano. Al igual que con los protozoarios, la localizacin de los helmintos en el
cuerpo del individuo infectado y el cuadro clnico que este presenta son determinantes
para decidir cual es la muestra ptima a utilizar para diagnosticar las infecciones
helmnticas. Algunas veces el diagnstico se puede hacer por mtodos directos pero
en otros casos se requiere, no solo de mtodos indirectos, si que tambin es necesario
hacer una correlacin de los resultados de laboratorio con la historia epidemiolgica y
clnica del paciente y de los resultados de otros exmenes complementarios como
pueden ser ciertas pruebas imaginolgicas. Hay diferentes tipos de pruebas que el
laboratorio debe aplicar para determinar la presencia del patgeno, bien sea de
manera directa o indirecta; sin embargo, como con la mayora de los protozoos, el
diagnstico de estas infecciones tiene como base la determinacin de la presencia del
agente y su correcta identificacin con base en sus caractersticas morfolgicas, por lo
tanto una gran parte del diagnstico es directo.
Entre los helmintos que afectan al hombre encontramos algunos de localizacin
intestinal, bien en intestino delgado o grueso, mientras otros son hemticos o tisulares.
Entre estos ltimos algunos se localizan en piel, otros en diferentes rganos y unos
ms pueden incluso ser multi-sistmicos. Entre los parsitos intestinales se
encuentran Ascaris lumbricoides y Trichuris trichiura, los cuales por su prevalencia,
generan alta morbilidad, principalmente en poblacin infantil y en edad escolar. De otro
lado, Strongyloides stercoralis est asociado a cuadros complicados en pacientes
transplantados, inmunosuprimidos y HTLV-1+. De los parsitos tisulares son de gran
importancia Onchocerca volvulus que se localiza en tejido subcutneo y otras filarias
de localizacin linftica, el primero ocasiona cuadros de ceguera en un gran nmero
de personas, especialmente en frica, mientras las otras ocasionan un cuadro
incapacitante conocido como elefantiasis.
Diagnstico de las infecciones helmnticas
Las parasitosis intestinales por helmintos se cuentan entre las principales causas
de morbilidad en poblacin infantil. Entre los nematodos ms frecuentemente
informados como causantes de infeccin intestinal en humanos se encuentran
Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura, Enterobious vermicularis y Strongyloides
stercoralis, este ltimo, dependiendo de las condiciones del hospedero puede
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ocasionar cuadros de diseminacin e hiperinfeccin que llegan a ser fatales. Otros

nematodos son de localizacin en tejido subcutneo (Onchocerca volvulus) o
linftica (Wuchereria bancrofti, Brugia sp) asocindose el primero a cuadros de
dermatitis y ceguera y los segundos a elefantiasis. De las tenias o cestodos los
ms frecuentes son Hymenolepis nana, H. diminuta, Taenia saginata, T. solium y
T. asiatica. Fasciola hepatica, Paragonimus sp, Clonorchis sinensis, Schistosoma
mansoni, S. haematobium y S. japonicum son de los digneos ms
frecuentemente asociados a infeccin en humanos, siendo de localizacin ms
tisular que luminal en intestino. Para otros helmintos, el hombre sirve de hospedero
intermediario y los cuadros clnicos pueden ser incapacitantes e incluso fatales,
entre estos parsitos se encuentran varias especies de Echinococcus, de las
cuales en Colombia se encuentran E. vogeli y E. oligarthrus, y el estadio larvario
de T. solium, que ocasiona cuadros de cisticercosis con diferentes localizaciones,
siendo de gran importancia su ubicacin en sistema nervioso central
(neurocisticercosis).

