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Protocolo de rotferos
CONTENIDO
INTRODUCCION .................................................................................................................... 3
CAPITULO I GENERALIDADES ........................................................................................... 5
1. MORFOLOGIA ................................................................................................................... 5
2. CICLO DE VIDA Y DESARROLLO .................................................................................... 6
3. ALIMENTO ......................................................................................................................... 7
4. VALOR NUTRICIONAL ...................................................................................................... 7
CAPITULO II CONDICIONES GENERALES DEL CULTIVO .............................................. 8
1. SALINIDAD ......................................................................................................................... 8
2. TEMPERATURA ................................................................................................................ 8
3. OXGENO DISUELTO ........................................................................................................ 8
4. pH ....................................................................................................................................... 8
5. PRESENCIA DE MICROBIOS ........................................................................................... 8
6. DENSIDAD DE SIEMBRA.................................................................................................. 9
CAPITULO III SISTEMAS DE CULTIVO ............................................................................ 10
1.PRODUCCION DE ROTIFEROS....................................................................................10
2. CONCENTRACION Y LAVADO DE ROTIFEROS.........................................................12
3. CONTEO DE ROTIFEROS .............................................................................................. 12
4. PROTOCOLO ................................................................................................................... 13
5. PROTOCOLO DE LIMPIEZA ........................................................................................... 14
6. RUTINA DIARIA. .............................................................................................................. 15
ANEXO: BITACORA DE REGISTRO .................................................................................. 16
BIBLIOGRAFA ..................................................................................................................... 17
Protocolo de rotferos
INTRODUCCION
La acuicultura es una actividad que incluye varias prcticas y una amplia gama
especies, sistemas y tcnicas de produccin. Puede definirse como el cultivo
organismos acuticos con tcnicas encaminadas a hacer ms eficiente su produccin.
acuicultura tiene una historia de 4.000 aos, pero ha sido desde hace 50 cuando se
convertido en una actividad socioeconmica relevante, dando empleo a ms de
millones de personas en el mundo.1
de
de
La
ha
12
La acuacultura tiene a nivel mundial un importante papel que jugar en los esfuerzos por
erradicar el hambre y la malnutricin, proveyendo alimentos ricos en protenas, aceites
esenciales, vitaminas y minerales. Adems, puede contribuir a reducir la pobreza
mejorando los ingresos econmicos, fomentando el comercio, ofreciendo oportunidades
de empleo y mejorando el uso de los recursos. La FAO considera que la acuacultura es
una actividad que contribuye a la utilizacin eficaz de los recursos naturales, a la
seguridad alimentaria y al desarrollo econmico, con un limitado y controlable impacto
sobre el medio ambiente.
La tasa de crecimiento mundial 1980-2010 de la acuacultura: 8.8% con tendencias hacia
la intensificacin de los sistemas de cultivo y el control de los aspectos nutricionales.
En la acuicultura, el alimento vivo es el grupo de organismos que componen el plancton
(fitoplancton y zooplancton), el cual constituye la unidad bsica de produccin del material
orgnico en los ecosistemas acuticos. La importancia del plancton en piscicultura marina
es mayor durante las fases de larvicultura y alevinaje, siendo su importancia
independiente de la estrategia alimenticia del pez durante su vida adulta. Por regla
general, despus de la absorcin del saco vitelino, el inicio de la alimentacin exgena de
la larva estar constituida de organismos planctnicos en las larvas altriciales, siendo
demostrada la esencialidad de organismos vivos como alimento inicial para larvas de
peces, ya que prcticamente todas las especies se alimentan de stos durante su fase
postlarval.
Entre las diversas especies que componen el zooplancton, los rotferos del gnero
Brachionus se han utilizado regularmente como alimento vivo para otros organismos.
Brachionus plicatilis se cultiva como primer alimento para larvas de peces marinos, ya que
tiene un tamao pequeo, natacin lenta, capacidad de mantenerse suspendido en la
columna de agua, puede ser cultivado en altas densidades, alto ndice reproductivo y
puede ser enriquecidos para mejorar su composicin proximal. Por estas razones, el
cultivo de B. plicatilis ha llegado a ser indispensable en la acuicultura (Fulks y Main,
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APROMAR,2012
Protocolo de rotferos
Protocolo de rotferos
CAPITULO I GENERALIDADES
1. MORFOLOGIA
Rotatoria (=Rotifera) pertenecen a los ms pequeos metazoarios. Ellos raramente
alcanzan 2 mm en la longitud del cuerpo. Los machos tienen un tamao reducido y son
menos desarrollados que las hembras; algunos miden tan solo 60 m. El cuerpo de todas
las especies consiste de un nmero constante de clulas, las diferentes especies de
Brachionus contienen aproximadamente 1000 clulas las que no deben considerarse
como identidades nicas sino como un rea de plasma. El crecimiento del animal es
asegurado por el aumento de plasma y no por la divisin de la clula.
