MEDIOS DE CULTIVO

1.- CULTIVO DE MICROORGANISMOS

Es el desarrollo activo de microorganismos en medios adecuados.
El cultivo de microorganismos consiste en proporcionarles las condiciones
fsicas, qumicas y nutritivas adecuadas para que puedan multiplicarse de forma
controlada.
Toda clula viva requiere consumir nutrientes que le permitan realizar los
procesos metablicos necesarios para su supervivencia.

MEDIOS DE CULTIVO
Es la mezcla adecuada de nutrientes que, permiten el crecimiento de los
microorganismos.
Es un gel o una solucin que cuenta con los nutrientes necesarios para permitir
que en condiciones favorables de pH y temperatura, se produzca el crecimiento
de microorganismos, clulas o plantas.

2.- REQUERIMIENTOS QUIMICOS

El medio de cultivo debe tener una composicin tal que provea al
microorganismo los nutrientes que le aporten energa y elementos qumicos
para la sntesis de sus constituyentes celulares.
Los componentes qumicos de las clulas son: carbono, alrededor del 50% del
peso seco, oxgeno (32%), nitrgeno (14%), fsforo (3%), azufre ( 1%) y
elementos traza como: Fe, K, Mg, Mn, Co, Mb, Cu y Zn.
Una parte importante del K est unida al RNA de manera que sus
requerimientos aumentan con los factores que influyen en el aumento del RNA
de las clulas, como la velocidad de crecimiento. El in K actua como coenzima
y probablemente acta como catin en la estructura aninica de varios
componentes celulares. El in Mg es esencial para la estabilidad de los
ribosomas y actua como cofactor en numerosas reacciones del metabolismo.
Tanto el K como el Mg se incorporan a los medios en forma de sales como
fosfato y sulfato.

Disponibilidad de los componentes

Aparte de su presencia en el medio de cultivo, los nutrientes deben estar
disponibles para ser usados por la clula. (en forma asimilable).
As, el C debe estar en forma de carbono orgnico para los heterotrofos y como
CO2 para los autotrofos, el N en forma de NH4, de NO3- o de NO2- o en forma de
aminocidos; el P en forma de PO43-; el S como aminocidos sulfurados o de
SO42-, etc.
La disponibilidad de los iones metlicos es modificada por quelacin, ya que
muchos constituyentes del medio y productos del metabolismo actan como
agentes complejantes o precipitantes, _por ejemplo aminocidos, hidroxicidos,
hidrxidos, y los aniones P04 y C03-2 .
Con el objeto de controlar su concentracin y prevenir la precipitacin de los
iones metlicos, puede ser necesario quelar el ion mediante algn agente
quelante como el EDTA. (OEA, 2006).

Fuentes de Macronutrientes
Fuente de
carbono

- CO2
- Compuestos
orgnicos

Fuente de
nitrgeno

- Inorgnica
- Orgnica

Fuente de
fsforo

- Inorgnica
- Orgnica

Fuente de
azufre

- Inorgnica
- Orgnica

Carbohidratos, azcares,
protenas, aminocidos,
lpidos, cidos grasos,
glicerol

NH4, NO3-, N2
Protenas, peptonas, aa,
bases pricas y
pirimdicas, urea
Fosfatos
Esteres del cido fosfrico

Sulfuros y sulfatos
Aminocidos sulfurados,
vitaminas

Requerimientos de Oxigeno
Segn los requerimientos de oxigeno, los microorganismos son:
Aerobios
obligados: requieren oxgeno (21%). Ej. Bacillus, hongos, Acetobacter aceti,
etc.
microaeroflicos: requieren niveles menores (5-10%). Ej. Azospirillum
Anaerobios
obligados: no toleran O2, muere en su presencia. Ej. Methanobacterium,
Clostridium.
facultativos: no requieren O2, pero el desarrollo es mejor con O2. Ej. E. coli.
aerotolerantes: no son sensibles al oxgeno (crecen en ausencia o
presencia de oxgeno de hasta 8%). Ej. Enterococcus faecalis.

TIPOS DE MEDIOS
A.- Segn la naturaleza de sus constituyentes.
Definidos cuando su composicin qumica se conoce totalmente. Se usan en
laboratorio para trabajos de investigacin.
Complejos No se conocen los componentes ni las cantidades exactas
presentes, y estn compuestos por mezclas de extractos de materiales
complejos (extracto de levadura, extracto de carne, etc.).