Las infecciones por helmintos, al igual que las infecciones por protozoarios,
dependen de la localizacin del parsito para definir el tipo y nmero de muestras
y el tipo de prueba que se pueda emplear. Para aquellos de localizacin intestinal,
la muestra ideal es materia fecal en examen seriado. El nmero de muestras vara
entre 3 (Ascaris, Trichuris) y 10 (Strongyloides,Taenia) dependiendo del parsito
involucrado. Para las infecciones por oxiuros (Enterobius vermicularis) y Taenia sp
se puede tomar una impresin de la regin perianal con una cinta pegante
transparente (Mtodo de Graham).
Para los helmintos de localizacin pulmonar (Paragonimus) as como para los que
hacen migracin por este rgano en su ciclo de vida (uncinarias, Ascaris y
Strongyloides) puede ser til tomar muestras seriadas de esputo. Tanto
Paragonimus como los de localizacin en vas hepticas y biliares (Fasciola y
Clonorchis) tambin pueden diagnosticarse por medio de examen coprolgico. En
algunos casos pueden ser usadas muestras como aspirados duodenales, de bilis o
lavados broncoalveolares para el diagnstico de estos helmintos.
Los helmintos de localizacin linftica (filarias como Wuchereria y Brugia) se
diagnostican por medio de muestras de sangre en las cuales se deben buscar las
microfilarias. Para Onchocerca volvulus la muestra de eleccin es una bopsia de
piel tomada en las zonas correspondientes a los huevos planos (escpula y cresta
ilaca o cerca de los ndulos subcutneos). Otras helmintiasis son ms difciles de
diagnosticar y se requiere emplear tcnicas indirectas, que permitan detectar
anticuerpos en los pacientes infectados. Sin embargo, en algunos casos es
necesario tener en cuenta no solo los resultados de los exmenes de laboratorio si
no tambin los resultados de pruebas imaginolgicas (RMN y TAC), los
antecedentes epidemiolgicos y los signos y sntomas que presenta el paciente
para poder realizar un diagnstico certero. Entre estas infecciones se encuentran
la neurocisticercosis, la equinococosis y la fascioliasis. Entre las pruebas para
deteccin de anticuerpos se encuentran ELISA, IB o WB (inmunoblot o western
blot), dot-ELISA, hemoaglutinacin, entre otras. En algunos casos se emplean
antgenos crudos para las pruebas indirectas pero se presentan con frecuencia
problemas de reaccin cruzada y falsos positivos con otras infecciones; para
minimizar estas reacciones cruzadas se han estandarizado tcnicas que emplean

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antgenos purificados en columnas de sefarosa con lectina de lenteja (cisticercosis)

o antgenos recombinantes (Toxocara, Onchocerca, Echinococcus), lo cual ha
asegurado una mayor especificidad de las pruebas diagnsticas.
Es importante recordar que las infecciones por nematodos (Ascaris, Trichuris y
uncinarias) deben informarse con recuento de los huevos, bien sea por
preparacin o por gramo de materia fecal y que la tcnica recomendada por la
OMS como la de eleccin para cuantificar los huevos de helmintos es la de KatoKatz. En el caso de las infecciones por cestodos o digeneos no se hace recuento,
excepto para los casos de esquistosomiasis.

Morfologa de helmintos que infectan humanos.

Las caractersticas detalladas que identifican los diferentes helmintos intestinales y
tisulares deben ser estudiadas en los textos complementarios sugeridos en clase.
Cabe recordar que los helmintos intestinales pueden diagnosticarse por medio de
la indentificacin de huevos, larvas o adultos que se encuentran presentes en la
materia fecal, sangre, esputo u otras muestras. En el caso de los helmintos
intestinales, el diagnstico se basa principalmente en la identificacin de los
huevos, cuya morfologa vara segn la especie involucrada.
Los huevos de Ascaris poseen una estructura caracterizada por la presencia de
unas proyecciones globosas llamadas mamelones en su cubierta externa (algunos
huevos pueden carecer de ella y se les llama decorticados) y una sola masa
central o blastmero, a partir de la cual se formar la larva. En el caso de Trichuris,
los huevos tienen forma de barril y en los extremos poseen abultamientos
traslcidos que se conocen como tapones polares. Los huevos de uncinarias
(Ancylostoma y Necator) son indiferenciables entre los dos gneros y presentan
una cubierta externa delgada y la masa de clulas sale con su proceso de divisin
ya adelantado, por lo que se aprecian varios blastmeros. Los huevos de oxiuros
tienen forma de letra D o grano de arroz y se encuentran con la larva ya casi
totalmente formada en su interior.
Las filarias linfticas se diagnostican por la presencia de microfilarias en sangre
perifrica y la diferenciacin de especie se basa en la morfologa que incluye
presencia o no de vaina y la distribucin de los ncleos a lo largo del cuerpo. El
diagnstico de Toxocara canis se basa en la presencia de anticuerpos, bien en
suero o humores vtreo y acuoso, y en otros exmenes complementarios. Las
infecciones por Strongyloides se detectan por coprolgico seriado de al menos 7
muestras, pero son ms sensibles las tcnicas de embudo de Baerman y cultivo en
agar. En algunos casos de diseminacin se puede detectar en esputo o en
biopsias de tejido. En esta infeccin se pueden apreciar tanto las larvas filariformes
como las rabditiformes y se debe hacer el diferencial con larvas de uncinarias.
Ocasionalmente se pueden apreciar hembras parasticas y huevos en materia
fecal.
La infeccin por Taenia, Hymenolepis o Dipylidium se diagnostica por presencia de
huevos en materia fecal, pero para Taenia tambin es til la cinta de Graham ya
que los progltidos al salir activamente por el ano dejan un rastro de huevos en la
regin perianal. Los huevos de Taenia se caracterizan por la presencia de una
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cubierta gruesa radiada (embrioforo) que en su interior contiene la oncosfera, con

