Para obtener buenos resultados las condiciones de cultivo deben de ser rigurosas,

prestando atencin a los siguientes procesos:

las manipulaciones han de ser estriles para evitar la invasin por los
organismos y guardar una sola especie de alga por cultivo.
El agua de mar ser de buena calidad y estar esterilizada por la filtracin o
por calor. Se enriquecer con la ayuda de un medio que contenga los
elementos necesarios para el desarrollo de las algas, principalmente
nitratos y fosfatos, silicatos en el caso de las diatomeas pero tambin boro,
hierro, magnesio, diversos oligoelementos y vitaminas B1 y B12.
Intensidad lumnica suficiente (3.000 a 5.000 luz)
Temperatura constante optima, para la especie a cultivar (19-20C).
Habr el aporte de gas carbnico para reemplazar el utilizado por las algas
en el agua de mar, jugando adems un papel preponderante en el equilibrio
del pH.

http://www.fundame.org/cientificas/pdfs/acuicultura/Acui_capitulo9_01.pdf

Porqu esterilizar con leja y cmo neutralizarla

En muchas ocasiones nos vemos en la necesidad de tener que esterilizar
recipientes o medios de cultivo para evitar contaminaciones indeseadas. Tal es el
caso por ejemplo del cultivo de microalgas, en el que es esencial mantener unas
condiciones de asepsia previas a la inoculacin. Para el aficionado que mantiene
una pequea instalacin no suele ser viable o accesible el uso de mtodos de
esterilizacin como autoclaves u xido de etileno, bien por su precio, por el
espacio que ocupan o por su peligrosidad. En estos casos, el uso de leja
(hipoclorito de sodio, NaClO) es una magnfica solucin siempre que tengamos
una manera de neutralizarla una vez hecha la esterilizacin. Y la tenemos.
Para neutralizar la leja, disponemos del tiosulfato de sodio (Na 2S2O3), una
molcula que reacciona con el hipoclorito de sodio neutralizando la capacidad
oxidante del cloro y convirtindolo en in cloruro (Cl-) incuo. El tiosulfato lo
encontraremos fcilmente en su forma salina (penta)hidratada (Na 2S2O3 + 5H2O).

El tiosulfato neutraliza una cantidad variable de

leja, segn el pH de la disolucin
La cantidad de tiosulfato necesaria para neutralizar una determinada cantidad de
hipoclorito (lo que en qumica se llama la estequiometra de la reaccin) es
variable, dependiendo de varios factores de la disolucin en la que se produzca, y
siendo el ms importante el pH de la misma. La ecuacin habitual de la reaccin
es:
4 NaClO + Na2S2O3 + 2 NaOH 4 NaCl + 2 Na2SO4 + H2O
con una proporcin de 4 molculas de hipoclorito por cada molcula de tiosulfato
(aprox. 2 mg de Cl2 por cada mg de Na2S2O3). Pero esta ecuacin slo se cumple
para condiciones de disolucin muy alcalinas (pH>11). A pH entre 7-9 (ms
cercano al del agua marina) la proporcin entre ambos reactivos cambia,
empezando a predominar la reaccin:
HOCl/NaOCl + Na2S2O3 Na2SO4 + S + HCl
con una proporcin de 1 molculas de hipoclorito por cada molcula de tiosulfato
(aprox. 1 mg de Cl2 por cada 2 mg de Na2S2O3). Finalmente, si la disolucin tiene
un pH cido a neutro (entre 4-7) vuelve a cambiar el tipo de reaccin:
HOCl/NaOCl + 2Na2S2O3 Na2S4O6 + NaCl + NaOH
con una proporcin de 1 molculas de hipoclorito por cada 2 molculas de
tiosulfato (aprox. 1 mg de Cl2 por cada 4 mg de Na2S2O3).

