GUIA DE PRCTICA N 1

UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA DE MEDICINA
MICROBIOLOGIA I
GUA PARA PRCTICA DE LABORATORIO N 1
1.

TEMA: Introduccin, materiales y seguridad en el laboratorio de microbiologa,

conceptos de Esterilizacin y Desinfeccin, y tipo de muestras bacteriolgicas

2.

OBJETIVOS:

2.1

OBJETIVO GENERAL

2.2

Conocer y aplicar las reglas bsicas de higiene y seguridad para los laboratorios
del rea microbiolgica.
Aprender las tcnicas correctas para una buena extraccin, manejo y trasporte
de muestras.

OBJETIVOS ESPECFICOS

Identificar los distintos instrumentos utilizados en laboratorios de

Microbiologa.
Conocer las reas de trabajo de un laboratorio Microbiolgico.
Conocer las normas de seguridad que deben establecerse en el laboratorio para
evitar la transmisin de infecciones.
Conocer el uso correcto y el material de que est elaborado cada instrumento.
Determinar los diferentes mtodos de esterilizacin.
Conocer los mtodos de obtencin de las muestras ms caracterizadas como
(orina, heces, exudados).
Conocern como se trasportan las muestras, y los mtodos que disponen para
ello.

MICROBIOLOGIA I PRCTICA
Pgina

GUIA DE PRCTICA N 1

3.

FUNDAMENTO TERICO

Un laboratorio de Microbiologa es un lugar habilitado para manejar y estudiar

microorganismos.
El trabajo debe realizarse de acuerdo con los estndares tcnicos y de seguridad propios de
un laboratorio de Microbiologa Clnica.
Es importante recordar que la finalidad es determinar los microorganismos presentes en la
muestra por lo que es preciso extremar las precauciones para evitar contaminaciones que
den lugar a resultados errneos.
Todas las muestras deben ser manejadas con precaucin por su potencial patogenicidad.
Para deshacerse del material contaminado se deben utilizar recipientes adecuados que
deben ser esterilizados posteriormente. Nunca se puede tirar nada contaminado por el
fregadero o al cubo de la basura comn sin haber sido esterilizado previamente.
En el laboratorio deben existir unas recomendaciones generales de limpieza y en caso de
vertidos: Procedimientos de limpieza de superficies externas mediante papel humedecido
con solucin desinfectante (alcohol 70%, desinfectante fenlico diluido, etc.). Aclarar con
agua los restos de desinfectante. En caso de usar soluciones de hipoclorito en zonas
metlicas, limpiar posteriomente para evitar el efecto corrosivo. En caso de derramamientos
de material peligroso o formacin de aerosoles: evitar inspiraciones de esos aerosoles,
esperar 30 minutos hasta que las partculas se hayan depositado y limpiar con mascarilla,
guantes y otros tiles protectores. En caso de vertido de materiales, cubrir la superficie con
desinfectante y posteriormente cubrir con papel humedecido con desinfectante. Dejar
durante 15 minutos y limpiar. En caso necesario aclarar con agua. En caso de
derramamientos menores limpiar el material vertido mediante papel humedecido y
posteriormente aclarar, cuando sea necesario.
Debe existir un procedimiento de control de calidad en el laboratorio de Microbiologa
Clnica que implique la monitorizacin de los medios e instrumentos, con el fin de asegurar
la adecuada realizacin de los aislamientos, identificacin y caracterizacin de los
patgenos y la realizacin precisa de las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos
como referencia teraputica. El sistema de la calidad deber contemplar la existencia de
registros de formacin de personal.
Es imprescindible la existencia de un procedimiento sobre medidas de proteccin personal
en el manejo de equipos y aparatos. El laboratorio deber estar bajo la direccin y
responsabilidad de un facultativo con la especialidad correspondiente, legalmente
capacitado para realizar aqullas determinaciones clnicas que el laboratorio tenga
autorizadas. El personal tcnico y sanitario del laboratorio deber disponer la titulacin
adecuada para las funciones que desarrolla de conformidad con la legislacin vigente.