sus tpicos ganchos. Los huevos de Hymenolepis nana se caracterizan por
presentar una forma ligeramente ovalada, una pared delgada y filamentos polares
mientras que los de H. diminuta son algo ms grandes y redondos y carecen de
filamentos polares. Los huevos de Dipylidium se aprecian en paquetes conocidos
como cpsulas ovgeras, las cuales continenen entre 12 y 26 huevos. En todos los
casos se aprecia la oncosfera en el interior de los huevos.
Los huevos de Fasciola son ovalados, operculados y de color mbar, mientras que
los de Paragonimus son mucho ms pequeos, cafs, operculados y presentan un
engrosamiento de su pared en el extremo contrario al oprculo.
Los gusanos adultos de Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura y Enterobius
vermicularis presentan dimorfismo sexual, siendo las hembras ms grandes que
los machos. Ascaris se caracteriza por su gran tamao (hembras hasta 32 cm y
machos hasta 27 cm), su color entre crema y rosado y los machos por su extremo
posterior curvo y la presencia de espculas. Los adultos de Trichuris presentan el
extremo anterior mucho ms delgado que el posterior y los machos un gran
curvamiento de su extremo caudal. Los adultos de Enterobius presentan aletas
ceflicas y el macho su extremo caudal curvo y espculas. En el caso de los
adultos de uncinarias hay que identificar la presencia de placas cortantes (Necator)
o dientes (Ancylostoma) en la cavidad oral, tanto en machos como hembras; los
machos adems presentan la bursa copulatoria o copulatriz en el extremo caudal,
la cual es caracterstica de cada especia, y espculas. Los adultos de Toxocara se
encuentran en el intestino de perros y gatos. Sus huevos al salir al ambiente se
encuentran no embrionados y cuando embrionan se vuelven infectivos tanto para
su hospedero definitivo como para muchos otros vertebrados que sirven de
hospederos paratnicos. Los gusanos se caracterizan por la presencia de aletas
ceflicas y labios en la regin anterior y dimorfismo sexual, siendo las hembras
ms grandes que los machos (15 cm vs 8 cm).
Los progltidos de Taenia en estado grvido presentan un tero con ramificaciones
conspicuas, cuyo nmero vara entre T. solium (hasta 12 ramificaciones) y T.
saginata (ms de 12 ramificaciones). Los adultos de Fasciola presentan las
ventosas oral y ventral (llamada tambin acetbulo), un intestino en forma de
ciegos ramificados, espinas en el cono ceflico y los rganos reproductores
masculinos y femeninos.
2. Morfologa microscpica de protozoos tisulares y hemticos
HELMINTOS INTESTINALES Y TISULARES

Nombre: Paragonimus mexicanus

Nombre: Schistosoma mansoni

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Estadio?:
Infectivo?: Si _____ No _____
Tcnica:

Estadio?:
Infectivo?: Si _____ No _____
Tcnica:

Nombre: Clonorchis sinensis

Estadio?:
Infectivo?: Si _____ No _____
Tcnica:

Nombre: Echinococcus sp
Estadio?:
Infectivo?: Si _____ No _____
Tcnica:

Nombre: Toxocara canis

Estadio?:
Infectivo?: Si _____ No _____
Tcnica:

Nombre: Strongyloides stercoralis

Estadio?:
Infectivo?: Si _____ No _____
Tcnica:

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