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REALIDAD?
Resumen
El levantamiento y la restriccin de antibiticos sub-teraputicos de las dietas de aves
de corral en muchas partes del mundo han amplificado inters en mejorar la salud
intestinal y la utilizacin de nutrientes. Algunos microbios (DirectFed) probiticas y
derivados aditivos (de origen vegetal) alimentacin de la planta estn ganando presencia
en el mercado. Cultivos probiticos definidos tienen el potencial para tener xito, en
gran parte debido a la seleccin in vitro y la seleccin. Sin embargo, los retrasos de
aprobacin reglamentaria, especialmente en Europa, han obstaculizado la aplicacin
comercial de algunos microorganismos en las dietas de aves de corral. Aditivos para
piensos fitognicos han demostrado rangos de actividad antimicrobiana in vitro y estn
construyendo un historial de mejoras en el rendimiento de las aves. Vacilacin por los
nutricionistas para incorporar estos aditivos en la alimentacin se deben en parte a 1) la
falta de familiaridad, 2) la sobreventa de los efectos posibles de la industria, 3) la
inconsistencia del producto, 4) la falta de efectos fisiolgicos y microbiolgicos
documentados in vivo, y, en el caso de los probiticos, 5) la falta de documentacin de
la persistencia.
DESCRIPCIN DEL PROBLEMA
La industria de las aves de corral se inunda con numerosas opciones cuando se trata de
alimentar aditivos pretendidos para ayudar en el rendimiento, aliviar los sntomas
asociados con un insulto en particular, o ambas cosas. Muchos de estos productos se han
agrupado como el crecimiento antibitico promocin de reemplazos (AGP), pero todos
estn a la altura de los efectos fisiolgicos especficos provocados por los propios AGP.
Estos productos son diversos e incluyen enzimas, metabolitos de la vitamina, extractos
de plantas, productos competitivos de exclusin (CE), probiticos, prebiticos, los
componentes de la levadura, cidos orgnicos, cidos grasos cortos y de cadena media,
bacteriocinas, bacterifagos, y pptidos antimicrobianos, para nombrar unos pocos .
En el pasado, los reemplazos AGP fueron el estndar de oro por el cual se midieron la
promocin del crecimiento y resistencia a las enfermedades. Utilizado desde la dcada
de 1940, las dosis subteraputicas de antibiticos han mejorado el rendimiento del ave
al incrementar el crecimiento, mejorar la FE, la alteracin de la flora intestinal
favorable, y la reduccin de la incidencia de la enfermedad. Los mecanismos exactos
por los que se producen estas mejoras, sin embargo, an no se comprenden totalmente.
Actualmente, 4 mecanismos de promocin del crecimiento han sido propuestos por
diversos cientficos.
Dado que los investigadores han indicado que los antibiticos por va oral dosificados
no promueven el crecimiento en pollos libres de grmenes [1], cada uno de estos
mecanismos propuestos se basa en la hiptesis de que la presencia de bacterias en el
intestino reduce el crecimiento de las aves, e incluye hiptesis que 1) los antibiticos
inhiben la aparicin de infecciones subclnicas, 2) los antibiticos reducen la produccin
de metabolitos microbianos de crecimiento-deprimente, 3) los antibiticos disminuyen
el uso de nutrientes por los microbios intestinales, y 4) los antibiticos permiten el
APLICACIN
DEL
PRODUCTO
de sinergismo de las cepas dentro de las culturas CE, as como las especies efectivo de
los distintos gneros de bacterias es an insuficiente [37].