MICROBIOLOGIA I PRCTICA
Pgina

GUIA DE PRCTICA N 1

EQUIPOS Y MATERIALES DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

A) Material de uso corriente
Material de vidrio o plstico que se usa para contener o medir: aqu se incluyen tubos
de ensayo, vasos de precipitado, matraces, embudos, probetas, pipetas, dosificadores, etc.,
todo ello de distintos tamaos y capacidades. Tambin incluimos las placas de Petri, los
portaobjetos y cubreobjetos, cmaras de recuento, cestillos y cubetas para efectuar
tinciones, jarras para incubar en anaerobiosis, etc.
Material de siembra: constituido principalmente por asas y filamentos de platino, asas de
Drigalski y pipetas estriles. Material para toma de muestras e inoculaciones: escobillones
estriles, tubos y frascos estriles, jeringas y agujas, trcares, cnulas, catteres y material
de diseccin
B) Aparatos productores de calor: Se utilizan con diversas finalidades:
Para esterilizacin: autoclave (calor hmedo), horno Pasteur (calor seco) y mechero Bunsen (esterilizacin por calentamiento directo).
Para incubacin: estufas, baos de agua, de aceite o parafina y de arena.
C) Aparatos productores de fro:
Refrigeradores: son indispensables para conservar los medios de cultivo, productos biolgicos y patolgicos, as como mantener la supervivencia de algunos mo. Su temperatura oscila alrededor de los 4C.
Congeladores: alcanzan temperaturas entre -20 y -70C y son indispensables para con
servar determinados productos biolgicos (sueros, clulas, mo).
D) Material ptico
Microscopios: en su distintas versiones (campo claro, campo oscuro, contraste de fases,
fluorescencia).
Lupa estereoscpica: permite observar colonias bajo distintas condiciones de iluminacin.
E) Otro tipo de material y aparatos:

Vitrinas y armarios
Mechero Bunsen
Estufa de incubacin
Frigorfico o cmaras refrigeradas
Congeladores

MICROBIOLOGIA I PRCTICA
Pgina

GUIA DE PRCTICA N 1

Microscopio ptico
Centrfuga
Cmaras de seguridad biolgica
Desionizador de agua
Contador de colonias
Balanzas
Baos termostticos
Agitador/ mezclador

Material fungible

Placas de Petri
Tubos con medio lquido
Pipetas de vidrio, de plstico y pipeteadores
Pipetas automticas (micropipetas) y puntas de pipeta:
Portas y cubres
Vasos de precipitados y matraces
Cucharas y esptulas

REA DE LIMPIEZA DE MATERIAL Y ELIMINACIN DE RESIDUOS

Zona donde se procede a la esterilizacin mediante autoclave del material utilizado. El
material desechable se elimina y con el material reciclave se procede a la eliminacin de
residuos y lavado. De esta manera el material queda dispuesto para ser utilizado.
rea de esterilizacin
Procedimiento por el que se consigue la muerte de todos los organismos vivos y formas de
resistencia en un objeto o producto tratado.
Esterilizacin: Diferentes tcnicas, aparatos y formas de trabajo para lograr la
esterilizacin del material y para deshechar el material una vez contaminado.
AUTOCLAVE
Es el equipo ms utilizado. Es un procedimiento de esterilizacin mediante calor hmedo.
Se realiza en al autoclave durante 15 20 min, segn el volumen, a 115C 121C, segn
la naturaleza del material que se desee esterilizar.
Autoclavado: es un procedimiento en el que se emplea vapor a presin (a 1 atmsfera).
Como tiene gran poder de penetracin la temperatura y el tiempo utilizado son menores que
los que se emplean con el horno Pasteur (121 C, 15-20 minutos).
MICROBIOLOGIA I PRCTICA
Pgina

GUIA DE PRCTICA N 1

Se utiliza para esterilizar: Medios de cultivo, ropa, material de plstico resistente al calor
hmedo, objetos de metal que no se alteren con la humedad y sobre todo material de vidrio.

Horno de Pasteur: emplea altas temperaturas (160-180 C) durante un tiempo prolongado

(1.5 a 3 horas). Debido a su poca capacidad de penetracin se usa para esterilizar vidrio y
metales. Acta principalmente desnaturalizando las protenas y secundariamente oxidando
los compuestos celulares.

rea de preparacin de medios

Almacn de reactivos
rea de seguridad microbiolgica
Debe ser una zona diferenciada y aislada para la manipulacin de microorganismos
susceptibles de formar aerosoles potencialmente infecciosos.
MICROBIOLOGIA I PRCTICA
Pgina

GUIA DE PRCTICA N 1

La toma de muestra es el conjunto de procedimientos destinados a obtener una parte

representativa cualitativamente y cuantitativamente a partir de un todo, en nuestro caso, el
paciente, es el medio ambiente.
Consideraciones generales para la toma de muestra:
Debemos saber QUE vamos a tomar como muestra (esputo, sangre, etc.)
PORQUE vamos a tomar la muestra (con fines de diagnstico, investigacin)
COMO vamos a tomar la muestra (puncin, raspado, etc.)
DONDE vamos a tomar la muestra (piel, faringe, etc.)
CUANDO vamos a tomar la muestra (ayuno, etc.)
CLASIFICACION DE LA TOMA DE MUESTRAS:

Muestras superficiales
Muestras de cavidades
Muestras especiales.