La epidermis contiene una capa densamente empaquetada de protenas similar a la
queratina denominada la loriga. El cuerpo del rotfero se diferencia en tres partes distintas
que consisten de la cabeza, el tronco y pie. La cabeza lleva el rgano rotatorio o corona
que es reconocido fcilmente por sus cilios anulares (Figura 1). La corona retrctil
asegura la locomocin y un movimiento del agua en forma de remolino que facilita la
captacin de pequeas partculas alimentarias (principalmente algas y detrito).
El tronco contiene el tracto digestivo, consistiendo de un mastax que muele las partculas
ingeridas, el esfago, el estmago con glndulas gstricas y el intestino. El sistema
excretorio consiste de un par de protonefridios con clulas terminales (cyrtocitos), el
conducto y la vescula. Los protonefridios expulsa lquido excretorio y juegan un papel
importante en la regulacin osmtica. El rgano genital es impar (Monogononta) o
pareado en los rdenes Seisonidea y Bdelloidea. La apertura del conjunto externo de la
vescula y el oviducto se llama cloaca.
El pie es una estructura anillada retrctil sin segmentacin que termina en uno o cuatro
dedos que posee glndulas pedales que segregan una sustancia adhesiva en rotferos
reptantes y ssiles.
Tipos de cepas (L y S)
Existen dos diferentes morfotipos de rotferos: el tipo pequeo (S) y el tipo grande (L).
Ellos difieren en la longitud de la loriga: 130-340 m (promedio 239 m) para el tipo L y
100-210 m (promedio 160 m) para el tipo S. Existen tambin diferencias en el peso,
forma de las espinas occipitales y de las temperaturas ptimas de crecimiento (el tipo L
tiene un rango de temperatura ms amplio, mientras el tipo S posee mayor resistencia a
temperaturas ms alta).
Protocolo de rotferos
Protocolo de rotferos
3. ALIMENTO
Los rotferos del gnero Brachionus como filtrador no selectivo, puede ingerir partculas de
alimento de 20-30 m. En la naturaleza consumen microalgas, bacterias, levaduras y
protozoarios. Los animales cultivados se alimentan mayormente con algas unicelulares y/
o levaduras. Nannochloropsis es una de las microalgas utilizadas usualmente como
alimento del rotfero. Tiene un tamao de 2-3 m. Sin embargo tambin Tetraselmis e
Isochrysis son de alta calidad nutricional. La levadura de pan ha sido tambin empleada
para el cultivo de rotferos, pero el valor nutritivo resultante de los rotferos es muy pobre.
Desde hace algunos aos, existen dietas artificiales y de enriquecimiento en el mercado,
las cuales son nutricionalmente completas y pueden reemplazar totalmente el uso de
algas y/ o levadura.
4. VALOR NUTRICIONAL
La composicin bioqumica y valor nutricional es determinada por la dieta. Watanabe y
colaboradores en 1983 llevaron a cabo un estudio donde observaron que los rotferos
alimentados con Nannochloropsis contenan en peso seco un 75% de protenas, 22% de
lpidos y 3% de cenizas mientras los alimentaos con levaduras un 71%, 17% y 12%
respectivamente. Tambin observaron que a diferencia de los rotferos alimentados con
Nannochloropsis, los alimentados con levaduras, eran pobres en cidos grasos altamente
insaturados de la serie n-3 esenciales en la larvicultura de peces marinos.
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1. SALINIDAD
El rango de tolerancia de los rotferos (plicatilis) a la salinidad oscila entre 1 y 97g/l siendo
ptimo entre 4 y 35g/l (Dhert 1996).
En el laboratorio se est manejando dos cepas de rotferos:
1. Brachionus plicatilis tipo L aclimatado a una salinidad de 16 ppm
2. Brachionus rotundiformis tipo S aclimatado a una salinidad de 35 ppm.
2. TEMPERATURA
El rango ptimo de temperatura vara de acuerdo a factores especficos e intraespecficos
como especie o cepa (Fielder et al., 2000). Los rotferos del morfotipo L crecen mejor
cuando la temperatura del agua est entre 18 y 25C mientras que los del morfotipo S
crecen mejor entre 28 y 35C (Dhert, 1996).