.Tipos de medios
B.- Segn la consistencia del medio.
Medios Liquidos, si no se aaden agentes
gelificantes. Son tiles para promover el crecimiento
celular (Caldo de cultivo)
Ejm. caldo lactosado para coliformes.
Medios semislidos (agar al 0.7%) para poner de
manifiesto la movilidad de la bacteria
Siembra con aguja, y se observa si la bacteria
presenta turbidez mvil en el tubo.
Ejplo. Agar SIM. agarMIA, agar PCA.
Medios slidos. si se aade un agente solidificante
no consumible por los microorganismos
(normalmente agar). Se usan para obtener colonias
aisladas del m.o de inters.
El crecimiento se observa en la superficie de placa
o pico de flauta. Agar al 1-2%

c.- Segn el uso

Medios de laboratorio.
Pueden ser medios definidos o complejos.
Se usan para:
Desarrollo de m.o (reproduccin)
Conservar m.o
Aislar m.o.
Medios industriales.
Generalmente son medios complejos y se desarrollan a partir de subproductos
industriales como; melazas de caa o remolacha, suero de leche, licor del maz.
Etc.
Se usan para:
Produccin de biomasa.
Produccin de metabolitos

d.- Segn la funcin.

Generales, Es un medio altamente enriquecido que permite el crecimiento de todo
tipo de microorganismos. Ejemplo: Agar nutritivo, caldo nutritivo
Selectivos cuando favorecen el crecimiento de ciertos microorganismos mientras
suprimen el de otros. Un medio selectivo puede usar un antibitico, como la
ampicilina, para permitir nicamente el crecimiento de las bacterias resistentes a ste.

Diferenciales. Capaz de distinguir dos m.o por su crecimiento diferencial en el

mismo, usando las propiedades metablicas de ambos en presencia de un
determinado nutriente y de un indicador que evidencia por ejemplo, un pH cido en su
entorno. (Agar LIA: Lisine iron agar (lisina hierro)
Selectivo-diferenciales cuando combinan las dos caractersticas anteriores (por
ejemplo, el agar de MacConkey para identificar Escherichia coli), y
Medios de enriquecimiento que permiten aislar un tipo determinado de
microorganismo a partir de una mezcla una poblacin mixta de gran tamao. Ejplo:
Agar sangre.

MEDIOS DE LABORATORIO
Pueden ser sintticos o complejos, y sus constituyentes tienen las
siguientes caractersticas:
a. Fuentes de carbono
1.1. Carbohidratos.
Monosacridos. Dextrosa. Presente en jugos de frutas. Hidrlisis de
lactosa, sacarosa, almidn.
Oligosacridos. Lactosa (suero de leche), Sacarosa. Dextrina.
Polisacridos. Almidn. agar
1.2. alcoholes.
Glicerol. Etanol. Metanol
1.3. Lpidos
1.4. Hicrocarburos

b. Fuentes de nitrgeno
Nitratos, Sales de amonio
Hidrolizados. Peptonas. Digeridos, extractos.
1) Peptonas. Obtenidas por hidrlisis cida o enzimtica de fuentes proteicas
como carne, pescado, casena, gelatina, harina de soja, algodn, girasol, etc.
Representa una fuente fcilmente asequible de nitrgeno y carbn, pues los
aminocidos y peptidos presentes en la peptona, son mas faciles de asimilar.
Mediante ajuste de la relacin enzima-sustrato y variando tiempo de hidrlisis es
posible variar el tamao de la cadena de polipptidos.
2) Extracto. Se obtiene por extraccin acuosa y concentracin posterior de una
fuente rica en nutrientes: Extracto de carne, extracto de levadura (obtenida
mediante autlisis o plasmlisis de la levadura, es bsicamente una mezcla de
aminocidos, pptidos, vitaminas solubles en H2O y carbohidratos), etc.
4) "Cornsteep. Agua de maceracin de la industria del maz.

c. Micronutrientes
Son activadores enzimticos. Fe, Cu, Zn, Mn, Mo, Co, B.
Sales: NaCl, KH2PO4, NH4(SO4), MnSO4, ZnSO4, CaCl2.
Macronutrientes. En cantidades de gr/l. C, O2, H2, N2, P, S, K, Na, Ca, Mg
Micronutrientes.oligoelementos, en mg/l o g/l
Con respecto a los micronutrientes se distinguen 2 categoras:
a) Los que son frecuentemente esenciales para el crecimiento como Ca, Mn,
Fe, Co, Cu y Zn y
b) los que son raramente esenciales como B, Na, Al, Si, Cl, V, Cr, Ni, As, Se,
Mo, Sn, I.