MUESTRA SUPERFICIALES:

Aqu consignamos a las muestras de la piel, pelo, uas.

1. PIEL: Tenemos dos posibilidades de obtener la muestra, ya sea procediendo a alzar a los
grmenes con el asa bacteriologa, por simple raspado ligero o con la ayuda de bistur
proceder a raspar algo energticamente los bordes de la lesin, de manera no solo
obtendremos los microorganismos sino tambin las capas superficiales de la piel, esto es
provechoso en el caso de ciertas determinaciones.
Finalmente puede ser que en determinados casos se pretenden ndulos los cuales estn por
debajo de la piel, siendo ms palpable que visibles; en este caso procedemos tambin a
raspar con el bistur el lugar de la lesin llegando hasta el ndulo de manera que una vez
obtenida la pulpa, esta puede ser procesada y as llegar a observar al microbio.
2. PELO: Tambin hay dos posibilidades, la primera cuando los grmenes se hallan
localizados en el folculo piloso, en este caso ser suficiente proceder a raspar la regin con
MICROBIOLOGIA I PRCTICA
Pgina

GUIA DE PRCTICA N 1

el asa bacterol6gca previo de la zona con agua destilada, tambin se podr arrancar el pelo
a fin de aislar al germen a partir del folculo piloso.
MUESTRA DE CAVIDADES:
Consignamos las muestras de mucosas, conducto auditivo externo, esputo, orina, heces
fecales.
1. MUCOSAS.- El instrumento que sirve de como denominador en la obtencin de estas
muestras es el hisopo, es decir un aplicada de madera que posee es uno de sus extremos un
engrosamiento de algodn y que obviamente debe ser esterilizado. Si vamos describiendo
las mucosas de arriba hacia abajo, encontramos lo siguiente:
2. MUCOSAS CONJUNTIVAL.- Usamos un hiposo estril luego ubicamos la conjuntiva
infectada o aquella que presente mayor exudado si la muestra a nivel del ngulo interno del
ojo afectado. El hisopado debe ser cuidadoso y suave para no producir mayor traumatismo.
3. MUCOSA NASAL.- De igual forma utilizamos un hisopo si la lesin es visible a simple
vista procedemos entonces a obtener la muestra, si la lesin es mucho ms interna.
Entonces ser necesario que un especialista la obtenga con instrumental que nosotros ya no
poseemos. Hay otras oportunidades en que es preciso utilizar un cincel delgado y largo que
podemos fabricar a partir de un sujetador de papel (clip) el cual es convertido en alambre
rectilneo y posteriormente aplastando uno de los extremos obtendremos un pequeo cincel,
con el cual y una vez esterilizado procedemos a raspar lesiones sospechosas.
4. MUCOSA ORAL.- En esta cavidad es sencillo tomar cualquier nuestra pues tenemos
gran visibilidad All podemos observar donde se localizan una lesin y posteriormente
utilizando el hisopo llevar a cabo la toma de muestra. Por otra parte para fines de
investigacin podemos escoger cualquier segmento de la mucosa oral puesto, que esta
posee una flora variada de microorganismos.
5. MUCOSA GENITAL FEMENINA.- Aun debemos considerar dos posibilidades ms y
son aquellas que se presentan en el caso de una mujer con himen intacto y otra que haya
tenido contacto sexual. En la mujer con himen intacto tan solo debemos esperar que las
secreciones se viabilicen al exterior para as ser obtenidas.
En la mujer desflorada utilizaremos el especulo es decir dos valvas que una vez
introducidas en el canal vaginal pueden ser separadas a voluntad, brindndonos de esta
forma un campo de accin y observacin ideales luego procederemos a hisopar las regiones
escogidas, haciendo hincapi en las vecindades del orificio cervical externo, pues all se
acumularan las secreciones.
MUESTRAS ESPECIALES.-

MICROBIOLOGIA I PRCTICA
Pgina

GUIA DE PRCTICA N 1

1.