3. OXGENO DISUELTO
Est reportado que los rotferos pueden sobrevivir en aguas con niveles de oxgeno tan
bajos como 2 ppm (Dhert 1996)
4. pH
En el medio natural los rotferos pueden vivir a niveles de pH inferiores a 6.6 El rango
ptimo de produccin ha sido establecido entre 6.6 y 8.0 (Hoff y Snell 1999)
Amonio (NH3). En el agua los niveles de amonio no ionizado (NH 3) estn en equilibrio con
el ionizado (NH4+) en una relacin NH3/NH4+ que es afectada por la temperatura y el pH
del agua. Altos niveles de NH3 son txicos para los rotferos por lo que en cultivos debe
vigilarse que estos no superen 1 ppm de concentracin (Dhert, 1996)
5. PRESENCIA DE MICROBIOS
Los cultivos de rotferos son adecuados para la proliferacin de microorganismos que
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pueden afectar el cultivo o representar un riesgo sanitario a las larvas por alimentar.
Algunos microorganismos (Pseudomonas) producen vitamina B12, necesaria para la
reproduccin de los rotferos; otros son oportunistas que deterioran la calidad del agua y
aparecen indicando exceso de materia orgnica (los ciliados Euplotes y Uronema),
tambin existen patgenos como las bacterias Vibro spp y los hongos Aspergillus que
producen una disminucin drstica de la poblacin de rotferos (Dhert, 1996).
6. DENSIDAD DE SIEMBRA
La densidad a inocular depende tanto del tipo de alimento como del sistema de cultivo.
Dhert (1996) recomienda densidades entre 50 y 100 rotferos/ml cuando se usa
Nannochloropsis a 6 x106 cels/ml en sistemas de cultivo por lotes. La densidad de siembra
permite clasificar los cultivos como extensivos cuando sta es de 50 a 100 rotferos/ml y el
volumen de los tanques de 100 a 150 m3, e intensivos cuando la densidad vara de 500 a
1000 rotferos/ml y el volumen de los tanques de 1 a 2 m 3 (Fukusho 1989).
Protocolo de rotferos
Su clasificacin depende del tipo de cosecha, manejo del agua y alimentos. Hoff y Snell
(1999) y Dhert (1996) se refieren a la clasificacin segn el tipo de cosecha como sistema
de recoleccin completa (batch), que tiene dos variantes: Densidad constante (BDC),
donde el volumen del tanque incrementa a lo largo del cultivo sin afectar la densidad, y la
recoleccin completa con volumen constante (BVC). Otros sistemas son el semi-continuo,
cuando a partir del tercer da se hacen cosechas parciales reponindose el volumen del
tanque; y el continuo cuando se cosecha un volumen especifico y se renueva el medio
manteniendo la poblacin en fase logartmica mediante un control ya sea quimosttico
(nivel estable de nutrientes) o turbidosttico (densidad constante de rotferos).
1. PRODUCCION DE ROTIFEROS
1.1.
Para este propsito se inoculan volmenes pequeos (por ejemplo tubos de ensayo de
20ml) con 20 rotferos (densidad de no ms de 1 rotferos por ml). Alimentados con
Microalgas (Tetraselmis o Nannochloropsis), estos cultivos llegan a densidades de 10
rots/ml dentro de un periodo de 2 a 3 semanas. Posteriormente se filtra la suspensin del
cultivo utilizando un filtro con malla de 50 60 micras, se enjuagan los rotferos y se
transfieren a recipientes de 250 ml en agua marina (filtrada y esterilizada), alimentando
con 250ml de Microalgas.
Cuando se estima una densidad de 10 rots/ml, se cosechan y se utiliza la cantidad
requerida de rotferos previamente limpios para re-inocular tubos de ensaye y el ciclo
empieza nuevamente.
Para el mantenimiento del stock de rotferos se debe utilizar agua de mar filtrada y
esterilizada. Se alimenta los cultivos solamente una vez (al inicio). Para el mantenimiento
de la cepa, los recipientes deben ser almacenados en un rea con clima controlado donde
se observa muy estrictamente las medidas para que el riesgo de contaminacin sea
mnimo.
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1.2.
FRASCOS DE 3 LITROS
1. Lavar y desinfectar el recipiente con cloro (1ml/litro), enjuagar y por ltimo, aplicar
0.30gramos/litro de tiosulfato de sodio para eliminar restos de cloro.
2. Llenar el recipiente con 3 litros de microalga y poner aireacin suave.
3. Inocular y/o sembrar los rotferos a una densidad aproximada entre 100-200 rot/ml
(total de 75,000 rotferos).