En vista de los riesgos asociados a la prohibicin total europea de antibiticos
promotores del crecimiento (por ejemplo, un mayor uso de los antimicrobianos
teraputicos), varios proyectos de la Unin Europea (por ejemplo,
C-EX, PoultryFlorGut, SUSTITUIR PROPATH) han puesto en marcha para encontrar
formas alternativas de prevencin y tratamiento de infecciones animales que tambin
son un riesgo para los seres humanos. El proyecto C-EX, titulado "Desarrollo de una
exclusin de productos competitivo para las aves de corral que cumplan los requisitos
reglamentarios para el registro en la Unin Europea", por ejemplo, tena el objetivo de
establecer una adecuada combinacin de cepas probiticas para su uso combinado en
pollos. El resultado final de este proyecto fue un aditivo para piensos que contiene 5
cepas, utilizando diversas especies bacterianas derivadas de diferentes nichos en el
intestino de los pollos, los cuales, a diferencia de los productos no definidos, deben
cumplir con los requisitos para el registro en la Unin Europea [28]. Las cepas fueron
seleccionados de 477 cepas bien caracterizadas originalmente aisladas de la cosecha,
yeyuno, leon y ciego de los intestinos de los pollos, proporcionando as una
justificacin de su utilizacin segura y eficaz como aditivos en la alimentacin de
pollos-[38].
Obstculos regulatorios y lecciones aprendidas.
Uno de los obstculos que limitan la amplitud, el nmero y la velocidad de la
aprobacin de los productos de esta naturaleza es el proceso de regulacin y registro,
cuyo mbito de aplicacin vara de un pas a otro. Por lo general, la Unin Europea y
los Estados Unidos son considerados los ms estrictos, y los componentes del
expediente de registro en otros pases las utilizan como modelos. En los Estados
Unidos, hay un sistema de regulacin que funcione bien para los cultivos microbianos
para alimentos y piensos, que se basa en la lista GRAS (generalmente reconocido como
seguro) sistema de notificacin, y que motiva a la industria a ser ms abiertos sobre las
aplicaciones microbianos en los alimentos sector [39]. En la prctica, el estado de
GRAS se puede lograr ya sea por un historial de uso seguro de los microorganismos en
los alimentos (que data antes de 1958) o mediante una evaluacin positiva de la
seguridad por expertos cualificados e independientes. En la Unin Europea, los
microorganismos utilizados como aditivos para piensos se regulan exhaustivamente
[34], mientras que en el pasado, el uso de organismos probiticos convencionales en
diversas aplicaciones humanos no estaba reguladas en particular [38]. Esto ha llevado a
la situacin ilgica en el que las mismas cepas utilizadas libremente en alimentos
humanos han sido objeto de evaluaciones rigurosas de seguridad cuando se solicita la
aprobacin como aditivos para piensos. Aspectos de seguridad ocupan la mayor parte
del expediente de solicitud, con la intencin de asegurar que los aditivos alimentarios
con microbios son inocuos para apuntar los animales, los usuarios y los consumidores
[40].
Con algunas cepas probiticas, la bioseguridad es menos claro. Por ejemplo, las cepas
de enterococos se han utilizado de manera positiva como probiticos o en la produccin
de ciertos quesos, sin embargo, otras cepas de enterococos se han aislado de las
han sido identificados como ejerciendo efectos bactericidas. Por otra parte, el organo
es ampliamente disponible, por lo que es atractivo como aditivo para piensos. El uso de
compuestos activos sintticos, tales como carvacrol, timol, limoneno, o cinamaldehdo,
se considera una alternativa al uso de extractos naturales. La eleccin de la combinacin
ms adecuada de ingredientes requiere una extensa investigacin a travs de pruebas
amplio in vitro, as como experimentos de alimentacin bien diseada bajo condiciones
estandarizadas.