ESPUTO.- El esputo es la coleccin de secreciones patolgicas provenientes del rbol

traqueo-bronquial. La muestra podemos obtenerla a travs de diferentes tcnicas, entre las
cuales citaremos las ms importantes:
FORMA NATURAL DE ELIMINACIN DEL ESPUTO: Esta es la tcnica ms utilizada,
se aplica a pacientes que pueden entender y aplicar las instrucciones que se les d.
Entregamos al paciente un recipiente especial para esta muestra y le indicamos que al
despertar proceda a realizar un enjuague bucal con un antisptico, luego debe proceder a
expectorar directamente dentro de recipiente, llegando a acumular por lo menos tres
esputos (flemas).
Posteriormente se cierra hermticamente el envase y deber ser enviado a laboratorio
debidamente rotulado (nombre completo, edad y sexo) adems de la numeracin
correspondiente y fecha.
2. LAVADO GSTRICO.- Esta tcnica se prctica en pacientes que no van ha poder
realizar lo anterior, los nios (por qu degluten el esputo), ancianos, enfermos mentales
finalmente mujeres (por que tambin degluten el esputo.
3. LAVADO TRAQUEAL.- Esta tcnica consiste en instalar suero fisiolgico tibia hacia el
rbol traqueo- bronquial de manera que provoquemos el acceso de tos al despertar o excitar
ese reflejo, en esa circunstancia debemos estar bien protegidos con barbijo, gorro, mandil y
guantes.
4. FORMA POSTURAL.- Este mtodo tambin es til en pacientes que no pueden
eliminar en forma espontnea la muestra. Procedemos a colocar al paciente en decbito
ventral sobre una camilla (o cualquier superficial que cumpla la misma funcin) con una
almohada debajo de la regin abdominal finalmente la cabeza queda colgado en una de los
extremos la camilla al igual que los brazos lateralmente: de esta forma por simple accin de
la gravedad la secreciones se viabilizaran al exterior, directamente al recipiente.
RECOGIDA DE ORINA. - La toma de muestras se realizar en un frasco estril que no
deber abrirse antes de la recogida.
La recogida de orina puede realizarse de tres formas:
1. RECOGIDA DE LA PORCIN MEDIA DE LA MICCIN.- Es aconsejable que la orina
recogida sea de la primera hora de la maana. El paciente debe lavarse meticulosamente los
genitales externos con agua y jabn enjugndose finalmente con agua limpia. Iniciar la
miccin desprecindose la primera parte. A continuacin, y sin detener la miccin, debe
recogerse la segunda mitad de la misma en un frasco estril de unos 20, 35 m1 evitando
tocara el interior o borde de 1 frasco.
2. SONDAJE VESICAL 0 PUNCIN DE SONDA.- El sondaje vesical debe utilizrselo
menos posible yaque con lleva el riesgo de provocar una infeccin por introducir
MICROBIOLOGIA I PRCTICA
Pgina

GUIA DE PRCTICA N 1

microorganismos del exterior. Se efectuara en condiciones de rigurosa asepsia y por

personal cualificado.
El enfermo portadores de sonda permanente debe recogerse la muestra a travs de la sonda
y nunca directamente de la bolsa.
3. PUNCION SUPRAPVICA.- Esta tcnica permite extraer la orina directamente de la
vejiga mediante una jeringa con aguja asegurando una muestra libre de contaminaciones.
Este mtodo puede realizarse con muy poco riesgo en lactantes, nios y adultos con vejiga
llena.
Dado que la orina es un excelente medio de cultivo para la mayor parte de las bacterias, la
muestra debe refrigerarse inmediatamente despus de la extraccin.
Caractersticas del recipiente para recolectar orina.
a. La capacidad mnima es de 250 cc.
b. Debe poseer boca ancha.
c. Debe poseer sistema de rosca y tapa que asegure con este sistema.
d. Debe ser estril.
e. Debe ser construido de material susceptible de esterilizacin.
f. De preferencia ser transparente a fin de observar ciertas caractersticas macroscpicas.
g. Tiene que consignar el nombre, edad, sexo del paciente, adems de la fecha y el
correspondiente nmero de registro.
HECES FECALES.- Tenemos dos posibilidades: heces diarreicas y heces slidas.
1. HECES DIARREICAS.- En este caso obtenemos un volumen similar al de una cuchara
sopera lo que ms o menos viene a ser una cantidad de 10 cc. Estas muestras deben
procesarse dentro de un margen de tiempo prudencial pues al acidificarse muchos grmenes
patgenos se lisan.
2. HECES SLIDAS.- Se toma un volumen similar al de una pepa de durazno.
Caractersticas del recipiente para recolectar heces fecales.
a. La capacidad mnima es de 30 ml
b. Debe poseer sistema de rosca y tapa que asegure con este sistema, o en su defecto un
tapn que asegure hermticamente.
c. En lo posible debe ser estril, aunque se puede utilizar un envase bien lavado.
d. Podr ser construido de material susceptible de esterilizacin, (polipropileno,
policarbonato, vidrio)
e. No debe ser fabricado de cartn pues deshidrata la muestra. En ltimo caso se podr
utilizar recipientes de cartn parafinado.
MICROBIOLOGIA I PRCTICA
Pgina

GUIA DE PRCTICA N 1

f. Tiene que consignar el nombre, edad, sexo del paciente, adems de la fecha y el
correspondiente nmero de registro.