d. Suplementos
Compuestos que inhiben o favorecen el crecimiento de algunos microorganismos.

d.1. inhibidores.
Antibiticos: penicilina, estreptomicina, cloranfenicol. Ejm. Agar saboraoud.
(Contiene cloranfenicol).
Fungicidas: fungizona, amphotericina (mohos y levaduras).
Metales pesados: Agar sulfito-bismuto. Contiene Bi y colorante verde brillante e
inhiben a bacterias Gram (+) y mayora de Gram (-), excepto a salmonella.
Compuestos orgnicos inhibidores: Agar salmonella-shigella. Contiene altas
concentraciones de sales biliares y citrato de sodio que inhibe a las Gram (+) y
mayora de gram(-) incluyendo coliformes, excepto salmonella y shigella.
D.2.- factores de crecimiento.
Compuestos orgnicos que se suministran en bajas concentraciones.
No son sintetizados por los m.o que se desea favorecer, pero son necesarios para su
desarrollo. Vitaminas, aminocidos, cidos grasos.
Los aminocidos y vitaminas del grupo B como tiamina, riboflavina, cido pantottico,
niacina, etc., que representan para muchas bacterias y levaduras factores esenciales
en los medios sin los cuales no se produce crecimiento celular. La mayor parte de las
vitaminas son constituyentes de co-enzimas.

.Suplementos
d.3. Colorantes e indicadores.
Indicadores de la reaccin del medio.
Verde malaquita:
pH muy cido: amarillo
pH =2 : verde
pH = 11.5: azl
pH = 14: incoloro
Rojo-fenol.
pH = 7.8: azl
pH =7.8: prpura.
pH = 7.4: rojo
oH = 7.0: naranja
pH =6.5: amarillo.
Para indicar produccin de acidos;
lctico, ctrico, actico.
Rojo neutro
Rango de pH: 6.8-8.0 (rojo a amarillo)
Azul de bromotimol
Rango de pH: 6-7.6 (amarillo a azul).

Indicadores del potencial de oxidoreduccin.

Azul de metileno: Medio oxidante: azul,
Medio reductor: incoloro
Indicadores selectivos.
Verde malaquita, cristal violeta: inhiben
bacterias gram(+)
Colorantes bsicos: inhiben bacterias.
Ejplo. Agar Mc-Conkey. Contiene sales
biliares y cristal violeta que inhibe a las
gram(+)
Agar EMB. Para determinacin de
coliformes fecales. Contiene eosina y azul
de metileno que inhiben gram(+) y facilita el
desarrollo de enterobacterias.

Particularidades de los medios de laboratorio.

Para la preparacin de medios solidos, el agar es el agente solidificante mas
empleado. Se lica completamente al hervir el agua y se solidifica a 40 grados.
Con algunas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias
y no es atacado las que crecen en l.
La fuente de nitrgeno: la forma ms extendida de aportar N, es utilizar
peptona.
En el caso de medios sintticos hay concentraciones definidas como:
Agar McConkey . 50 g/l
Agar nutritivo . 20 g/l
Agar LIA . 32 g/l
Agar TSI . 65 g/l
Agar EMB . 36 g/l

Ejemplos: Medios
General: Agar nutritivo
El agar nutritivo es un medio de cultivo
usado como rutina para todo tipo de
bacteria.
El agar nutritivo contiene normalmente
(p/v):
0,5 % de peptona;
0,3 % de extracto de carne/extracto de
levadura;
1,5 % de agar;
0,5 % de cloruro de sodio;
agua destilada;
pH casi neutro (6,8) a 25 C.
El caldo nutritivo se hace exactamente
igual, excepto por la omisin del agar.