Efecto del cultivar de tipo, condiciones de cultivo, procesamiento y almacenamiento de
los componentes activos o sus metabolitos secundarios de las plantas
Para garantizar una calidad continua de aditivos para piensos fitognicos, estricta
normalizacin de la composicin qumica en trminos de sus ingredientes activos es
obligatoria. Esto no siempre es fcil debido a que los niveles de principios activos en
plantas o extractos de plantas pueden variar considerablemente, como afectados por
gentica (es decir, el genotipo, la variedad) y los factores externos (es decir, las
condiciones de cultivo, tiempo de cosecha, almacenamiento, procesamiento). Por
ejemplo, Hsn Can Baser [82] observ que el contenido de aceite de Origanum vulgare
ssp. hirtum cosechado en Turqua vari desde 2.3 hasta el 5,4%, mientras que el
contenido carvacrol podra oscilar entre 52 al 61%. El contenido de aceite esencial y la
composicin tambin dependen de la parte de la planta utilizada para hacer un aditivo
de origen vegetal. Por ejemplo, un estudio comparativo de la composicin qumica de
los aceites esenciales a partir de yemas y hojas de diente mostr diferencias en sus
componentes principales [83]. Las diferencias encontradas entre los aceites esenciales
de diferentes rganos de la planta pueden explicarse en parte por la existencia de
diferentes estructuras secretoras que se distribuyen dentro del cuerpo de la planta [84].
Produccin de aceites esenciales depende de las condiciones climticas altamente. En
un estudio que investiga la composicin de O. vulgare ssp. hirtum para carvacrol, timol,
-terpineno, y p-cimeno en 23 localidades diferentes en Grecia, se demostr que la ms
caliente est el clima, mayor es su concentracin total en el aceite esencial [85]. Por otra
parte, la altitud parece ser un importante factor ambiental [85]. Los altos valores de
contenido de aceites esenciales se registraron a baja altura.
Los olores de las plantas son, en la mayora de los casos, relacionados con la atraccin
de los polinizadores. Como tal, la emisin de voltiles alcanza su mximo en el
momento de la disponibilidad de nctar y de la maduracin del polen, que es cuando la
flor est listo para la polinizacin. Aparte de las fluctuaciones mensuales y Anuales o
los cambios asociados con el perodo vegetativo o floracin de la planta, tambin hay
fluctuaciones diurnas que parecen estar relacionados con la actividad del polinizador
[84]. En las plantas con polinizacin diurna, la emisin de voltiles alcanza su mximo
durante el da, mientras que se observ lo contrario para aquellas plantas que tienen
polinizadores nocturnos (murcilagos, ratones, o polillas nocturnas). Por ejemplo, los
cambios en los componentes voltiles emitidos de las flores de la madreselva largo de
24 h se ha demostrado, en el que se encontr el olor ms fuerte para ser emitida 1930
hasta 0730 h, con su mximo entre 1130 a 1530 h [86].
In vivo del metabolismo y Sitio de accin
Dosis efectiva
Se puede suponer que el efecto de fitognicos sobre la microflora del intestino,
digestibilidad de los nutrientes, la morfologa intestinal, y, por ltimo, los parmetros de
rendimiento depende en gran medida de su nivel de inclusin en el pienso acabado o
agua [112, 113] potable. Debido a la acumulacin de ingredientes activos, en particular
en los aceites esenciales, el uso de tales extractos permite la aplicacin de dosis por
debajo de 1 g / kg de pienso. Por el contrario, las plantas enteras (por ejemplo, hierbas
de tierra) o partes de los mismos se administran por lo general en dosis ms altas. Gler
et al. [114], por ejemplo, utiliza el cilantro en una dosis de 5 a 40 g / kg y de un
creciente consumo de alimento y la ganancia de peso en la codorniz japonesa. En los
experimentos realizados por Cruz et al. [113], alimentacin inclusin de niveles
diferentes hierbas, incluyendo la mejorana, el organo, la milenrama, el romero y el
tomillo, vari de 1 a 10 g / kg, dependiendo de si se usan todo el suelo, las plantas o sus
extractos destilados.
Dependiendo de la forma fsica de aditivos fitognicos y en sus posibilidades tcnicas
de la granja, que se pueden aplicar ya sea en el alimento o en el agua potable. La
suplementacin de dietas de pur con aditivos para piensos fitognicos en polvo o
granulados permite niveles de inclusin precisos y generalmente garantiza un suministro
constante de los ingredientes activos en la alimentacin. Debido a la volatilidad de los
aceites esenciales, se debe prestar atencin a la estabilidad trmica cuando el alimento
se somete a altas temperaturas durante la granulacin, extrusin o expansin. Aplicacin
de frmulas fitognicos lquidos en el agua potable tiene la ventaja de una gran
flexibilidad en trminos de tiempo de aplicacin y la dosis. A condicin de que los
equipos de dosificacin adecuada est disponible en la granja, aditivos fitognicos
lquidos se pueden aplicar ya sea continuamente o especficamente en momentos de
estrs mejorada, como el cambio de alimentacin, la vivienda, o la vacunacin.