4. La cosecha de los rotferos se realiza a los 5 das de cultivo, y dependiendo de la
temperatura del cultivo, se puede obtener una concentracin aproximada entre 100-200
rot/ml (total de 450,000 organismos) en dicho ciclo.
GARRAFONES DE 18 LITROS
1. Lavar y desinfectar el recipiente con cloro (1ml/litro), enjuagar y por ltimo, aplicar
0.30gramos/litro de tiosulfato de sodio para eliminar restos de cloro.
2. Llenar el garrafn con 18 litros de microalga, poner aireacin, aproximadamente 10cm
del fondo con aireacin suave, generando un anillo de turbulencia en la superficie
alrededor de los 20cm.
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3. CONTEO DE ROTIFEROS
El conteo se realizar en un porta objetos excavados o cmaras Sedgwick-Rafter de
hasta 5 ml, (figura 2) o dispositivo similar bajo estereoscopio o microscopio.
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4. PROTOCOLO
1. Preparar el tanque para sembrar los rotferos cosechados.
2. Desinfectar todo el equipo para lavar los rotferos.
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NOTA: El proceso debe ser rpido para que los rotferos no estn mucho tiempo sin
alimento.
Aire
Agua filtrada y
tratada con UV
Tamiz de 200m
Tamiz de 60m
5. PROTOCOLO DE LIMPIEZA
El material a utilizar deber ser enjuagado con agua de mar filtrada o salobre y tratada
para quitar los desechos del cultivo, rotferos muertos, etc.
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Para el lavado de tanques se deber agregar cido muritico (1 litro de cido en 15 litros
de agua de mar o salobre filtrada. Posteriormente se realiza un enjuague par remover el
cido y se desinfecta con una solucin de cloro (1 ml de cloro por 1 litro de agua filtrada y
tratada). Enjuagar con abundante agua y es recomendable utilizar tiosulfato de sodio para
neutralizar el cloro. Revisar el agua del ltimo enjuague con un kit para deteccin de cloro
(ortotolidina). Si se detecta cloro, enjuagar una vez ms y revisar de nuevo.
6. RUTINA DIARIA.
Revisar temperatura.
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ANEXO: BITACORA DE REGISTRO
FECHA:
CONTEOS
Vol. De
Nmero de tanque
ALIMENTACIN
Tot.rot.
TECNICO:
OBSERVACIONES:
Microalga/Levadura
Da de
Cultivo
TC
O2 (mg/l)
Salinidad
pH
Cultivo(L)
#
rotferos
# huevos
(millones)
Total Cosecha:
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Protocolo de rotferos
BIBLIOGRAFA
CENAIM. 2002. Manual para la produccin y uso de organismos zooplanctnicos. Centro
Nacional de Acuicultura e Investigaciones Marinas (CENAIM).
Guayaquil,Ecuador.http://www.cenaim.espol.edu.ec/publicaciones/ artemia/index.html.
Coll-Morales, J. 1983. Acuicultura Marina Animal. Ediciones Mundi-Prensa, Madrid. 275
pp.
Dhert, P. 1996. Rotifers In P. Lavens and P. Sorgeloos (Eds.), Manual on the production
and use of live for aquaculture. Technical paper FAO-ARC.
Fielder, D.S., G.J. Purser & S.C. Battaglene. 2000. Effect of rapid changes in temperature
and salinity on availability of the rotifers Brachionus rotundiformis and Brachionus plicatilis.
Aquaculture 189: 85-99.
Fulks, W. y K. Main.1991. Rotifer and Microalgae Culture Systems. Proceedings of U.S.Asia Workshop, Honolulu. USA.
Fukusho, K.1989. Biology and Mass Production of the Rotifer II, Brachionus plicatilis (I) Int.
J.Aq. Fish. Tech. I:232-240.
Gama-Flores, J.L., S.S.S. Sarma & S. Nandini. 2005. Interaction among copper toxicity,
temperature and salinity on the population dynamics of Brachionus rotundiformis
(Rotifera). Hydrobiologia 546: 559-568.
Hoff, F. H. & T.W. Snell. 1999. Plankton Culture Manual. Florida Aquafarms Inc. Dade
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Maruyama, I., T. Nakao, I. Shigeno, Y. Ando & K. Hirayama. 1997. Application of
unicellular algae Chlorella vulgaris for the mass culture of marine rotifer Brachionus.
Hydrobiologia 358: 133-138.
Yfera, M. & N. Navarro. 1995. Population growth dynamics of the rotifer Brachionus
plicatilis cultured in non-limiting food condition. Hydrobiologia 313/314: 399-405.
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