Selectivo: Agar Sabouraud

Medio para la deteccin y

aislamiento de hongos.
Composicin por Litro:
Digesto pancretico de
casena- 5g
Peptona de tejido digestivo -5
g
Dextrosa -40g
Agar- 15g
cloranfenicol

Ejplo: medio selectivo-diferencial

Agar Mac Conkey.
Este medio es selectivo contra Gram (+) debido al violeta cristal y a muchas Gram (-)
debido a las sales biliares (agentes tensoactivos que desorganizan muchas membranas
externas).
En cambio las enterobacterias, estn adaptadas a soportar las sales biliares en su habitat
natural (el intestino de vertebrados superiores) y pueden crecer en este medio.
Accin diferencial. Los microorganismos capaces de fermentar lactosa producen una
cada de pH, junto con una absorcin del colorante, apareciendo en la colonia el color rojo
(del rojo neutro), las colonias de m.o que no fermentan lactosa permanecen incoloras.

Agar Eosina Azul de Metileno (EMB)

La presencia de los colorantes eosina y azul de
metileno inhibe el crecimiento de la flora Gram
positiva; y permiten diferenciar a los Gram
negativos e indican cuales fermentan la lactosa.
Las bacterias fermentadores de lactosa dan
colonias de un color violeta.
Las colonias de Escherichia coli se distinguen por
ser regulares con un brillo metlico verde.
Las colonias de Klebsiella son siempre mucosas,
grandes y ligeramente rosadas.
Los no fermentadores de lactosa dan colonias
incoloras sin producir mayor modificacin en el
medio a simple vista

Agar KIA: Kliger Iron Agar

Es un medio que permite evidenciar la habilidad de
los bacilos Gram negativos, para fermentar glucosa o
lactosa, as como su habilidad de producir hidrgeno
sulfurado.
La peptona de carne y la triptena, aportan los
nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano.
La lactosa y la glucosa son los hidratos de carbono
fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato
usado para la produccin de cido sulfhdrico, el
citrato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe 3+.
El rojo de fenol es el indicador de pH.
Por fermentacin de azcares, se producen cidos,
que se detectan por medio del indicador rojo de
fenol, el cual vira al color amarillo en medio cido.
El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de
hidrgeno el que reacciona luego con una sal de
hierro proporcionando el tpico sulfuro de hierro de
color negro.

PREPARACION DE MEDIOS
Se pueden preparar:
A partir de sus constituyentes bsicos, o por rehidratacin de medios.
PASOS:
1. Rehidratacin: Usar agua destilada.
Se aade el agar al agua a T ambiente, se deja embeber unos minutos, se
agita y se calienta a 98-100 C hasta disolucin total.
En medios con azcares un excesivo calentamiento lleva a caramelizacin.
Los medios agarizados con pH<5 son muy delicados porque la acidez sumada
al calor hidroliza las molculas de agar, hacindose el medio friable y
quebradizo.
2. Secado de las placas.
Para obtener colonias bien aisladas sembrar sobre placas cuya superficie no
est hmeda.
Poner la placa boca abajo (con el medio colgando), se coloca la tapa de la
placa abajo.
Todo medio preparado debe almacenarse en la oscuridad, para evitar la
formacin de perxidos bacteriostticos o bactericidas.

Preparacin
3- Esterilizacin (121 C, 15 min.)
El tiempo de esterilizacin (tiempo a 120 C) requerido, para tubos de ensayo
de 18 x 50 mm es de 12-14 min y para tubos de 38 x 200 mm, de 15-20 min.
Erlenmeyers de 2 L. de 30-35 min, para 125 ml es de 12-14 min.
Un frasco pyrex cuadrado de 1000 ml requiere 30-35 min y una botella de
suero de 9000 ml 50-55 min.

Medios con componentes grasos, enfriar en agitacin para no formar grumos.

Los medios con azcares se esterilizan mejor por debajo de 118 C (116 C,
30), para evitar caramelizacin.
4. Almacenamiento de medios deshidratados
Almacenados bajo condiciones ptimas tienen caducidad de 3 a 5 aos.
Una vez abierto el bote no usar mas de 6 meses.
Deben permanecer en armario cerrado, sin luz, humedad o calor (lmparas,
estufas).
Conviene lugar fresco, pero no refrigerador, porque condensara agua.
Una vez preparado y esterilizado se debe almacenar entre 2 y 8 C, a menos
que el medio requiera alguna condicin diferente.

MEDIOS INDUSTRIALES
Se usan siempre medios complejos.
Es conveniente considerar tres fases:
diseo
formulacin y
optimizacin de los mismos.

a. Diseo del medio

Consiste en la eleccin de los componentes necesarios para lograr el
crecimiento y la formacin de productos deseados.
Se debe tener en cuenta; los requerimientos nutricionales del
microorganismo y algunos especficos del proceso, la disponibilidad real de
los componentes y consideraciones sobre las materias primas. (OEA,
2006).
Tener en cuenta:
Requerimientos nutricionales del m.o.
Aspectos especficos del proceso
Disponibilidad de las materias primas.