MUESTRAS ESPECFICAS
1. LQUIDO CEFALORRAQUDEO: Esta muestra se obtiene a partir de una puncin
lumbar que se practica entre el 3er. Y 4to. Espacio intervertebral lumbar.
Esta es una tcnica prctica operatoria y se la debe realizar con todos los cuidados
necesarios teniendo en cuenta las contraindicaciones.
La cantidad necesaria es de 3 - 5ml. y siempre se debe realizar un estudio microscpico
antes de entrar al estudio microbiolgico. La presin ms importante es de procesar el
lquido cefalorraqudeo dentro de un margen de tiempo mnimo desde la toma de muestra,
pues muchos grmenes se lisan transcurrido cierto tiempo; dndonos de esta manera un
resultado negativo.
2. MUESTRA CAPILAR: tcnicas.
Realizar la antisepsia del lugar elegido (lbulo de la oreja, pulpejo del dedo anular, planta
del pie en lactantes.
Funcionar con rapidez y firmeza de tal manera que ingrese toda la punta de la lanceta.
Descartar la primera gota.
Recoger la sangre que fluye libremente llenando las tres cuartas partes del capilar.
Presionar suavemente el lugar de puncin con un algodn empapado en alcohol.
La puncin cutnea o capilar se emplea para:
Frotis
Micro hematocrito
Grupo sanguneo
Recuento de glbulos blancos
Y otros.
4.

PROCEDIMIENTO
1.
2.
3.
4.
5.

Ingresaremos al laboratorio aplicando las normas de bioseguridad.

Socializacin sobre las normas de bioseguridad.
Reconocimiento de las reas del laboratorio de Microbiologa.
Identificacin de los materiales y equipos utilizados en el laboratorio.
Conocer la sealtica del laboratorio y de los reactivos a utilizar.

MICROBIOLOGIA I PRCTICA
Pgina

10

GUIA DE PRCTICA N 1

6.
7.

5.

La toma de muestras debe realizarse antes de iniciar el tratamiento con

antimicrobianos, ya que este interfiere en la observacin directa del germen,
as como en posterior aislamiento del mismo en los medios de cultivo.
Las muestras deben recoger es cantidades suficientes para permitir un
examen completo; deben colocarse en recipientes estriles y remitirse lo ms
pronto posible el laboratorio.

CUESTIONARIO
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.

11.
12.
13.
14.
6.

Dibuje 5 materiales principales utilizados en el laboratorio de microbiologa

e indique la funcin que tienen
Cules son los mecanismos de esterilizacin, explique cada fundamento?
Qu es un desinfectante, como es su mecanismo, escriba dos ejemplos?
Qu es un agente esterilizante, como es su mecanismo, indique dos
ejemplos?
Dibuje 10 sealticas utilizadas en el laboratorio microbiolgico.
Describa los niveles de seguridad biolgica?
Defina agente bactericida, y agente bacteriosttico, coloque dos ejemplos?
Qu caractersticas debe tener una muestra indique 6?
Por qu es importante refrigerar la muestra de orina inmediatamente
despus de la extraccin?
Cul de las siguientes muestras no deben guardarse en la nevera cuando se
requiere realizar un cultivo microbiolgico? Subraya la respuesta y
justifcala.
Esputo
Orina
Liquido cfalo raqudeo
Heces
Porque
Para qu estudio se emplea la puncin cutnea o capilar?
De qu espacio intervertebral se obtiene la muestra del Lquido Cfalo
Raqudeo y porque?
Indique como debe ser la seleccin de una muestra?
Indique cules son los mtodos de transporte de muestras convencionales?

BIBLIOGRAFA

FERNANDEZ,
Maria.
(2010).
Microbiologa
Clnica
Prctica.
Editorial: Universidad de Cadiz. Servicio de Publicaciones. Pag (123- 129).Espaa
Manual de Microbiologa Prctico de la Ctedra de Microbiologia.

MICROBIOLOGIA I PRCTICA
Pgina

11