IN VITRO DE DETECCIN BIAS-ENSAYO Y ENSAYO DE DEPENDENCIA
Como se mencion anteriormente, la gama de productos de reemplazo de AGP es muy
diversa, y la bsqueda de productos eficaces se ha basado en gran medida en los
ensayos o estudios de deteccin in vitro realizados con seres humanos, ratas y otras
especies. Los ensayos in vitro pueden ser criticados por los usuarios finales del producto
por no reflejar con precisin en las respuestas in vivo en el ave. Este sentimiento puede
ser cierto en algunos casos, pero en otros puede ser parcialmente un reflejo de sesgo
atribuible al ensayo de seleccin de medios, la duracin o la concentracin de sustrato.
Sin embargo, in vitro, tcnicas de ensayo han sido de suma importancia para la
investigacin biotecnolgica y farmacutica, ya que permiten la determinacin del
modo de potencial (s) de la accin, permitir un mayor rendimiento para la deteccin de
los productos candidatos, y no estn influenciados por factores ambientales que pueden
enmascarar los resultados in vivo (temperatura, presin de la enfermedad) y
farmacocintica.
La vinculacin de las tcnicas in vitro para la viabilidad y la eficacia in vivo ha sido as
tanto uso y abuso en la literatura. Un ejemplo de ello es la literatura in vitro con
respecto a los componentes de la pared celular de la levadura. Se han propuesto
manano-oligosacridos (MOS) para tener un efecto "debilitamiento" en las bacterias
patgenas gram negativas tales como E. coli y Salmonella spp. Patgenos gramnegativos (E. coli, Salmonella spp.) son capaces de unirse a los residuos de manosa en
lugar de unirse a las clulas epiteliales intestinales debido a su tipo especfico manosa
lectina I fimbrias [115, 116]. Se ha propuesto que MOS son capaces de unirse y mover
patgenos a travs del intestino sin la colonizacin, disminuyendo as o prevenir la
enfermedad (s) entrica. En los estudios in vivo, los investigadores no han medido (y,
dada la metodologa actual, no se puede medir) la unin directa con patgenos, sino que
tienen un nmero reducido indicadas de bacterias seleccionadas en digesta intestinal y
heces [117, 118]. En todo el mundo, algunos miembros del personal de la industria
alimentacin estn reclamando estos beneficios para la salud, el uso de mtodos in vitro
para apoyar esta afirmacin. Un mtodo para estudiar la interaccin de MOS con
bacterias ha sido a travs del mtodo de aglutinacin. Este mtodo se mezcla con una
solucin de bacterias de la pared celular, seguido por la evaluacin visual de la unin
[115, 117, 119]. Los temas crticos con este procedimiento y su interpretacin son la
solubilidad del MOS, as como la naturaleza cualitativa del propio ensayo. Solubilidad
de la solucin de MOS no se indica generalmente a pesar de su alto peso molecular, y
por lo general resulta en las fracciones de pared celular pesados sedimentan rpidamente
en solucin. Visual valoracin de unin es altamente subjetiva, porque no es posible
evaluar si la bacteria es en realidad obligada, su afinidad de unin, o si es simplemente
en la proximidad de las bacterias. Por lo tanto, el uso de este ensayo como una adecuada
herramienta en vitro es deficiente debido a su incapacidad de ser reproducible y
cuantitativa a travs de una gama de productos.