Cmo preparar una disolucin de tiosulfato para la

prctica diaria con leja domstica
Para la esterilizacin en nuestros cultivos podemos utilizar leja de uso domstico,
que indique en la etiqueta que es Apta para la desinfeccin del agua de bebida.
Esto nos asegurar que no contiene otros aditivos ms que hipoclorito de sodio y
una pequea cantidad de sosa custica estabilizante. Las marcas domsticas
suelen tener una concentracin de cloro activo a la salida de fbrica de entre 35-

45 g/l. Tras cierto tiempo de almacenamiento, debido al calor y a la lenta

descomposicin de la leja, suele llegarnos con algo menos de concentracin. Por
ello tomaremos como cifra orientativa y aproximada 35 g/l, o lo que es lo mismo 35
mg/ml de cloro activo.
Basados en las reacciones antes descritas, y en los rangos tiles de cloracin
aprendidos como fruto de nuestra experiencia, hemos desarrollado una disolucin
neutralizadora muy cmoda de usar y eficaz. La disolucin neutralizadora de
tiosulfato de sodio la haremos por ejemplo en un envase de unos 300 ml (sirve por
ejemplo una botella de agua mineral bien aclarada). Nos harn falta unos 200 ml
de agua destilada y 20 g de tiosulfato de sodio pentahidratado (Na 2S2O3 + 5H2O) en
forma cristalina. Nos vendr muy bien una probeta graduada para marcar en la
botella el nivel de los 200 ml.
Procederemos como sigue:

medimos 200ml de agua de grifo en la probeta y los echamos en la botella

previamente vaca.

marcamos con rotulador permanente la lnea de nivel que alcanza el agua

en la botella, y tiramos el agua de grifo.

aadimos los 20 g de tiosulfato y enrasamos con agua destilada hasta la

marca de los 200ml que hicimos anteriormente.

si tenemos una pequea cantidad de carbonato de sodio (Na 2CO3) a mano,

podemos aadir una pequea cantidad (como el tamao de una lenteja) a la
disolucin para aumentar su estabilidad a largo plazo.

agitamos suavemente durante unos segundos, disolvindose el tiosulfato

sin dificultad.

guardamos en el frigorfico, a oscuras.

Esta disolucin tiene una concentracin de tiosulfato pensada para facilitar el uso
cotidiano de la misma sin necesidad de complicados clculos. Usarla es tan
sencillo como sigue:

cuando la disolucin en la que hayamos aadido la leja sea alcalina (p.ej.

en agua salada con pH entre 8-9), aadiremos 1 ml de la disolucin neutralizadora
por cada 1 ml de leja utilizada;

cuando la disolucin en la que queramos neutralizar la leja sea cida o

neutra (p.ej. en agua dulce con pH entre 4-7,5), aadiremos 2 ml de la disolucin
neutralizadora por cada 1 ml de leja utilizada.
Hay que tener en cuenta que si aadimos un exceso de tiosulfato respecto de la
cantidad de leja aadida, se produce dixido de azufre (SO 2), y notaremos un
caracterstico olor a huevos podridos. Esto no es malo si es en poca cantidad, y
de hecho es un mecanismo de seguridad con el que sabremos que toda la leja ha
sido neutralizada (si no huele nada, o huele un poco a cloro, es que nos hemos
quedado un poco justos y tendremos que aadir un poco ms disolucin de
tiosulfato). Conviene no aadir un exceso muy grande de tiosulfato, primero por no
gastarlo innecesariamente, y segundo porque puede acidificar la disolucin y
disminuir el oxgeno de la misma.

Ejemplo de cloracin y descloracin cotidiana de

medio de cultivo de microalgas con leja y tiosulfato
Cultivamos nuestras microalgas en bidones de 5 litros. Normalmente los llenamos
con 4-4,5 litros de medio de cultivo, dejando una pequea cmara de aire superior.
El medio de cultivo lo esterilizamos generalmente con 2 ml de leja domstica por
cada bidn de 4 litros. Para ello lo llenamos de medio de cultivo, aadimos la leja
con una pipeta, cerramos bien, agitamos fuertemente unos segundos y lo dejamos
10 minutos de pie y 10 minutos tumbado (para que se esterilice bien la zona de la
boca-tapn). En ese lapso de tiempo las posibles microalgas contaminantes y la
prctica totalidad de los grmenes mueren. Se puede dejar un poco ms si se
desea por precaucin.
A continuacin abrimos el bidn y, con una pipeta estril, tomamos 2 ml de
disolucin neutralizadora (si es cultivo de agua salada) o 4 ml (si es de agua
dulce). La aadimos, volvemos a cerrar y agitamos fuertemente unos segundos.

Dejamos reposar 10 minutos. El medio de cultivo est estril y listo para ser
utilizado.
http://www.fishroom.es/blog/2014/10/esterilizacion-de-medio-de-cultivo-demicroalgas-con-lejia-y-tiosulfato-de-sodio/