Materias primas fundamentales

Las materias primas ms importantes son: fuentes de carbono y de nitrgeno.
Las fuentes de carbono pueden ser: 1) Hidratos de carbono como glucosa o
dextrosa, sacarosa, lactosa, almidn, dextrina; 2) Alcoholes como el glicerol y manitol;
y 3) Hidrocarburos como hexadecano, octadecano y otros.
En una fermentacin uno de los mayores costos es la fuente de carbono, que
representa el 50% de la economa del proceso. Para obtener un medio de cultivo
industrial, se requiere que los componentes del mismo sean econmicos y los
rendimientos de productos se incrementen. (Montoya et al, 1999).

Las fuentes de nitrgeno de naturaleza inorgnica ms comun son el amonaco o

las sales de amonio. Las orgnicas pueden ser: peptonas o extractos. (OEA, 2006)

Se pueden emplear algunos subproductos de procesos industriales como fuentes de

nutrientes para el crecimiento microbiano, buscando disminuir costos de produccion.
Asi para la produccin de renina a partir de Mucor miehei, se utiliza subproductos
como; el suero de leche, debido a su alto contenido de lactosa y diversas protenas que
lo hacen una buena fuente de carbono y nitrgeno; la melaza, constituye una fuente
rica de carbono; la cscara de papa y la harina de maz, son posibles fuentes de
nitrgeno. (Osorio et al 2009)

-Requerimientos especficos.
En algunos procesos existe la necesidad de efectuar otros agregados, que son
requerimientos especficos del proceso considerado.
Un ejemplo es el caso de precursores que constituyen la base de una molcula
que debe ser sintetizada por el microorganismo, como el cido fenil actico para
la penicilina.
El agregado de sulfato, en el proceso de fermentacin alcohlica, que favorece
la formacin de glicerol, es otro ejemplo de un requerimiento especfico.
El diseo correcto tiene que ver con las caractersticas bioqumicas propias y
evolucin de los parmetros de cada proceso. Por ejemplo, un proceso
caracterizado por un descenso continuo de pH, debido al uso de una sal de
amonio como fuente de nitrgeno, obliga a considerar en su diseo algn
agregado que no corresponda a una exigencia nutricional, como es el caso del
control de pH del mismo.
Este puede efectuarse por agregados al medio de agentes "buffer" como
mezclas de fosfatos o de carbonato de calcio o con agregados peridicos de
soluciones alcalinas.
La produccin de cido ctrico debe considerar la influencia negativa que para
el proceso tiene un exceso de hierro en su composicin.

b. Formulacin
La formulacin consiste en establecer las concentraciones de cada
componente.
Una primera aproximacin con respecto a las cantidades requeridas de cada
componente, lo da la composicin de biomasa del microorganismo a ser
empleado.
Una composicin elemental y tpica de la biomasa es (en % de peso seco):
Carbono, 46-48; Nitrgeno, 7-12; Fsforo, 1-3; Azufre, 0.5-1.0; Mg, 0.5-1%.
(OEA, 2006)

c. Optimizacin
Pueden ocurrir situaciones en las cuales sea imperativo la optimizacin de los
medios de cultivo, como:
1) No existencia de informacin respecto a coeficientes de rendimiento de
macro y micro elementos.
2) Existencia de limitaciones nutricionales ocultas, (microelementos y factores
de crecimiento).
3) Ensayo de sustancias estimulantes, activadoras e inhibidoras del
crecimiento y formacin del producto.
4) Empleo de fuentes nutricionales no convencionales.
La metodologa ms elemental consiste en realizar experimentos, en los
cuales se vara la concentracin del componente a ensayar mantenindose
constante las concentraciones de los dems ingredientes. (OEA, 2006)

d. Esterilizacin
Se hace para evitar el desarrollo de microorganismos competidores, y permitir el
cultivo del microorganismo deseado. (OEA, 2006)
Adems de esterilizar los medios, se debe conservar al mximo su calidad
nutriente.
En medios definidos puede haber prdida importante de Mg, K, amonio, Na y
fosfatos por precipitacin de sales poco solubles como MgNH4PO4, MgKP04 y
MgNaPO4.
Autoclavar, sales de Ca y Mg aparte de PO4.
Los aminocidos(triptofano, glutamina, asparragina) y factores de crecimiento
(tiamina, riboflavina y piridoxina) son muy lbiles al calor.
Es aconsejable disolverlas separadamente en pequeos volmenes de H2O y
luego esterilizarlas por filtracin.