Otro mtodo usado para estudiar la interaccin de las paredes celulares de levadura con
bacterias ha sido a travs del mtodo de sedimentacin. Newman et al. [120] utiliz este
procedimiento, en el supuesto de que las bacterias que estaban conectados a la pared
celular de la levadura se sedimentar; por lo tanto, ms rpida ser la sedimentacin,
mejor ser la unin entre las bacterias y de la pared celular de la levadura. Sin embargo,
este procedimiento tambin podra ser criticado porque todas las bacterias y levaduras
(o fracciones de pared celular de levadura) de sedimentos en soluciones acuosas debido
a su polaridad y peso molecular.
Un tercer mtodo usado para estudiar la interaccin de las paredes celulares de levadura
con bacterias ha sido a travs de un mtodo de la placa de microtitulacin. En este
procedimiento, se presume que la insolubilidad del material de pared celular, a causa de
su alto peso molecular, se puede tomar como una ventaja, y el material de la pared
celular se utiliza para recubrir los pocillos. Los pocillos se dejaron incubar con la
bacteria de ensayo y bacterias no unidas se enjuagan de distancia, y la tasa de
crecimiento de bacterias unidas se cuantifica posteriormente. La precisin y la
reproducibilidad de la unin se dan por la evaluacin automatizada por densidad ptica
[121, 122]. Debido a la variacin sustancial entre los ensayos, su aplicacin debe ser
analizada para la evaluacin del producto. Los revisores externos deben ser conscientes
y diligente para asegurarse de que todas las pruebas de cribado in vitro se validan para
comprobar su adecuacin y reproducibilidad, y que la relevancia de los resultados ser
interpretados cuidadosamente.
Eficacia de los probiticos y fitognicos-lo que no sabemos git desconocidos
ecologa microbiana y la interaccin con el anfitrin.
La microbiota intestinal, la integridad del tejido intestinal y el sistema inmunitario
asociado al intestino son las primeras lneas de defensa contra los patgenos. Estos
sistemas trabajan en conjunto para prevenir o reducir al mnimo la colonizacin de
patgenos y la invasin o destruccin de los tejidos intestinales [123, 124]. El dogma es
que los individuos sanos desarrollan una estructura de la comunidad microbiana
equilibrada que inhibe la colonizacin de patgenos sin estimular abiertamente el
sistema inmunolgico. Respuestas inmunolgicas pueden ser costosas en trminos de
asignacin de nutrientes, pero son necesarias para librar el cuerpo de un patgeno (s) y
por lo tanto mantener al animal vivo.
Los recientes avances en herramientas moleculares nos han permitido obtener ms
informacin sobre cmo la comunidad microbiana en el intestino [125]. Sin embargo,
ms all de un cambio en la flora en diferentes regiones del tracto intestinal, la
informacin brilla por su ausencia en la distribucin horizontal (vs. vertical) de la flora
bacteriana, microbiana diafona, y la activacin o supresin de mecanismos de
patogenicidad para los patgenos microbianos.
Al menos algunos de la microbiota intestinal se comunican con el epitelio intestinal, que
a su vez proporciona nutrientes, sitios de unin, o ambos de estos microorganismos,
productos de fermentacin y tambin puede influir en la proliferacin celular, la
diferenciacin y la apoptosis [124]; mucina composicin [8]; y la angiognesis [126].
Por lo tanto, cuando se trata de trabajar ms con aditivos para piensos destinados a los
efectos en el intestino provocando, es necesaria la consideracin de cmo los efectos
sobre el medio ambiente microbiana (verticalmente y horizontalmente) afectarn a la
estructura de la comunidad microbiana. Adems, el impacto en la respuesta por el
intestino, y, ms importante, la cuantificacin de las prdidas endgenas de estas
respuestas, debe ser dilucidado.
Inmunoestimulacin vs. inmunosupresin.
La inmunomodulacin puede definirse [127] como un cambio (estimular o suprimir) en
los indicadores de celular, humoral, y los mecanismos de defensa inespecficos.
Normalmente, el sistema inmunitario se mantiene en un equilibrio homeosttico entre la
inmunoestimulacin e inmunosupresin.