Caso aplicativo: Cultivo de Levadura panera

Antes se usaba la levadura de cerveza.
Primera planta de produccin. Holanda, 1780 (proceso Dutch) era
anaerobio con rendimiento del 4 al 6% con respecto a la materia prima
usada.
Mejor el rendimiento, al 12-22% (proceso Vienna) con proceso anaerobio
1846.
Con aireacin (1879), se aumenta rendimiento, a 50-60% del terico.
Con melazas de remolacha o de caa pueden alcanzarse rendimientos
cercanos al 100% del terico.

Requerimientos nutricionales
Fuentes de carbono y energa: Glucosa y sacarosa.
El N como: NH4, urea, sales de amonio, mezclas de aminocidos. (Nitrato o
nitrito no pueden ser asimilados).
Macroelementos indispensables: P(cido fosfrico), Mg como MgSO4.
S. cerevisiae requiere 200 ug de Zn, 75 ug de Fe y 12-15 ug de Cu por litro de
medio para crecimiento ptimo.
Requerimientos de la biotina: 100 ug de biotina por 100 g de azcar.
El cido pantotnico, que es un componente de la coenzima A, es tambin
requerido por muchas especies.
La tiamina aumenta la actividad fermentativa de la levadura.
El Mg, S, y Zn se agregan como sulfatos
El MgSO4 se suele incorporar a razn de 1 g de la sal heptahidratada y el Zn
como 10 mg del sulfato tetrahidratado por Kg de melaza.

Composicin de la melaza de caa y remolacha

Medio de produccin
La materia prima elemental es la melaza de remolacha o de caa o ambas en
conjunto. (Sacarosa es el azcar predominante en ambas)
Los orgnicos no azcares en la melaza de caa son: gomas solubles y
cidos orgnicos sobre todo acontico y compuestos nitrogenados.
En melaza de remolacha los orgnicos no azcares son: betana, cido
glutmico y algunos cidos orgnicos como lctico, mlico, actico y oxlico.
En las cenizas predomina en ambas melazas el K.
Mayor % de fsforo y biotina en melaza de caa que en remolacha.
El contenido de pantotenato de Ca, y compuestos nitrogenados asimilables es
mayor en la remolacha.
Los fabricantes prefieren, si tienen disponibilidad, utilizar mezclas de ambas.

Las melazas se utilizan generalmente diludas al 50%.

Componentes extraos (que pueden afectar el rendimiento): algunos
pesticidas, como lindane, aldrin, heptaclor, dieldrin, etc.
Si se utiliza melaza de remolacha es indispensable agregar biotina

MEDIOS Y METODOS PARA CULTIVOS ANAEROBIOS

La mayora de bacterias anaerobias
requieren para su crecimiento vitamina K
y hemina.
Sistemas de incubacin en
anaerobiosis.
Los ms comunes son las cmaras,
cajas y bolsas de anaerobiosis.
Eliminacion del oxigeno: se puede
conseguir por:
- Se inyecta CO2 y nitrgeno a la estufa,
pues muchos anaerobios necesitan
cantidades pequeas de CO2 para crecer
mejor.
- Reacciones de formacin de H2, o por
remocin mecnica del oxigeno.

Sistema anaerobios de laboratorio

Sistemas de anaerobiosis.
El oxigeno residual se elimina
promoviendo su reaccin con el
Hidrgeno, con catalizador,
Paladio. La reaccion da agua.
Se coloca un sobre conteniendo
sustancias qumicas que en
presencia de agua liberan H2 y
CO2 (contiene borohidrato sdico,
bicarbonato sdico y cido
ctrico).
NaBH4 + 2H2O NaBO2 + 4H2
Se monitorea el ambiente
anaerobio con papel indicador de
azul de metileno o de resarzurina.
El azul de metileno pierde color
en presencia de oxigeno.

Sistemas microareofilos.
Los microaerfilos necesitan cierta
concentracin de CO2 y O2 en la
atmsfera.
Esto se consigue, utilizando sobres
generadores comerciales para
atmsferas microaerfilas.
Existen medios microaerobios
como, MICROAEROBAC, que
cuando se activa produce dentro de
la jarra de 2,5 l una atmsfera de 5
a 15% de O2 y de 5 a 10% de CO2.
Tambin se puede crear esa
atmosfera con el encendido de una
vela.

CONSERVACION DE CULTIVOS MICROBIANOS

Mtodo de conservacin a largo plazo
- Conservacin por congelacin(conservacin de los
microorganismos a temperaturas inferiores a cero grados
centgrados. Se basa en la paralizacin del metabolismo
celular por la disminucin del agua disponible. Se usan
crioprotectores: Minimizar daos durante la congelacin.
Limitar la formacin de hielo (tasa de congelacin). Glicerol,
Dimetilsulfxido (DMSO), cido glutmico, Glucosa,
Sacarosa , Meso inositol , Lactosa, Leche Descremada)
- Conservacin por liofilizacin (Es un mtodo de
conservacin a largo plazo)
Mtodos Alternativos
- Conservacin por transferencia peridica (Se debe
transferir peridicamente, ya que los nutrientes se
consumen, y el agar se seca. (repicado) El proceso es
repetido a intervalos que garanticen la obtencin de un
cultivo fresco antes de la prdida del viejo.)
- Conservacin por suspensin en agua destilada

MEDIOS DE CULTIVO DE CLULAS

ANIMALES
El suero fetal de ternera es la mayora de las veces aplicable.
El suero contiene diversos factores esenciales para el metabolismo y
proliferacin celular, incluyendo factores de iniciacin, protenas ligadoras,
factores de unin y compuestos de peso molecular bajo.
Otro, es conocido como BME (medio basal de Eagle), ampliamente utilizado en
el cultivo de clulas de mamferos.
Las clulas se cultivan y mantienen a una apropiada temperatura y mezcla
de gases (habitualmente, 37C, 5% CO2 y 95% O2) en un incubador celular.
Adems pueden variar en pH, concentracin de glucosa, factores de
crecimiento y la presencia de otros componentes nutritivos.

MEDIOS DE CULTIVO PARA CLULAS

VEGETALES
La biotecnologa vegetal tiende a convertirse en una estrategia tecnolgica en la
denominada agricultura global, para mejorar la produccion de alimentos. (Calva y Perez,
2005).
La reproduccin asexual de plantas por cultivo de tejidos es posible gracias a que, en
general, varias clulas de un individuo vegetal poseen la capacidad de crecer y
desarrollar un nuevo individuo completo, sin necesidad de fusin de clulas sexuales.
Esta capacidad es caracterstica de un grupo de clulas vegetales conocidas como
clulas meristemticas.
Las clulas vegetales crecidas en condiciones aspticas sobre medios de cultivo
adicionados con hormonas vegetales, pueden dividirse dando una desdiferenciacin
celular acompaada de crecimiento tumoral, que da lugar a una masa de clulas
indiferenciadas denominada callo, la cual bajo las condiciones adecuadas es capaz de
generar rganos o embriones somticos. (Sagretin, 2010)

El cultivo in vitro consiste en tomar una porcin de una planta (a la que se

denominar explanto, como por ej. el pice, una hoja o segmento de ella,
segmento de tallo, meristema, embrin, nudo, semilla, antera, etc.) y colocarla
en un medio nutritivo estril (usualmente gelificado, semislido) donde se
regenerarn una o muchas plantas.
La formulacin del medio cambia segn se quiera obtener un tejido
desdiferenciado (callo), crecer yemas y races, u obtener embriones somticos
para producir semillas artificiales.
Las fuentes de carbono ms utilizadas son: sacarosa, glucosa, fructosa,
maltosa y lactosa.
La fuente ms importante de nitrgeno, son los nitratos, a veces se
suplementa con sales amnicas.
Algunas especies de clulas necesitan nitrgeno orgnico en forma de
aminocidos.
En la mayora de los cultivos de clulas vegetales son necesarias hormonas
vegetales: auxinas, y citoquininas. (Calva y Perez, 2005).

 Figura 7. Cultivo de clulas

y rganos vegetales. A
partir de un explanto se
pueden establecer cultivos
de clulas para producir
compuestos de inters, o
para obtener embriones
somticos y semillas
artificiales, entre otras
aplicaciones.
Adaptado de
Biotecnologa. Muoz,
2006

REFERENCIAS
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